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Effects of Volatile oil of Rhizoma Zingiberis and other two kinds of volatile oil on percutaneous penetration of Bullatine A via hairless mouse skin in vitro

石菖蒲等3种挥发油对雪上一枝蒿甲素经皮渗透的影响



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Preparationandpropertiesofsustainedreleasepeletsofglycyrrhizin
efectivecomponents
CHENLihua1,2,FENGYi1,XUDesheng1,LIJunsong1,ZHANGLiang1,WANGYihan1
(1.CenterofScienceandTechnology,ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shanghai201203,China;
2.KeyLabforModernpreparationoftraditionalChinesemedicine,MinistryofEducationofChina,Jiangxiuniversityof
TraditionalChineseMedicine,Nanchang330004,China)
[Abstract] Objective:Topreparetheglycyrhizinpeletsbyextrusionspheronization,andoptimizetheformulationofsus
tainedreleasepeletsofglycyrhizinefectivecomponentscoatedwithmixedEudragitRS100andEudragitRL100.Method:Thesus
tainedreleasepeletsofglycyrhizinwerepreparedbyGlatfluidbedtechnique.TheratioofEudragitRS100toEudragitRL100inthe
formulationwasoptimized.Thefactorsthatinfluencethedrugreleasebehaviorsandtheirpropertieswereevaluated.Result:Theopti
malcoatfordrugsustainedreleasewasshownattheratioofEudragitRS100toEudragitRL100of4∶1,theloadingweightofcopoly
mersof5% andtheplasticizerconcentrationof15%.ThecurvesofcumulativedrugreleasewerefitforPeppasandHiguchiequation.
Conclusion:TheoptimalsustainedreleaseoftheglycyrhizinefectivecomponentpeletsisfeaturedbyadjustingtheratioofEudragit
RS100toEudragitRL100andtheloadingweightofcopolymers.
[Keywords] glycyrhizinefectivecomponents;EudragitRS100;EudragitRL100;sustinedreleasepelets
[责任编辑 鲍 雷]
[收稿日期] 20070530
[通讯作者] 马云淑,Tel:(0871)7154594,Email:yunshuma2@126com
石菖蒲等3种挥发油对雪上一枝蒿甲素
经皮渗透的影响
白一岑,李艳杰,马云淑
(云南中医学院 中药学院,云南 昆明 650200)
[摘要] 目的:考察石菖蒲、肉豆蔻、桔皮所含挥发油对雪上一枝蒿甲素经皮渗透的影响。方法:采用改良
Franz扩散池法,以裸鼠皮肤为透皮屏障,以HPLC测定模型药物雪上一枝蒿甲素的累积渗透量,并以3%氮酮为对
照,考察石菖蒲、肉豆蔻、桔皮3种挥发油对雪上一枝蒿甲素的促渗效果。结果:7%石菖蒲、7%肉豆蔻、5%桔皮挥
发油与3%氮酮对雪上一枝蒿甲素均具有一定的促渗作用,促渗倍数分别为652,674,218,603倍。结论:7%
石菖蒲、7%肉豆蔻、5%桔皮挥发油均能促进雪上一枝蒿甲素的经皮渗透。
[关键词] 石菖蒲挥发油;肉豆蔻挥发油;桔皮挥发油;促渗剂;雪上一枝蒿甲素
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[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)05051304
  透皮给药制剂具有避免肝脏的首过效应、维持
恒定的血药浓度及给药方便等优点。药物透皮吸收
的主要障碍来自皮肤的角质层,人们已尝试多种方
法来克服这种障碍,其中促渗剂的研究和使用效果
明显,已得到广泛应用。为了得到效果好,副作用小
的促渗剂,人们已开始从中药中研究、发掘。为系统
考察各类中药挥发油的促渗作用,本实验按功效分
重点选择芳香开窍药石菖蒲、温中行气药肉豆蔻、桔
皮,3种中药含有丰富的挥发油,主要成分多为单萜
和倍半萜,作为促渗剂研究均未见文献报道。
目前,对中药有效成分的经皮渗透制剂研究方
兴未艾,雪上一枝蒿甲素是毛茛科植物雪上一枝蒿
的主要成分之一,属于二萜类生物碱。现代药理实
验研究表明具有镇痛、抗炎、镇静的功效,民间和临
床上常用雪上一枝蒿药材外敷治疗各类疼痛。但对
其透皮给药的实验研究鲜有报道[1],本实验选择的
3种中药挥发油与雪上一枝蒿甲素有协同药理作
用。为此,作者考察了石菖蒲、肉豆蔻、桔皮挥发油
对模型药物雪上一枝蒿甲素透皮吸收的影响,并以
促渗剂氮酮进行阳性对照观察,为中药促渗剂的研
究与开发提供实验依据,并为中药透皮给药系统新
剂型的研究提供参考。
1 材料
1.1 药品与试剂
雪上一枝蒿甲素对照品(中国药品生物制品检
定所);雪上一枝蒿甲素为毛茛科植物短柄乌头 Ac
onitumbrachypodumDiels.的主要成分(中国科学院
昆明植物所提供,李锡文鉴定,面积归一化法含量为
98%);石菖蒲为天南星科多年生草本植物石菖蒲
AcorusgramineusSoland.根茎;肉豆蔻为肉豆蔻科植
物肉豆蔻 MyristicafragransHout的成熟果仁;桔皮
为芸香科植物橘CitrusreticulataBlanco的栽培变种
的成熟新鲜果皮(以上药材均购自云南省药材公
司,由云南中医学院生药教研室鉴定)。
8%Na2S溶液、生理盐水、70%乙醇、磷酸盐缓
冲液(pH43),均为分析纯、甲醇(色谱纯)。
1.2 动物
裸鼠,雄性,10周龄(云南中医学院实验动物中
心提供,许可证号200416)。
1.3 仪器
①TK-12B透皮扩散试验仪,上海锴凯科技贸
易有限公司产品;②高效液相色谱仪,德国 Agi
lent1100Series(DAD);③1/1万电子分析天平(Pre
cisaXs125A);④KUDOS-SK250HP超声仪(上海科
导超声仪器有限公司)。
2 方法
2.1 挥发油提取
石菖蒲经水蒸气蒸馏得到的淡黄色油状液体,
收率为06%;肉豆蔻经水蒸气蒸馏后得到的淡黄
色油状液体,收率为136%;桔皮经水蒸气蒸馏得
到近无色油状液体,收率为066%。
2.2 供试液的配制
精密称取雪上一枝蒿甲素,少量稀盐酸(pH1)
溶解,加入70%乙醇定容,配成浓度为7mg·mL-1
的空白雪上一枝蒿甲素溶液。同法另配4份,分别
加入氮酮、石菖蒲、肉豆蔻以及桔皮配制成含3%氮
酮、7%石菖蒲、7%肉豆蔻、5%桔皮的供试液。实验
时,取上述5份样品液各1mL,再另取1mL70%乙
醇溶液作为空白皮肤对照放入供给池进行透皮扩散
实验。
2.3 HPLC条件
2.3.1 色谱条件 EclipseXDBC18色谱柱 (46
mm×250mm,5μm);流动相乙腈磷酸盐缓冲液
(10∶90);流速10mL·min-1;波长214nm。在此
条件下,样品峰分离较好,且挥发油无干扰,各挥发
油、氮酮+雪上一枝蒿甲素透过液的色谱图如图1。
图1 雪上一枝蒿甲素HPLC图
1.一枝蒿甲素对照品;2.一枝蒿甲素+3% Azone;
3.一枝蒿甲素+7%肉豆蔻;4.一枝蒿甲素+7%石菖蒲;
5.一枝蒿甲素+5%桔皮;6.空白一枝蒿甲素
2.3.2 标准曲线的制定 精密称取一定量的雪上
一枝蒿甲素,少量稀盐酸(pH1)溶解,12h空白皮
肤透过液定容,配成一系列质量浓度的溶液
(0013,0065,013,026,039,104mg·mL),进
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样量10μL,进行测定。以峰面积为横坐标,进样量
(mg·mL-1)为纵坐标,进行线性回归,得回归方程
为Y=20586X-13555,r=09999,线性范围为
0013~104mg·mL-1。
2.3.3 回收率试验 取12h已知浓度的样品皮肤
透过液6份加入一定量的雪上一枝蒿甲素对照品,
测定浓度,结果平均回收率9989%,RSD002%。
2.3.4 精密度试验 用026mg·mL-1对照品溶
液连续测定6次,计算,结果RSD0003%。
2.3.5 稳定性试验 用026mg·mL-1对照品溶
液于不同时间分别进样5μL。日内稳定性于0,1,
2,4,6,8,10,24h进样,计算,结果 RSD0012%。
日间稳定性于1,2,3,4,5,6d每日10:00进样,计
算,结果RSD0015%。
2.4 离体皮肤的制备
将裸鼠断颈处死,取腹部皮肤,去掉皮下脂肪,
用生理盐水洗净,浸泡,置冰箱中冷藏备用。
2.5 透皮试验[2]
将处理好的皮肤置于 Franz扩散池供给池和接
受池结合处,使角质层面向供给池,用弹簧夹固定,
接收池中加入生理盐水,在供给池中加入按2.2项
下配制的供试液1mL进行体外透皮实验,在05,
1,15,2,4,6,8,12,24h时将接受液全部取出(7
mL),同时补加7mL接受液并排尽气泡。并以空白
皮肤透过液为随行对照,氮酮为阳性对照,不含挥发
油的乌头碱供试液为阴性对照。透皮扩散实验仪温
度(37±02)℃,磁搅拌子转速(250±5)r·
min-1,用HPLC测定样品浓度。
2.6 结果的处理
根据下式求得累积渗透量 Qn=(7Cn+7∑
n-1
i=1
Ci)/292,公式中Cn为第n个取样点测得的药物浓
度;Ci为第i个取样点测得的药物浓度。以累积渗
透量Q对时间t作图,药物渗透达到稳态后,其中直
线部分的斜率为药物的透皮速率,即稳态渗透速率
(Jss),药物渗透系数(Kp)从下式计算 Kp=Jss/C,C
为供给池的药物浓度[3]增渗倍数(enhancementratio,
ER),可从下式得到:ER=Kp/Kp0
[4],Kp为加促渗剂
后药物的渗透系数,Kp0为药物固有的渗透系数。
3 结果
分别取上述5种透皮药液,按2.4所述实验方
法进行实验。测定接受池皮肤透过液中雪上一枝蒿
甲素的含量,计算其累积渗透量、渗透系数、增渗倍
数等,结果见表1,2。
表1 雪上一枝蒿甲素溶液12h累积渗透量(珋x±s,n=3)
促进剂 05h 1h 15h 2h 4h 6h 8h 12h Qt方程 r
对照组 00242 00473 00672 00796 01272 01763 02448 04384 Q=00286t+0014 09882
±0028 ±0052 ±0071 ±0082 ±0107 ±0121 ±0137 ±0158  
氮酮 01078 02196 03391 04445 08873 12764 15969 19653 Q=01724t+0089 09861
±0043 ±0087 ±0119 ±0140 ±0245 ±0336 ±0378 ±0282  
肉豆蔻 02768 06216 08981 10680 14971 18156 20792 23953 Q=01909t+0441 09513
±0049 ±0031 ±0124 ±0173 ±0261 ±0271 ±0247 ±0193  
石菖蒲 02088 04078 05899 07187 11959 16132 19136 21888 Q=01865t+0257 09696
±0111 ±0082 ±0053 ±0071 ±0156 ±0235 ±0261 ±0266  
桔皮 00236 00536 00878 01211 02389 03584 04886 07491 Q=00624t-0007 09998
±0019 ±0045 ±0065 ±0080 ±0108 ±0117 ±0113 ±0107
表2 石菖蒲等挥发油对雪上一枝蒿甲素渗透系数、
增渗倍数的影响(珋x±s,n=3)
促进剂
浓度
/%
Jss
/μg·cm2·h
Kp
/×103cm·h
ER
对照组 0 2860±0014 409±0002 -
氮酮  3 17238±0060 2463±0009 603
肉豆蔻 7 19087±00161) 2727±0003 674
石菖蒲 7 18652±00292) 2665±0004 652
桔皮  5 6237±00093,4) 891±0001 218
  注:1)经 t检验与雪上一枝蒿对照组相比 P<0001;2,3)与雪上
一枝蒿对照组相比P<0005;4)与氮酮相比P<005
结果表明12h的平均累计透过量大小为:肉豆蔻
油>石菖蒲油>桔皮油。肉豆蔻的增渗倍数是不含
促渗剂的674倍,石菖蒲为652倍,桔皮为 218
倍,氮酮为603倍。3种挥发油均能促进雪上一枝
蒿甲素的经皮渗透,但肉豆蔻、石菖蒲与氮酮相比无
显著性差异,而桔皮促渗效果不如氮酮。
4 讨论
促渗剂的应用是促进药物渗经皮肤进入体内的
中药的药剂学方法,是经皮给药研究的重点之一,氮
酮是目前公认的促渗剂。从表1,2可以看出,石菖
蒲、肉豆蔻、桔皮挥发油作用于皮肤后,使雪上一枝
蒿甲素渗透系数,增渗倍数均增大,说明这些挥发油
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对雪上一枝蒿甲素的经皮渗透具有一定促进作用。
但氮酮对一枝蒿甲素的促渗作用有明显的滞后现
象,肉豆蔻和石菖蒲2种挥发油与氮酮增渗倍数相
差虽不大,却能在前2h使药物迅速透过。
在接收液测定方法的选择中,曾按部颁标准使用
溴甲酚绿酸性染料比色法,以紫外分光光度计检测其
渗透量因误差大影响实验结果,因此改用HPLC测定
其渗透量。色谱条件优化时,曾选用甲醇磷酸盐缓
冲液系统,但甲醇在该波长下有吸收,基线不平;改为
乙腈-磷酸盐缓冲液系统后,出峰时间适宜,理论塔
板数均大于6000,分离度大于2。
石菖蒲、肉豆蔻、桔皮中含有丰富的挥发油,挥
发油中所含萜类化合物具有较好的促渗作用[5]。
通过GCMS分析,石菖蒲挥发油主要成分为β细辛
脑、莰烯、龙脑;肉豆蔻挥发油主要成分为香桧烯、黄
樟油素、β水芹烯、1,8桉叶素;桔皮挥发油主要成
分为柠檬烯、γ松油烯、月桂烯。这些成分均为单萜
和倍半萜,有一定的促渗作用。桔皮对雪上一枝蒿
甲素的促渗作用弱于石菖蒲和肉豆蔻,各成分之间
的配比对促渗结果可能有一定的影响,其中具促渗
作用的主要成分及其构效关系还值得进一步研究。
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andPericarpiumCitriReticulatae(PCR)onpercutaneouspenetrationofbulatineAviahairlessmouseskininvitro.Method:Byan
improvedFranzdifusion,theefectsofthreekindsofvolatileoilsonthepercutaneouspenetrationofbulatineAwereobservedand
comparedwithAzone,andthecumulativeamountofbulatineAwasdeterminedbyHPLC.Result:Thepenetrationenhancementrati
osofbulatineAwith7% volatileoilRATandSM,5% volatileoilofPCRand3% Azonewere6.52,6.74,2.18,6.03,respectively.
Conclusion:ThevolatileoilofRAT,SMandPCRenhancepermeationofbulatineA,efectively.
[Keywords] penetrationenhancers;bulatineA;volatileoilofRhizomaAcoriTatarinowi;volatileoilofSemenMyristicae;
volatileoilofPericarpiumCitriReticulatae
[责任编辑 鲍 雷]
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