全 文 ：茵陈醇提物抗游离脂肪酸脂对体外培养 ＨｅｐＧ２
细胞的毒性作用及机制研究
陈少东１，２，冯琴１，彭景华１，许丽莉１，胡义扬１
（１．上海中医药大学 附属曙光医院 上海中医药大学肝病研究所 肝肾疾病病证教育部重点研究室
上海市高校中医内科学Ｅ研究院，上海 ２０１２０３；
２．厦门大学 医学院，福建 厦门 ３６１００５）
［摘要］　目的：研究中药茵陈醇提物对游离脂肪酸刺激ＨｅｐＧ２细胞所致肝脂毒性的抑制作用及机制。方法：制备大鼠的
正常血清和药物血清，在经毒性试验确定无药物毒性浓度的前提下，分设正常组、模型组和茵陈醇提物组（１０％，１％，０１％ ３
个剂量），以相应浓度的正常血清和药物血清培养ＨｅｐＧ２细胞，同时添加长链游离脂肪酸（ＦＦＡ）刺激ＨｅｐＧ２细胞２４ｈ。观察：
①细胞上清肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）含量（ＥＬＩＳＡ法）；②细胞内甘油三酯（ＴＧ）含量、细胞脂肪油红Ｏ染色；③细胞内磷酸化κＢ
抑制蛋白（ＰＩκＢ）、组织蛋白酶Ｂ（ｃｔｓｂ）、凋亡抑制基因相关 Ｘ蛋白（Ｂａｘ）蛋白表达（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ法）；④细胞 ＴＮＦα，ｃｔｓｂ
和Ｂａｘ基因表达（ｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ）；⑤细胞内ｃｔｓｂ的表达和分布（免疫荧光法）。结果：模型组细胞内 ＴＧ及上清 ＴＮＦα含量显
著升高，分别达（５９０±１８６）ｍｇ·ｇ－１、（７７±１１）ｐｇ·ｍｇｐｒｏｔ－１，细胞内 ｃｔｓｂ、ＰＩκＢ的蛋白表达以及 ｃｔｓｂ、ＴＮＦα的 ｍＲＮＡ表达
显著增强；而１０％茵陈醇提物组细胞内ＴＧ和上清ＴＮＦα含量较模型组显著降低，仅为（３３５±５４）ｍｇ·ｇ－１、（５５±７）ｐｇ·ｍｇ
ｐｒｏｔ－１，且显著抑制细胞内ｃｔｓｂ、ＰＩκＢ的蛋白表达以及ｃｔｓｂ、ＴＮＦα的ｍＲＮＡ表达。结论：茵陈醇提物对ＦＦＡ诱导的ＨｅｐＧ２细
胞脂肪变性、ＴＮＦα分泌有显著的抑制作用，其作用与抑制ｃｔｓｂ等基因和蛋白表达有关。
［关键词］　茵陈醇提物；游离脂肪酸；ＨｅｐＧ２细胞；肝脂毒性
［收稿日期］　２００９００００
［基金项目］　国家自然科学基金项目（３０６７２６３５）；上海市优秀学科
带头人计划项（０６ＸＤ１４０１８）；上海市教委重点学科建设项目
（Ｙ０３０２）；上海高校创新团队（第一期）
［通信作者］　胡义扬，Ｔｅｌ：（０２１）５１３２８８８８８１１１，Ｅｍａｉｌ：ｙｙｈｕｌｉｖｅｒ
＠１６３．ｃｏｍ
［作者简介］　陈少东，医学博士，厦门大学医学院教师。Ｅｍａｉｌ：
ｃｓｄ５０３５２０１＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
　　近年来临床实践和研究表明，中医药对非酒精
性脂肪肝的治疗有良好的效应和前景［１］。作者既
往对“祛湿化瘀复方”（由中药茵陈、栀子、虎杖、田
基黄、姜黄组成）的研究表明，该方具有显著的抗脂
肪肝效应，并存在抗氧化、抗脂毒性等作用［２５］。为
进一步剖析复方综合药理作用的主效应中药，作者
结合数学模型“均匀设计法”研究发现方中的茵陈
（醇提）是该方针对抑制脂肪变性和 ＴＮＦα分泌作
用环节的主效应中药［６］。为此，作者采用游离脂肪
酸诱导ＨｅｐＧ２细胞肝脂毒性体外模型，以期对茵陈
醇提物体外抗肝脂毒性作用及其机制进行了进一步
深入研究。
１　材料
１．１　细胞株
采用ＨｅｐＧ２细胞，购自中国科学院上海细胞生
物学研究所细胞库。
１．２　动物
ＳＤ雄性大鼠，ＳＰＦ级，３００ｇ左右，购自中国科
学院上海实验动物中心，合格证号 ＳＣＸＫ（沪）２００７
０００５，用于制备药物血清。
１．３　药物
茵陈（ＨｅｒｂａａｒｔｅｍｉｓｉａｅＳｃｏｐｏｒｉａｅ），购自上海华
浦中药饮片有限公司，生产批号２００６０８０３０３。制备
工艺：取茵陈１０００ｇ，加６０００ｍＬ９０％乙醇回流提
取３次，每次３ｈ，合并滤液，６０℃减压回收乙醇，得
含生药０３３ｇ·ｍＬ－１的茵陈醇提物。冷藏备用。
１．４　试剂
胎牛血清（ＦＢＳ），批号 ０４００１１Ｂ，ＰＲＭＩＭｅｄｉ
ｕｍ１６４０培养基干粉，批号１２８５０８２，购自 ＧＩＢＣＯ公
司。棕榈酸（Ｐａｌｍｉｔｉｃａｃｉｄ），批号Ｐ０５００、油酸（Ｏｌｅｉｃ
ａｃｉｄ），批号 Ｏ１００８１Ｇ，均购自 Ｓｉｇｍａ公司。甘油三
酯（ＴＧ），批号２００６１１０３３２、乳酸脱氢酶（ｌａｃｔａｔｅｄｅ
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ｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＬＤＨ），批号 ２００６０６０６、考马斯亮蓝蛋
白测定试剂盒，批号２００７１１０３３７，购自南京建成生
物制品研究所，ＢＣＡ蛋白浓度测定试剂盒，批号
Ｐ００１２，购 自 碧 云 天 公 司。 油 红 Ｏ，批 号
ＷＦ２００６０３０７，购自上海化学试剂站。酶联免疫吸附
分析（ＥＬＩＳＡ）人血浆 ＴＮＦα检测试剂盒，批号
ＫＨＣ３０１２，购自 Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ公司。ＰＩκＢ抗体（ｍｏｕｓｅ
ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌＩｇＧ），批号９２４６、多克隆 ｃｔｓｂ抗体，批号
０６４８０，为ＣｅｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司产品。Ｂａｘ
抗体，批号ＺＭ０３００，由北京中杉金桥生物技术有限
公司提供。单克隆 ＧＡＰＤＨ抗体，批号 ＫＣ５Ｇ５，为
康成生物科技公司产品。多克隆兔抗羊Ⅱ抗，批号
６４３５６，为ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓＩｎｃ公
司产品。ＡｎｔｉｒａｂｂｉｔＩｇＧ多克隆Ⅱ抗，批号 ｗ１０５６２，
为ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司产品。ｃｔｓｂ细胞免
疫荧光抗体为 ａｎｔｉｒａｂｂｉｔＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＣＹＴＭ５，批号
６２６１２０，为美国 ＺＹＭＥＤ公司产品。焦碳酸二乙酯
（ＤＥＰＣ），批号 Ｗ６７０１，购自 Ａｍｒｅｓｃｏ公司产品。
ＲＮＡ抽提试剂盒，批号２６０８Ａ，购自上海华舜生物
工程有限公司，琼脂糖，批号 ＤＨ０１１，购自华美公
司，ｃＤＮＡ合成试剂盒ＲｅｖｅｒｔＡｉｄＴＭＦｉｒｓｔＳｔｒａｎｄｃＤ
ＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ，批号 Ｋ１６２２，为 Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司产
品。ＤＮＡＭａｒｋｅｒ，批号 ＤＲＲ０４１Ａ、荧光定量 ＰＣＲ试
剂盒，批号 ＢＫ４４０２，为 ＴＡＫＡＲＡ公司产品，溴化乙
锭，批号 Ｅ８７５１，为 Ｓｉｇｍａ公司产品。ＲＮＡ上样缓
冲液，批号０６０４９２，ＤＮＡ上样缓冲液，批号０５０１０８４
均购自北京鼎国生物技术公司。ＴＡＥ干粉（ＴｒｉｓＡｃ
ｅｔａｔｅＥＤＴＡ），批号 ＢＲＬ２５３００，购自迪申生物技术
公司。引物合成自生工公司，其序列及片段长度
（表１）。
表１　目的基因引物序列及片段长度
目的基因 引物序列 片段／ｂｐ
βａｃｔｉｎ ５′ＴＧＡＣＧＡＧＧＣＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡ３′（Ｆ） ３３１
　 ５′ＡＴＧＧＧＣＡＣＡＧＴＧＴＧＧＧＴＧＡＣ３′（Ｒ） 　
ＴＮＦα ５′ＧＧＣＡＧＣＣＴＴＧＴＣＣＣＴＴＧＡＡＧＡＧ３′（Ｆ） １７１
　 ５′ＧＴＡＧＣＣＣＡＣＧＴＣＧＴＡＧＣＡＡＡＣＣ３′（Ｒ） 　
ｃｔｓｂ ５′ＡＡＧＣＴＴＣＧＡＴＧＣＡＣＧＧＧＡＡＣ３′（Ｆ） １３６
　 ５′ＡＴＴＧＧＴＧＴＡＧＡＴＧＣＡＧ３′（Ｒ） 　
Ｂａｘ ５′ＧＣＧＡＧＴＧＴＣＴＣＡＡＧＣＧＣＡＴＣ３′（Ｆ） １４３
　 ５′ＣＣＡＧＴＴＧＡＡＧＴＴＧＣＣＧＴＣＡＧＡＡ３′（Ｒ） 　
１．５　主要仪器
ＰｒｉｍｏＲ型低温高速离心机和 ＢＢ１５型 ＣＯ２培
养箱，德国 Ｈｅｒａｅｕｓ公司制造。ＨＦｓａｆｅ１５００型生物
安全柜，ＨＥＡＬＦＯＲＣＥ公司产品。倒置生物显微镜
３７ＸＢ，上海光学仪器厂生产。ＰｈｉｌｉｐｓＴｅｃｎａｉ电子显
微镜。Ｍ５多功能酶标仪，美国 ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ公
司产品。０２２，０４５μｍ微孔滤膜，上海半岛实业有
限公司净化器材厂产品。６０ｍｍ培养皿、６孔、２４
孔、９６孔培养板，均为美国 Ｃｏｒｎｉｎｇ公司产品，购自
上海实生细胞生物技术公司。ＦＡ１００４分析电子天
平，美国Ｄｅｎｖｅｒ公司生产，３６３３型高压消毒锅，美国
ＹａｍａｔｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃｗｃ公司产品。ＰＣＲ扩增仪 Ｒｏｔｏｒ
ＧｅｎｅＲＧ３０００，美国基因公司产品。ＪＹ２００电泳仪，
北京市君意机电技术公司产品。石英比色皿，江苏
宜兴和桥玻璃仪器二厂产品。ＢｉｏＲａｄ电泳仪、
ＸＲＣＩ型Ｘ射线暗匣，上海医疗器械五厂产品。复
日ＦＲ９８０生物电泳图像分析系统，上海复日科技有
限公司产品。ＨＰＳｃａｎｊｅｔＸＰＡ型扫描仪，惠普公司
产品。
２　方法
２．１　细胞培养
ＨｅｐＧ２细胞株以０２５％胰酶＋００２％ＥＤＴＡ消
化传代，以含１０％胎牛血清的１６４０培养液在含５％
ＣＯ２＋９５％空气的３７℃培养箱中培养。加药前以
无血清１６４０洗涤２次。
２．２　药物血清制备
按１０ｍＬ·ｋｇ－１鼠重，生药０３３ｇ·ｍＬ－１剂量
给大鼠灌服药物，２次·ｄ－１，连续３天，末次灌胃结
束后禁食，１ｈ后无菌条件下从腹腔静脉取血，静置
３～４ｈ，３０００ｒ·ｍｉｎ－１、２０ｍｉｎ、４℃离心，超净台上
分离血清。将分离得到的血清置于５６℃水浴中３０
ｍｉｎ灭活，－７０℃冷藏备用。
２．３　药物血清毒性试验
分别设 １０％，２０％，３０％３种浓度的胎牛血清
组、正常大鼠血清组和茵陈醇提物药物血清组，每组
３皿，作用于ＨｅｐＧ２２４ｈ后，取上清检测ＬＤＨ活性。
２．４　分组与用药
２．４．１　茵陈醇提物体外抗肝脂毒性的药效学筛选
实验　ＨｅｐＧ２培养 ２４～４８ｈ，细胞长满 ７０％ ～
８０％，换液，分正常组、模型组以及１０％，１％，０１％
３个剂量茵陈醇提物组，每组各４皿。正常组、模型
组添加１０％正常大鼠血清，１０％茵陈醇提物剂量组
添加１０％茵陈醇提物药物血清、１％茵陈醇提物剂
量组添加１０％正常大鼠血清稀释１０倍的１０％茵陈
醇提物药物血清，０１％茵陈醇提物剂量组添加
１０％正常大鼠血清稀释１００倍的１０％茵陈醇提物
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药物血清，不同茵陈醇提物组的血清浓度仍保持为
１０％。除正常组外，各组添加 ＦＦＡ（油酸：棕榈酸浓
度为０５×１０－３Ｍ∶０２５×１０－３Ｍ）［７］。刺激２４ｈ收
集上清及细胞，检测细胞内 ＴＧ、上清 ＴＮＦα含量及
进行细胞油红Ｏ染色。
２．４．２　茵陈醇提物体外抗肝脂毒性的作用机理实
验　ＨｅｐＧ２培养２４～４８ｈ，细胞长满７０％ ～８０％，
换液，分正常组、模型组、最佳效应茵陈醇提物剂量
组（取药效学筛选实验所得效应强度最佳的剂量组
进行作用机理研究），每组各４皿。正常组、模型组
添加 １０％正常大鼠血清，１０％茵陈醇提物剂量组
（根据药效学筛选实验所得）添加１０％茵陈醇提物
药物血清。除正常组外，各组添加 ＦＦＡ。刺激２４ｈ
收集上清及细胞，检测如下项目。
２．５　检测项目和方法
２．５．１　细胞内ＴＧ含量　参考 ＨｅｉｄｅｒＪＧ方法提取
细胞层总脂质［８］，冰上刮下细胞层后，加入３ｍＬ异
丙醇洗净，移入试管，混匀３ｍｉｎ（破膜），分装３管。
取出其中一套，室温离心（３０００ｒ·ｍｉｎ－１１５ｍｉｎ），
脂类溶于异丙醇，下层沉淀为蛋白。取上清８０℃以
上水浴使异丙醇蒸发至干，所得为脂类物质，重新溶
于９μＬ异丙醇，加入９００μＬ酶试剂，采用ＧＰＯＰＡＰ
法，酶标仪５４６ｎｍ处测吸光度（Ａ），求出各样本的
ＴＧ含量（ｍｇ·Ｌ－１）。下层沉淀溶于２００μＬ１ｍｏｌ·
Ｌ－１ＮａＯＨ，取 ３０μＬ进行检测，得蛋白浓度（ｇ·
Ｌ－１）。细胞内ＴＧ含量通过细胞层总蛋白含量进行
校正，得ＴＧ含量（ｍｇ·ｇ－１）。
２．５．２　细胞油红 Ｏ染色　细胞爬片取出后，用预
冷的ＰＢＳ洗３遍，吹干，入１０％甲醛固定１ｈ。加油
红Ｏ染液，室温下２ｈ，再用ＰＢＳ洗３遍。光学显微
镜观察拍照。
２．５．３　细胞上清ＴＮＦα含量　ＥＬＩＳＡ法，以５０μＬ
上清进行检测，求出各样本的 ＴＮＦα含量（ｐｇ·
Ｌ－１），最后用细胞层总蛋白浓度校正，即 ＴＮＦα含
量（ｐｇ·Ｌ－１）测定值／细胞层总蛋白（ｍｇ·Ｌ－１），得
ＴＮＦα含量（ｐｇ·ｍｇｐｒｏｔ－１）。
２．５．４　细胞 ＰＩκＢ、ｃｔｓｂ、Ｂａｘ蛋白表达　Ｗｅｓｔｅｒｎ
Ｂｌｏｔｉｎｇ法［９］。
２．５．５　细胞ｃｔｓｂ的表达和分布检测　细胞免疫荧
光法［１０］。
２．５．６　细胞 ＴＮＦα、ｃｔｓｂ、Ｂａｘ基因表达　ｒｅａｌｔｉｍｅ
ＰＣＲ法［１１］。
２．６　统计方法
所有数据均使用 ＳＰＳＳ１１０软件包进行统计学
分析。计量资料以差珋ｘ±ｓ表示。数据经过正态分布
及齐性检验，组间比较采用单因素方差分析Ｑ检验。
３　结果
３．１　不同浓度茵陈醇提物药物血清对 ＨｅｐＧ２细胞
的毒性实验
茵陈醇提物药物血清、胎牛血清以及正常大鼠
血清。相同浓度两两比较上清ＬＤＨ活性，无统计学
差异，但三者上清ＬＤＨ活性均随浓度增加呈上升趋
势。提示一定浓度的大鼠血清也存在毒性作用。为
了排除血清本身的影响，故后续实验均添加１０％正
常大鼠血清或药物血清（表２）。
表２　不同浓度茵陈醇提物药物血清对ＨｅｐＧ２细胞
上清ＬＤＨ活性的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
组别 ＬＤＨ／Ｕ·ｇ－１
１０％胎牛血清 ４８７±１１０
１０％正常大鼠血清 ４５９±１２０
１０％茵陈醇提物药物血清 ４８４±８５
２０％胎牛血清 ５２４±７５
２０％正常大鼠血清 ５１６±２１
２０％茵陈醇提物药物血清 ５１９±５８
３０％胎牛血清 ５５８±８４
３０％正常大鼠血清 ５５５±４３
３０％茵陈醇提物药物血清 ５５６±４６
３．２　不同剂量茵陈醇提物抗肝脂毒性的作用
３．２．１　细胞内 ＴＧ含量及上清 ＴＮＦα蛋白表达变
化　与正常组细胞内 ＴＧ含量（１４１±１３）ｍｇ·ｇ－１
相比，模型组ＦＦＡ刺激后，达（５９０±１８６）ｍｇ·ｇ－１
（Ｐ＜００１）。各剂量茵陈醇提物组细胞内 ＴＧ含量
较模型组有所降低，但以 １０％茵陈醇提物剂量组
（３３５±５４）ｍｇ·ｇ－１效果最佳（Ｐ＜００５）。本实验
结果重复 ２次，结果一致。较之正常组细胞上清
ＴＮＦα蛋白含量（４８±７）ｐｇ·ｍｇ－１，模型组经 ＦＦＡ
刺激后，达（７７±１１）ｐｇ·ｍｇ－１（Ｐ＜００１）。各剂量
茵陈醇提物组均能抑制 ＴＮＦα的蛋白表达，但仅
１０％茵陈醇提物剂量组下降为（５５±７）ｐｇ·ｍｇ－１
（Ｐ＜００１）（表３）。
３．２．２　细胞脂肪油红 Ｏ染色变化　正常组 ＨｅｐＧ２
细胞呈不规则多角形或卵圆形生长，胞质染色浅淡
或无明显着色。模型组在 ＦＦＡ刺激后，胞质内广泛
着色，红色脂滴大而多。而１０％茵陈醇提物剂量组
的上述变化显著减轻（图１）。
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表３　细胞内ＴＧ，上清ＴＮＦα含量变化（珋ｘ±ｓ，ｎ＝４）
组别 剂量 ＴＧ／ｍｇ·ｇ－１ ＴＮＦα／ｐｇ·ｍｇ－１
正常 １０％正常大鼠血清 １４１±１３ ４８±７
模型 １０％正常大鼠血清 ５９０±１８６１） ７７±１１１）
０１％茵陈醇提物 ０１％茵陈醇提物药物血清 ４８３±１８７ ６４±１７
１％茵陈醇提物 １％茵陈醇提物药物血清 ４３０±７７ ６３±１７
１０％茵陈醇提物 １０％茵陈醇提物药物血清 ３３５±５４２） ５５±７３）
　　注：与正常组比１）Ｐ＜００１，与模型组比２）Ｐ＜００５，与模型组比３）Ｐ＜００１。
Ａ．正常组；Ｂ．模型组；Ｃ．０１％茵陈醇提物剂量组；Ｄ．１％茵陈醇提物剂量组；Ｅ．１０％茵陈醇提物剂量组。
图１　不同剂量茵陈醇提物组细胞脂肪油红Ｏ染色示意图（×２００）
３．３　１０％茵陈醇提物抗肝脂毒性作用及其对
“ＦＦＡｃｔｓｂＴＮＦα”通路的影响
３．３．１　细胞 ＰＩκＢ，ｃｔｓｂ，Ｂａｘ蛋白表达变化　较之
正常组，模型组经 ＦＦＡ刺激后，细胞 ＰＩκＢ，ｃｔｓｂ蛋
白表达均显著增加，而Ｂａｘ蛋白表达未见显著变化。
１０％茵陈醇提物剂量组能显著抑制ＰＩκＢ，ｃｔｓｂ蛋白
表达（图２），本实验重复３次，结果一致。
３．３．２　细胞ＴＮＦα，ｃｔｓｂ和 Ｂａｘ基因表达变化　较
之正常组，模型组经 ＦＦＡ刺激后，细胞 ＴＮＦα和
ｃｔｓｂ基因表达显著增加（Ｐ＜００１），但 Ｂａｘ基因表
达未见显著变化。１０％茵陈醇提物剂量组均能抑制
　　
ＴＮＦα和 ｃｔｓｂ基因表达（Ｐ＜００５，Ｐ＜００１）
（表４）。
１．正常组；２．模型组；３．１０％茵陈醇提物剂量组。
图２　细胞ＰＩκＢ，ｃｔｓｂ，Ｂａｘ蛋白表达变化
表４　细胞ＴＮＦα，ｃｔｓｂ和Ｂａｘ基因表达变化（密度积分比值）（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
组别 剂量 ＴＮＦα ｃｔｓｂ Ｂａｘ
正常 １０％正常大鼠血清 １５３±０４８ １６２±０５３ １４２±０５９
模型 １０％正常大鼠血清 ３７７±０５４１） ５７±０６９１） １３５±０７９
１０％茵陈醇提物剂量 １０％茵陈醇提物药物血清 ２３５±０２８２） ３４８±０３６３） ０９２±０５６
　　注：与正常组比１）Ｐ＜００１；与模型组比２）Ｐ＜００５；与模型组比３）Ｐ＜００１。
３．３．３　细胞内ｃｔｓｂ免疫荧光表达变化　细胞免疫 荧光法显示，正常状态时，ｃｔｓｂ呈点状分布（和溶酶
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体定位一致）。ＦＦＡ刺激后，ｃｔｓｂ从溶酶体释放出
来，广泛地弥漫地分布在胞浆中，表达增加（荧光较
强），而１０％茵陈醇提物剂量组的上述变化受到明
显抑制（图３）。
Ａ．正常组；Ｂ．模型组；Ｃ．１０％茵陈醇提物剂量组。
图３　细胞内ｃｔｓｂ免疫荧光表达变化示意图（×２００）
４　讨论
茵陈具有利胆保肝、抗病原微生物、抗癌、抗
动脉粥样硬化、兴奋平滑肌等多方面的活性［１２１５］，
其化学成分及药理作用的研究报道甚多。本研究
则发现中药茵陈（醇提）显著的治疗脂肪肝效应与
其抗肝脂毒性有关，且与“ＦＦＡｃｔｓｂＴＮＦα”通路密
切相关。
ＦＦＡ异 常 增 多 在 非 酒 精 性 脂 肪 性 肝 病
（ＮＡＦＬＤ）的发病中起着重要的作用。当 ＦＦＡ异常
增多时，其很强的细胞毒性，可作为去垢剂损害细胞
质、线粒体和溶酶体膜等，引起生物膜损伤［１６］。近
年来，Ｆｅｌｄｓｔｅｉｎ等人［１７］研究发现，ＨｅｐＧ２细胞经
ＦＦＡ刺激后，刺激Ｂａｘ向溶酶体内转位，促使ｃｔｓｂ释
放到胞浆，激活ＩκＢ激酶β（ＩＫＫβ）使ＩκＢ磷酸化，
导致核因子 ｋａｐｐａＢ（ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ，ＮＦ
κＢ）的活化，使之向细胞核内移位，启动炎症因子如
ＴＮＦα的基因转录、大量表达引起 ＴＧ的蓄积、发生
脂肪变性，造成肝脏脂毒性，ＴＮＦα又能进一步促进
溶酶体渗透，激活ＮＦκＢ，形成一个加重肝损伤的循
环，即“ＦＦＡｃｔｓｂＴＮＦα”通路。
本研究结果显示，在无细胞毒性剂量范围下
（１０％浓度药物血清），不同剂量茵陈醇提物（１０％，
１％，０１％）具有抗 ＦＦＡ诱导 ＨｅｐＧ２细胞内 ＴＧ变
性、ＴＮＦα分泌的肝脂毒性作用，但以１０％药物血
清效应最强，提示该药的抗脂毒性作用具有剂量依
赖性。
本研究结合 １０％茵陈药物血清对“ＦＦＡｃｔｓｂ
ＴＮＦα”通路的影响探讨茵陈醇提物体外抗肝脂毒
性作用机理。实验结果表明，ＨｅｐＧ２细胞经 ＦＦＡ刺
激后，Ｂａｘ的蛋白和基因表达均未见显著性改变，提
示Ｂａｘ在本通路中的作用可能与 ＦＦＡ的刺激后向
溶酶体内转位，促使 ｃｔｓｂ释放到胞浆，激活了 ＮＦ
κＢ／ＩκＢ信号转导途径有关［１８］。经 ＦＦＡ刺激后，模
型组 ｃｔｓｂｍＲＮＡ及蛋白、ｐＩκＢ蛋白、ＴＮＦαｍＲＮＡ
及蛋白表达均显著升高。茵陈药物血清则可显著抑
制上述作用环节，提示茵陈醇提物抗肝脂毒性的作
用机理与有效抑制 ｃｔｓｂｍＲＮＡ及蛋白表达有关，从
而达到抑制ＮＦκＢ的活化，通过ＮＦκＢ／ＩκＢ信号转
导途径抑制ＴＮＦαｍＲＮＡ转录，以阻断 ＴＮＦα的生
物活性和靶效应。
以上结果表明，中药茵陈醇提物对 ＦＦＡ的肝脂
毒性具有直接的、高强度的干预作用，其机理与有效
抑制ｃｔｓｂ表达从而抑制ＮＦκＢ活化等有关。
［参考文献］
［１］　 胡义扬．加强中医药治疗脂肪性肝病的深入研究［Ｊ］．中国中
西医结合杂志，２００４，２４（１）：１２．
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第３４卷第１９期
２００９年１０月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
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ＲｅｓｅａｒｃｈｏｆＨｅｒｂａＡｒｔｅｍｉｓｉａｅＳｃｏｐｏｒｉａｅｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｈｅｐａｔｉｃｌｉｐｏｔｏｘｉｃｉｔｙ
ＣＨＥＮＳｈａｏｄｏｎｇ，ＦＥＮＧＱｉｎ，ＰＥＮＧＪｉｎｈｕａ，ＸＵＬｉｌｉ，ＨＵＹｉｙａｎｇ
（）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｉｃｉｅｎｃｙａｎｄｅｆｅｃｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＨｅｒｂａＡｒｔｅｍｉｓｉａｅＳｃｏｐｏｒｉａｅｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｈｅｐａｔｉｃｌｉｐｏｔｏｘ
ｉｃｉｔｙｍｏｄｅｌｉｎｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｒａｔｒｅｇｕｌａｒｓｅｒｕｍａｎｄｍｅｄｉｃｉｎｅｓｅｒｕｍ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｓａｆｔｙｏｆｍｅｄｉｃｉｎｅｔｈｉｃｋｎｅｓｓｂｙｔｏｘｉｃｉｔｙｔｅｓ
ｔｉｎｇ，ｎｏｒｍａｌａｎｄｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅａｄｄｅｄ１０％ ｎｏｒｍａｌｒａｔｓｅｒｕｍ，ＨｅｒｂａＡｒｔｅｍｉｓｉａｅＳｃｏｐｏｒｉａｅｇｒｏｕｐｗａｓａｄｄｅｄ１０％ ｍｅｄｉｃｉｎｅｓｅｒｕｍ
ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｆｏｒ２４ｈ，ＦＦＡｗａｓａｄｄｅｄｔｏａｌｔｈｅｇｒｏｕｐｓｂｕｔｔｈｅｎｏｒｍａｌｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｆｏｒ２４ｈ．Ｔｈｅｉｎｄｉｃｅｓｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｅｌｏｗ：ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆ
ｓｅｒｕｍｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒα（ＴＮＦα）ｂｙＥＬＩＳＡ，ｃｅｌｕｌａｒｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｃｏｎｔｅｎｔ（ＴＧ），ＯｉｌＲｅｄＳｔａｉｎｉｎｇ；ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｅｌｕｌａｒ
Ｂｃｌ２ＡｓｓａｃｉａｔｅｄＸｐｒｏｔｅｉｎ（Ｂａｘ），ｐｈｏｓｐｈｏＩκＢ（ＰＩκＢ）ａｎｄＣａｔｈｅｐｓｉｎＢ（ｃｔｓｂ）ｂｙＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｉｎｇ；ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｅｌｕｌａｒ
ＴＮＦα，ＢａｘａｎｄｃｔｓｂｂｙｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ；ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｃｔｓｂｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ａｆｔｅｒｂｅｉｎｇ
ｉｎｃｕｂａｔｅｄｗｉｔｈＦＦＡｆｏｒ２４ｈｏｕｒｓ，ＴＧｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆＨｅｐＧ２ｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｉｎｃｒｅａｓｅｄｍａｒｋｅｄｌｙ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ，ｎｏｔ
ｏｎｌｙｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｓｅｒｕｍＴＮＦα，ｂｕｔａｌｓｏｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｅｌｕｌａｒｃｔｓｂ，ＰＩκＢａｎｄｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｔｓｂ，ＴＮＦαｉｎ
ｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｃｏｎｔｒａｓｔｔｏｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ＴＧｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎｄｅｃｒｅａｓｅｄｍａｒｋｅｄｌｙｉｎｔｈｅＨｅｒｂａＡｒｔｅｍｉｓｉａｅＳｃｏｐｏｒｉａｅｇｒｏｕｐ．ＴｈｅＨｅｒｂａ
ＡｒｔｅｍｉｓｉａｅＳｃｏｐｏｒｉａｅｉｎｈｉｂｉｔｅｄＴＮＦαｃｏｎｔｅｎｔ，ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｅｌｕｌａｒｃｔｓｂ，ＰＩκＢａｎｄｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴＮＦαｓｉｇｎｉｆｉ
ｃａｎｔｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＨｅｒｂａＡｒｔｅｍｉｓｉａｅＳｃｏｐｏｒｉａｅｈａｓａｄｉｒｅｃｔｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｎＨｅｐＧ２ｓｔｅａｔｏｓｉｓａｎｄＴＮＦαｓｅｃｒｅｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙｌｏｎｇｃｈａｉｎ
ＦＦＡ．ＴｈｅｅｆｅｃｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＨｅｒｂａＡｒｔｅｍｉｓｉａｅＳｃｏｐｏｒｉａｅｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｈｅｐａｔｉｃｌｉｐｏｔｏｘｉｃｉｔｙｈａｓｃｌｏｓｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｎｔｈｅ
ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｔｓｂ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　ＨｅｒｂａＡｒｔｅｍｉｓｉａｅＳｃｏｐｏｒｉａｅ；ｆｒｅｅｆａｔｙａｃｉｄ；ＨｅｐＧ２；ｈｅｐａｔｉｃｌｉｐｏｔｏｘｉｃｉｔｙ
［责任编辑　古云侠］
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