全 文 ：

http://www.cjcmm.com.cn ·447·
Vol.34，Issue 4
February，2009
第 34 卷第 4 期
2009 年 2 月
肉豆蔻挥发油对小鼠肝微粒体细胞色素
P450 的影响
赵润英*，王 玮，赵丽妮，李 昭，王俊平
（沈阳医学院 药理学教研室，辽宁 沈阳 110034）
[摘要] 目的：研究肉豆蔻挥发油对小鼠肝微粒体细胞色素 P450 的影响。方法：肉豆蔻挥发油按 0.4，0.8，1.2 mg·g-1
剂量每天灌胃 2 次，连续 10 d 后，用紫外分光光度法检测肝脏微粒体细胞色素 P450（CYP）、细胞色素 B5（Cytb5）、丙二
醛（MDA）和血清谷胱甘肽转移酶（GST）的含量。结果：用药小鼠的肝脏微粒体 CYP，Cytb5 和血清中 GST 含量显著增
加（P＜0.01），并呈现一定的剂量依赖性；而肝脏 MDA 含量明显降低(P＜0.01)。结论：肉豆蔻挥发油对小鼠肝微粒体 CYP
具有诱导作用。
[关键词] 肉豆蔻挥发油；小鼠；肝微粒体细胞色素 P450；诱导作用

肉豆蔻为肉豆蔻科植物 Myristica fragrans
Houtt 的干燥种仁。肉豆蔻的主要成分为挥发油[1]，
内含 7-32 种化合物[2]，具有较强的药理活性。目前
对肉豆蔻抗炎、抗癌、抗凝、镇痛、降血糖和肝损
伤保护作用的研究都取得了一定进展[3-13]，但对肝
药酶的影响尚未见文献报道。肝微粒体细胞色素
P450 ( cytochrome P450，CYP)是药物代谢中最重要
的酶系,而药物对 CYP 活性的诱导或抑制作用,是药
物间相互作用的最重要机制[14]。本研究通过检测
CYP、细胞色素 B5（Cytb5）、丙二醛（MDA）和血
清谷胱甘肽转移酶（GST）的含量,观察肉豆蔻挥发
油对小鼠肝微粒体药物代谢酶的影响。
1 材料
1.1 动物
昆明种小鼠，体重 18~22 g，雌雄各半，沈阳
医学院和中国医科大学实验动物中心提供，动物合
格证号 SCXK（辽）2003-0016。
1.2 药物
肉豆蔻购自辽宁中医学院附属医院药房中药
部, 经沈阳医学院药学系王俊平教授鉴定。采用水
蒸气蒸馏法[15]提取肉豆蔻挥发油。按 2005 年版《中
国药典》附录规定的 XD 挥发油提取方法,将药材粉

[收稿日期] 2008-09-10
[通信作者] *赵润英，药理学教授，主要从事抗肿瘤药物靶向制剂研
究，Tel：（024）62215687，E-mail：zhaorunying@sohu.com
碎成粒径 20～40目,加水 12倍,浸泡 l.5 h, 加热提取
时间 5 h。收集肉豆蔻挥发油,加无水硫酸钠适量脱
水、干燥,得 1～3 号肉豆蔻挥发油样品。实验中以
2%聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸甲酯将每个样品分
别稀释成不同浓度备用。
1.3 试剂
还原型辅酶 I 二钠盐（上海东风试剂厂）；牛血
清白蛋白（中国科学院上海生物化学研究所）；石
油醚、氯仿、乙醇、硫酸铜、蔗糖、酒石酸甲钠、
正丁醇、氢氧化钠等均为国产分析纯试剂。
1.4 仪器
挥发油提取器(上海玻璃仪器厂)，Sorvall Pico
微量台式高速离心机（德国 Thermo Scientific®），
Eppendorf Centrifuge 5804R 冷冻型台式高速离心机
（德国 Eppendorf 公司），ShimadzuUV-260 型紫外-
可见分光光度计（日本岛津公司），日立 7180 型全
自动生化分析仪（日本日立公司）。
2 方法
2.1 动物分组及给药
按组间一致原则将小鼠分为 10 组，每组 10 只，
雌雄各半。配制肉豆蔻挥发油样品稀释液，质量浓
度分别为 12%，8%，4%。实验组分别按 0.4，0.8，
1.2 mg·g-1 剂量每天灌胃给药，对照组给 2%聚氧乙
烯脱水山梨醇单油酸甲酯，每日2次，连续10 d（0.01
mL·g-1）。


http://www.cjcmm.com.cn ·448·
Vol.34，Issue 4
February，2009
第 34 卷第 4 期
2009 年 2 月
2.2 微粒体的制备
于第 10 天，断头处死小鼠，让血液尽量流出，
称量肝重然后剪碎，生理盐水漂洗 3 次。按 1∶10
制备生理盐水匀浆。部分用于测定 MDA，其余用
Eppendorf Centrifuge 5840R 离心 30 min（4 500×g，
4 ℃），取上清用 Sorvall Pico 离心 2 h(16 060×g)，
弃上清，残留物用 0.4 mol·L-1 蔗糖重新分散,离心 2
min（4 500×g ，4 ℃），用于测定细胞色素 P450
和细胞色素 B5。
2.3 微粒体蛋白的测定
2.3.1 牛血清蛋白标准曲线 精密称取牛血清白
蛋白 100 mg，加 2 mL 生理盐水溶液，即得 4 g•L-1
牛血清蛋白溶液。用双缩脲试剂稀释不同倍数，制
作标准曲线。经紫外-可见分光光度计扫描，双缩尿
的吸收峰位于 533 nm（文献报道为 540 nm）。以吸
收度为横座标，小牛血清白蛋白浓度为纵坐标，进
行线性回归，得标准曲线方程：Y = 2.5X–0.002 735
（r=0.997），检测范围 8~2 000 mg·L-1。
2.3.2 微粒体蛋白的测定 将 1.5 mL 微粒体悬液
分别装于参考比色杯和样品杯，参考比色杯中加入
1.5 mL 生理盐水，样品杯加入 1.5 mL 的双缩脲试
剂，混匀 1 min 后在 533 nm 处测定吸光度(A)。根
据标准曲线测定各组动物的微粒体蛋白浓度。
2.3.3 肝细胞色素P450和B5的测定 将待测样品
等量（2.5 mL）加到比色杯中，然后分别加入 100 μL
硫代硫酸钠（相当于 5 mg）混匀后，样品池中比色
杯通 CO 约 30 s（气泡连续，液体不溢出），然后放
回原位在 450~490 nm 波长条件下测定 A，按以下公
式计算细胞色素 P450 的含量。
P450(nmol·mg-1) = A450 nm-A490 nm×1 000（μm）
/[91 mmol·L-1(摩尔消光系数)×蛋白浓度（g·L-1）]
将肝微粒体蛋白液分装至样本比色杯和参考
比色杯，在样本比色杯中加入 250 μL 还原型辅酶 I
二钠盐（相当于 1 mg），1 min 后在 425~500 nm 波
长段内测定 A，按上述公式计算 B5 含量（E=170
mmol·L-1）[3]。
2.4 MDA 的测定
过氧化脂质降解产物中的 MDA 可与硫代巴比
妥酸（TBA）缩合，形成红色产物，在 532 nm 处
有最大吸收峰。取肝匀浆液 0.2 mL 加入 2.5%醋酸
溶液 1.5 mL，0.67%硫代巴比妥酸溶液 1.5 mL，置
于旋涡式振荡器上充分混匀。放入 95 ℃水浴中，1
h 后取出，即入冰浴中终止反应。冷却后，加正丁
醇 4 mL，充分振荡混匀，离心 15 min（2 700×g，
4 ℃）分层，吸取正丁醇层，测定 A，根据试剂盒
说明书按如下公式计算 MDA 含量。
MDA(nmol·mg-1)=[A532 nm/0.095]×10 μmol·L-1
×10 mL·g-1
2.5 GST 测定
搜集动物全血于干净试管中，静置一夜，取血
清测定 GST 含量。
2.6 统计方法
应用简明统计学处理器 V2.0 版-专业医学统计
学处理软件，采用计量资料 t 检验方法对结果进行
处理。各数据均以 ±x s 表示。P＜0.01 则差异非常
显著, P<0.05 则差异显著。
3 结果
灌胃肉豆蔻挥发油 3 种样品 3 个剂量的小鼠，
其肝脏微粒体 CYP450,Cytb5 和血清中 GST 含量增
加，与对照组比较差异非常显著（P＜0.01），并呈
现一定的剂量依赖性；而肝脏 MDA 含量明显降低，
与对照组比较差异非常显著(P＜0.01），见表 1。
表1 肉豆蔻挥发油对小鼠肝药酶的影响( ±x s ，n=10)
组别 剂量/mg·g-1 细胞色素 P450/μmol·g-1 细胞色素 B5/μmol·g-1 MDA/μmol·g-1 GST/U.L-1
对照 – 0.136±0.069 0.029±0.010 57.89±5.98 1 138±29
样品 1 0.4 0.191±0.051 0.037±0.028 44.21±4.93 2 333±871)
0.8 0.328±0.0531) 0.066±0.0391) 37.89±7.191) 2 475±591)
1.2 0.410±0.1201) 0.095±0.0451) 29.47±5.891) 3 112±461)
样品 2 0.4 0.246±0.043 0.058±0.024 53.24±9.61 2 874±751)
0.8 0.355±0.0691) 0.073±0.0221) 51.58±9.94 2 906±581)
1.2 0.464±0.0901) 0.088±0.0461) 30.52±7.121) 3 351±961)
样品 3 0.4 0.164±0.053 0.044±0.021 53.68±9.16 1 888±471)
0.8 0.328±0.0301) 0.073±0.0221) 38.68±6.951) 3 110±751)
1.2 0.492±0.1031) 0.088±0.0321) 25.26±7.241) 3 133±421)
注：与对照组相比 1)P<0.01。


http://www.cjcmm.com.cn ·449·
Vol.34，Issue 4
February，2009
第 34 卷第 4 期
2009 年 2 月
4 讨论
CYP 是由结构和功能相关的基因超家族编码
的同工酶所组成的超家族酶系,是肝微粒体中最重
要的混合功能氧化酶,参与大量的外源性物质(药
物、化学毒物、致癌物等)和内源性物质(类固醇激
素、维生素 D、胆酸等)的代谢过程；而 CYP 本身
又可被许多物质诱导或抑制, 是造成药物间相互作
用的最重要原因。本实验研究表明, 肉豆蔻挥发油
连续灌胃 10 d，可显著提高小鼠肝细胞中细胞色素
P450 含量，同时也使细胞色素 B5 和血清中 GST 含
量明显增高，并呈剂量依赖性,但使MDA含量降低，
提示肉豆蔻挥发油对小鼠肝微粒体 CYP 和 Cytb5
有诱导作用，由此可能产生药物的相互作用,在临床
上应给予足够的重视，即肉豆蔻可能导致其他主要
经肝脏代谢的药物在体内的代谢速度加快，使药物
的作用减弱。而肉豆蔻挥发油中能诱导小鼠肝微粒
体 CYP 活性的具体化学成分，以及肉豆蔻对 CYP
这一超家族酶系中单一同工酶的影响还有待进一
步研究。
[参考文献]
[1] 李秀芳，吴立军，贾天柱，等.肉豆蔻的化学成分[J]. 沈阳药科大
学学报，2006，23（11）：698.
[2] 袁子民, 贾天柱, 王 静，等.肉豆蔻挥发油的研究进展[J].时珍国
医国药，2005，16（12）：1201.
[3] 张 静，热 娜，卡斯木，等.维吾尔药肉豆寇抗肿瘤作用实验研
究[J]. 新疆医科大学学报，2005，28（7）：618.
[4] 昌友权，杨世杰，李 红，等.肉豆蔻提取物对 GaIN 致大鼠急性
肝损伤的保护作用[J]. 中国药理学通报，2004，20 (1) :118.
[5] 韩 蕾,马颖芳,袁子民，等.肉豆蔻挥发油的药理毒理研究[J]. 中
华中医药学刊，2007，25（5）：900.
[6] 贾天柱，姜 涛，关洪全，等.肉豆蔻不同炮制品抗炎镇痛及抑菌
作用比较[J]. 方药纵横，1996，23（10）：474.
[7] 翁绳美, 孙建成, 黄自强，等.132 甲基肉豆蔻酸抗小鼠宫颈癌
U14[J]. 福建医科大学学报，2006，40（1）：34.
[8] 李德智，昌友权，昌喜涛，等.肉豆蔻乙醇提取物对一氨基半乳糖
中毒大鼠急性肝损伤的保护作用[J]. 吉林工程技术师范学院学
报：工程技术版，2003，19（6）：41.
[9] 翁绳美，昌友权，昌喜涛，等. 132 甲基肉豆蔻酸对小鼠的调节血
糖作用[J]. 海峡药学，2005，17（6）：46.
[10] Husan S ,Jannul. The action of anti-tumor in uterme about Myristica
fragrans Houtt [ J] . Cancer Lett ,1991 ,56 (3) :231.
[11] Jannul , Husan S. The action of anti-tumor in derma about Myristica
fragrans Houtt [J] . Cancer Lett ,1991 ,56 (1) 59.
[12] Smith P A. Antimicrobial properties of plant essential oils and
essences against five important foodborne pathogens[J]. Lett App
Microbiol， 1998，26 (2) : 118.
[13] Rasheed A, Laekeman G M, Vlietinck A J. Pharmacological
influence of nutmeg and nutmeg constituents on rabbit p-latelet
function [J]. Planta Med, l984, 50 (3)： 222.
[14] 杨宝峰.药理学[M ]. 6 版. 北京：人民卫生出版社，2003：11.
[15] 袁子民, 王 静, 吕 佳, 等.正交法优选肉豆蔻挥发油提取工艺[J].
时珍国医国药，2005，16（11）：1063.



Effect of volatile oil from nutmeg on liver microsomal cytochrome P450 in mice

ZHAO Runying*，WANG Wei，ZHAO Lini，LI Zhao，WANG Junping
(Dept of Phamarcology，Shenyang Medical College，Shenyang 110034, China )

[Abstract] Objective: To study the effect of the volatile oil from nutmeg on liver microsomal cytochrome P450 in mice.
Method: Mice were administered the volatile oil from nutmeg at 0.4，0.8 and 1.2 mg•g-1 , respectively, twice a day for 10 days. And
then, the contents of liver microsomal cytochrome P450(CYP), cytochrome b5 (Cytb5) , MDA and GST in serum were examined by
UV chromatography method. Result: The contents of liver CYP, Cytb5 and GST in serum were increased significantly (P＜0.01)
and the contents of MDA was reduced significantly (P＜0.01). Conclusion: The volatile oil from nutmeg showed induction effect on
the hepatic microsomal CYP in mice.
[Key words] volatile oil from nutmeg；mice；hepatic microsomal CYP；induction effect
[责任编辑 古云侠]