全 文 ：·研究报告·
ＨＰＬＣ测定杠板归中槲皮素的含量
许乾丽１，鲍家科１，茅向军１，童红１，左宏笛１，李静峰１，张志勇１，
王德甫３，李莎２，薛朝金２
（１．贵州省药品检验所，贵州 贵阳 ５５０００４；
２．贵州省毕节地区药品检验所，贵州 毕节 ５５１７００；
３．贵阳医学院，贵州 贵阳 ５５０００４）
［摘要］ 目的：建立用高效液相色谱法测定杠板归中槲皮素含量的方法。方法：对样品的提取条件和色谱条件进行研
究。采用Ｃ１８柱，流动相为甲醇０４％磷酸溶液（５０∶５０），检测波长为３６０ｎｍ。结果：槲皮素在００６０４８～１６３３０μｇ线性关系
良好，平均回收率１０２２％，ＲＳＤ２９％。结论：本法简便，准确，可作为该药材的定量分析方法。
［关键词］ ＨＰＬＣ；杠板归；槲皮素；含量测定
［收稿日期］ ２００９０３２０
［基金项目］ 贵州省中药现代化科技产业研究开发专项（黔科合社
字［２００８］５００２）
［通信作者］ 鲍家科，主任药师，硕士生导师，主要从事药品质量
标准技术研究。Ｔｅｌ：（０８５１）６８０７５９１，１３９８５４３０５３７，Ｅｍａｉｌ：ｂｊｌ２００５＠
１６３．ｃｏｍ
杠板归又名贯叶蓼、蛇牙草等，为蓼科植物
杠板归 ＰｏｌｙｇｏｎｕｍｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍＬ．的干燥地上部
分。本品亦为贵州省少数民族用药。《中国药
典》１９７７年版一部曾经收载，无含量测定项目。
具有利水消肿，清解热毒，止咳的功效。用于肾
炎水肿，上呼吸道感染，百日咳，泻痢，湿疹，疖
肿，毒蛇咬伤［１］。根据文献报道，杠板归有抗癌
活性，对实验性动物移植肿瘤有抵制作用［２３］。
作为国家药典委员会《中国药典》２０１０年版一
部拟增加品种，我所根据《中国药典》２０１０年版
一部标准研究课题任务书要求，对杠板归药材
进行含量测定研究。据报道［４］，杠板归中主要
含黄酮类［５］、苯丙酸类、苦木素类、蒽醌类和新
苯丙素蔗糠酯类等成分。杠板归中化学成分的
含量测定，文献报道较少，有报道对其所含的槲
皮素含量采用薄层扫描法进行测定［６］。作者参
考《中国药典》２００５年版一部［７］及有关文献［８９］
资料，采用高效液相色谱法对杠板归中所含的
槲皮素含量进行了测定，并对测定的方法学进
行了研究。
１ 仪器与试药
ＴＵ１９０１紫外分光光度计（北京普析通用仪器
公司）；岛津ＬＣ２０Ａ液相色谱仪，ＬＣｓｏｌｕｔｉｏｎ色谱工
作站，恒温柱箱，自动进样器。ＴＣＱ２５０超声波清洗
器（北京医疗设备二厂）。槲皮素对照品由中国药
品生物制品检定所提供，供含量测定用（批号
１０００８１２００４０６），甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其
余试剂均为分析纯。１３批杠板归样品，原植物由贵
阳中医学院陈德媛研究员鉴定。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 大连依利特 ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ２色谱
柱Ｃ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相甲
醇０４％磷酸（５０∶５０）；检测波长３６０ｎｍ［７］；流速１
ｍＬ·ｍｉｎ－１；进样量１０μＬ。分别取槲皮素对照品溶
液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱（图１）。
从图中可见，槲皮素的保留时间约１８６ｍｉｎ，槲皮素
和其相近的其他峰分离完全（分离度 ＞１５），理论
板数以槲皮素峰计算不低于２５００。
２．２ 槲皮素对照品溶液的制备 精密称取槲皮素
对照品适量，加甲醇溶解并制成 ３０ｍｇ·Ｌ－１的溶
液，即得。
２．３ 供试品溶液的制备 取本品粉末（过３号筛，
并同时测定水分），精密称取约０７ｇ，置１００ｍＬ具
塞锥形瓶中，精密加入甲醇盐酸（４∶１）５０ｍＬ，称
重，加热回流９０ｍｉｎ，取下，放冷，再称重，用甲醇盐
酸（４∶１）补足失重，摇匀，用微孔滤膜（０４５μｍ）滤
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Ａ．对照品；Ｂ．样品；１．槲皮素。
图１ 杠板归中槲皮素含量测定ＨＰＬＣ图
过，取续滤液即得。
２．４ 线性关系考察 精密称取槲皮素对照品适量，
加甲醇溶解并制成６０４８ｍｇ·Ｌ－１的对照品溶液。
分别精密吸取对照品溶液１，３，９，１５，２１，２７μＬ，分
别注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定。以
峰面积Ｙ对质量数（μｇ）进行线性回归计算，得线性
回归方程Ｙ＝４１４×１０６Ｘ－１８１×１０５（ｒ＝０９９９９），
线性范围００６０５～１６３μｇ。
２．５ 精密度试验 精密吸取槲皮素对照品（３０２４
ｍｇ·Ｌ－１）溶液１０μＬ，注入高效液相色谱仪，连续进
样 ６次，测定槲皮素的峰面积，测定值分别为
１６０６４９７，１５９６５１４，１６００９５８，１６１１８８６，
１６０５２９７，１６１５５５０；６次测定结果的平均值为
１６０６１１７；ＲＳＤ０４３％。
２．６ 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 １０
μＬ，分别于０，２，４，６，９，１２ｈ各测定一次。峰面积值
分别为１４３２８８１，１４４０２８７，１４４４３５４，１４３７１１１，
１４１５１８５，１４１３７９８；６次测定结果的平均值为
１４３０６０３，ＲＳＤ０９１％，说明供试品溶液在１２ｈ内
稳定性良好。
２．７ 重复性试验 精密称取同一批号的杠板归样
品６份，按供试品溶液制备方法制备，测定。结果槲
皮素平均含量为２４５５ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ２２％。
２．８ 加样回收率试验 分别精密称取６份已测定
含量的样品（槲皮素含量２４５５ｍｇ·ｇ－１）约 ０３５
ｇ，精密加入用甲醇盐酸（４∶１）制备的槲皮素
（００１５１２ｇ·Ｌ－１）对照品溶液５０ｍＬ，称重，加热回
流９０ｍｉｎ，取出，放冷，再称重，用甲醇盐酸（４∶１）补
足失重，摇匀，用微孔滤膜（０４５μｍ）滤过，测定，结
果见表１。
２．９ 样品测定 分别称取不同来源的杠板归适
量，按 ２．３项下的方法制备供试品溶液，分别精
密吸取对照品溶液与供试品溶液各１０μＬ，注入
液相 色 谱 仪，按 上 述 色 谱 条 件 测 定，结 果
见表 ２。
表１ 杠板归中槲皮素的加样回收率
样品中量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
０８５９６ １５９３０ ９７０
０８８２６ １６４９４ １０１５
０８６２３ １６２６９ １０１１
１０２２ ２９
０８６４７ １６５０３ １０３９
０８８４４ １６７６３ １０４７
０９１０４ １７０３７ １０４９
注：加入量０７５６０ｍｇ。
表２ １３批样品中槲皮素质量分数（ｎ＝２）
产地 批号
槲皮素含量／％
（以干燥品计）
贵州平坝 ２００７０８０１ ００１７
贵州开阳 ／ ０３０４
贵州贵阳 ２００８０８０１ ０２０３
山西广生 ４７ ０２４３
贵州平坝 ２００８０８０１ ０２３０
贵州毕节 ２００８０８１４ ０４９５
贵州毕节 ２００８０１００８ ０２４０
贵阳花溪区 ／ ０１９１
佳程药业贵州有限公司样品 ／ ０１２５
四川绵阳 ／ ０１９１
福建福州 ／ ０１９８
贵阳济仁堂药业公司样品 ／ ０３００
贵州同济堂药业公司样品 ／ ０２９８
３ 讨论
３．１ 提取方法的选择 采用以下３种方法进行提
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取方法研究，方法１：称样２ｇ，精密加入８０％甲醇５０
ｍＬ，加热回流１５ｈ，滤过，取续滤液２５ｍＬ，加盐酸
５ｍＬ，加热回流３０ｍｉｎ，放冷，移至５０ｍＬ量瓶中，用
甲醇稀释至刻度。方法２：称样１ｇ，精密加入甲醇
盐酸（５∶１）５０ｍＬ，加热回流１ｈ，放冷，摇匀，即得。
方法３：称样２ｇ，精密加入甲醇５０ｍＬ，加热回流１
ｈ，滤过，取续滤液２５ｍＬ，加盐酸５ｍＬ，加热回流３０
ｍｉｎ，放冷，转移至５０ｍＬ量瓶中，用乙醇稀释至刻
度。结果表明采用方法２提取水解测得的槲皮素含
量最高，操作简单可行，故选取方法２作为提取水解
制备供试品的方法。
３．２ 提取条件的研究 考察甲醇盐酸水溶液（２∶
１，３∶１，４∶１，５∶１，６∶１）、不同提取水解时间（２０，３０，
４５，６０，９０，１２０ｍｉｎ）、不同提取水解液体积（２０，２５，
５０，１００ｍＬ）对提取效率的影响，结果表明：用甲醇
盐酸（４∶１），提取水解时间９０ｍｉｎ，提取水解液５０
ｍＬ，即能提取水解完全，且含量稳定，１３批杠板归
药材的槲皮素质量分数在０１２％～０４９％。
［致谢］ 感谢四川、福建、山西等兄弟省药检所及贵州
同济堂、贵阳济仁堂、贵州远程、佳程药业贵州有限公司等企
业提供药材样品。
［参考文献］
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１９９８：２２７．
［４］ 王定勇，卢江红．杠板归化学成分研究［Ｊ］．亚热带植物科学，
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［Ｊ］．沈阳药科大学学报，２００８，２５（２）：１０５．
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［９］ 谭明娜，于清峰，肖莹，等．ＲＰＨＰＬＣ测定连蒲双清片中咖啡
酸、槲皮素和盐酸小檗碱［Ｊ］．中成药，２００７，２９（８）：１１６１．
［责任编辑 王亚君］
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