全 文 ：活血祛瘀方对单侧输尿管梗阻大鼠 TGF

1和 CTGF表达的影响
沈烨渠1, 2 ,周健淞3 ,何立群1 *

( 1 上海中医药大学附属曙光医院 肾内科,上海中医药大学 肝肾疾病病证教育部重点实验室,上海中医药大学
上海市高校中医内科学 E
研究院, 上海  201203; 2 中国人民解放军第一八八医院,
广东 潮州  521000; 3 南通大学第三附属医院 肾内科,江苏 无锡  214000)
摘 要:目的  通过研究活血祛瘀方对单侧输导管梗阻 ( UUO ) 大鼠肾组织转化生长因子

1 ( TGF

1 )、结缔组织
生长因子 ( CTGF ) 表达的影响, 探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法  建立大鼠 UUO 模型, 48 只 SD 大鼠
随机分为假手术组、模型组、代文组、活血祛瘀方组, 于治疗 4 周后腹主动脉采血检测血肌酐 ( SCr )、尿素氮
( BUN) ;收集 24 h 尿液检测 N
乙酰


D
氨基葡萄糖苷酶 ( NAG )、
2
微球蛋白 (
2
M G) ; 取梗阻侧肾组织, HE 染
色观察肾小管间质病变;免疫组织化学染色观察 T GF

1、CTGF 的阳性表达, 并进行半定量分析。结果  与假手
术组相比,模型组大鼠血 SCr、BUN 和尿 NAG、
2
M G 水平以及 TGF

1、CTGF 阳性表达显著升高。与模型组相
比,活血祛瘀方组大鼠 BUN 水平降低,尿
2
MG、NAG 排泄减少; 活血祛瘀方组和代文组肾间质 TGF

1、CTGF
阳性表达显著下调。结论  活血祛瘀方可降低 UUO 大鼠尿 NAG、
2
MG 和血 BUN 水平, 表明具有保护肾小管
功能和改善肾功能作用,可能因其能抑制肾间质 TGF

1、CTGF 过度表达,从而减缓肾纤维化病程的进展。
关键词:活血祛瘀方; 单侧输尿管梗阻; 转化生长因子

1 ; 结缔组织生长因子; 肾间质纤维化
中图分类号: R285 5    文献标识码: A    文章编号: 0253
2670( 2010) 11
1859
04
  肾间质纤维化 ( renal interstit ial fibrosis,
RIF) 的机制较为复杂, 多种细胞因子和生长因子均
参与 RIF 的发生和发展。细胞因子是介导和调节
免疫、炎症反应的小分子多肽, 可以由多种细胞分
泌,如淋巴细胞、肥大细胞、成纤维细胞、上皮细胞及
肿瘤细胞等。许多细胞因子参与了 RIF 病理的过
程,主要影响小管细胞的肥大、增生、凋亡、表型转化
及细胞外基质 ( ECM ) 的合成。转化生长因子

1
( TGF

1 ) 是公认的导致 RIF 的细胞因子, 它能够
诱导炎性细胞浸润和成纤维细胞的增殖, 参与 RIF
的发生发展过程。结缔组织生长因子 ( CT GF) 的
生物学活性是促进成纤维细胞的增生、移动、黏附、
ECM 的形成及小管上皮细胞的转化, 是导致 RIF
的主要原因之一, 能被数种因子转录激活。活血祛
瘀方是临床用于治疗慢性肾脏病的有效中药复方,
为了进一步揭示其作用机制, 本实验观察了活血祛
瘀方对单侧输导管梗阻 ( UU O) 模型大鼠肾间质
TGF

1、CTGF 表达的影响。
1  材料与方法
1 1  实验动物:清洁级雄性 SD大鼠 48只, 体质量
( 180 20) g, 由上海西普尔
必凯实验动物有限公
司提供,在上海中医药大学实验动物中心饲养,人工
光照,阴暗各 12 h,自由饮食。
1 2  药物、试剂与仪器:活血祛瘀方 (丹参 10 g、桃
仁 6 g、积雪草 30 g、制大黄 9 g 共 4味药,购自本院
中药房,水煎后浓缩生药量 0 825 g/ mL) ;代文 (缬
沙坦胶囊,北京诺华制药公司,批号 X0859) ; SCr 试
剂盒 (上海申索佑福医学诊断公司) ; BUN 试剂盒
(济南希森美康医用电子公司) ; N AG 试剂盒 (上海
申索佑福医学诊断) ,
2
MG 放免试剂盒 (北京原子
高科) ; 兔抗大鼠 TGF

1及 CTGF 多克隆抗体;
SABC 免疫组化试剂盒 (武汉博士德) ; MIQAS 医
学图象定量分析系统、Image J 图像分析软件 (上海
求为生物科技)。
1 3  模型建立、分组及给药: 48 只 SD 大鼠随机选
取 12 只作为假手术组, 其余 36 只大鼠 UUO 造
模。造模方法:先以 3% 戊比巴妥 ip 麻醉,从距左
脊肋骨 0 5 cm 处作斜向外方切口; 经后腹膜取肾
脏,游离肾脏及输尿管,将左侧肾脏用组织钳托起,
取中段部位用止血钳夹住,在输尿管两端各用丝线
结扎后不剪断输尿管, 然后分层缝合,肌注青霉素预
防感染。假手术组除不结扎输尿管外, 其余步骤同
上。造模大鼠按质量随机分为活血祛瘀方组、代文
组、模型组,每组各 12只。从术后第一天起 ig 给药
!1859!中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月

收稿日期: 2010
02
09                     基金项目: ∀ 十一五#国家科技部支撑计划 ( 2006BAIO4A07) ; 国家自然科学基金资助项目 ( 30873259 ) ; 上海市优秀学科带头人培养计划
( 08XD14039) ; 上海市教育委员会 E
研究院建设计划项目 ( E03008) ; 上海高校创新团队建设项目作者简介:沈烨渠( 1983 ∃ ) ,男,广东潮州人,上海中医药大学附属曙光医院 2007级硕士研究生,现中国人民解放军第一八八医院住院医师,主要研究方向为肾脏病的基础及临床研究。E
mail: yequ shen@ 126. com
* 通讯作者  何立群  E
mail: H eliqun59@ yahoo. com. cn
4周,活血祛瘀方组大鼠用药量为 60 kg 体质量成
人单位剂量的 20倍,即 5 5 g/ kg (根据临床有效剂
量换算) , 代文组给予 60 kg 体重成人单位剂量的
20倍,即 8 mg / kg,假手术组、模型组给予等量生理
盐水,每日给药 1次。
1 4  标本采集与指标检测:给药干预 4 周后, 用代
谢笼收集 24 h 尿液,检测 NAG 及
2
MG; 腹主动
脉采血检测 SCr、BUN ;均按照试剂盒说明书操作。
1 5  病理观察: 取梗阻侧肾组织, 置于 10% 福尔
马林固定液, 常规石蜡包埋切片, 经 HE 染色后, 光
镜下观察肾小管间质的病理改变。采用 MIQAS 医
学图象定量分析系统对组织切片进行定量分析, 每张
切片在 400倍光镜下,随机采集 5个不重叠视野 (不
含肾小球及小血管) ,绿色为纤维化阳性染色区, 分别
测量每个视野中阳性染色的相对面积,取其平均值。
1 6  免疫组织化学染色法检测 TGF

1、CT GF 的
阳性表达:采用 SABC 法, MIQAS 医学图象定量分
析系统,每张切片在 400倍光镜下随机采集 5 个不
重叠视野 (不含肾小球及小血管) , 棕黄色为阳性染
色区。测量每个视野阳性染色面积和吸光度值, 得
出阳性相对面积, 取平均值。阳性染色相对面积=
(阳性染色面积/整个视野面积) % 吸光度值。
1 7  数据处理: 实验数据以 x s 表示,多组间比
较采用单因素方差分析, 任意两组间比较采用 LSD
检验,方差不齐时采用非参数 H 检验, 所有统计学
处理均由 SPSS 13 0 软件完成。
2  结果
2 1  一般情况观察: 假手术组大鼠活动灵活, 被毛
光泽,体质量增长均匀。模型组大鼠活动差, 被毛蓬
乱,精神较差,体质量增长较慢, 各治疗组大鼠整体
状况均较模型组有明显改善。由于操作不当、病理
损害等原因,代文组死亡 1 只, 模型组死亡 1 只。
2 2  肾组织病理观察
2 2 1  肉眼观察: 假手术组大鼠两侧肾脏外观正
常;模型组大鼠左肾肿大,颜色变浅,有囊性感,内含
混浊的褐色尿液, 肾实质变薄,肾盂扩张, 肾盏乳头
受压,右肾稍肿大, 颜色稍浅,组织结构清楚。活血
祛瘀方治疗组大鼠上述病理改变较模型组略有改善。
2 2 2  光镜观察: HE 染色显示,假手术组大鼠肾
小球、肾小管结构基本正常;模型组大鼠肾小管上皮
细胞肿胀、空泡变性,肾小管萎缩, 管腔闭塞或扩张,
小管间质区增宽,间质炎性细胞浸润明显,纤维组织
增生较多, 小管结构遭到严重破坏。与模型组相比
较,活血祛瘀方组上述病理改变减轻。
2 3  对大鼠肾功能的影响:模型组大鼠 SCr、BUN
水平较假手术组显著升高, 说明 UUO造模 4周后,
肾小球功能出现了明显的损害, SCr、BUN 在体内
蓄积;活血祛瘀方组 BUN 较模型组明显降低 ( P<
0 01) , SCr 也略有降低,但无统计学意义。见表 1。
2 4  对大鼠肾小管功能的影响: 模型组大鼠尿
NAG 及
2
MG 水平均较假手术组显著升高,说明
造模后肾小管功能损伤,尿 NAG 及
2
MG 重吸收
减少, 排泄增加; 与模型组比较, 活血祛瘀方组尿
NAG 及
2
MG 均明显降低 ( P< 0 05、0 01)。结
果见表 2。
表 1 各组大鼠尿中 Scr、BUN 水平 ( x s, n= 6)
Table 1  Scr and BUN levels in urine of rats in every group
(x s, n= 6)
组  别  SCr/ ( m ol! L- 1) BU N/ ( mmol! L- 1 )
假手术 11734 7 40 655 0 28
模型 14669 19 09* 894 0 50* *
代文 13980 28 28 798 0 58 &
活血祛瘀方 13284 9 36 777 1 02 & &
  与假手术组比较: * P < 0 05  * * P < 0 01
  与模型组比较: &P < 0 05  & &P < 0 01,下表同
  * P < 0 05  * * P< 0 01 v s Sham g rou p
  &P < 0 05 & &P < 0 01 v smodel group, follow ing tables are same
表 2 各组大鼠尿中 NAG 和
2
MG 水平 ( x s, n= 6)
Table 2  NAG and
2
MG levels in urine of rats
in every group ( x s, n= 6)
组  别  NAG/ U
2
MG/( n g ! L- 1)
假手术 1723 5 14 3165 5 07
模型 3315 2 57* * 4110 11 35*
代文 2918 3 47 3717 3 82
活血祛瘀方 2426 2 24 & & 3210 6 68 &
2 5  对大鼠肾组织 T GF

1、CT GF 表达的影响:
假手术组 TGF

1在皮髓质交界区肾小管有微弱的
表达,与假手术组比较, 模型组 T GF

1表达呈显著
性增高;活血祛瘀方组、代文组 TGF

1的表达与模型
组相比较,均有降低 ( P< 0 05、0 01)。结果见表 3。
假手术组大鼠 CTGF 在肾间质表达极少,与假手术
组比较,模型组 CTGF 表达呈显著性增高;活血祛瘀
方组、代文组 CTGF 的表达与模型组比较,均有降低
( P< 0 05)。结果见表 3。
表 3 各组大鼠肾组织中 TGF

1、CTGF 的表达 ( x s, n= 6)
Table 3 Expression of TGF

1 and CTGF in nephridial
tissue of rats in every group (x s, n= 6)
组  别  T GF

1阳性表达 CT GF 阳性表达
假手术 017 0 01 016 0 01
模型 133 0 26* * 119 0 11* *
代文 096 0 36 & 083 0 15 & &
活血祛瘀方 056 0 16 & & 055 0 09 & &
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3  讨论
3 1  活血祛瘀方防治 RIF 的理论基础: 祖国医学
虽无 RIF 的专门论述, 但究其病因及症状属于∀ 虚
劳#、∀水肿#、∀癃闭#、∀溺毒#等范畴。RIF 从中医角
度看,其本虚标实的病机特点已为大多数医家所认
可,邪实诸证中,瘀血浊毒贯穿于 RIF 整个过程, 且
一般认为瘀血为邪实之首 [ 1]。瘀血存在于慢性肾脏
的始终,表现为血液的∀浓、黏、凝、聚#。临床病例亦
多见面色晦黯、舌质黯有瘀斑等血瘀证的表现。由
于血瘀,经脉中血行缓涩,气机升降失常,壅塞不畅;
脏腑失养,功能减退;水湿无力运化;邪毒内聚,不得
排泄,最终导致虚者更虚, 而实者更甚, 故而祛除瘀
血势在必行。因此活血祛瘀法是治疗慢性肾病, 防
止及延缓 RIF 的重要治法之一。通过贾秀琴等 [ 2]
对 269 篇文献研究发现治疗肾纤维化的活血祛瘀
药使用次数为 323 次, 占 18%, 且在最常用的抗肾
纤维化 15 味中药, 具有活血祛瘀作用的药物有 5
味,这表明活血祛瘀法是治疗肾纤维化的基本大法。
临床观察、实验研究发现瘀血阻络是慢性肾衰
患者主要的病理机制, 且贯穿于发病过程的始
终[ 3
8]。依据中医理论结合现代药理研究结果而制
定的中药复方 ∃ ∃ ∃ 活血祛瘀方,该方以活血祛瘀为
原则组方, 药味组成精简,由丹参、桃仁、积雪草、制
大黄共 4味药组成。方中桃仁苦甘平, 破血行瘀、润
燥滑肠,善泄血分之壅滞;丹参苦寒降泄,活血祛瘀、
凉血消痈;积雪草苦辛寒,清热利湿、消肿解毒;制大
黄苦寒,泻热毒、破积滞、行瘀血。诸药合用, 共奏活
血祛瘀之功。
3 2  活血祛瘀方对 RIF 的疗效及机制探讨
3 2 1  活血祛瘀方对 UUO 模型大鼠肾小管间质
和肾功能的影响: U UO 模型是目前主要累及肾小
管间质的非免疫源性进行性肾损害的经典实验动物
模型,且是一个成熟的实验模型, 随梗阻时间延长,
RIF 逐渐突出,最终导致整个肾脏结构破坏 [ 9]。研
究表明, NAG 是一种高分子糖蛋白,属于细胞内容
酶体酶之一, NAG 不能经肾小球滤过,主要存在于
肾近曲小管上皮细胞溶酶体中,在肾小管变性、坏死
时, NA G 释放增多, 活性显著增高, 因此, 尿 NAG
的升高是近曲肾小管的损伤及损伤程度的敏感指
标[ 10
11]。
2
MG 是一种相对分子质量小的蛋白质,
以低浓度存在于尿液、血液等体液中。健康人体内
产生的
2
MG 可自由通过肾小球滤过膜, 99 9%
以上被近曲小管重吸收, 正常人尿中只有痕迹量, 近
曲小管轻微受损尿
2
MG 量就增加。
本研究显示: 模型组大鼠肾小管标志蛋白尿
NAG、
2
MG 和血 SCr、BUN 均显著高于假手术
组,提示 UUO 模型大鼠肾小管损伤明显,同时有肾
功能异常,病理结果亦显示 UUO 模型组肾小管管
腔闭塞或扩张,间质区域的增宽,间质炎性细胞浸润
明显, HE 染色显示 RIF 的程度加重, 表明模型制
作成功。而活血祛瘀方组尿 NAG、
2
MG 和血
BUN 较模型组显著降低, 且活血祛瘀方组病理损害
明显轻于模型组, 推测活血祛瘀方可通过降低
UUO 模型大鼠尿 NAG、
2
MG 和血 BUN,保护肾
小管功能和改善肾功能作用, 从而延缓 UUO 模型
大鼠 RIF。
3 2 2  活血祛瘀方对 UUO 模型大鼠肾组织
T GF

1、CT GF 表达的影响: TGF

1作为一个多功
能的多肽生长因子, 是组织纤维化过程中始发的促
纤维化分子,它在成纤维细胞增殖, 成纤维细胞、上
皮细胞转分化, ECM 合成及降解等多个环节起作
用[ 1 2
14] 。CT GF 在正常生理状态下表达水平较低,
生物学效应较单一, 可由成纤维细胞、内皮细胞、平
滑肌细胞合成分泌, 其在 RIF 过程中起着重要作
用。CT GF 作为介导 TGF

1诱导肾纤维化的下游
效应因子,在病理状态时过度表达,可促进细胞增生
和 ECM 在间质沉积, 从而参与 RIF 的发生发
展[ 1 5]。阻断 CT GF 表达或抑制其活性, 可能是一
种更特异、更有效的防治纤维化手段[ 16]。本研究表
明造模后, 模型组较假手术组 TGF

1的表达显著
增高,代文、活血祛瘀方均可有效降低 TGF

1的表
达,活血祛瘀方组的效果优于代文组。假手术组几
乎不表达 CT GF,模型组大鼠的肾小管上皮细胞及
间质细胞的胞浆 CTGF 均有不同程度的表达; 而治
疗组较模型组明显减轻。推测活血祛瘀方可以抑制
UUO 大鼠肾组织 TGF

1、CTGF 的表达, 从而防
治 RIF 的发生、发展。由于 CT GF 具有突出而特
异的致纤维化作用 [ 17] ,故本研究亦为临床针对 CT

GF 为靶点治疗 RIF 提供了实验依据。
综上所述,活血祛瘀方能够通过降低 BUN 水
平,减少尿 NAG、
2
MG 排泄, 保护肾小球及肾小
管功能;能够下调 T GF

1和 CT GF 的表达,抑制纤
维化信号的传递, 从而减少 ECM 在肾间质的过度
沉积,起到改善 RIF 的作用。
参考文献:
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F809
翁沥通胶囊中铜绿的拆方研究
任雷鸣*
,赵  丁, 王  雪,吴志刚,赵  艳
(河北医科大学药学院 药理学研究室,河北 石家庄  050017)
摘  要:目的  研究铜绿在翁沥通胶囊镇痛、抗炎及治疗前列腺增生功效中的作用。方法  采用醋酸扭体模型比
较不含铜绿的翁沥通胶囊 ( A 药) 和含铜绿的翁沥通胶囊 ( B 药 ) 的镇痛作用; 采用小鼠二甲苯炎症模型比较 A
药和 B 药的抗炎作用; 采用小鼠 sc 丙酸睾酮诱导前列腺增生模型,比较 A 药和 B 药的抗前列腺增生作用。结果
连续 ig 7 d 翁沥通 A 药和 B 药 0 6、1 2、2 4、4 8 g / kg (按生药量计算) , 小鼠 15 min 内的扭体次数均显著少于对
照组 (P < 0 05、0 01)。翁沥通 B 药 1 2、2 4、4 8 g / kg 及翁沥通 A 药 2 4 g/ kg 连续 ig 7 d,明显减轻小鼠耳片肿
胀度 (P< 0 05、0 01) ; 翁沥通 A 药的其他 4 个剂量组的小鼠耳片肿胀度与对照组相比均无明显差异。翁沥通 B
药 0 3、1 2 g/ kg 连续 ig 14 d,明显减轻前列腺增生模型小鼠的前列腺湿质量及湿质量系数、前列腺干质量及干质
量系数 ( P< 0 05、0 01) ;翁沥通 A 药仅有 1 2 g/ kg 明显减轻模型小鼠的前列腺湿质量、湿质量系数及前列腺干
质量 (P< 0 05、0 01) , 对前列腺干质量系数无明显影响 (P > 0 05)。结论  铜绿在翁沥通胶囊的组方中,对于该
方剂的抗炎和抗前列腺增生功效发挥重要作用。
关键词:翁沥通胶囊; 铜绿; 镇痛; 抗炎; 前列腺增生
中图分类号: R285 5    文献标识码: A    文章编号: 0253
2670( 2010) 11
1862
04
  良性前列腺增生 ( BPH ) 是以排尿困难进行性
加重,如尿频、尿等待、尿线无力、尿间断或尿滴沥等
为临床症状的一类前列腺疾病, 是中老年人群的常
见病和多发病。对于轻度和中度 BPH 患者, 临床
上常采用药物治疗。1976年, Caine 等 [ 1]就使用非
选择性 受体阻断药酚苄明治疗 BPH 患者。但
是,非选择性的 受体阻断药不良反应较大, 约有
10% 患者不能耐受而停药。天然药物因其作用全
面而温和,不良反应较小, 适合长期服用等特点, 在
治疗良性前列腺增生方面越来越受到重视。前列腺
炎也是泌尿科临床上最常见的炎症性疾病之一, 高
达 25%~ 50% 的男性曾经或正在受到前列腺炎的
!1862! 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 11 期 2010 年 11月

收稿日期: 2010
03
12                     基金项目:河北省自然基金 ( C2006000802)
* 通讯作者  任雷鸣( 1956 ∃ ) ,男,教授,主要从事神经和心血管药理学研究。T el: ( 0311) 86266405  E
mail: ren
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