全 文 ：ＨＰＬＣＣＡＤ联用于三七药材皂苷类成分
提取工艺优化
白长财１，２，柴兴云１，高晓燕１，李　萍２，屠鹏飞１，２
（１．北京大学 药学院 天然药物及仿生药物国家重点实验室，北京 １００１９１；
２．中国药科大学 现代中药重点实验室 生药学教研室，江苏 南京 ２１００３９）
［摘要］　目的：优选三七药材中皂苷类成分的提取工艺。方法：以三七皂苷 Ｒ１、人参皂苷 Ｒｇ１，Ｒｅ，Ｒｂ１，Ｒｇ２，Ｒｈ１和 Ｒｄ的
峰面积为指标，采用ＨＰＬＣＣＡＤ检测，对药材提取过程中粉碎粒度、提取溶剂、提取方法以及浸泡时间４个影响因素进行单因
素考察，并对不同的浓度的甲醇、提取时间、提取次数以及提取溶剂用量进行Ｌ９（３
４）正交试验设计分析。结果：三七药材的最
优化提取工艺为，药材粉碎后过８０目筛，室温浸泡０５ｈ后，甲醇回流提取１次，提取时间为１５ｈ，溶剂用量为每克２０ｍＬ。
结论：优选的提取工艺操作简便、三七总皂苷提取率高，为三七皂苷提取工艺的进一步优化提供基础数据。
［关键词］　三七；皂苷类成分；提取工艺优化；ＨＰＬＣＣＡＤ
［收稿日期］　２００８１０１０
［基金项目］　国家杰出青年科学基金（３０５２５０４３）
［通信作者］　屠鹏飞，Ｔｅｌ／Ｆａｘ：（０１０）８２８０２７５０，Ｅｍａｉｌ：ｐｅｎｇｆｅｉｔｕ＠
ｖｉｐ．１６３．ｃｏｍ
　　三七是传统的名贵药材，为五加科植物三七
Ｐａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ（Ｂｕｒｋ）Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ的干燥根和
根茎。其主要活性成分为达玛烷型皂苷，目前已经
从三七中分离得到６０多种皂苷类成分［１］。
对三七皂苷成分的提取，已有较多报道［２８］，其
主要是对三七总皂苷的提取工艺进行考察，但采用
的提取工艺并不统一，所以，选择合适的评价指标和
检测条件，对三七皂苷的提取工艺进行系统考察和
优化，对三七类药材以及相关产品的进一步研究，具
有重要应用价值。
电雾式检测器（ｃｈａｒｇｅｄａｅｒｏｓｏｌｄｅｔｅｃｔｏｒ，ＣＡＤ），
又称荷电气溶胶检测器，其检测信号不依赖于被检
测物的化学结构，对不同结构的化合物有统一的响
应，被誉为新型通用型检测器，对无紫外吸收化合物
的检测，和ＵＶ和ＥＬＳＤ相比，更加灵敏、准确。
为了建立优化的三七药材提取工艺，本研究在
已建立的色谱条件的基础上，利用 ＨＰＬＣＣＡＤ，以７
种三七皂苷 Ｒ１（１），人参皂苷 Ｒｇ１（２），Ｒｅ（３）、Ｒｂ１
（４），Ｒｇ２（５），Ｒｈ１（６）和 Ｒｄ（７）的峰面积为指标，对
粉碎粒度、提取溶剂、提取方法以及浸泡时间４个影
响因素进行单因素考察，在此基础上，进而对不同的
浓度的提取溶剂、提取时间、提取次数以及提取溶剂
用量进行Ｌ９（３
４）正交试验设计分析，根据其结果分
析，选择最佳提取方法。
１　试剂与材料
电子分析天平（ＢＰ２１１Ｄ，ＡＬＣ２１０４，瑞士 Ｓａｒ
ｔｏｒｉｕｓ公司）；超声波清洗器（Ｄ７８２２４，德国 ＥＬＭＡ
公司）；旋转蒸发仪（Ｎ１０００旋转蒸发仪，ＳＢ１０００
数字水浴锅以及 ＣＡ１１１１循环冷凝水系统）为日本
ＥＹＥＬＡ公司产品；Ａｇｉｌｅｎｔ高效液相色谱仪 ＨＰ１１００
系列：四元泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱，二
极管阵列检测器，Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ化学工作站；ＣＡＤ检
测器（ＣｏｒｏｎａＴＭ，ＥＳＡＩｎｃ．，ＵＳＡ）；变压吸附空气制氮
机（北京鑫南龙科技有限公司）；全无油润滑空气压
缩机ＺＷ０３／７（中国安庆无油压缩机厂）。
三七药材购自云南文山，所有药材经北京大学
药学院屠鹏飞教授鉴定为三七 Ｐｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ的干
燥根和根茎，凭证标本保存于北京大学中医药现代
研究中心药材标本库。分析纯乙醇、甲醇均为北京
化工厂产品，色谱乙腈为默克公司产品（Ｍｅｒｋ，
Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ），去离子水经ＭｉｌｉＱ系统纯化。
对照品三七皂苷 Ｒ１（批号１１０７４５２００４１５），人参皂
苷 Ｒｇ１（批号 １１０７０３２００４２４），Ｒｅ（批号 １１０７５４
２００３２０）和Ｒｂ１（批号１１０７０４２００３１８）购自中国药品
与生物制品检定所；人参皂苷 Ｒｄ为文山三七研究
所崔秀明教授惠赠；人参皂苷Ｒｇ２和Ｒｈ１购自北京中
西公司，纯度经ＨＰＬＣ检测，均大于９８％。
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１．１　数据处理软件
正交试验小助手（ＯｒｔｈｏｇｏｎａｌｉｔｙＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓＡｓ
ｓｉｓｔａｎｔ，Ｖｅｒｓｉｏｎ３１）。
２　方法和结果
２．１　色谱条件
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相仪与 ＣＡＤ（ＣｏｒｏｎａＴＭ，ＥＳＡ
Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）串联；色谱柱 ＺｏｒｂａｘＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢｃｏｌｕｍｎ
（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍＩＤ）及 ＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８预柱
（４ｍｍ×２０ｍｍ，５μｍ）。流动相水（Ａ）和乙腈
（Ｂ）梯度洗脱 ０～４０ｍｉｎ，１９％ Ｂ；４０～４５ｍｉｎ，
１９％～３１％ Ｂ；４５～７５ｍｉｎ，３１％ Ｂ；７５～８０ｍｉｎ，
３１％～４８％ Ｂ，柱温３０℃，流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，进
样量１０μＬ。检测波长２０３ｎｍ；ＣＡＤ氮气压力、响
应范围、信号滤过和偏移量依次设为 ２４１４×１０５
Ｐａ，１００ｐＡ、无滤过和零偏移（图１）。
２．２　样品制备
取三七药材粉末（过８０目筛）１０ｇ，置具塞三
角瓶中，精密加入甲醇２０ｍＬ，称定质量，回流提取
１５ｈ，用甲醇补足减失质量，静置，用０４５μｍ微孔
滤膜滤过，取续滤液，即得（以下各项提取工艺的考
察，如无特殊说明，均按此法制备样品）。
２．３　精密度与重复性
按照已经建立的 ＨＰＬＣ分析条件，对仪器的精
密度和方法的重现性进行考察，结果表明，ＲＳＤ（％）
　　
Ａ７种三七皂苷混标ＨＰＬＣＣＡＤ图谱；Ｂ三七药材ＨＰＬＣＣＡＤ
图谱；Ｃ三七药材ＨＰＬＣＵＶ图谱；化合物１～７三七皂苷 Ｒ１，
人参皂苷Ｒｇ１，Ｒｅ，Ｒｂ１，Ｒｇ２，Ｒｈ１，Ｒｄ。
图１　三七液相色谱图
均小于１，仪器精密度符合要求，并且方法的重复性
较好。
２．４　提取工艺单因素优化
２．４．１　粉碎粒度　将干燥的三七药材分段切小后，
粉碎，然后分别过４号筛、５号筛和６号筛，所得药
材粉依次编号为４号粉、５号粉和６号粉。样品处
理后，经 ＨＰＬＣＣＡＤ分析，然后比较所考察的三七
皂苷峰面积的总和（表１）。
表１　三七药材不同粉碎粒径与７种皂苷类成分的峰面积比较
编号
粒径
／μｍ
筛目
峰面积
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ 总和
４ ２５０±９９ ６５ １１２１８ ４１３７５ ７７２９ ３９３３５ ２８０６ ２１８０ １２８１４ １０４７０７
５ １８０±７６ ８０ １１９６９ ４２２１２ ８２５０ ４０１１７ ２８７２ ２２８３ １３７６４ １０７７８３
６ １５０±６６ １００ １１４９４ ３８５１６ ８６５１ ３８９６２ ２４５８ １９１５ １０５０７ １０２０９６
　　注：化合物１～７三七皂苷Ｒ１，人参皂苷Ｒｇ１，Ｒｅ，Ｒｂ１，Ｒｇ２，Ｒｈ１，Ｒｄ。
　　由上表可知，三七药材的粉碎粒度，对三七皂苷
类成分的提取影响不大，考虑到过滤等操作的方便，
将药材粉碎后过８０目筛。
２．４．２　提取溶剂　平行取样，分别精密加入水、甲
醇、乙醇２０ｍＬ，回流提取１５ｈ后，过滤。制备好的
样品经ＨＰＬＣＣＡＤ检测分析，计算７种三七皂苷的
峰面积（表２）。
从表２可知，３种不同提取溶剂对三七皂苷类
成分的提取率依次为 ＭｅＯＨ＞ＥｔＯＨ＞水，因此选取
甲醇作为提取溶剂。
２．４．３　提取方法　平行取样，分别精密加入２０ｍＬ
甲醇，分别用超声、回流和索氏 ３种不同的提取方
法，提取１５ｈ后，过滤。经ＨＰＬＣＣＡＤ分析并计算
各三七皂苷的峰面积（表３）。
由表３可知，回流提取效率较高，操作简便，故
选用回流对三七药材进行提取。
２．４．４　浸泡时间　考察了在室温下浸泡８ｈ，４ｈ以
及０５ｈ与不浸泡处理对提取效率的影响（表４）。
由上可知，提取前进行浸泡处理在一定程度上能
提高三七药材的提取率，但是浸泡时间的增加，对三
七药材的提取影响不明显。
通过对上述影响因素的考察，结果表明粉碎粒
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表２　不同提取溶剂的峰面积比较
提取溶剂
峰面积
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ 总和
水　 ２６９５０ ６３１２４ ５００２９ １８８７ ８４４ １０３３９ １１１９ １５４２９０
甲醇 ２６５１０ ８６４３８ ８８９３８ ５１６３ ３５９７ ２３２００ ２５９８ ２３６４４３
乙醇 ２６１９５ ８４８５９ ８１２０２ ４６２５ ２２２６ ２１２５２ ２２５６ ２２２６１４
表３　不同提取方法的峰面积比较
提取方法
峰面积
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ 总和
回流 ２７８５２ １０４４７８ １０９８５１ ４０９５ ３７３８ ２３２８０ ２５２３ ２７５８１７
索氏 ２８８８１ １０６０３８ １０５８９７ ４０５０ ２９２５ ２２８３９ ２４７５ ２７３１０５
超声 ２４１２３ ９１７５５ ８８１４９ ３５２８ １８６３ １８５４０ ２２１１ ２３０１６９
表４　不同浸泡时间与提取效率的比较
浸泡时间
峰面积
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ 总和
８ｈ ２１３５６ ６８５８８ １３７７５ ６３３８０ ４８１５ ３４５８ ２５２９５ ２００６６７
４ｈ ２０７７７ ６７６１７ １２８５１ ６１４４９ ３７９５ ３６０６ ２３４７２ １９３５６６
０５ｈ ２０３５４ ６７７２９ １２２０６ ６４９７２ ３６５９ ３２９９ ２４２１０ １９６４３０
０ｈ １８６９６ ６５６２６ １２８８１ ５８８９２ ４６７６ ３６３３ ２１３５６ １８５７６０
度对提取效率影响不大、甲醇为最适合的提取溶剂、
回流提取效率高，而提取前进行０５ｈ的浸泡，可以
提高提取效率。为了进一步优化提取条件，本研究对
甲醇的浓度、提取时间、提取次数及提取溶剂用量４
个因素进行了Ｌ９（３
４）正交试验。
２．５　提取工艺正交试验设计
Ｌ９（３
４）正交试验设计见表５，试验方案见表６，试
验结果为７种皂苷三七皂苷 Ｒ１，人参皂苷 Ｒｇ１，Ｒｅ，
Ｒｂ１，Ｒｇ２，Ｒｈ１，Ｒｄ的积分峰面积的加和。
表５　提取条件优化设计
水平 Ａ Ｂ Ｃ Ｄ
１ ６０ １ １ １２
２ ８０ １５ ２ １６
３ １００ ２ ３ ２０
　　注：Ａ．提取溶剂：不同浓度的甲醇水（％，φ）；Ｂ．提取时间（ｈ）；Ｃ．
提取次数（次）；Ｄ．溶剂用量（ｍＬ）。
表６　正交试验设计
Ｎｏ 总和ａ Ｎｏ 总和ａ
１ ５８１９８２ ６ ５８０７４０
２ ５２０４９４ ７ ５８８２６４
３ ５９２８６６ ８ ５４３８９４
４ ６３０８２２ ９ ６０３８７６
５ ４２５９７０
　　注：ａ．峰面积总和；ｂ．ＫＡｉ＝（Σ峰面积总和 Ａｉ）／３；ｃ．ＲＡｉ＝ｍａｘ
［ｋＡｉ］－ｍｉｎ［ｋＡｉ］。
通过软件直观分析和极差比较可知，在所设计的
４个提取因素中，对提取效率的影响依次为：Ｂ＞Ｄ＞
Ｃ＞Ａ。结合Ｒ和Ｋ的分析比较，得优化提取工艺为
Ａ３Ｂ１Ｃ１Ｂ３，即甲醇回流提取１次，每次提取１５ｈ，溶
剂用量为每克２０ｍＬ。
３　讨论
本研究利用 ＨＰＬＣＣＡＤ法，对三七皂苷类成分
提取进行了粉碎粒度、提取溶剂、提取方法以及浸泡
时间４个影响因素的单因素分析，最终得出三七药材
的最佳提取工艺：药材粉碎后过８０目筛，室温浸泡
０５ｈ，甲醇回流提取１次，提取时间为１５ｈ，每克药
材溶剂用量为２０ｍＬ。该工艺操作简便，对三七药材
皂苷类成分提取率高，为三七药材以及相关制剂的进
一步研究提供了参考。
在ＣＡＤ检测器的使用过程中发现，长期使用含
水比例较高的流动相（水有机相＞８０％）容易导致因
检测器内水分挥发不充分而造成基线噪音的增大，可
能会对检测器造成损伤。为此，可在检测器中增设升
温装置，加快单位时间内流动相的挥发；另外，使用小
流速或在色谱柱和检测器之间串联一个可调节的定
量分流器，可减少进入检测器的流动相的总量，进而
保护检测器。
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［致谢］　云南文山三七研究所崔秀明教授提供人参皂
苷Ｒｄ并代购三七药材。
［参考文献］
［１］　ＷａｎｇＣＺ，ＭｃＥｎｔｅｅＥ，ＷｉｃｋｓＳ，ｅｔａｌ．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄａｎａｌｙｔｉ
ｃａｌｓｔｕｄｉｅｓｏｆＰａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ［Ｊ］．ＪＮａｔＭｅｄ，２００６，６０：９７．
［２］　罗晓健，周书余．均匀设计优化三七总皂苷提取工艺［Ｊ］．沈阳药
科大学学报，２００２，１９（２）：１２２．
［３］　魏凤玲，朱春波．三七总皂苷提取工艺优选［Ｊ］．中国中药杂志，
２０００，２５（１２）：７２２．
［４］　瞿林海，郑　明，楼宜嘉．三七总皂苷提取工艺研究［Ｊ］．中药材，
２００６，２９（６）：５９３．
［５］　秦　枫，刘　靖，陈玉勇，等．三七总皂苷含量测定方法及超声提
取工艺研究［Ｊ］．安徽农业科学，２００８，３６（８）：３０６２．
［６］　周　琳，李元波，曾　英．超声酶法提取三七总皂苷的研究［Ｊ］．
中成药，２００６，２８（５）：６４２．
［７］　李　鹏，万建波，李绍平，等．三七皂苷类成分的加速溶剂提取法
研究［Ｊ］．中国天然药物，２００４，２（３）：１５７．
［８］　马　妮，高明菊，崔秀明，等．三七皂苷成分的超声波提取研究
［Ｊ］．时珍国医国药，２００５，１６（９）：８５４．
ＨＰＬＣＣＡＤｉｎｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｎｇｏｆｓａｐｏｎｉｎｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｒｏｍ
ＲａｄｉｘｅｔＲｈｉｚｏｍａＮｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ
ＢＡＩＣｈａｎｇｃａｉ１，２，ＣＨＡＩＸｉｎｇｙｕｎ１，ＧＡＯＸｉａｏｙａｎ１，ＬＩＰｉｎｇ２，ＴＵＰｅｎｇｆｅｉ１，２
（１．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮａｔｕｒａｌａｎｄＢｉｏｍｉｍｅｔｉｃＤｒｕｇｓ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，
ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＨｅａｌｔｈＳｃｉｅｎｃｅＣｅｎｔｅｒ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９１，Ｃｈｉｎａ；
２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｏｄｅｒｎＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅｓ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎａｎｄＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｏｇｎｏｓｙ，
ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｏｐｔｉｍｉｚｅｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｓａｐｏｎｉｎｓｆｒｏｍＲａｄｉｘｅｔＲｈｉｚｏｍａＮｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ（Ｓａｎｑｉ）．
Ｍｅｔｈｏｄ：ＨＰＬＣｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈｃｈａｒｇｅｄａｅｒｏｓｏｌｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＣＡＤ）ｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｓａｐｏｎｉｎｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｐｅａｋａｒｅａｓｏｆｔｈｅｍａｉｎｓａｐｏｎｉｎｓｎｏ
ｔｏｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲ１，ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓＲｇ１，Ｒｅ，Ｒｂ１，Ｒｇ２，Ｒｈ１ａｎｄＲｄｉｎＳａｎｑｉｗｅｒｅｍｏｎｉｔｏｒｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｅｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ．Ｏｎｅｆａｃｔｏｒ
ａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｆａｃｔｏｒｓｏｆｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅ，ｓｏｌｖｅｎｔ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄａｎｄｓｏａｋｉｎｇｔｉｍｅ．Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｄｅ
ｓｉｇｎＬ９（３
４）ｗｉｔｈｄｉｆｅｒｅｎｔｌｅｖｅｌｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｓｏｌｖｅｎｔｓ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅｓａｎｄｖｏｌｕｍｅｏｆｔｈｅｓｏｌｖｅｎｔ，ｗａｓｉｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ
ｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄｅｘｔｒａｃｔｃｏｎｄｉｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｅｘｔｒａｃｔｔｅｃｈｎｉｑｕｅｗａｓｔｈａｔｔｈｅｄｒｉｅｄａｎｄｗｅｌｐｕｌｖｅｒｉｚｅｄ（ｐａｓｓｅｄ
ｔｈｒｏｕｇｈａ８０ｍｅｓｈ（１８０±７６）μｍｓａｍｐｌｅ１０ｇｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｉｎ２０ｍＬｍｅｔｈａｎｏｌｂｙｒｅｆｌｕｘ（１５ｈ）ａｆｔｅｒｓｏａｋｅｄａｔｒｏｏｍｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｆｏｒ
０５ｈ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄｔｅｃｈｎｉｑｕｅｉｓｓｉｍｐｌｅａｎｄｈｉｇｈｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．ＩｔｐｒｏｖｉｄｅｂａｓｉｃｄａｔａｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙｏｎＳａｎｑｉ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　ＲａｄｉｘｅｔＲｈｉｚｏｍａＮｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ；ｓａｐｏｎｉｎｓ；ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ＨＰＬＣＣＡＤ
［责任编辑　周　驰］
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第３４卷第６期
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