全 文 ：金匮肾气丸、右归丸对肾阳虚小鼠模型以药反证的
脑基因芯片研究
杨裕华，李　震，孙　静
（山东中医药大学，山东 济南 ２５００１４）
［摘要］　目的：在基因水平上探讨补肾中药金匮肾气丸、右归丸对肾阳虚小鼠模型的作用机制。方法：昆明种小鼠分为
正常组、模型组、金匮组和右归丸组。正常组和模型组每天灌胃蒸馏水０５ｍＬ；金匮组和右归丸组每天分别灌胃金匮肾气丸
混悬液和右归丸混悬液０５ｍＬ，含生药１２９ｍｇ·ｋｇ－１。造模组和治疗组均采用雄雌鼠比例１∶６同笼喂养，雄鼠每日游泳１次，
直至无力下沉时捞出，达４周，以诱导产生“劳倦过度、房室不节”肾阳虚证。观察动物的畏寒、活动及反应、饮食和皮毛等情
况。用３６Ｋｍｏｕｓｅｇｅｎｏｍｅａｒａｙ鼠脑芯片检测正常组和肾阳虚模型组鼠脑基因，并以二者荧光信号相对强度比值≥２和≤０５
筛选差异显著基因，用ｑＲＴＰＣＲ对部分差异表达基因进行验证。结果：模型组／正常组上调基因，二药治疗组／造模组基因下
调２３个基因，主要是与炎症／免疫、神经传递／信号转导等相关基因；造模组／对照组下调基因而治疗组／造模组基因上调的基
因有６个，其主要是与细胞周期／细胞结构、神经传递／信号转导、转录等有关基因。ｑＲＴＰＣＲ也证实了金匮组／模型组、模型
组／正常组的ＧＨ和Ｓｃｇｂ３ａ１的差异表达。结论：金匮肾气丸、右归丸可使肾阳虚小鼠模型显著下调的激素、黑色素显著上调
并促进细胞增殖，从而在基因水平上探讨了金匮肾气丸和右归丸的药物作用机制及其差别。
［关键词］　ＤＮＡ芯片；肾阳虚；动物模型；金匮肾气丸；右归丸
［收稿日期］　２００８０８２５
［基金项目］　国家自然科学基金项目（３０６７２５７３）
［通信作者］　李震，教授，博士生导师，山东中医药大学基础医学
院。Ｔｅｌ：（０５３１）８２６１３４４８，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｚｈｅｎ４４８＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
［作者简介］　杨裕华，主任医师，山东中医药大学中西医结合基础
专业博士研究生，研究方向：中西医结合“肾”的研究。
　　基因芯片可同时研究上千条基因，具有高通量、
所需样品少、微型化和自动化的特点［１］。利用基因
芯片技术研究复杂的中医“证候”的实质，是中医现
代研究的重要课题。根据“以药反证”的原理，用基
因芯片检测肾阳虚证用药前后的基因变化，以期从
基因水平研究其药物作用的机制。
１　材料
１．１　动物
昆明种健康雄性小鼠，体重３５～４０ｇ；雌鼠，体
重２８～３５ｇ，山东中医药大学实验动物中心提供，许
可证号ＳＣＸＫ（鲁）２００５００１５。山东中医药大学实验
动物中心提供普通饲料喂养。
１．２　药品
金匮肾气丸由山东中医药大学中医专家门诊部
药房提供。生地黄４０ｇ，山药２０ｇ，山萸肉２０ｇ，泽
泻１５ｇ，丹皮１５ｇ，茯苓１５ｇ，肉桂５ｇ，附子（炮）５
ｇ，共１３５ｇ。先将生地黄烘干，与其余药物共为细
末，加炼蜜１５３ｇ，作蜜丸３１个，每丸重９ｇ。右归丸
由山东中医药大学中医专家门诊部药房提供，熟地
黄４０ｇ，山药２０ｇ，山茱萸１５ｇ，枸杞子２０ｇ，炒鹿角
胶２０ｇ，
$
丝子２０ｇ，炒杜仲２０ｇ，当归１５ｇ，肉桂１０
ｇ，附子（炮）１０ｇ，共１９０ｇ。先将熟地黄烘干，与其余
药物共为细末，加炼蜜１６８ｇ，作蜜丸３９个，每丸重９
ｇ。戊酸雌二醇（法国ＳｃｈｅｒｉｎｇＳＡ，批号０３７Ｂ２）。
１．３　试剂
ＫＬＥＮＯＷ酶标记，Ｃｙ５ｄＣＴＰ，Ｃｙ３ｄＣＴＰ（Ａｍｅｒ
ｓｈａｍ ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ，
ＵＳＡ）；ｄＮＴＰ，１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｅａｃｈ（上海英骏生物技
术有限公司）；ＲａｎｄｏｍＰｒｉｍｅｒ，９个碱基（上海英骏
生物技术有限公司）。
１．４　仪器
所用３６Ｋｍｏｕｓｅｇｅｎｏｍｅａｒａｙ芯片系购自北京博
奥生物有限公司，该芯片共有约３５８５２条７０个碱基
长度的ＯｌｉｇｏＤＮＡ，来自于Ｏｐｅｒｏｎ公司的小鼠全基因
组 Ｏｌｉｇｏ库，ＭｏｕｓｅＧｅｎｏｍｅＶｅｒｓｉｏｎ４０，共代表了约
２５０００个基因，３８０００个转录本。芯片上的样品还包
括小鼠的４个看家基因作为阳性对照，Ｈｅｘ作为点样
阳性对照，点样溶液５０％ＤＭＳＯ作为阴性对照。
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２　方法
动情期雌鼠的制备：雌鼠每天灌胃戊酸雌二醇
混悬液０５ｍＬ（含药０００４６８ｍｇ），以阴道涂片检
查角化细胞证实。雄鼠筛选：以雌雄鼠同笼，直视有
否阴道栓决定取舍。
２．１　动物肾阳虚模型制备
劳倦过度＋房室不节组（以下简称模型组）［２］：
取雄性小鼠１５只，雄性小鼠每天下午游泳１次，以
长４５ｃｍ、宽２８ｃｍ和高３０ｃｍ长方形塑料水槽，水
深２５ｃｍ，水温２８～３０℃，供雄性小白鼠游泳。于
塑料水槽内强迫小鼠游泳至无力而下沉时捞出，以
诱导劳倦过度，达４周。每只雄鼠与６只动情期雌
鼠同笼，注意每天更换动情期雌鼠以诱导雄鼠房室
不节，每天灌胃蒸馏水０５ｍＬ。
２．２　分组及给药
正常组：雄性小白鼠１０只，常规饲养，每天灌
胃蒸馏水０５ｍＬ。金匮肾气丸治疗组（以下简称金
匮组）和右归丸组：取雄性小鼠１０只，造模方法同
模型组，每天分别对２组各灌胃金匮肾气丸混悬液
和右归丸混悬液０５ｍＬ，含生药１１ｇ·ｋｇ－１（成人
２丸／ｄ的剂量，２丸溶入５８ｍＬ溶液中，按小白鼠体
重计算得０５ｍＬ／只／ｄ，含药００８４２ｇ）［３］。试验
共进行４周。
２．３　脑组织总ＲＮＡ提取
正常组、模型组、金匮组及右归丸组治疗 ４周
后，小鼠颈椎脱臼法处死，于头骨骨缝处剪除骨片，
完整取出小鼠全脑，放入液氮罐冻存。按 Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎ
ｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ，ＵＳＡ）一步法提取脑组
织细胞中的总ＲＮＡ（同组２只鼠脑混合），通过异丙
醇沉淀法浓缩 ＲＮＡ，并进一步采用 ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ
ＲＮＡｃｌｅａｎｕｐ试剂盒（ＭＡＣＨＥＲＥＹＮＡＧＥＬ，Ｇｅｒｍａ
ｎｙ）对总ＲＮＡ进行过柱纯化，最后用分光光度计定
量，甲醛变性胶电泳质检。
２．４　对样品ＲＮＡ进行荧光标记
２．４．１　双链ｃＤＮＡ合成　取５μｇｔｏｔａｌＲＮＡ，以Ｔ７
Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ），（５′ＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴＧＡＡＴＴＧＴＡＡＴ
ＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＣＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＶ３，
Ｖ可以是Ｇ，Ｃ和Ａ，上海博亚生物技术有限公司）
为引物，用ｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ，ＵＳＡ）合成
双链 ｃＤＮＡ；双链合成后用 ＰＣＲＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎＥｘｔｒａｃｔ
Ⅱ Ｋｉｔ（ＭＮ）纯化。
２．４．２　体外转录合成 ｃＲＮＡ　用 Ｔ７ＲｉｂｏＭＡＸＥｘ
ｐｒｅｓｓＬａｒｇｅＳｃａｌｅＲＮＡＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）
将双链 ｃＤＮＡ进行体外转录合成 ｃＲＮＡ；然后用
ＲＮＡＣｌｅａｎｕｐＫｉｔ（ＭＮ）纯化。
２．４．３　随机引物反转录　取２ｇｃＲＮＡ，用 ＭＭＬＶ
反转录酶，２００Ｕ·μＬ－１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ），９Ｒａｎｄｏｍ
Ｐｒｉｍｅｒ进行反转录，反转录产物用 ＰＣＲＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ
ＥｘｔｒａｃｔⅡ Ｋｉｔ（ＭＮ）纯化。
２．４．４　ｃＤＮＡ用 ＫＬＥＮＯＷ酶标记　取２μｇｃＲＮＡ
反转录产物，以９ＲａｎｄｏｍＰｒｉｍｅｒ为引物进行 ＫＬＥ
ＮＯＷ酶（Ｔａｋａｒａ，Ｊａｐａｎ）标记，标记产物用 ＰＣＲＮｕ
ｃｌｅｏＳｐｉｎＥｘｔｒａｃｔⅡ Ｋｉｔ（ＭＮ）纯化，纯化后抽干。标
记过程中 ｄＡＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＴＴＰ终浓度为１２０μｍｏｌ·
Ｌ－１，ｄＣＴＰ终浓度为６０μｍｏｌ·Ｌ－１，Ｃｙ５ｄＣＴＰ，Ｃｙ３
ｄＣＴＰ终浓度为 ４０μｍｏｌ·Ｌ－１。以 Ｃｙ５标记正常
组、金匮组及右归丸组样品，以 Ｃｙ３标记模型组样
品。
２．４．５　杂交与清洗　标记的ＤＮＡ溶于３０μＬ杂交
液中（３×ＳＳＣ３倍的氯化钠柠檬酸钠缓冲液），
０２％ＳＤＳ，５×Ｄｅｎｈａｒｔ＇ｓ，２５％甲酰胺），于４２℃杂交
过夜。杂交结束后，先在４２℃左右含０２％ ＳＤＳ，
２×ＳＳＣ的液体中洗５ｍｉｎ，而后在０２×ＳＳＣ中室温
洗５ｍｉｎ。玻片甩干后即可用于扫描。
２．５　芯片扫描
芯片用ＬｕｘＳｃａｎ１０ＫＡ双通道激光扫描仪（Ｃａｐ
ｉｔａｌＢｉｏ公司）进行扫描。
２．６　芯片图像的采集与数据分析
采用 ＧｅｎｅＰｉｘＰｒｏ４０图像分析软件（ＡｘｏｎＩｎ
ｓｔｒｕｍｅｎｔｓ公司）对芯片图像进行分析，把图像信号
转化为数字信号；然后对芯片上的数据用 Ｌｏｗｅｓｓ方
法进行归一化；最后以差异为２倍的标准来确定差
异表达基因，亦即荧光信号相对强度比值≥２和≤
０５筛选差异显著基因。
２．７　差异表达基因的功能归类
将基因输入北京博奥生物有限公司的生物分子
注释系统进行功能归类检索，同时参阅有关文
献［４］。
２．８　ＲｅａｌｔｉｍｅＲＴＰＣＲ
２．８．１　ＲＮＡ逆转录　逆转录反应体系 取经纯化的
总ＲＮＡ２～２５μｇ，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５２μＬ（５００ｍｇ·
Ｌ－１），ＤＥＰＣＨ２Ｏｔｏ１１５μＬ，６５℃变性５ｍｉｎ，冰浴
５ｍｉｎ，加入５×１ｓｔＢｕｆｅｒ４μＬ，０１ｍｏｌ·Ｌ－１二硫苏
糖醇（ＤＴＴ）２μＬ，ｄＮＴＰｓ１μＬ（１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｅａｃｈ）、
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ＲＮＡ酶抑制剂０５μＬ（４０Ｕ·μＬ－１），ＭＭＬＶ（反转
录酶）１μＬ（２００Ｕ·μＬ－１），共２０μＬ体系。
逆转录程序：２５℃１０ｍｉｎ，３７℃１ｈ，加入５μＬ
１５ｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＯＨ终止逆转录反应，７０℃１０ｍｉｎ。
加入１μＬ１０ｍｏｌ·Ｌ－１醋酸中和，再加灭菌水至５０
μＬ，４℃低温保存。上述实验在 ＰＣＲ仪（ＢＩＯＲＡＤ
产，ＰＴＣ２２５型）上进行。
２．８．２　ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲ反应　选取造模组／对照组
和金匮肾气丸组／造模组差异表达基因生长激素
（ＧＨ）和子宫珠蛋白相关蛋白２前体（Ｓｃｇｂ３ａ１）位
点设计并合成引物其２套引物：上游引物５′ＴＣＡＧ
ＣＡＧＧＡＴＴＴＴＣＡＣＣＡＡＣ３′，下 游 引 物 ５′ＧＧＣＧＴ
ＣＡＡＡＣＴＴＧＴＣＡＴＡＧＧ３′；上游引物 ５′ＴＧＡＣＡＡＴ
ＧＴＴＣＧＧＴＴＧＡＧＧＧ３′，下游引物 ５′ＧＴＧＡＧＣＡＧ
ＣＡＧＧＧＴＴＴＣＣＡＧ３′。
ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲ反应体系：Ｔｅｍｐｌａｔｅ（模板ｃＤＮＡ）
小于５００ｎｇ（一般是逆转录反应体系５０μＬ中的１
μＬ），加入２×ＰＣＲＢｕｆｅｒｆｏｒＥｖａＧｒｅｅｎ１０μＬ，２０×
ＥｖａＧｒｅｅｎ染料０６μＬ，上、下游引物各０６μＬ（１０
μｍｏｌ·Ｌ－１），ＣａｐＴａｑ酶０３μＬ（５Ｕ·μＬ－１）加不
含核酸酶的水至２０μＬ。
ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲ程序：酶激活９５℃，１０ｍｉｎ，扩增
反应９５℃，１５ｓ变性；５０～６０℃，１５ｓ退火；７２℃，
２０ｓ延伸；７６℃，３ｓ荧光检测；共４０个循环。溶解
曲线７５～９５℃。以上实验在定量 ＰＣＲ仪（Ｒｏｃｈｅ
公司产，１２型）上进行。
ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲ产物１５％非变性（不加甲醛）琼
脂糖凝胶电泳检测：取ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲ产物２～４μＬ，
加２×ＬｏａｄｉｎｇＢｕｆｅｒ４μＬ，总体积６～８μＬ上样。
２．８．３　循环次数差值 ΔＣＰ　循环次数差值为正常
组与模型组、金匮组和右归丸组循环次数的差值。
３　结果
３．１　动物的一般表现
正常组：活动正常，皮毛光泽，反应灵活。模型
组：随着时间延长，动物逐渐出现萎靡不振，畏寒怕
冷，拱背少动，反应迟钝，拥挤在一起，饮食减少，皮
毛无光泽，竖毛现象明显，腹部皮毛潮湿等肾阳虚表
现。金匮组和右归丸组：随着时间延长，动物未出现
明显的萎靡不振、畏寒及竖毛等肾阳虚表现。
３．２　各组差异表达基因分析
二药治疗组／模型组均下调而模型组／正常组上
调的基因共有２３个，主要有炎症／免疫、代谢、神经
传递／信号转导、和氧化还原有关基因，还有酪氨酸
生成多巴和儿茶酚胺类的限速酶酪氨酸羟化酶。
二药治疗组／模型组均上调的基因而模型组／正常组
基因下调共有６个，其涉及转录／翻译、细胞周期／
细胞结构、神经传递和孤儿核受体基因（表１）。表
１中倍数１和倍数２分别为模型组／正常组与金组／
模组和模型组／正常组与右组／模组相互上调基因是
下调基因的倍数。
表１　各组小鼠出现基因上、下调表达的部分基因
基因符号 基因名称
模型
／金匮
右归丸
／正常
模型 倍数１ 倍数２ 基因编号
Ｓｃｇｂ３ａ１ 　Ｕｔｅｒｏｇｌｏｂｉｎｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ２ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ（ＣｙｔｏｋｉｎｅＨＩＮ１） ５６７５８０３１７８０１６６７ １７８６０ ３４０５１１９ＮＭ０５４０３７
　 （Ｈｉｇｈｉｎｎｏｒｍａｌ１） 　 　 　 　 　 　
Ｃｐ Ｃｅｒｕｌｏｐｌａｓｍｉｎｐｒｅｃｕｒｓｏｒ（Ｆｅｒｏｘｉｄａｓｅ） ２５４３２０１８７３０３０５２ １３５６７ ８３２４０５ＡＫ０４３２４８
Ｄｆｙ Ｄｕｆｙａｎｔｉｇｅｎ／ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ ２７７８８０３２５５０４８３６ ８５３６７ ５７４６０７ＮＭ０１００４５
Ａｇｘｔ２ｌ１ ａｌａｎｉｎｅｇｌｙｏｘｙｌａｔｅａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ２ｌｉｋｅ１ ２２４１５０２８０９０２３２６ ７９７８９ ９６３６７２ＮＭ０２７９０７
Ｌｙ６ｆ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅａｎｔｉｇｅｎ６ｃｏｍｌｅｘ，Ｌｏｃｕｓ ３２０４１０４１４００４１４４ ７７３９６ ７７３１９ ＡＫ１２９１１５
ＴＹ３ＨＭＯＵＳＥ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ３ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ３ｈｙｄｒｏｘｌａｓｅ）（ＴＨ） ２０３２３０２８３１０３７６６ ７１７７５ ５３９６４ ＮＭ００９３７７
Ｓｇｋ 　Ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅｋｉｎａｓｅＳｇｋ１（ｓｅｒｕｍ／ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ３１６８５０４８０００２９９９ ６６０１４１０５６５２ ＮＭ０１１３６１
ｒｅｇｕｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅ１） 　 　 　 　 　 　
Ｌｒｃ８ Ｌｅｕｃｉｎｅｒｉｃｈｒｅｐｅａｔｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ８ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ２６１０８０４０３９０３７７１ ６４６４０ ６９２３３ ＮＭ１７７７２５
Ｌｙ６ａ ＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅａｎｔｉｇｅｎＬｙ６Ａ．２／Ｌｙ６Ｅ．１ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ（Ｆｒａｇｍｅｎｔ） ２６８９６０４３９４０４４４２ ６１２０５ ６０５４９ ＮＭ０１０７３８
Ｑ８Ｃ０Ｊ４ ＡＮＴＩＳＥＮＳＥＲＮＡＯＶＥＲＬＡＰＰＩＮＧＭＣＨｐｒｏｔｅｉｎ ００８７０５０３３０５０５７８ ５７８３４９５８１２０１ ＸＭ１２５８６１
Ｇｎｇ１２ 　ＧｕａｎｉｎｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｂｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎＧ（Ｉ）／Ｇ（Ｓ）／Ｇ（０） ０１７８０４６００１４８３５０ ２５８３７０２７２５４６ ＮＭ０２５２７８
　 ｇａｍｍａ１２ｓｕｂｕｎｉｔ 　 　 　 　 　 　
Ｔｍｅｍ１０ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎ１０；ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎＴＭＰ１０ ０２００２３６７４３３０５８９ １８３５０８１５２７７５ ＮＭ１５３５２０
Ｃａｐ１ Ａｄｅｎｙｌｙｌｃｙｃｌａｓｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ１（ＣＡＰ１） ０２６３９３７０９９２８１４７ １４０５８０１０６６５８ ＮＭ００７５９８
Ｎｒ４ａｌ 　ＯｒｐｈａｎｎｕｃｌｅａｒｒｅｃｅｐｔｏｒＮｒ４ａｌＯｒｐｈａｎｎｕｃｌｅａｒｒｅｃｅｐｔｏｒＨＭＲ ０３３９２４６８１８２２１２１ １３８０３３ ６５２２０ ＮＭ０１０４４４
　 ＮｕｃｌｅａｒｈｏｒｍｏｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒＮＵＲ／７７ 　 　 　 　 　 　
Ｐｃｓｋ１ｎ 　ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｖｅｒｔａｓｅｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ／ｋｅｘｉｎｔｙｐｅ１ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；ｇｒａｎｉｎ０４３４６３３０５５２７５４４ ７６０６２ ６３３８１ ＮＭ０１３８９２
　 ｌｉｋｅｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅｐｅｐｔｉｄｅｐｒｅｃｕｒｓｏｒ；ｐａｎｃｒｅａｓｐｒｏｔｅｉｎ３； 　 　 　 　 　 　
　 ｂａｓｉｃｐｒｏｔｅｉｎＩＡ４ 　 　 　 　 　 　
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３．３　ＲｅａｌｔｉｍｅＲＴＰＣＲ检测
用 ＲｅａｌｔｉｍｅＲＴＰＣＲ对模型组／正常组和金匮
组／模型组差异表达基因生长激素（ＧＨ）和子宫珠
蛋白相关蛋白２前体（Ｓｃｇｂ３ａ１）位点进行验证，结果
见表２。表中比值１和比值２分别为 ＲｅａｌｔｉｍｅＲＴ
ＰＣＲ检测法所得和基因芯片检测所得；金匮组２个
比值２为金匮组／模型组的比值。
４　讨论
表２　两差异表达基因的ＲｅａｌｔｉｍｅＲＴＰＣＲ检测
样品 基因名称 基因符号 基因编号 交叉点 ΔＣＰ 扩增效率 ＰＣＲ检测 芯片检测
正常 生长激素 ＧＨ ＮＭ００８１１７ １８１５ 　 　 　 　
模型 生长激素 ＧＨ ＮＭ００８１１７ ２３９５ －５８０ １８６５ ００３０３２１９２５ ００３０６
金匮 生长激素 ＧＨ ＮＭ００８１１７ ２２４３ －４２８ 　 ００７８６８８１５１１） ４４５２５２）
正常 子宫珠蛋白相关蛋白２前体 Ｓｃｇｂ３ａ１ ＮＭ０５４０３７ ２７０２ 　 　 　
模型 子宫珠蛋白相关蛋白２前体 Ｓｃｇｂ３ａ１ ＮＭ０５４０３７ ２４４６ ２５６ １８５５ ５４７８４０８８３９ ５６７５８
金匮 子宫珠蛋白相关蛋白２前体 Ｓｃｇｂ３ａ１ ＮＭ０５４０３７ ２８６０ －１５８ 　 ０４２７００３４４１） ０３１７８２）
　　注：１）为芯片检测的金匮丸组／模型组的比值；２）为ＲｅａｌｔｉｍｅＲＴＰＣＲ检测的金匮组／正常组的比值。
　　模型组／正常组上调而二药治疗组均下调的基
因共有２３个，涉及炎症／免疫，特别是子宫珠蛋白
相关蛋白２前体（Ｓｃｇｂ３ａｌ，比值５６７５８）是类固醇依
赖分泌蛋白，有显著地抗炎和免疫调节作用。丝氨
酸／苏氨酸蛋白激酶Ｓｇｋ１（血清／糖皮质激素调节激
酶）（ＮＭ０１１３６１），其为参与信息传递的蛋白激酶，
也是 ＤＮＡ激活的蛋白激酶，主要参与信号转导并
可因脑损伤诱生上调而起抗凋亡作用［５］，以及达菲
抗原／趋化因子受体（ＮＭ０１００４５）是红细胞趋化因
子受体，属于Ｇ蛋白的偶联受体，同样也参与信号
转导，同时还有抗炎作用。二治疗组显著上调模型
组显著下调的反义ＲＮＡ重叠黑色素（ＭＣＨ）蛋白基
因，说明用药后显著改善机体抵御寒冷的能力，而机
体是通过增加下丘脑分泌黑色素，从而使暴露于寒
冷下的机体提高其产热的利用率，增加御寒能
力［６］。同时二治疗组可显著下调模型组小鼠上调
的酪氨酸３羟化酶基因（ＮＭ００９３７７）和血管紧张肽
前体（ＮＭ００７４２８），前者是酪氨酸生成多巴及进一
步生成儿茶酚胺、黑色素的限速酶，显著下调其基
因将会增加多巴、儿茶酚胺和黑色素的生成，提高
神经递质和黑色素水平，也有助于提高御寒能
力［７］。重要的是儿茶酚胺生成减少，并殃及生殖系
统内分泌功能紊乱［８］。而血管紧张肽前体（含血管
紧张素Ⅱ）可通过神经元巨噬细胞移动抑制因子
（ＭＩＦ）（脑中表达）介导分解去甲肾上腺素（ＮＥ）递
质的作用来调节 ＮＥ的代谢［９］，较多的分解 ＮＥ会
导致去甲肾上腺素能反应直至功能紊乱 用二药后
均可显著下调血管紧张肽前体基因，有益于 ＮＥ神
经元的功能。二治疗组可显著上调 Ｄ点结合蛋白，
即清蛋白 Ｄ盒功能在于识别并与激素反应元件
（ＨＲＥ）结合。而 ＨＲＥ由两大类组成 糖皮质激素／
孕激素反应元件；含雌激素、维生素Ｄ３［１，２５（ＯＨ）
Ｄ３］反应元件和甲状腺激素反应元件。ＨＲＥ是基因
启动子和增强子中能与核内激素受体结合的 ＤＮＡ
序列［１０］。另外，孤儿核受体（一类蛋白转录因子）显
著上调，可提高机体其他激素，如类固醇激素，以及
非类固醇激素的［１１］。加之上调神经颗粒蛋白基因
（ＮＭ０２２０２９）表达，都说明用药后可提高机体的激
素水平。由于鸟苷酸结合蛋白、跨膜蛋白参与细胞
蛋白质的合成、信号转导、生长及分化，从而调节细
胞周期，二治疗组显著上调模型组／正常组显著下调
的鸟苷酸结合蛋白 Ｇ（Ｉ）／Ｇ（ｓ）／Ｇ（０）γ亚基基因
（ＮＭ０２５２７８）此促进了细胞增殖，减少细胞凋
亡［１２］。还有二治疗组显著上调腺苷酰环化酶相关
蛋白（Ｃａｐ１）基因，也说明可以显著改善肾阳虚小鼠
模型氧化磷酸化不活跃、全身功能及代谢低下的状
态［１３］。下调铜蓝蛋白前体基因则与抗氧化和铜的
解毒、存储以及氧自由基清除有关［１４］。通过定量
ＰＣＲ检测进一步证实了金匮、模型、正常组均有生
长激素和子宫珠蛋白相关蛋白２前体（Ｓｃｇｂ３ａ１）位
点，并给出三者的定量关系。
本研究表明，在用金匮肾气丸和右归丸后，可下
调炎症／免疫反应和抗氧化基因，上调黑色素、激素、
促增殖基因，改善机体的功能和代谢情况。
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ｓｅｘｕａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ａｎｉｍａｌｓ＇ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓｕｃｈａｓｆｅａｒｉｎｇｃｏｌｄ，ａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，ｍｏｕｓｅ＇ｆｕｒａｎｄｓｏｏｎｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｔｈｅｂｒａｉｎ
ｇｅｎｅｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｕｓｅｂｒａｉｎｇｅｎｅｃｈｉｐｏｆ３６ＫＭｏｕｓｅｇｅｎｏｍｅａｒａｙｍａｄｅｂｙＣａｐｉｔａｌＢｉｏＣｏｒｐ．Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ，ａｎｄｔｈｅｄｉｆ
ｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｇｅｎｅｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｒａｔｉｏｅｑｕａｌｔｏｏｒａｂｏｖｅ２ａｎｄｅｑｕａｌｔｏｏｒｂｅｌｏｗ０．５ｗｉｔｈｔｈｅｒｅｌａｔｅｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ
ｉｎｔｅｎｓｉｔｙｃｏｍｐａｒｉｎｇｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓ，ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｂｅｆｕｒｔｈｅｒｖｅｒｉｆｉｅｄｉｎｔｈｅｌｉｇｈｔｏｆｐａｒｔｌｙｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｇｅｎｅｗｉｔｈｑＲＴＰＣＲ．
Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｏｆｋｉｄｎｅｙｙａｎｇａｓｔｈｅｎｉａｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｗａｙｏｆｅｘｃｅｓｓｉｖｅｐｈｙｓｉｃａｌａｎｄｓｅｘｕａｌ
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｔｗｅｎｔｙｔｈｒｅｅｇｅｎｅｓａｍｏｎｇｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｖｅｒｓｕｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｂｕｔｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｉｎ
ｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓｖｅｒｓｕｓｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｃｈｉｅｆｌｙｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｇｅｎｅｓａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗｉｔｈｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ／ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ，ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｓ／
ｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｓｏｏｎ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｓｉｘｇｅｎｅｓａｍｏｎｇｔｈｅｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｖｅｒｓｕｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｂｕｔｕｐ
ｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓｖｅｒｓｕｓｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｍａｉｎｌｙｉｎｖｏｌｖｉｎｇｔｈｅｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｏｆｃｅｌｕｌａｒｃｙｃｌｅａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｓ
ｓｉｏｎｓ／ｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ，ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄｅｔａｌ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＪｉｇｕｉＳｈｅｎｑｉｗａｎａｎｄＹｏｕｇｕｉｗａｎｍａｙｍａｋｅｉｔｍａｒｋｅｄｌｙｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄｔｏ
ｎｏｔａｂｌｙｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｏｆｈｏｒｍｏｎｅａｎｄｍｅｌａｎｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅ（ＭＣＨ）ｆｏｒｍｏｄｅｌｏｆｍｏｕｓｅｏｆｋｉｄｎｅｙｙａｎｇａｓｔｈｅｎｉａ，ａｎｄ
ｐｒｏｍｏｔｅｃｅｌｕｌａｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈｃａｎｉｎｑｕｉｒｅｉｎｔｏｅｆｅｃｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｈｅｄｒｕｇｉｎｇｅｎｅｔｉｃｌｅｖｅｌａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　ＤＮＡｍｉｃｒｏａｒａｙ；ｋｉｄｎｅｙｙａｎｇａｓｔｈｅｎｉａ；ａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌ；ＪｉｎｇｕｉＳｈｅｎｑｉｗａｎ；Ｙｏｕｇｕｉｗａｎ ［责任编辑　古云侠］
·８２１１·
第３４卷第９期
２００９年５月
　　　　　　 　 　 　 　 　　　　　　 　 　 　 　
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