全 文 ：ｌｉｔｅｓｕｎｄｅｒｗａｔｅｒａｎｄｎｕｔｒｉｅｎｔｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＲｅｃｅｎｔＡｄｖＰｈｙｔｏ
ｃｈｅｍ，１９８４，１８：２７３．
［１２］ ＢａｒｌｏｇＰ．Ｅｆｅｃｔｏｆｍａｇｎｅｓｉｕｍａｎｄｎｉｔｒｏｇｅｎｏｕｓｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒｓｏｎｔｈｅ
ｇｒｏｗｔｈａｎｄａｌｋａｌｏｉｄｃｏｎｔｅｎｔｉｎＬｕｐｉｎｕｓａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｓＬ［Ｊ］．Ａｕｓｔ
ＪＡｇｒｉｃＲｅｓ，２００２，５３：６７１．
［１３］ 张丽萍，陈 振，马小军，等．氮源对黄连植株生长、根茎小檗
碱含量的影响［Ｊ］．中草药，１９９７，２６：３８７．
［１４］ ＨｏｌＷＨＧ，ＶｒｉｅｌｉｎｇＫ，ＶａｎＶｅｅｎＪＡ．Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓｄｅｃｒｅａｓｅｐｙｒ
ｒｏｌｉｚｉｄｉｎｅａｌｋａｌｏｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｉｎＳｅｎｅｃｉｏｊａｃｏｂａｅａ［Ｊ］．Ｎｅｗ
Ｐｈｙｔｏｌｏｇｉｓｔ，２００３，１５８：１７５．
［１５］ ＬｉｕＺ，ＡｄａｍｓＪＣ，ＶｉａｔｏｒＨＰ，ｅｔａｌ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｓｏｉｌｆｅｒｔｉｌｉｚａ
ｔｉｏｎ，ｐｌａｎｔｓｐａｃｉｎｇ，ａｎｄｃｏｐｐｉｃｉｎｇｏｎｇｒｏｗｔｈ，ｓｔｏｍａｔａｌｃｏｎｄｕｃｔ
ａｎｃｅ，ａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄ，ａｎｄｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｌｅｖｅｌｓｉｎＣａｍｐｔｏｔｈｅｃａ
ａｃｕｍｉｎａｔａｓｅｅｄｌｉｎｇｓ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌＰｌａｎｔａｒｕｍ，１９９９，１０５：４０２．
［１６］ 孔垂华，徐 涛，胡 飞，等．环境胁迫下植物的化感作用及
其诱导机制［Ｊ］．生态学报，２０００，２０（５）：８４９．
ＥｆｅｃｔｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎｏｎｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｃｏｎｔｅｎｔｉｎＣａｍｐｔｏｔｈｅｃａａｃｕｍｉｎａｔａｓｅｅｄｌｉｎｇｓ
ＳＵＮＳｈｉｑｉｎ１，２，ＹＡＮＸｉｕｆｅｎｇ２
（１．ＨａｒｂｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＤａｑｉｎｇＢｒａｎｃｈ，ＭｅｄｉｃａｌＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｄａｑｉｎｇ１６３３１９，Ｃｈｉｎａ；
２．ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＣｏｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，Ｈａｒｂｉｎ１５４０００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ（ＣＰＴ）ｃｏｎｔｅｎｔｉｎＣａｍｐｔｏｔｈｅｃａ
ａｃｕｍｉｎａｔａｓｅｅｄｌｉｎｇｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｓｅｅｄｌｉｎｇｓｏｆＣ．ａｃｕｍｉｎａｔａｗｉｔｈ６ｐａｉｒｏｆｌｅａｖｅｓｗｅｒｅｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏｆｉｖｅｎｉｔｒｏｇｅｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｔｒｅａｔ
ｍｅｎｔｓｂｙｓａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｉｎａｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ．ＴｈｅＣＰＴｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｈｅｓｅｅｄｌｉｎｇｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＨＰＬＣｏｎｔｈｅ２０ｔｈ，３５ｔｈ，５０ｔｈ，６５ｔｈａｎｄ
８０ｔｈｄａｙｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅＣＰＴｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｈｅｙｏｕｎｇｌｅａｖｅｓｏｆＣ．ａｃｕｍｉｎａｔａｓｅｅｄｌｉｎｇｓｓｕｐｐｌｉｅｄｗｉｔｈｄｉｆｅｒｅｎｔｎｉｔｒｏｇｅｎｃｏｎｃｅｎ
ｔｒａｔｉｏｎｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｏｔｈｅｒｏｒｇａｎｓ（Ｐ＜０．０１），ａｎｄｉｔｓｈｏｗｅｄａｓｉｎｇｌｅｐｅａｋｃｕｒｖｅｗｉｔｈｔｈｅｔｉｍｅｃｏｕｒｓｅ，ｔｈｅｈｉｇｈ
ｅｓｔＣＰＴｃｏｎｔｅｎｔｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｏｎｔｈｅ５０ｔｈｄａｙａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＴｈｅＣＰＴｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｈｅｙｏｕｎｇｌｅａｖｅｓｏｂｖｉｏｕｓｌｙｄｅｃｌｉｎｅｄｗｉｔｈｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ
ｎｉｔｒｏｇｅｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｉｔｒｅａｃｈｅｄｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ（６．７２％）ｗｈｅｎｎｉｔｒｏｇｅｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｗａｓ４ｍｍｏｌ·Ｌ－１，ｅｑｕａｌｔｏ１．１ｔｉｍｅｓｔｈａｔｏｆ
１６ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｎｉｔｒｏｇｅｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｔｈａｔｐｒｏｐｅｒｄｅｆｉｃｉｅｎｔｎｉｔｒｏｇｅｎｓｔｒｅｓｓｃａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｎｈａｎｃｅＣＰＴａｃｃｕ
ｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｙｏｕｎｇｌｅａｖｅｓｏｆＣ．ａｃｕｍｉｎａｔａｓｅｅｄｌｉｎｇｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｎｉｔｒｏｇｅｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ；Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａａｃｕｍｉｎａｔａｓｅｅｄｌｉｎｇｓ；ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｃｏｎｔｅｎｔ
［责任编辑 张宁宁］
［收稿日期］ ２００６１２１４
［基金项目］ 浙江省自然科学基金项目（Ｙ２０４１４７）
［通讯作者］ 丁红梅，Ｔｅｌ：（０５７１）８６６１３５８９，Ｅｍａｉｌ：ｈｍｄｉｎｇ＠ｔｏｍ．ｃｏｍ
红曲菌株鉴别中 ＳＣＡＲ分子标记的应用
丁红梅１，丁志山２，李海波３，陈铌铍２
（１．浙江中医药大学 分析测试中心，浙江 杭州 ３１００５３；
２．浙江中医药大学 生命科学学院，浙江 杭州 ３１００５３；
３．浙江省林业科学研究院 生物技术研究所，浙江 杭州 ３１００２３）
［摘要］ 目的：建立一套基于ＤＮＡ遗传标记技术的红曲菌株快速鉴定方法。方法：采用ＲＡＰＤ方法对分离收
集的１０个红曲菌株进行多态性分析，从菌株Ｆ中获得１个４２１ｂｐ的特异ＲＡＰＤ标记片段Ｆ４２１。Ｂｌａｓｔ分析未发现
Ｆ４２１序列（ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＥＦ０６３１０７）与ＧｅｎＢａｎｋ中相关序列有较高同源性。根据该序列设计特意引物，对１０个
红曲菌株进行ＰＣＲ检测。结果：利用所获得的特征性片段扩增区域（ＳＣＡＲ）标记能能在１ｄ内准确地鉴别出红曲Ｆ
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第３３卷第４期
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中 国 中 药 杂 志
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菌株。结论：利用ＳＣＡＲ分子标记技术对红曲菌株进行分类鉴别是红曲研究领域的新尝试，为推广应用ＳＣＡＲ分子
标记技术对药用真菌进行菌株快速准确鉴定提供技术依据。
［关键词］ 红曲菌；快速鉴定；ＲＡＰＤ标记；ＳＣＡＲ标记
［中图分类号］Ｒ２８２５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０４０３５９０４
红曲是一味食疗兼备的传统中药，现代药理研
究证实红曲具有降血脂、降血压、降血糖和抑菌抗炎
等活性［１］。自然界有红曲菌Ｍｏｎａｓｃｕｓ４０余种，用于
制备红曲的基原菌株也较多，至今没有统一标准。
长期以来，对红曲菌的分类鉴定均根据其形态特征
和生理学特性［２］，但由于红曲菌属下分类的形态、
生化指标易受培养基质、温度等环境条件的影响，表
现出较大的差异性，有些种的界限不明确［３］，使得
现有的分类系统实际应用比较困难，造成红曲菌种
在管理上没有统一的标准，生产中菌种混乱，杂菌污
染等问题严重，导致红曲产品的质量和安全性较差，
制约了红曲产业的可持续发展。因此建立一套红曲
菌种快速鉴别检测技术，不仅有利于我国红曲种质
资源的发掘与利用，而且也是规范红曲市场的迫切
需要。
根据 ＲＡＰＤ标记转化的 ＳＣＡＲ（特征性片段扩
增区域，ｓｅｑｕｅｎｃｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｒｅｇｉｏｎ）标
记，具有特异性、稳定性好，对ＤＮＡ浓度和试剂要求
不高，操作简便、易分辨等优点，广泛用于物种形成、
辅助选择育种、系统演化、微生物菌种鉴别等各个领
域的研究中［４６］。但 ＳＣＡＲ分子标记在红曲等药用
真菌的菌种鉴别、种质筛选的研究尚未见文献报道。
本研究将通过ＲＡＰＤ多态性分析获得的特异 ＲＡＰＤ
标记转化为稳定的 ＳＣＡＲ标记，并将该标记作为该
菌株的特异 ＤＮＡ指纹，快速、准确地鉴定出红曲 Ｆ
菌株的真伪。进而为应用ＳＣＡＲ分子标记对药用真
菌菌种进行快速准确鉴定提供技术依据。
１ 材料和方法
１．１ 供试菌株及培养基 供试红曲菌株编号１～
１０依次为 ＡＳ３５５４（Ｍ．ａｎｋａ），ＡＳ３９７２（Ｍ．ａｎ
ｋａ），Ｂ（Ｍ．ａｎｋａ），Ｆ（Ｍ．ｒｕｂｅｒ），Ｊ（Ｍ．ａｎｋａ），Ｍ２
（Ｍ．ａｎｋａ），Ｐ（Ｍ．ａｎｋａ），Ｓ（Ｍ．ａｎｋａ），ＺＷ５（Ｍ．
ａｎｋａ），古田（Ｍ．ａｎｋａ）。其中Ｂ，Ｆ，Ｊ，Ｐ，Ｓ由浙江中
医药大学肿瘤研究室分离保存，ＡＳ３５５４，ＡＳ
３９７２，Ｍ２，ＺＷ５，古田购自浙江省微生物研究所
（ＡＳ３５５４，ＡＳ３９７２为中国普通微生物菌种保藏
中心保存菌株），ＭＥＡ（ｍａｌｔｅｘｔｒａｃｔａｇａｒ）培养基［３］培
养。大肠杆菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ．ｃｏｌｉＪＭ１０９菌株购自上海
皓嘉科技发展有限公司，常规ＬＢ培养基培养。
１．２ 主要试剂及随机引物 所用主要分子生物学
试剂购自杭州博日科技有限公司及宝生物工程（大
连）有限公司，ＲＡＰＤ分析所用的１０碱基随机引物
Ｓ２５１Ｓ２７８，Ｓ３４３Ｓ３５０，Ｓ２００１Ｓ２０５０购自上海生工
生物技术公司，编号及核苷酸序列见上海生工生物
技术公司网页 ｈｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓａｎｇｏｎ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／
ｓｅｒｖｉｃｅｓ．ｈｔｍ。
１．３ 红曲基因组ＤＮＡ的提取 取新鲜培养的红曲
菌丝体，加液氮研磨破碎细胞后按 ＣＴＡＢ法［７］进行
红曲基因组ＤＮＡ提取。
１．４ ＲＡＰＤ多态性分析 ＲＡＰＤ反应体系为 １×
ＰＣＲＢｕｆｅｒ，ｄＮＴＰｓ１ｍｍｏｌ·Ｌ－１，Ｔａｑ酶 １２Ｕ，
ＲＡＰＤ随机引物０２μｍｏｌ·Ｌ－１，模板ＤＮＡ２０ｎｇ，反
应总体积为２０μＬ。扩增反应在梯度ＰＣＲ扩增仪上
进行，９４℃预变性６ｍｉｎ，随即进入９２℃变性４０ｓ，
３６℃退火４０ｓ，７２℃延伸２ｍｉｎ的循环，共进行３５
个循环，最后７２℃补平７ｍｉｎ，终止温度为４℃。
１．５ ＲＡＰＤ特异片段的回收、克隆及测序 采用
ＣｏｒｅＯｎｅＴＭＧｅｌＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＫｉｔ于１．２％的琼脂糖凝胶
中回收ＲＡＰＤ特异片段，纯化后，经ＴａＫａＲａｐＭＤ１８
ＴＶｅｃｔｏｒ连接，转化于Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９感受态细胞，挑
取３个阳性克隆由宝生物工程（大连）有限公司测
定序列。
１．６ ＳＣＡＲ分析 根据回收 ＲＡＰＤ特异片段的测
序结果，设计合成１对２０ｂｐ的特异 ＰＣＲ引物。特
异引物Ｐ１，Ｐ２由宝生物工程（大连）有限公司合成。
调整 ＰＣＲ反应体系 Ｐ１，Ｐ２引物各为 ０１μｍｏｌ·
Ｌ－１，复性温度为５７℃，循环数为３０，其他同 ＲＡＰＤ
分析一致。
２ 结果
２．１ ＲＡＰＤ多态性分析 用８４条随机引物对 １０
个红曲菌株的总ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，经筛选发现，
引物Ｓ２０４４的扩增图谱不仅可以得到很好的重复，
而且在菌株Ｆ中能稳定地扩增出特异的条带，相对
分子量４２１ｂｐ（图１），命名为Ｆ４２１。
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图１ 引物Ｓ２０４４在１０个红曲菌株中的扩增结果
Ｍ．ｍａｒｋｅｒ；１．ＡＳ３５５４；２．ＡＳ３９７２；３．Ｂ；４．Ｆ；５．Ｊ；
６．Ｍ２；７．Ｐ；８．Ｓ；９．ＺＷ５；１０．古田（图３同）
２．２ ＲＡＰＤ特异片段的克隆 从Ｆ菌株中回收、克
隆Ｆ４２１片段，挑取的３个阳性克隆经测序后发现插
入的４２１ｂｐ序列一致，片段的全长序列（图２）Ｇｅｎ
Ｂａｎｋ登录号为 ＥＦ０６３１０７。图中５’和３’带有阴影
的１０碱基序列分别为引物 Ｓ２０４４的碱基序列及其
反向互补序列。将 Ｆ４２１的序列在 ＧｅｎｅＢａｎｋ上作
Ｂｌａｓｔ分析，未发现与ＧｅｎＢａｎｋ中相关序列有较高的
同源性。
图２ Ｆ４２１的核苷酸序列
阴影部分为ＲＡＰＤ引物Ｓ２０４４及其反向互补序列
２．３ ＳＣＡＲ标记的建立 将此序列输入 Ｐｒｉｍｅｒ
Ｐｒｅｍｉｅｒ５．０软件，同时参照Ｓ２０４４随机引物序列，设
计１对ＰＣＲ特异引物Ｐ１，Ｐ２，其序列分别为：Ｐ１（２０
ｂｐ）：５′ＧＴＧＣＧＡＧＣＡＡＣＧＣＴＡＣＴＣＣＡ３′和 Ｐ２（２０
ｂｐ）：５′ＧＴＧＣＧＡＧＣＡＡＡＴＡＧＡＣＣＴＧＡ３′。用引物
Ｐ１，Ｐ２对１０个红曲菌株的总ＤＮＡ进行扩增获得预
期结果：引物Ｐ１、Ｐ２在Ｆ菌株中有唯一的１条扩增
带，约４２１ｂｐ；而在其他供试菌株中均无相应的扩增
带（图３），这表明 ＲＡＰＤ标记已成功转化为 ＳＣＡＲ
标记。
３ 讨论
种质分类鉴定是筛选优良品种的基础。传统的
分类方法虽然可信度较高，但鉴定周期长且对鉴定
人员的专业素质要求较高，很难适应生产实际中简
图３ 引物Ｐ１，Ｐ２在１０个红曲菌株中的扩增结果
便、快速、直观的需要。鉴于微生物代谢终端产物蛋
白质、碳水化合物、短链脂肪酸等在其分类中具有特
别重要的意义，宋洪涛等、邢旺兴等采同工酶凝胶电
泳、毛细管气相色谱法、薄层色谱法、紫外光谱法、高
效毛细管电泳色谱法等化学指纹图谱分析来鉴别不
同种红曲菌［８１３］。但由于红曲菌的生化指标易受培
养基质、温度等环境条件的影响，差异性较大，仍然
造成实际菌株分类鉴定应用上的困难。近年来，利
用ＤＮＡ分子遗传标记对微生物进行种质鉴定取得
了一定进展。在对红曲菌的分类鉴定研究上，以
ＲＡＰＤ分子标记应用为主［１４，１５］。但由于ＲＡＰＤ标记
技术假阳性高、稳定性和重复性差等缺陷，常常使得
研究结果一直未能用于实际生产中菌种的分类鉴
定、筛选育种与质量检验。
由ＲＡＰＤ标记发展起来的 ＳＣＡＲ标记，在对特
异ＲＡＰＤ片段测序的基础上，根据两端序列设计一
对１８～２４碱基特异引物，在较高的退火温度下实现
特异扩增，特异引物的采用排除了随机引物结合位
点之间的竞争，稳定性和可重复性显著提高［５］。
ＳＣＡＲ标记在样品鉴别时用特异引物直接进行 ＰＣＲ
分析，具有快速、简便、低廉的特点，非常适合于样本
的大量分析，目前在动植物种质分类鉴定上已得到
广泛应用，技术上比较成熟。
本研究通过ＲＡＰＤ分析从红曲菌株Ｆ中获得一
条特异片段，并将该特异 ＲＡＰＤ标记转化为稳定的
ＳＣＡＲ标记作为 Ｆ菌株的特异 ＤＮＡ指纹，可在１ｄ
内对Ｆ菌株作出准确鉴定。应用ＳＣＡＲ分子标记技
术对红曲菌株进行分类鉴别是红曲菌研究领域的新
尝试。
［参考文献］
［１］ 刘兆玺 ，杜金华 ，傅贸润，等．红曲功能及其研究进展［Ｊ］．酿
酒，２００６，３３（４）：７０．
［２］ 邢旺兴，程荣珍，宓鹤鸣．几种常见红曲霉的生理学特性研究
［Ｊ］．药学实践杂志，２００１，１９（４）：２３１．
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第３３卷第４期
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Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ４
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００８
［３］ 李钟庆，郭 芳．红曲菌的形态与分类学［Ｍ］．北京：中国轻
工业出版社，２００３
［４］ 平文祥，李海英．ＤＮＡ分子多态性标记技术及应用［Ｊ］．中国
糖料，２００２，（４）：２７．
［５］ 吴学谦，李海波，魏海龙，等．ＤＮＡ分子标记技术在食用菌研
究中的应用及进展［Ｊ］．浙江林业科技，２００４，２４（２）：７５．
［６］ ＨｅｒｍｏｓａＭＧ，ＭｉｎｇｕｅｚＪＭＤ，ＩｔｕｒｉａｇａＥＡ，ｅｔａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐ
ｍｅｎｔｏｆａｓｔｒａｉｎｓｐｅｃｉｆｉｃＳＣＡＲｍａｒｋｅｒｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＴｒｉ
ｃｈｏｄｅｒｍａａｔｒｏｖｉｒｉｄｅⅡ，ａｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｔｒｏｌａｇｅｎｔａｇａｉｎｓｔｓｏｉｌ
ｂｏｒｎｅｆｕｎｇａｌｐｌａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｓ［Ｊ］．ＣｕｒｅｎｔＧｅｎｅｔｉｃｓ，２００１，３８
（６）：３４３．
［７］ 杨 华，李联泰．食用菌 ＤＮＡ提取方法研究［Ｊ］．中国食用
菌，２００３，２２（１）：１９．
［８］ 宋洪涛，郭 涛，张跃新．不同产地红曲中可溶性蛋白和２种同工
酶的凝胶电泳研究［Ｊ］．中国中药杂志，１９９９，２４（７）：３９３．
［９］ 宋洪涛，郭 涛，张跃新，等．中药红曲的生药学及质量控制
标准研究［Ｊ］．中国中药杂志，１９９９，２４（５）：２６２．
［１０］ 邢旺兴，宓鹤鸣，陈 斌，等．气相色谱模糊聚类分析法用于
红曲基原菌的鉴别［Ｊ］．中国中药杂志，２０００，２５（６）：３２９．
［１１］ 邢旺兴，陈士景，宓鹤鸣．中药红曲的薄层色谱法鉴别［Ｊ］．药
学实践杂志，２０００，１８（２）：９３．
［１２］ 邢旺兴，宓鹤鸣，程荣珍．中药红曲的紫外光谱法鉴别［Ｊ］．解
放军药学学报，２０００，１６（３）：１３３．
［１３］ 邢旺兴，尹 茶，宓鹤鸣．中药红曲基原真菌的高效毛细管电
泳色谱法鉴别［Ｊ］．第二军医大学学报，２０００，２１（１）：５９．
［１４］ 宓鹤鸣，邢旺兴，程荣珍．随机扩增多态性 ＤＮＡ技术在中药
红曲基原菌系统分类中的应用［Ｊ］．第二军医大学学报，
２０００，２１（１０）：９４４．
［１５］ 邢旺兴，宓鹤鸣，陈士景．不同产地红曲基原菌的ＲＡＰＤ分析
［Ｊ］．药学实践杂志，２００１，１９（３）：１６３．
ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＳＣＡＲｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆＭｏｎａｓｃｕｓｓｔｒａｉｎｓ
ＤＩＮＧＨｏｎｇｍｅｉ１，ＤＩＮＧＺｈｉｓｈａｎ２，ＬＩＨａｉｂｏ３，ＣＨＥＮＮｉｐｉ２
（１．ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＴｅｓｔｉｎｇＣｅｎｔｅｒ，ＺｈｅｊｉａｎｇＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００５３，Ｃｈｉｎａ；
２．ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅＣｏｌｅｇｅ，ＺｈｅｊｉａｎｇＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００５３，Ｃｈｉｎａ；
３．ＢｉｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＺｈｅｊｉａｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＡｃａｄｅｍｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００２３，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｅｆｅｃｔｉｖｅｗａｙｆｏｒｒａｐｉｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＭｏｎａｓｃｕｓｓｔｒａｉｎｓｂａｓｅｄｏｎＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋ
ｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＡｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ（ＲＡＰＤ）ｍａｒｋｅｒｎａｍｅｄＦ４２１ｉｎｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｏｆＭｏｎａｓｃｕｓＦｓｔｒａｉｎｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄ
ｄｕｒｉｎｇａｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＤＮＡｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍ１０ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｓｔｒａｉｎｓｏｆＭｏｎａｓｃｕｓ．Ｆ４２１ｗａｓｃｌｏｎｅｄａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄ．Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ
ｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＦ４２１（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｕｍｂｅｒＥＦ０６３１０７）ｗｉｔｈｏｔｈｅｒｒｅｌａｔｉｖｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｉｎｔｈｅＧｅｎＢａｎｋｄａｔａｂａｓｅｓ，ｎｏｄｉｓｔｉｎｃｔ
ｃｏｍｐａｒａｂｉｌｉｔｙｗａｓｆｏｕｎｄ．Ａｐａｉｒｏｆｓｅｑｕｅｎｃｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｒｅｇｉｏｎ（ＳＣＡＲ）ｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆ
ｔｈｅｃｌｏｎｅｄｆｒａｇｍｅｎｔａｎｄｔｅｓｔｅｄｆｏｒｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＭｏｎａｓｃｕｓＦ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ
ｏｎｌｙａ４２１ｂｐｓｅｇｍｅｎｔｏｆＭｏｎａｓｃｕｓＦｓｔｒａｉｎｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｏｔｈｅｒ９ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｓｔｒａｉｎｓｏｆＭｏｎａｓｃｕｓ．ＡｎｄｔｈｅａｃｑｕｉｒｅｄＳＣＡＲ
ｍａｒｋｅｒｏｆｓｔｒａｉｎＦｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄａｓａｓｐｅｃｉｆｉｃＤＮＡｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙＭｏｎａｓｃｕｓｓｔｒａｉｎＦｗｉｔｈｉｎｏｎｅｄａｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＳＣＡＲｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒｍａｒｋｅｒｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｓａｎｅｆｅｃｔｉｖｅｎｅｗｗａｙｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙＭｏｎａｓｃｕｓｓｔｒａｉｎｓｍｏｒｅｒａｐｉｄｌｙ．ＡｎｄａｌｓｏｉｓａｎａｓｓｉｓｔａｎｔｔｏｏｌｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙＭｏｎａｓ
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［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｍｏｎａｓｃｕｓ；ｒａｐｉｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ＲＡＰＤｍａｒｋｅｒ；ＳＣＡＲｍａｒｋｅｒ
［责任编辑 张宁宁］
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第３３卷第４期
２００８年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ４
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００８