免费文献传递   相关文献

Optimization of expression and purification of recombinant Salvia miltiorrhiza WRKY1 protein in Escherichia coli

丹参转录因子SmWRKY1蛋白的表达和纯化条件优化研究



全 文 :ÔÕÑØà
8/E>FG
ÙҋÌÍÚ
Û{ÜÝÞ{Ž
M¬­
!
®¯
!
°±²
!
q{%
!
D³´
!
q=€
!

!

=Â=ˆŽ =‘=’
!
“”
$$%$$#
#
no
$!E>FG
ÑØàúБìD”˜>5‹
E>FG
5Ðï‹2¥ÙÒ
$
úÊ˚eD‹ÑØàï­
)
ȍŽQ
E“•‹
!5C):WX -I;3
Ѓf›ÌÍÎÏ
PJZ*(K
Î
$
Ñ{…`]s
MD* !IJ)
¸dOPÌÍ
$8I85@3?J
5IÏÈ
Ùҋ…:.
)# _IK$
‚b˜‹ÙҖ>Œ £íÐB
$
ûlÈÂÃi…`]s$~ÌÍ
)
>HIÙÒÌ͋
&
{Ã(
#
O
PQé
%
OP.˜
%:@Z?
p˜•OPJs‡‹p˜¸dÞ{
$
5Ìli…`]s
MD* !IJ)
$
$
J
4
#$$
Íf.
c$ fc
Q
$
ÃF
$c* /.[(D
p
‹
:@Z?$
i
*$ m
OPêí
* S
£
8/E>FG
ÙҋÌÍ퉔
)
›ÌÍ}Ë
8/E>FG
ÙÒ5Õ
/ϋ8¶i
$
³#†(\]Õ/ÏÙÒ
$
#
;T
*e
NÚÞ§¿Û{ÌÍÙÒ
$
Û{£Ùҋ£íp˜Å
*c&& Q(D
p
)
÷
ÙÒ£_ŽÑ˜
$NTU5ZKQ
“•xÏ/5e™”‹»Ì
8/E>FG
ÙÒ
$
¸Ðú©WÔÕ
8/E>FG
ÙÒi…`]s$~
ÌÍ
)
mŽÅ¸Ðúd¹
!5C):WX
ÂËÌ͂ÔÕƑ¡{6ˋ|Ë6~–—Ž½ÓrÄÂ|
)
#
pqr
$!
ÔÕ
*!5C):WX*
Þ{ÌÍ
*
Õ/ÏÙÒ
*
ÙÒ£_Ž
#
st)(
$!*$)5*54
#
uvwP
$!
%ïVA&ÂåWg
!(%)&4$$()$$%$
#
xyz{
$!
!
“æ
$
Ž†
$
ðñÁU$,¼½‚Œ |,
Ž
$ZO[# !$$#&$&&5*4$ J5/KT[# -/)_O_O2#)c-./
#
z{…†
$!
ëʙ
$
2DŽ|
$ ZO[# !$$ #&$&&5*4#$
J5/KT[# S^.1Q*4USK14*2#)c-./
!!E>FG
ÑØàÄÅÊË$aJ…‹ÑØÃ
 ï­cÐ
$
iÊˋ|)cÌÁ$‹f¬×ž
ñ‹Ä#
$
vՂÊË>|ËÚ¬|ËOˏá‹
Ó¹Ä#
$
’Õ‚Óë|RŠ}ˋ|Ë6~‹Ó
Ä#
)
Ha¸ÈÑØà/5‚g‹ùÂÃÅ,
 Lï‹
E5MHA
d8wÝ
!<=ZZ?3
”56
-5*.
$
Á®ª2–—ÂËÌÍ
$
WH¡iÑ
Ø~΋ӹÄ#
) AÚ
EK1Q
¡Á~Wrm
fÓ$ŒûÍf
R#C):WX$
ª2ÊËx“(f†
Ç|Ë6~ÌÁ$—ÑV
<3I
ÂËÌÍ
$
¸Ð
ú3¸f†Ç‹|Ë6~
-).
) FKV.
Ú
I\R.\ O^V
¡
cHqm+$
E>FG
ÙҝõӁ+|Ë6
~‘$6iÂËÌÍ
$
3¸qm+|Ëü‹
|Ë6~
-&.
)
 =/&
E>FG
ÑØàiÑØ~
Î>ë|RŠ}Ë|Ë6~‘$‹—ÑV‹O
¬×žñ‹ÓÄ#
)
mŽQE“•‹
!5C):WX -I;3
Ѓf
›ÌÍÎÏ
PJZ*(K
Î
$
Ñ{…`]s
MD* !IJ)
¸dOPÌÍ
$
G>¡OPÜݸÐúÞ{
$
³#†
(\]Õ/ÏÙÒ
$
8#
NTU5ZKQ
NÚÞ§>ÈÙ
Ò¸dÛ{
$EOUVOX1
_Ž¸ÐúX©
!5C):WX
i
…`]s$ÌÍ
)
ÔÕ
!5C):WX
ÂÃi…`]s
$‹~Ì͕Û{
$
ōŽÈÂÃ>ÔÕƑ¡
{6ˋ|Ë6~‹Ó¹õ½Óн‹Â|
)
!

\!
sT
%
£ÿ
%
êíÂ
Ñ{sT
B+.1*-%.1%# .&(%IN
!ÚÌÍ¢ðA
B
MD* !IJ)
¸V23m8å|Ë()DEF
G
$
ÌÍÎÏ
PJZ*(K
ÅmWX†š>¶
) Bc.&(%
-PJZ*(K5!5E>FG.
úÑ{Ó
PJZ*(K5!5E>FG
‹…`]s
*
ÀÑ{
PJZ*(K
£ÿ‹…`]s
Bc.&>
(%-PJZ*(K.
ž”>žás
)
DM
êíÂ
!
oÙҒ
$ Q(D
p
$
“û\]Ë

Q(D
p
$ ;K<[$ Q(D
p
$ PN%c$*
DÏêíÂÃ4
+.
Q(D
p

#Mêí…`]s
)
\!
x|(
‘A’(¸V
8TQ/K
FG
$
tR£íp˜
Å
$ Q(D
p
)
\&!
Vڌ4
Eõ”›È8âV¸V
;JM
FG
*:@Z?
¸V
8TQ/K
FG
*
›Ì͚#‹¬bÀÙÒ
9KX_OX
¸
V
COX/O1VKU
FG
*;T
*e
8OPSKX.UO
Z9
# CKUVC[.+
¸V
(&*(
t
)4
Êt
%
v
*$&
o
&
p
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
L.[c)4$:UU\O!%
3PXT[$ *$&
?J
FG
*

9KX_OX
¸V
;JM
FG
$NTU5ZKQ
“
•xÏ
$N>@5
àx:^‘x•
JYæcÁ‡¸V
]=—“FG
)
¡qŒ4—ÅŒ˜Û
)
\)!8I85
°fÆE§Wc

8I85@3?J

!d
‹Œû§Ú
d
‹
pö§
$
»#
M:H5>3I
FG‹
9T1T5@>HZJ3;ZOV5
XK
Wc”¸džáÙҋŒ˜
-.
)
!
¾¿
\!!5E>FG
›ÌÍÎϋЃڼ½
8#Eõ”8âV
7#5?
Ú
O1&
ŒÌ>g
‹ÂÃ
!5C):WX
‹
@<>
}Ëڐ›ÌÍÎÏ
PJZ*(K
¸d?Vâ
$
QÛ{£‹
@<>
}˂ÌÍ
ÎÏ
PJZ*(K
+q
$
žá£ÿÑ{
Bc.&(%MD*
!IJ)
ĀäAB
)
%•f‹WX()—Õ$É
ü
-#5%.
)
#
7#5?
Ú
O1&
?Vâ¼½Œ˜
$d
‹
4+.WcјˆFÚF‹…:
$
G>žá£ÿ
PJZ*(K5E>FG
¸d˜4¼½
)
\!!5E>FG
›ÌÍ
ž]1”žás‹s‹
$
qåt
* /D
ì
FK1
‹
DM
‡ÏêíÂ$
$)% m
2{퐣
$

l$

$*$ X(/T1
p
ÆÆ$|)>?v
!4
#$$
.
c$ f
c$
ÃF$c* //.[(D
p
‹
:@Z?
t
*$
m
OPÌÍ
)
OPÌÍ5v£
$
]
/D

$& m$
( $$$ X(/T1
p
ûU
/T1$
2´sÏ
$
#‹û ~d
•
*
ë
$
ÃF
$$
*
D* k8I8
ÎB¤F‡
$
Ӗ
$
/T1$& m$* $$$ X(/T1
p
ûU
) /T1$
]Î)
*$
*
D
ÎB
)
#
d
‹°fÆ!E§¸d
8I85@3?J
јŒ˜
)
\&!
ÌÍÜ݋Þ{
ÿ>OP.˜
%
OPQé
%:@Z?
p˜•OPQ
¢ðs‹
4
#$$
&
{Ã(
$
>0¡$‹
)
{Ã(çî
$
ŒÌ}$%ÐÃ(>ÔÕ
E>FG
žáÙÒÌ
͋HI
)
\)!
s‡|Ë틘½
]þ틢ðss‡
$
5ìD
FK1
‹
DM
‡Ï
Å#Ò>
$
ј¡i
4
#$$
f‹1Á˜
$
ÄÅ¡|Ë
í‹È.
)
\$!
Õ/ÏÙҋ\]
Õ/ÏÙҋ\]
$
%•f‹ŒX¾¿—Õ$
Éü
-(.)
\b!
žáÙÒ
8/E>FG
‹Û{
•HÎpÞ{ÜÝ
$
\]Õ/ÏÙÒ
$
\]‡÷
$c&
*
/
‹óÌ£
$
³#
;T
*e
NÚÞ§¿
$
#
;T
*e
8OPSKX.UO
Z9
# CKUVC[.+
ÌÜÛ{‡
$
A£³#
)$ _IK
‹pöÜpöÛ{£‹B«
$
a£¸d
8I85
@3?J
E§Wcј
$
Gi
4 1/
f
$
ј¡p˜
)
\%!
žá
8/E>FG
ÙҋÙÒ_Ž
Û{ÙÒ÷
8I85@3?J
E§WcŒû£
$

WÑ{f
@LIC
óÎ
$
Ñ{ëm‹ó
$
#
$$d
‹t
E—d
*
ë
$
A£QóÑn$ìD
@M8$d
e+á
˜
$$c)d
°yýƺ~ãžEp%È,
!V+OO1
*$
•Ðx‹Õ6‡$w
* S$
qO#
@M85Z
Fd
*
ë
$
‰#
N>@
Èɋàx:^‘xw
) S$

™
@M85Z
—d
)
ë
)
1þ~Œ£
$
#
JwêŒ
V
$
¸dIH
)
&!
5
&\!PJZ*(K5!5E>FG
›ÌÍÎϋЃ
QЃ‹
PJZ*(K5!5E>FG
žá£ÿÑ{¢
ðs
Bc.&(%IN
!$
$@<>
¼½¬1”“•
)

#
7#5?
Ú
O1&
¸d?Vâ¼½
$
¬H
*
ܛ
$


$t
*
Üܛ‹…:.
%4( RP!
g
$
‚
!5C):WX
Â˅:Ð%
)
˜45Iςg‹
ÂË4ÙÐ%
$
ûlE÷~Q
!5C):WX
ÂÃ
Ѓf›ÌÍÎÏ
PJZ*(K
Î
)
9$9*c
ŒÌÅ
_R I;39KX_OX
Ú
I;39KX_OX* $$$* cPJZ*(K5
!5C):WX
?VâÚF
)
g
!
žá£ÿ
PJZ*(K5!5C):WX
‹
7#5?
Ú
O1&
?V
â¼½
CTQc!31K[6UTU.WVSOXO-./RT1K1VP[KU/TY +TVS XOUVXT-VT.1 O15
6^/OU7#5?

K1Y O1&

&\!Bc.&(%-PJZ*(K5!5E>FG.
‹OPÌÍ
QЃƒ‹
PJZ*(K5!5E>FG
£ÿÑ{fÌ
ÍsT
MD* !IJ)$
ÃFþEp˜‹
:@Z?
OPÌ
Í
)
]
/D
‹OPs‡
$
÷ÌûUd•Ó–£
$
‚
(*(
t
)4
Êt
%
v
*$&
o
&
p
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
L.[c)4$:UU\O!%
3PXT[$ *$&
þí‹
* k8I8
E§ÎB¤F‡Õ6£
$
¸d
8I85
@3?J
E§WcŒ˜
)
i.
)# _IK
f¬Hg‹Ü
›
$!5C):WX
ÂË
-I;3
 
($
{{ÂÈá~
$
/Q
*4c# _IK
‹ÙÒ
$
®›ÌÍÎÏ
PJZ*(K
‹
NTU5ZKQ
Ț‹…:Å
#c)( _IK$
š5žáÌÍÎÏ
/Q‹Ù҅:.Å
)# _IK)
Cú¾”>
Bc.&>
(%-PJZ*(K.
OPÌÍ£i
)# _IK
f­Dܛ¬H
!
g
*)
 t›ÌÍÎÏ
PJZ*(K
‹
NTU5ZKQ
Ț
ÙÒ«:
$
š5ig$­D¬Hg‹Ü›
)
5Î5
ÌlìD
!5C):W
Â˞á£ÿ
$
i…`]
s$E~ÌÍ
)
9c
Ù Ò
9KX_OX* <$cBc.&(%- PJZ*(K.* !5E>FG.)
g
*!
žá£ÿ
PJZ*(K58/E>FG
‹ÙÒÌ͌˜
CTQc*!31K[6UTU.WVSOPJZ*(K58/E>FG W\UT.1 PX.VOT1 O75
PXOUUT.1 R68I85@3?J
&\&!Bc.&(%-PJZ*(K5!5E>FG.
ÌÍÜ݋Þ{
&\&\!
OPQé>
PJZ*(K58/E>FG
ÙÒÌ͋
HI
!
>0OP.˜
*$ m$:@Z?
‹OPp˜
$c*
//.[(D
p
•OPJs‡‹p˜çî
$
ŽOPQ
é>
PJZ*(K58/E>FG
ÙÒÌ͋HI
$
ÆNjQ
éâÅ
*$&$#$($$$* S$
5IÏOPQé>ÈÙ
ҋÌÍD‰ÅlI‹HI
$
ÈÙÒi
* S
‹Qò
EDÔlI‹ÌÍ
$
NOQé‹mÃ
$
ÈÙҋÌÍ
íD‰ÅlI‹mÃ
$
Ui
* S
ÙҋÌÍíÍf

!
g
))
&\&\!
OP.˜>
PJZ*(K58/E>FG
ÙÒÌ͋
HI
!
>0OPQé
* S$:@Z?
‹OPp˜
$c*
//.[( D
p
•OPJs‡‹p˜çî
$
ÆÇ
&

è‹.˜
$
_
*$$*$)$$)% m$
«%fOP.˜>
PJZ*(K58/E>FG
ÙҋÌÍHIçúÔlI
$

&
{çè‹.˜6žáÙҗ/5Í5ԃ‹ÌÍ
$
®
ÿ.
*$ m
‹®¯6ÈÙҋÌÍí–>‰ƒ
!
g
&)
9c
ÙÒ
9KX_OX* <$cBc.&(%- PJZ*(K.* < f<#c
ŒÌi
*$&$#$($
$$* S
f·‹
Bc.&(%-PJZ*(K.

* f#c
ŒÌi
*$&$#$($$$*
S
f·‹
Bc.&(%-PJZ*(K58/E>FG.

)
g
)!
žáÙÒ
PJZ*(K58/E>FG
içèOPQé6‹Ì
͌˜
CTQc) ! 8I85@3?J K1K[6UTUW.XB+.1*-%.1%# .&(%- PJZ*(K5
8/E>FG. +TVS YTWOXO1VT1Y\-VT.1 VT/OU
9c
ÙÒ
9KX_OX* <$cBc.&(%-PJZ*(K.* < f<&c
ŒÌi
)%$ )$$ *$
*$ m
6OP‹
Bc.&(%-PJZ*(K58/E>FG.

)
g
&!
žáÙÒ
PJZ*(K58/E>FG
içè.˜6‹OPÌ
͌˜
CTQc& ! 8I85@3?J K1K[6UTUW.XB+.1*-%.1%# .&(%- PJZ*(K5
8/E>FG. T1 YTWOXO1VT1Y\-VT.1 VO/POXKV\XOU
&\&\&!:@Z?
p˜>
PJZ*(K58/E>FG
ÙÒÌÍ
‹HI
!
BÌÎpÜ݋Þ{
$
>0OP.˜
*$
m$
OPQé
* S
•OPJs‡‹p˜çî
$
ÆÇ
#
{çè‹
:@Z?

$
ŒÌÅ
$c*$ $c&$ $c#$ $c($
c$$c* //.[(D
p
$
Á5/5¬
:@Z?
iÿp
˜
$c* //.[(D
p
Q
$PJZ*(K58/E>FG
ÙҋÌ
Í퉅
!
g
)
&\&\)!
OPJs‡p˜>
PJZ*(K58/E>FG
ÙÒ
Ì͋HI
!
>0OP.˜
*$ m$
OPQé
* S$
:@Z?
‹OPp˜
$c* //.[(D
p
çî
$
ÆÇ


è‹
:@Z?
¶ÃQéâ
$
_QÆÌê‹s‡(
l$
Ñq£
$
ŒÌi
$$$c$*$&$# S$
˜¡i
#$$ 1/
f‹1Á˜
$
GU¶Ã
:@Z?
OPÌÍ
$
÷
8I85
@3?J
E§WcŒ˜£
$
/5«%fçè‹
:@Z?

ÃQé
$
_çè‹OPJs‡p˜>
PJZ*(K5
(#*(
t
)4
Êt
%
v
*$&
o
&
p
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
L.[c)4$:UU\O!%
3PXT[$ *$&
!!!
9c
ÙÒ
9KX_OX* f#c
ŒÌi
$c*$ $c&$ $c#$ $c($c$$c* //.[(
D
p
:@Z?
p˜6OP‹
Bc.&(%-PJZ*(K.

* < f<#c
ŒÌi
$c*$
$c&$ $c#$ $c($c$$c* //.[(D
p
:@Z?
p˜6OP‹
Bc.&(%
-PJZ*(K58/E>FG.

)
g
!
žáÙÒ
PJZ*(K58/E>FG
içè
:@Z?
p˜6‹O
PÌ͌˜
CTQc ! 8I85@3?J K1K[6UTUW.XB+.1*-%.1%# .&(%- PJZ*(K5
8/E>FG. +TVS YTWOXO1V:@Z?T1Y\-VT.1 -.1-O1VXKVT.1U
8/E>FG
ÙҋÌÍíDÔlI‹HI
)
Ñq
$
S
¶Ã
:@Z?$
¡ÙÒÌÍíÔé
$
CÑq
* S
£
$
J
4
#$$
Íf
c$ fc
Q¶Ã
:@Z?$
¡ÙҋÌÍí

!
g
#)
9c
ÙÒ
9KX_OX* < f<#c
ŒÌi
$$$c$*$&$# S
¶Ã
:@Z?
£O

Bc.&(%-PJZ*(K.

* f#c
ŒÌi
$$$c$ *$ &$# S
¶Ã
:@Z?
£OP‹
Bc.&(%-PJZ*(K58/E>FG.

)
g
#!
žáÙÒ
PJZ*(K58/E>FG
içèQéF¶Ã
:@Z?
£‹OPÌ͌˜
CTQc# ! 8I85@3?J K1K[6UTUW.XB+.1*-%.1%# .&(%- PJZ*(K5
8/E>FG. .WYTWOXO1V-\[V\XOYO1UTVTOUROW.XO:@Z?T1Y\-VT.1
&\)!
Õ/ÏÙҋ\]
•HÎpÞ{ÜÝ
$
OPþí‹s‡
$
2´s
Ï
$
ÃFнí‹
@M8$
ÿ.YƒFªÿУcH
$
ȞáÙÒTi°K$DÌÍ
!
g
%$
_52”
‹Õ/ϐ8¬H
$
i³#†(ÿÕ/Ï
$
\]g‹
ÙÒ
$
A£ŒÌ]
$
*
D
Î)Ú°K¸d
8I85
@3?J
E§Wcј
$
cHÈÙÒiÎ)Ú°K$
}DÌÍ
!
g
($
Cú°K$g‹Ùҋìí‰é
$
ûlÕ/ÏÙҋ\]ˆ‰~
)
9c
ÙÒ
9KX_OX* 3$Kc
ŒÌÅ
Bc.&(%- PJZ*(K.
‹Î)Ú°K
*
M$Rc
ŒÌÅ
Bc.&(%-PJZ*(K58/E>FG.
‹Î)Ú°K
)
g
%!
žáÙÒ
PJZ*(K58/E>FG
‹/n”ј
CTQc%!8.[\R[OYOVO-VT.1 .WPJZ*(K58/E>FG PX.VOT1
9c
ÙÒ
9KX_OX* $*c
ŒÌÅÕ/ÏÙÒ\]£‹Î)Ú°K
)
g
(!
Õ/ÏÙÒ\]£‹
8I85@3?J
Œ˜
CTQc(!8I85@3?JK1K[6UTU.WO7VXK-VT.1 W.XVSOT1-[\UT.1 R.Y6
PX.VOT1
&\$!
žáÙҋÛ{Úpö
>Îpš\]‹ÙÒ
$
³#
;T
*e
NÚÞ§¿
$
#
;T
*e
8OPSKX.UO
Z9
# CKUVC[.+
ÌÜÛ{
$
#
)$ _IK
‹pöÜpöÛ{£‹ÙÒ
$
A£¸d
8I85@3?J
E§WcјÚp˜˜í
$
5IÏ
$
Û{£‹-Ù
ÒìílIùé
!
g
4$
ûlÛ{zԃ
)
ք
˜¡£íp˜Å
*c&& Q(D
p
)
9c
ÙÒ
9KX_OX* $*c
Û{£‹
PJZ*(K58/E>FG
žáÙÒ
)
g
4!
Û{£‹
PJZ*(K58/E>FG
žáÙҋ
8I85@3?J
Œ˜
CTQc4 ! 8I85@3?J K1K[6UTUW.XVSO P\XTWTOY XO-./RT1K1V
PJZ*(K58/E>FG PX.VOT1
(%*(
t
)4
Êt
%
v
*$&
o
&
p
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
L.[c)4$:UU\O!%
3PXT[$ *$&
&\b!
žá
8/E>FG
ÙҋÙÒa§_Ž
ÎpÛ{ƒ‹ÙÒ
$
Ƹd
8I85@3?J
E§W
c
$
qOWÑó
$
™
NTU5ZKQ
ÐxÚ
N>@
Èɋàx
:^‘xw£
$
IH
$
5IÏ
NTU5ZKQ
“•x
Ï/5e™”‹»ÌžáÙÒ
8/E>FG!
g
$$
ûl
8/E>FG
ÙÒi…`]s$E~‹ÌÍ
)
9c
bÀÙÒ
9KX_OX* ŒÌìD
$$*$$
)$$&$$$
*
Q
‹Û{£žáÙÒ
)
g
$!NTU5ZKQ
“•xÏ>žáÙҋ
EOUVOX1 R[.VT1Q
ј
CTQc$!EOUVOX1 R[.VT1QK1K[6UTU.WVSOXO-./RT1K1VPJZ*(K5
8/E>FG PX.VOT1 +TVS NTU5ZKQ/.1.-[.1K[K1VTR.Y6
)!
ˆº
E>FG
ÑØàiÊˋ|)cÌÁ
$
ÊË
>Oˏáà‹I{{›
$
5•ÊËRŠ¡¾Ý
‹OԞñ‹Ä#
)
…`]sÄÅÌ͔@ÂË
€Ïs
$
@AD>Z›|ËÙÒ£‹<”
ÚâWÃrÖì
*
8@”ÙÒV+‘ª#éнç
^D‹™@ÙÒ
*
ABP£8ìDå‘̆‹8“
(¡:ð
$
CúDSÃlI‹Þâ
$
Ç|YàK)
ó
*
ÂӕÌÍÖì~$ëì
*
Ìnvw
*
êíØ

*
>ľí
*
|Yø½¡
)
…`]sÄÅ×#‹R
6ÙÒÌÍÖì
$
HI¡Ì͋Ã(Ԇ
$
ÅÓ»Ù
ҋÌÍíÍf‰ƒZä
$
vÓÆÇ6þ‹ÎÏ
$
þ
J‹ÌÍsTc”
$
’{È$;¡þJ‹êíÜÝ
ÇOP.˜
-4.
%
OPQé
-$.
%:@Z?

-.
•OP
Js‡‹p˜
-*.
!
_s‡
4
#$$
‹–

¡
)
žá
8/E>FG
ÙÒÌ͍ŽÌlOP.˜>¡ÌÍH
IçúÔlI
$
CúÅÓiÿ.OP6mÃÙҋ
nª”
-).
$
a<ÆÇ
*$ m
OP
)
NOOPQé‹
²)
$
ÙÒÌÍíçßmÃ
$
U
* S
QÍfa…
$
®
:@Z?
‹p˜>¡ÌÍíeDн‹HI
$
iÿp˜
QÙÒÌÍí–>‰”
$
‚–—Éüa¸Ð
%
-&.
)
ÆÇÿp˜
:@Z?
OP/»e1‹‹ÙÒÌ
Íp˜ç+«”
$
Ã՛|ˋÑØڜßúè
Q¸d‹
$
¤¥Ñػ͜ߋÙÒDÜݸd^
D‹Jî/…͉†‹/n”ÙÒ
)
=”OP
Js‡‹p˜>ÙҋÌÍHI‰ÅlI
$
s‡p
˜ÌÿØ̔}ç8tÙҋ…íÌÍ
)
Õ/ÏÙҐ~‹ðñÃúžáÙҋÌÍ
ÌÁ$ðÙÙÒ£Jšó‹ä2àØOË
çþ
$
ÇÌÍí̔
*
žáÙҋ{ÂÈá~
!
ìl
{ÂÈ¢†¢j~Õ/ÏÙÒ
*
¢ðAB‹8

*
œß£âWšóñ‹V‘¡
$
¿~^
D‹ë¢Ñ
-&5.
¡
)
>tÕ/ϋ\]×#†(
Ú&ȝ
*
å‰ç‹/F”î”4
$
®Õ/ϋ
nª×#†(Ú
;KHN
Œ4
$
>t
*
ånª¾¿
•£1Ùҋ<”ÌÁ‹ˆ‰
$
gJD‰ÅoA‹
Ž
-#5(.
)
mWXcš5³#†(
$
úÃņ(n
ªMDçWû
$
ë$”
%
~mÿ
$
ÙÒ<”£v‹-
£
$
ç+·~…íÙÒ£‹°K5•nª‹Õ/Ï
/Æ#†å¾¿Û{‹Þâ
)
Cú†(nªÕ/Ï
Ùҋ<‰&ȝ$
nª˜Å
%$d f4$d$

e¤Ïú†(\]Õ/Ï£
$
iÎ)Ú°K$}¶
i‹Ã
!
g
%)
 t†(‹p˜>Õ/ÏÙҋ
\]Dԅ‹HI
$
š5mŽÆ#Ó
$c$$*$
/.[(D
p
&
{p˜
$
5cHi\]‡$ìD
/.[
(D
p
ܠ(Q
$
\]‹zaƒ
)
/ÍfÐú\]
Únª‹z
$
Cúdž(‹p˜«”
$
>£1‹
Û{+}|ԅ‹HI
)
xϋõö>Ùҋۘñœ‰”
$
ió>]‹ÙÒ¡¸dÛ{
)
ÙҋÛ{¾¿Ô†
$
mW
XÆ#
@JZ
ÖÙÎÏ
$
ìD
NTU5ZKQ
Ț
$
š5Ȟ
áÙÒ/56q³#
;T
*e
NÚÞ§¸dNÚÞ§
$
N£#žY¸d”˜de
$
…ÍÛ{ÙÒ
)
•M‹ŽÌl
$E>FG
ÑØàՂÊËë|
RŠ‹|Ë6~
$
mWXBÌ
!5C):WX
‹›Ì
Í
$
…Íg‹ÙÒ
$
Å£1xϋõö
$
8#
()b˜ùÂÃ
$
ŸÐúôFŽ
!5C):WX
ÂÃ
>ÔÕƑ—ÑVÂËӹ
$
•¡‚ÔÕƑ¡{
6ˋ|Ë6~–—”½Óн‹Â|
)
#
|}~
$
- .!>\USV.1 @]$ Z.XOU]Z$ @KX1TU_O9$ OVK[,:1VOXK-VT.1 .WO[T-T5
V.X5T1Y\-OY I;35RT1YT1QPX.VOT1U+TVS O[T-TV.XXOUP.1UOO[O/O1VU
T1 VSOPX./.VOXU.WPKXU[O6@> QO1OU-].,J9MH]$ 44#$
!*$$#4$,
- * .!@$OVK[,8V\YTOU.1 I;35
((*(
t
)4
Êt
%
v
*$&
o
&
p
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
L.[c)4$:UU\O!%
3PXT[$ *$&
RT1YT1QUO[O-VTgTV6.WE>FGVXK1U-XTPVT.1 WK-V.XU[O1Y UVX\-V\XK[
-[\OUT1V.E>FG5Y./KT1 W\1-VT.1-].,@[K1V9.[MT.[$ *$$($#(
!=*$(,
- ) .!A\ GN$EK1Q]E$EK1Q8$OVK[,FG$
K-.V.1 VXK1U-XTPVT.1 WK-V.XVSKVXOQ\[KVOUVSOUOUa\TVOXPO1OU61VSKUO
QO1O!e5
#
5-KYT1O1OU61VSKUO53-].,@[K1V@S6UT.[$ *$$&$)!#
$%,
- & .!FKV.;$ I\R.\ O^VJ$ F._KR\ G$ OVK[,:YO1VTWT-KVT.1 .WKE>FG
PX.VOT1 KUKVXK1U-XTPVT.1K[XOQ\[KV.X.WRO1 6^[TU.a\T1.[T1OK[_K[.TY
RT.U61VSOUTUT1 /&G$%+8#G&%.# -].,@[K1V!#(,
- .!8K/RX.._ ]$CXTVU-S JC$9K1TKVTUZ,9.[O-\[KX-[.1T1Q$K[KR.5
XKV.X6/K1\K[-9.,*1Y OY,;O+G.X_# <.[Y 8PXT1QNKXR.XDK5
R.XKV.X6@XOUU$4(4##,
- # .!DT\ Z$ S`\ @$ K1Y -SKXK-VOXT^KVT.1 .WS6.U-6K/T1O#

5S6YX.76[KUOWX./ SKTX6
X..VU.W4%+&3,+$#9,$%.,+-].,@[K1V9OY$ *$$$%#*&4,
- % .! S`K1QN$ DT\ `?$ b\ 8,>OUOKX-S .1 .PVT/K[O7PXOUUT.1 K1Y
P\XTWT-KVT.1 .WS\/K1 XO-OPV.XKUU.-TKVOY PX.VOT1 T1 BS.&(%-].,]
N\K1 S^.1QB1Tg8-TZO-S#NOK[VS 8-T$ *$$&$ ))#*#,
- ( .!].UPS 8K/RX.._$ IKgTY E>\UUO[,9.[O-\[KX-[.1T1Q# K[KR.XK5
V.X6/K1\K[-9.,)XY OY,;O+G.X_#<.[Y 8PXT1QNKXR.XDKR.XK5
V.X6@XOUU$ *$$#*#,
- 4 .!G\ ?b$ ]TK1Q8 b$ DTGD,HPVT/T^T1QO7PXOUUT.1 .WXO-./RT5
1K1V*#5_T[.YK[V.1 Q[\VKVST.1O!5VXK1UWOXKUOU.W!.1%+$&+&5# 8#>
5&%.,5T1B+.1*-.1%# .&(%-].,-$.!9T-SKO[]E$ 9KXTK@$ 8SK+1 ><$ OVK[,8VKRT[T^KVT.1 .WKP.5
Q[.RT1 R6[.+VO/POXKV\XOT1-XOKUO6TO[Y .WU.[\R[OXO-./RT1K1V
SO/.Q[.RT1 T1 B+.1*-%.1%# .&(%-].,3PP[J17TX.1 9T-X.RT.[$
44%$#)#&),
-.!GKU\_K+KZ$FK1OT:<$9KO_K+KZ$OVK[,:1-XOKUO.WU.[\RT[TV6
.WW.XOTQ1 PX.VOT1 T1 B+.1*-%.1%# .&(%R6-.PX.Y\-VT.1 .WVSORK-VO5
XTK[VST.XOY.7T1-].,]MT.[-*.!MK1O67Z,>O-./RT1K1VPX.VOT1 T1 B+.1*-%.1%# .&(%-].,<\X
HPT1 MT.VO-S1.[$ 444$$#&,
-).!8-SOT1 PX.VOT1 T1 TUWKg.\XOY R6[.+OXQX.+VS VO/POXKV\XO-].,MT.VO-S5
1.[.Q6$ 4(($##*4,
-&.! S`K1QZT1Q5VT1Q$ GOM.5PT1Q,@X.QXOUUT1 UV\Y6.1 XOW.[YT1QK1Y
XO1KV\XKVT.1 .WT1-[\UT.1 R.Y6-].,@SKX/MT.V$ *$$%$& !&#
)$#,
-.!CO1QATK.5[T,>OW.[YT1Q.WXO-./RT1K1VT1-[\UT.1 R.Y6PX.VOT1U
-].,@X.QMT.-SO/MT.PS6U$ *$$$*(!&#&(*,
-#.!MKTQC$ COX1K1Y.D@$ 8K[K^KX93$ OVK[,I61K/T-VXK1U-XTP5
VT.1K[XOUP.1UO.WB+.1*-%.1%# .&(%V.T1-[\UT.1 R.Y6W.X/KVT.1
-].,MT.VO-S1.[MT.O1Q$ *$)$*#(
-%.!EO[S.OWOX9$ 8PXT1 [^E$ NKS1 >$ OVK[,<.1VT1\.\UPX.-OUUT1Q
.WXO-./RT1K1VPX.VOT1U# T1VOQXKVT.1 .WT1-[\UT.1 R.Y6U.[\RT[T^K5
VT.1 K1Y XOW.[YT1Q\UT1QUT/\[KVOY /.gT1QROY UT^OO7-[\UT.1 -SX.5
/KV.QXKPS6+TVS R\WOXXO-6-[T1Q-].,])4#$%,
-(.!CXO6YO[J]$HVO1U9$JPPT1_ 9$OVK[,JWT-TO1VU.[\RT[T^KVT.1
.WT1-[\UT.1 R.YTOU-].,MT.VO-S1.[]$ *$$%$*!###%(,
6JB.,.[-B.@A@K?NJE?II.@A-AFJGE.K.T-B.@A@KE?T@,L.A-AB
<.-=(. 5(-2($**)(>. ]8^ _ JE@B?.A.A?#)*(#)(. #$-(
D:BG\5^S.1Q$ 8NJ;GO$ >H;?bT57TK1$ EBEO156K1$ D:>\T5R.$
EB S`T5QK1Q$ !
!#$%&#()*+&,-.*/*$*-0&-/1%*+*2#$*-%# 2*3%.#$ /1%# 4.#3*56&0/1%*+*2*3%.#(!.%*.*+$ 7*%8%9 $$%$$$ /1%#
!!-4LIBE-TB.!E>FGVXK1U-XTPVT.1 WK-V.XTU.1O.WVSO` T1-WT1QOXPX.VOT1U+ST-S -.1VKT1UKSTQS[6-.1UOXgOY E>FGY./KT1 K1Y
TUKWK/T[6.WVSOP[K1V5UPO-TWT-VXK1U-XTPVT.1 WK-V.XcZSOP[KU/TY PJZ*(K5!5E>FG SKXR.XT1Q!#(E%# 5%($%&-1%I# E>FG
!!5E>FG QO1O+KUU\--OUUW\[6VXK1UW.X/OY K1Y O7PXOUUOY T1 B+.1*-%.1%# .&(%MD* !IJ)cZSO-.1YTVT.1U.1 PX.VOT1 O7PXOUUT.1
.W!5E>FG T1 Bc.&(%$T1-[\YT1QT1Y\-VT.1 Y\XKVT.1$VO/POXKV\XO$:@Z?-.1-O1VXKVT.1 K1Y VSOBc.&(%-.1-O1VXKVT.1 +OXO.PVT/T^OYc
ZSOXOU\[VUUS.+OY VSKVVSOSTQSOUVPX.VOT1 O7PXOUUT.1 .W!5E>FG +KU.RVKT1OY KV*& S.\XUKWVOXVSOBc.&(%+KU-\[V\XOY T1 VSOPXOU5
O1-O.W$c* /.[(D
p
:@Z?KV*$ m +TVS 4
#$$
gK[\OU.Wc$5ccZSTUXO-./RT1K1VSTUVTYT1O5VKQQOY PX.VOT1 +KUO7PXOUUOY KV*c&& Q
(D
p
KUT1-[\UT.1 R.Y6$ +ST-S +KUWTXUVO7VXK-VOY \UT1Q\XOK$ K1Y VSO1 P\XTWTOY R6;T
*e
KWT1TV6-SX./KV.QXKPS6K1Y TYO1VTWTOY R6
8I85@3?JcZSOO7PXOUUT.1 .W!5E>FG T1 Bc.&(%+KUW\XVSOX-.1WTX/OY R6+OUVOX1 R[.VT1QK1K[6UTU,
- ?^D U@EFI.!!#(E%# 5%($%&-1%I#* !5E>FG* .PVT/T^T1QO7PXOUUT.1* T1-[\UT.1 R.Y6PX.VOT1* +OUVOX1 R[.VT1Q
F@.#(c)bdOT`T,,()(%&
#
€-0
!
‚ƒ„
$
(4*(
t
)4
Êt
%
v
*$&
o
&
p
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
L.[c)4$:UU\O!%
3PXT[$ *$&