全 文 ：金荞麦 ＭＹＢ转录因子基因 ＦｄＭＹＢＰ１的克隆及
分子特征分析
马婧１，祝钦泷１，２，郭铁英１，３，刘光德１，眭顺照１，李名扬１
（１．西南大学 园艺园林学院 重庆市花卉工程技术研究中心，重庆 ４００７１６；
２．华南农业大学 生命科学学院 广东省植物功能基因组与生物技术重点实验室，广东 广州 ５１０６４２；
３．云南省德宏热带农业科学研究所，云南 瑞丽 ６７８６００）
［摘要］　目的：对金荞麦ＭＹＢ转录因子基因ＦｄＭＹＢＰ１进行克隆和序列特征分析。方法：采用ＲＡＣＥ结合ｃＤＮＡ文库筛
选的方法，从金荞麦ｃＤＮＡ文库中克隆 ＭＹＢＰ１基因（ＦｄＭＹＢＰ１）；生物信息学分析，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交。结果：克隆到１个 ＭＹＢＰ１
转录因子基因（ＦｄＭＹＢＰ１），通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，推测ＦｄＭＹＢＰ１基因是１～２个拷贝基因；ＦｄＭＹＢＰ１基因编码１个长２５６
个氨基酸的蛋白质，在Ｎ端存在１个保守结构域，属于 ＭＹＢ转录因子家族。结论：首次从金荞麦中克隆到转录因子基因
ＦｄＭＹＢＰ１，它具有ＭＹＢ同源基因的典型特征，可能在金荞麦类黄酮代谢途径中起作用。
［关键字］　金荞麦；ＭＹＢ转录因子；类黄酮
［收稿日期］　２００９０１１３
［基金项目］　重庆市自然科学基金项目（ＣＳＴＣ２００５８８１１５４）；农业
部野生植物保护项目（２１３０１３５）
［通信作者］　李名扬，Ｔｅｌ：（０２３）６８２５００８６，Ｆａｘ：（０２３）６８２５１２５０，
Ｅｍａｉｌ：ｌｉｍｙ＠ｓｗｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
　　金荞麦Ｆａｇｏｐｙｒｕｍｄｉｂｏｔｒｙｓ（Ｄ．Ｄｏｎ）Ｈａｒａ是蓼
科荞麦属多年生草本植物［１］，是一种营养丰富并具
有重要药用价值的资源植物［２］。现已从金荞麦地
上部分提取获得１０余种化合物［３］，其块根活性提取
物主要为类黄酮次生代谢产物，具有显著的抗癌、抑
制肿瘤细胞侵袭和转移，以及消炎抗菌等作用，是多
种抗癌和癌预防药物（如复方金荞麦颗粒、金荞麦
片、和威麦宁胶囊等）的主要成分之一［４］。多种转录
因子在植物类黄酮合成途径的复杂调控中扮演重要
角色，它们通过决定一些酶编码基因的时空表达特异
性，来决定产物在时间和空间分布的特异性，从而参
与类黄酮生物合成的调控。目前己分离和鉴定的参
与类黄酮合成调控的转录因子主要有３类：ＭＹＢ蛋
白、ｍｙｃ基因家族的ｂＨＬＨ蛋白、ＷＤ４０蛋白。
本实验通过 ＲＴＰＣＲ获得金荞麦 ＭＹＢ转录因
子的特异探针，并从 ｃＤＮＡ文库中筛选获得 １个
ＭＹＢ转录调控因子编码基因 ＦｄＭＹＢＰ１，并对其进
行了序列特征分析。研究结果有助于从分子水平深
入认识类黄酮生物合成途径，为有效调控这一代谢
途径，提高金荞麦总类黄酮产量，解决金荞麦生物活
性物的工厂化生产遭遇的瓶颈问题提供理论依据。
１　材料与方法
１．１　植物材料及菌种
金荞麦ｃＤＮＡ文库由西南大学园林花卉研究所
构建、保存；烟草 Ｗ３８，大肠杆菌 ＸＬ１Ｂｌｕｅ，ＢＭ２５８
用于质粒克隆由该实验室保存扩繁。
１．２　试剂
ＰＣＲＤＩＧＰｒｏｂｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ（Ｃａｔ．Ｎｏ．１１６３６
０９０９１０）试剂盒为 Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司产品，ｃＤＮＡ第一
链合成试剂盒 ＲｅｖｅｒｔａｉｄＴＭＦｉｒｓｔＳｔｒａｎｄｃＤＮＡＳｙｎ
ｔｈｅｓｉｓＫｉｔ（ＭＢＩ，Ｋ１６２２）购自深圳晶美公司，Ｔ４连
接酶和各种限制性内切酶购自 ＴａＫａＲａ（大连），其
他生化试剂均为市售分析纯。
１．３　方法
１．３．１　金荞麦 ＭＹＢ基因 ｃＤＮＡ和 ＤＮＡ片段的克
隆　参照田振东等的方法（略改动）［６７］，采用ＲＡＣＥ
和文库结合的方法，快速克隆目的基因。
首先根据玉米 Ｐ基因及 ＭＹＢ转录调控因子
Ｒ２Ｒ３家族的Ｒ２，Ｒ３保守区域设计２条简并引物：
ＰｃＰｄｆ５′ＡＡＲＷＳＮＴＧＹＭＧＮＹＴＮＭＧＮＴＧＧ３′，ＰｃＰｄｒ
５′ＣＣＡＲＴＡＲＴＴＹＴＴＮＡＹＮＴＳＲＴＴＲＴＣ３′（Ｒ＝Ａ／Ｇ，
Ｗ＝Ａ／Ｔ，Ｍ＝Ａ／Ｃ，Ｈ＝Ａ／Ｔ／Ｃ，Ｙ＝Ｃ／Ｔ，Ｓ＝Ｇ／
Ｃ，Ｎ＝ａｎｙｂａｓｅ），进行ＰＣＲ扩增，得到金荞麦 ＭＹＢ
基因片段。然后根据得到的片段设计基因特异引物
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（５ＧＳＰ１： ＡＧＡＣＧＡＴＧＧＡＧＡＣＧＧＡＧＡＡＴＧＡＧＡＴＣ，
５ＧＳＰ２：ＣＧＧＡＧＡＡＴＧＡＧＡＴＣＴＴＣＴＴＣＧＴＣＡＧ），分别
与文库载体上 ５′端的 ２条特异引物 ５ＮＰ１（５′ＴＣ
ＣＧＡＧＡＴＣＴＧＧＡＣＧＡＧＣ３′）和 ５ＮＰ２（５′ＣＴＣＧＧ
ＧＡＡＧＣＧＣＧＣＣＡＴＴＧＴＧＧＴ３′）配对进行 ５′ＲＡＣＥ，
扩增目的基因的５′端。再根据５′ＲＡＣＥ得到的序
列设计特异引物 ５ＬＰ（５′ＧＡＡＡＡＣＡＴＣＡＣＧＴＣＴＴＣ
ＣＴＴＴＴＣＴＧＡ３′）和载体上 ３′端的特异引物 ３ＲＰ
（５′ＴＡＡＴＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＣＧＡＡＴＴＧＧ３′）直接
扩增ＦｄＭＹＢＰ１基因ｃＤＮＡ全长序列。
根据ＦｄＭＹＢＰ１基因ｃＤＮＡ序列，设计１对ＰＣＲ
引物，使得扩增产物必须包括完整的开放阅读框架
（ＯＲＦ）并尽可能最大，Ｐｇ１：５′ＡＧＣＴＣＡＣＡＧＣＧＡＴＣＧＡ
ＴＴＡＧＡＴＧ３′，Ｐｇ２：５′ＡＴＧＴＣＴＴＡＣＧＴＧＡＣＣＣＡＡＣＡＴＡ
ＣＡＧ３′，ＰＣＲ扩增得到ＦｄＭＹＢＰ１基因ＤＮＡ序列。
１．３．２　通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析ＦｄＭＹＢＰ１基因拷贝
数　选择３′端非保守性区域３０４ｂｐ的片段作为特
异探针进行杂交，用以判断 ＦｄＭＹＢＰ１基因的拷贝
数，探针引物如下：ＬＳＰ５′ＣＣＴＣＡＧＣＴＣＣＡＡＡＣ
ＣＣＴＡＡＴＣＡＴＧ３′，ＲＳＰ５′ＣＡＧＡＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＡＡ
ＣＴＣＣＴＡＧＧＴ３′。
１．３．３　ＦｄＭＹＢＰ１基因ｃＤＮＡ的生物信息学分析　
生物信息学分析主要采用 ＤＮＡＳｔａｔ软件包及 ｈｔ
ｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ，ｈｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｏｆｔｂｅｒｙ．ｃｏｍ／
等链接的网上软件包进行。文中用于序列比对和系
统发育分析的 ＭＹＢ基因或蛋白质序列在 ＧｅｎＢａｎｋ
上的序列号如下：ＶｖＭＹＢＰＡ１（ＡＭ２５９４８５），ＡｔＧＬ１
（Ｐ２７９００），ＺｍＰ（Ｐ２７８９８），ＺｍＣ１（ＡＡＡ３３４８２），
ＶｖＭＹＢＡ１（ＢＡＤ１８９７７），ＶｖＭＹＢＡ２（ＢＡＤ１８９７８），Ａｔ
ＰＡＰ１（ＡＡＧ４２００１），ＰｈＡＮ２（ＡＡＦ６６７２７），ＬｅＡＮＴ１
（ＡＡＱ５５１８１）， ＡｔＭＹＢ５ （Ｕ２６９３５）， ＰｈＭＹＢ１
（Ｚ１３９９６）， ＡｍＭｉｘｔａ（ＣＡＡ５５７２５）， ＡｔＭＹＢ１２
（ＣＡＢ０９１７２），ＡｔＭＹＢ１１１（ＡＡＫ９７３９６），ＡｔＴＴ２
（Ｑ９ＦＪＡ２）， ＰＨ４ （ＡＡＹ５１３７７）， ＡｔＰＡＰ１
（ＡＡＧ４２００１），ＡｔＰＡＰ２ （ＡＡＧ４２００２），ＡｔＷＥＲ
（ＣＡＣ０１８７４），ＶｖＭＹＢ５ａ（ＡＡＳ６８１９０），ＶｖＭＹＢ５ｂ
（Ｑ５８ＱＤ０）。
２　结果与分析
２．１　ＦｄＭＹＢＰ１基因的克隆及序列特征
以金荞麦嫩叶、茎表皮混合样ｃＤＮＡ为模板，对
简并扩增获得的 ｃＤＮＡ片段进行克隆测序（图１），
得到１个１７５ｂｐ的ｃＤＮＡ探针。对其在ＮＣＢＩ上进
行ＢＬＡＳＴｘ分析，确认得到的片段是金荞麦 ＭＹＢＰ１
基因的１个片段，因此，选择该片段作为同源探针。
Ｍ．ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ。
图１　金荞麦简并引物扩增（Ａ），５′ＲＡＣＥ扩增（Ｂ）以及ＦｄＭＹＢＰ１全长ｃＤＮＡ基因扩增（Ｃ）
　　通过 ＲＡＣＥ和文库结合的方式，以１μＬ稀释
１００×的原始文库为模板，经５′ＲＡＣＥ获得了１条约
４００ｂｐ的片段，测序和 ＢＬＡＳＴｘ比对结果表明为
ＭＹＢＰ１的５′端。用５′端特异引物（５ＬＰ）和３′载体
引物（３ＲＰ）直接扩增全长基因，得到长度约１２ｋｂ
条带，对测序结果比对分析推测分离得到的 ｃＤＮＡ
全长是金荞麦类黄酮代谢途径（花色素和原花色素
支路）的调控基因，由于是根据玉米 Ｐ基因同源克
隆得到的，命名为ＦｄＭＹＢＰ１。以金荞麦基因组ＤＮＡ
为模板，ＰＣＲ扩增（图 ２）得到包括完整 ＯＲＦ框的
ＤＮＡ序列。
利用相关软件分析克隆得到的 ＦｄＭＹＢＰ１基因
ｃＤＮＡ长１１５９个核苷酸，有 １个 １１１ｂｐ（１～１１１
ｂｐ）的５＇ＵＴＲ区（５＇ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄｒｅｇｉｏｎ），１个２５０ｂｐ
（９１０～１１５９ｂｐ，包括１９ｂｐ的 ｐｏｌｙＡ结构）的３′
ＵＴＲ区（３′ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄｒｅｇｉｏｎ），在３′ＵＴＲ区中　　
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Ｍ．ＤＮＡＭａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）；１．Ｈ２Ｏ；２．金荞麦花ｃＤＮＡ；
３．金荞麦基因组ＤＮＡ。
图２　金荞麦基因组ＦｄＭＹＢＰ１的ＰＣＲ扩增（Ａ）及
Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析（Ｂ）
１１１１～１１１６ｂｐ有典型的ｐｏｌｙ（Ａ）加尾信号 ＡＡＴＡ
ＡＡ。得到的ＦｄＭＹＢＰ１基因ＤＮＡ全长１０９８ｂｐ，包
含１个８１ｂｐ的内含子（３１１～３９１ｂｐ），符合标准的
ＧＴ…ＡＧ剪接方式，有１个７９８个核苷酸（１１２～９０９
ｂｐ）的开放阅读框（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ），编码１
个长２６５个氨基酸的蛋白质，理论相对分子质量为
２９７１，预测等电点为８５７。
２．２　Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析
用ＥｃｏＲＩ，ＥｃｏＲＶ，ＤｒａＩ分别酶切金荞麦基因组
ＤＮＡ，电泳转膜后与地高辛标记的探针杂交，ＥｃｏＲＩ
和 ＥｃｏＲＶ酶切方式显示１条带，ＤｒａＩ显示２条带，
表明在金荞麦基因组中ＦｄＭＹＢＰ１基因可能有１～２
个拷贝（图２）。
２．３　金荞麦ＦｄＭＹＢＰ１基因编码推测蛋白质分析
２．３．１　ＦｄＭＹＢＰ１蛋白质的基本性质　对 Ｆｄ
ＭＹＢＰ１蛋白的一级结构进行分析，结果显示：Ｆｄ
ＭＹＢＰ１蛋白含７０个疏水氨基酸，占氨基酸总数的
２６４２％，８０个极性氨基酸，占总数的 ３０１９％，３２
个碱性氨基酸，占总数的 １２０８％，２９个酸性氨基
酸，占总数的１０９４％，并且３２个碱性氨基酸中有
２６个在Ｎ端（１～１２５ａａ），符合ＭＹＢ类转录因子特
点；理论相对分子质量为 ２９７１，预测等电点为
８５７，分子式Ｃ１２９６Ｈ２０２３Ｎ３８７Ｏ４０２Ｓ８；预测半衰期为３０
ｈ，不稳定系数为４０７０，推测这个蛋白质是一个不
稳定的蛋白质。
２．３．２　ＦｄＭＹＢＰ１蛋白质二级结构和三级结构预测
　采用 ＳＰＯＭＡ进行二级结构预测，结果表明 Ｆｄ
ＭＹＢＰ１蛋白二级结构主要由 α螺旋 （ｈｅｌｉｘ，
３０９４％），少量的延伸链（ｅｘｔｅｎｄｓｔｒａｎｄ，４９１％），β
转角（βｔｕｒｎ，３０２％）和随机卷曲（ｒａｎｄｏｍ ｃｏｉｌ，
６１１３％）组成。用 ＬＯＯＰＰ预测得到的二级结构与
此十分相似。
运用 ＳＷＩＳＳＭＯＤＥＬ对 ＦｄＭＹＢＰ１的三级结构
预测，在Ｒ２Ｒ３区有和其结构相似的用 Ｘ射线衍射
测定的ＣＭＹＢＲ２Ｒ３的晶体结构，可以明显的看出
与ＤＮＡ大沟结合的ＨＴＨ（ｈｅｌｉｘｔｕｒｎｈｅｌｉｘ）结构域。
２．３．３　亚细胞定位和磷酸化位点预测　用 ＳＯＦＴ
ＢＥＲＲＹ对ＦｄＭＹＢＰ１进行亚细胞定位预测，ＦｄＭＹＢＰ１
与Ｑ６Ｑ７８９有相同的亚细胞定位，在 ＮＣＢＩ中查找
Ｑ６Ｑ７８９，对应的基因是葡萄中的一个 Ｒ２Ｒ３类 ＭＹＢ
转录因子蛋白基因 ＶｖＭＹＢ５ａ，它定位于细胞核［８］。
推测ＦｄＭＹＢＰ１是定位到细胞核的，由于转录因子蛋
白在细胞质中合成后，必须从核孔运输到细胞核，与
靶基因的启动子或增强子区结合才能调控基因的表
达。因此，亚细胞定位预测进一步证明ＦｄＭＹＢＰ１是
一个ＭＹＢ类转录因子。转录因子蛋白一般都是不稳
定蛋白，其活性在很大程度上受可逆磷酸化的调控，
磷酸化常常起到“开关”的作用。用ＮｅｔＰｈｏｓ２０进行
预测，ＦｄＭＹＢＰ１蛋白有１０个 Ｓｅｒ磷酸化位点，５个
Ｔｈｒ磷酸化位点，有２个Ｔｙｒ磷酸化位点。
２．４　ＦｄＭＹＢＰ１基因编码蛋白质同源性分析
２．４．１　ＦｄＭＹＢＰ１蛋白质的相似比对　在 Ｇｅｎｅ
Ｂａｎｋ中对ＦｄＭＹＢＰ１蛋白质进行保守结构域搜索和
同源性分析，ＦｄＭＹＢＰ１氨基酸序列在Ｎ端存在保守
的Ｒ２Ｒ３结合结构域，且与其他ＭＹＢ转录调控因子
的同源区域都集中在这一区域，在 Ｃ端同源性极
低。与 ＦｄＭＹＢＰ１蛋白该结构域同源性最高的是
ＣＡＪ９０８３１（葡萄的ＭＹＢＰＡ１，７６％），而不是玉米的Ｐ
基因 ＺｍＰ，尽管获得 ＦｄＭＹＢＰ１基因特异探针的部
分简并引物是根据 ＺｍＰ基因与其他 Ｒ２Ｒ３ＭＹＢ相
关基因的 Ｒ２，Ｒ３保守区域设计的，这反应了 ＭＹＢ
转录调控因子的多态性。
２．４．２　ＦｄＭＹＢＰ１基因编码蛋白质的进化分析　对
已有的植物ＭＹＢ蛋白家族构建邻接树（图３）进行
系统分类，发现ＦｄＭＹＢＰ１和葡萄的ＶｖＭＹＢ５ａ、矮牵
牛ＰＨ４和拟南芥ＡｔＭＹＢ５聚为一支。ＡｔＭＹＢ５是在
拟南芥分离到的没有功能报道的 ＭＹＢ蛋白；
ＡＡＳ６８１９０（葡萄的ＶｖＭＹＢ５ａ）是与类黄酮代谢途径
相关的调控因子，在烟草中超量表达 ＶｖＭＹＢ５ａ，在
花瓣中能使 ＣＨＳ（ｃｈａｌｃｏｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，查尔酮合成
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酶）ＣＨＩ（ｃｈａｌｃｏｎｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ，查尔酮异构酶），Ｆ３Ｈ
（ｆｌａｖａｎｏｎｅ３ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，黄烷酮 ３羟化酶）和 ＤＦＲ
（ｄｉｈｙｄｒｏｆｌａｖｏｎｏｌ４Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ，二氢黄酮醇４还原酶）
表达量提高，另外还能调控木质素代谢途径的一些
结构基因的表达，并提高花色素，原花色素，木质素
的含量，作者认为 ＶｖＭＹＢ５ａ可能对整个苯丙氨酸
代谢途径都起调控作用。ＬａｕｒｅｎｔＤｅｌｕｃ［８］和 Ｊｏｃｈｅｎ
Ｂｏｇｓ［９］等研究发现，ＡＡＹ５１３７７（矮牵牛ＰＨ４）主要作
用在于调节液泡 ｐＨ，虽然在共转化 ＰＨ４和 ＰｈＡＮ１
株系中也诱导ＤＦＲ的表达，但由于株系的表型不正
常（生长滞后和矮化），因此不清楚ＤＦＲ的表达是由
ＰＨ４和ＰｈＡＮ１诱导的还是一种应激反应［１０］。
图３　ＦｄＭＹＢＰ１的系统分类图
３　讨论
３．１　ＦｄＭＹＢＰ１基因结构和功能的关系
对克隆的全长 ＦｄＭＹＢＰ１基因进行分析发现它
和大多数植物 ＭＹＢ蛋白质一样［１０］，仅含有 Ｒ２Ｒ３
区域。在拟南芥中 Ｒ２Ｒ３ＭＹＢ家族包含 １２５个基
因，在水稻中至少有８５个基因。通常Ｒ２Ｒ３ＭＹＢ家
族基因的序列同源性仅限于 Ｎ端的 ＭＹＢ结构域，
但有１９个亚群的 Ｒ２Ｒ３ＭＹＢ蛋白质在 Ｃ端也有一
些保守的基序存在，预示它们可能在功能上有一定
的相似性［１１１２］。ＦｄＭＹＢＰ１和其他的 ＭＹＢ相比较，
发现在其 Ｃ端存在２个保守的基序，这是 Ｊｉａｎｇ在
２００４年进行分类时没有提到的保守基序，这２个基
序最早是由 Ｌｉ对拟南芥的 ＡｔＭＹＢ５研究时发现
的［１３］，２００６年 ＦｒａｎｃｅｓｃａＱｕａｔｒｏｃｃｈｉｏ在 ＰＨ４和
ＶｖＭＹＢ５ａ中又发现这２个基序，并将含有这２个基
序的ＭＹＢ命名为第２０个亚群（ｇｒｏｕｐ２０）［１０］。
根据 Ｊｉａｎｇ２００４年对 ＭＹＢ的分类研究［１２］，１９
个有着同样Ｃ端保守基序的 ＭＹＢ亚群在功能上都
有一定的相似性；系统树分析也表明聚到一支的功
能相似。从上述可以看出，ＦｄＭＹＢＰ１，ＡｔＭＹＢ５，
ＶｖＭＹＢ５ａ在Ｃ端有着同样的保守基序，在系统发育
树上也聚到一起；然而，令人不解的是，除 Ｆｄ
ＭＹＢＰ１，ＶｖＭＹＢ５ａ在功能上有一定的相似性以外，
其他包含这２个保守基序的基因在功能上似乎并没
有相似性。比较 ＦｄＭＹＢＰ１，ＶｖＭＹＢ５ａ的 Ｃ端序列
也未发现其他的一致序列。基因结构决定功能的观
点已在很多基因中证明是正确的，那么如何解释在
这一类ＭＹＢ中的结构和功能的不一致性呢？
推测可能有２个方面的可能性。第一，这些基
因可能属于准源基因系，而不是正源基因系，这些相
似的基序只是基因加倍和变异进化所留下的痕迹，
已经不能代表其功能。第二，由于不清楚这４个序
列的三级结构，不知道２个保守基序在每个蛋白的
空间位点是否一致，这也可能导致其功能的不一致。
３．２　类黄酮代谢途径调控的复杂性
目前己分离和鉴定的３类黄酮合成的转录因子
可能单独起作用，也可能形成二聚体或多聚体而发
挥调控作用。
ＥｒｉｃｈＧｒｏｔｅｗｏｌｄ在对玉米的 Ｐ基因和 Ｃ１基因
进行研究时，发现Ｐ基因可以单独的激活类黄酮代
谢途径基因的表达，而Ｃ１基因则必须和ｂＨＬＨ（ｂａｓ
ｉｃＨｅｌｉｘｌｏｏｐｈｅｌｉｘ）蛋白质 Ｒ相互作用才能起调控
作用，他们运用突变和酵母双杂交技术确定了 Ｃ１
基因和ｂＨＬＨ蛋白质 Ｒ相互作用的区域，因为这一
结构域是从和蛋白质 Ｒ结合的 ＭＹＢ中最先确定
的，故把ＭＹＢ中和ｂＨＬＨ形成二聚体的结构域称为
ＩＲ结构域（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈｂＨＬＨ ｃｏｆａｃｔｏｒＲｄｏ
ｍａｉｎ）［１４］。在随后的研究中发现，ＭＹＢ蛋白和
ｂＨＬＨ蛋白质形成复合体共同调控类黄酮代谢途径
基因的表达是一种普遍的调控方式，单独起作用的
很少。例如，ＶｖＭＹＢＰＡ１，ＥＧＬ３（编码 ｂＨＬＨ蛋白
ＥＧＬ３）共转化烟草比 ＶｖＭＹＢＰＡ１单独转化烟草时
对下游基因的激活强度高出５０倍［９］。同样，在 Ｆｄ
ＭＹＢＰ１的 Ｒ３区中也发现了 ＩＲ结构域（［Ｄ／Ｅ］Ｌｘ２
［Ｒ／Ｋ］ｘ３Ｌｘ６Ｌｘ３Ｒ），这可能暗示 ＦｄＭＹＢＰ１也要和
ｂＨＬＨ类辅助蛋白形成异源二聚体才能发挥调控
作用。
本实验证实 ＦｄＭＹＢＰ１具有 ＭＹＢ同源基因的
典型特征和关键结构域，推测其在类黄酮代谢途径
中起作用。而对于它调控哪些支路途径以及哪些结
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构基因的表达还需要进一步的研究。
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ＰＨ４ｏｆｐｅｔｕｎｉａｉｓａｎＲ２Ｒ３ＭＹＢｐｒｏｔｅｉｎｔｈａｔａｃｔｉｖａｔｅｓｖａｃｕｏｌａｒ
ａｃｉｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｗｉｔｈｂａｓｉｃｈｅｌｉｘｌｏｏｐｈｅｌｉｘｔｒａｎ
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓｏｆｔｈｅａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌ，
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ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆａＭＹＢｇｅｎｅｆｒｏｍ
Ｆａｇｏｐｙｒｕｍｄｉｂｏｔｒｙｓ
ＭＡＪｉｎｇ１，ＺＨＵＱｉｎｌｏｎｇ１，２，ＧＵＯＴｉｅｙｉｎｇ１，３，ＬＩＵＧｕａｎｇｄｅ１，ＳＵＩＳｈｕｎｚｈａｏ１，ＬＩＭｉｎｇｙａｎｇ１
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＬａｎｄｓｃａｐｅ，ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＦｌｏｗｅｒＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
ＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４００７１６，Ｃｈｉｎａ；
２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｌａｎｔＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＧｅｎｏｍｉｃｓａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｏｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，
ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４２，Ｃｈｉｎａ；
３．ＤｅｈｏｎｇＴｒｏｐｉｃａｌＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＹｕｎｎａｎ，Ｒｕｉｌｉ６７８６００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　ＵｓｉｎｇＲＡＣＥｗｉｔｈａＦａｇｏｐｙｒｕｍｄｉｂｏｔｒｙｓｃａｌｕｓｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙ，ｏｎｅｃｌｏｎｅ，ｎａｍｅｄＦｄＭＹＢＰ１，ｅｎｃｏｄｉｎｇａｐｕｔａｔｉｖｅ
Ｒ２Ｒ３ＭＹＢｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．ＦｄＭＹＢＰ１ａｐｐｅａｒｅｄｔｏｂｅａｆｕｌｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｏｆ１１５９ｂｐｅｎｃｏｄｉｎｇａｐｒｏｔｅｉｎｏｆ２６５ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．
ＴｈｒｏｕｇｈｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｐｒｏｐｅｒｔｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆＦｄＭＹＢＰ１ｗｉｔｈｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｍｅｔｈｏｄｓ，ｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＦｄ
ＭＹＢＰ１ｓｈｏｗｅｄｇｒｅａｔｈｏｍｏｌｏｇｙｔｏｏｔｈｅｒＭＹＢＰｗｉｔｈｔｈｅＲ２Ｒ３ｒｅｐｅａｔｒｅｇｉｏｎｉｎｔｈｅＮｔｅｒｍｉｎｕｓ．ＳｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＦｄ
ＭＹＢＰ１ｂｅｌｏｎｇｓｔｏａｓｉｎｇｌｅｃｏｐｙｇｅｎｅｉｎＦ．ｄｉｂｏｔｒｙｓｇｅｎｏｍｅｓ．ＴｈｅＦｄＭＹＢＰ１ｇｅｎｅｈａｓｔｈｅｓａｍｅｃｌａｓｓｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｓｗｉｔｈｏｔｈｅｒＭＹＢＰ
ａｎｄｐｒｏｂａｂｌｙｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｐａｔｈｗａｙｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　Ｆａｇｏｐｙｒｕｍｄｉｂｏｔｒｙｓ；ＭＹＢｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄ
［责任编辑　吕冬梅］
·９５１２·
第３４卷第１７期
２００９年９月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　１７
　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００９