全 文 ：栀子金花丸中栀子苷、黄芩苷、番泻苷 Ａ和番泻苷 Ｂ的
含量测定方法研究
高晓燕，卢建秋
（北京中医药大学 中医药科技发展中心，北京 １０００２９）
［摘要］　目的：建立栀子金花丸中同时测定栀子苷、黄芩苷、番泻苷 Ａ和番泻苷 Ｂ含量的方法。方法：色谱柱为 Ａｇｉｌｅｎｔ
ＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相乙腈００５％磷酸水梯度洗脱，流速１ｍＬ·ｍｉｎ
－１，检测波长２５４ｎｍ。结果：栀
子苷、黄芩苷、番泻苷Ａ和番泻苷Ｂ的分离度良好（Ｒ＞１５），４条标准曲线在检测范围内均呈良好线性（ｒ＞０９９９９），其检测
限均低于２８０ｎｇ、定量限均低于６９０ｎｇ，高、中、低３个水平日内和日间精密度的 ＲＳＤ均小于３１％，加样回收率分别为
９５２％，９７４％，９２５％，９３６％。应用所建立的方法测定了１０批购自不同地区的栀子金花丸中以上４个成分的含量，其结果
差别较大。结论：该方法简便、快速、灵敏、准确，在同一色谱检测条件下实现多指标成分同时定量，为该药的全面质量评价提
供参考。
［关键词］　ＨＰＬＣ；栀子金花丸；栀子苷；黄芩苷；番泻苷Ａ；番泻苷Ｂ
［收稿日期］　２００９０３１２
［通信作者］　高晓燕，Ｔｅｌ：１３４３９７２７６９９，Ｅｍａｉｌ：ｌａｏｄａｎ１１１２＠ｓｉｎａ．
ｃｏｍ
　　栀子金花丸处方由栀子、黄芩、大黄、黄连、黄
柏、金银花、知母、天花粉８味中药组成，其中栀子、
黄芩、大黄在处方中含量较高。栀子金花丸具有清
热泻火、凉血解毒的功效，用于肺胃热盛，口舌生疮，
牙龈肿痛，目赤眩晕，咽喉肿痛等症，２００５年版《中
国药典》在其含量测定项下规定了应用 ＨＰＬＣ测定
其中栀子苷含量［１］，对黄芩、大黄等其他药味的质
量没有进行控制。
应用ＨＰＬＣ测定大黄中的番泻苷Ａ和番泻苷Ｂ
的研究已有报道［２３］，但迄今为止，复方中测定这２
个指标成分含量的文献很少见，本实验建立的多指
标含量测定方法除了测定栀子苷的含量外，还能够
同时测定黄芩中的黄芩苷、大黄中的主要泻下成分
番泻苷Ａ和番泻苷Ｂ的含量，为全面评价栀子金花
丸质量提供了参考方法。
１　材料
１１　仪器
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱仪（四元泵、真空脱
气泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、ＨＰ
数据处理工作站）；超声仪（ＥｉｍａＤ７８２２４，德国 ＥＬ
ＭＡ公司）。
１２　药品与试剂
栀子苷（批号 １１０７４９２００３０９）、黄芩苷（批号
１１０７１５２００２１２）均购自中国药品生物制品检定所，
番泻苷Ａ（批号１１２６０７０１５２０４２２６）、番泻苷Ｂ（批号
１１６５７５６２０９０５０９５）均购自美国 Ｆｌｕｋａ公司，纯度均
大于９８％。色谱纯乙腈购自德国 Ｍｅｒｃｋ公司，分析
纯磷酸、甲醇均为北京化学试剂厂产品，水为乐百氏
纯净水，经重蒸后过滤使用。
１３　栀子金花丸样品
本研究所用的栀子金花丸从全国不同的地区收
集，共１０批（见表１）。
２　方法
２１　色谱条件
ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ），预柱为 ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＥｘｔｅｎｄＣ１８（４６
ｍｍ×１０ｍｍ，５μｍ）。进样量 １０μＬ，检测波长 ２８０
ｎｍ；流速 １０ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温 ４０℃；流动相
００５％的磷酸水（Ａ）乙腈（Ｂ），梯度洗脱：０～５
ｍｉｎ，２～１０％ Ｂ；５～１４ ｍｉｎ，１０～２５％ Ｂ；
１４～２６ｍｉｎ，２５～４０％ Ｂ；２６～４０ｍｉｎ，４０～６０％ Ｂ；
４０～６０ｍｉｎ，８０％ Ｂ。
２２　对照品溶液的配制
分别称取栀子苷３１ｍｇ、黄芩苷１２ｍｇ、番泻
苷Ａ２８ｍｇ、番泻苷 Ｂ２５ｍｇ，分别置于１０ｍＬ量
瓶中，用７０％的甲醇定容至刻度，储存于４℃的冰
箱中，作为对照品贮备液，备用。
２３　供试品溶液的制备
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表１　栀子金花丸样品信息及其中栀子苷、黄芩苷、番泻苷Ａ、番泻苷Ｂ的质量分数
购买地
栀子苷
／％
黄芩苷
／％
番泻苷Ａ
／％
番泻苷Ｂ
／％
北京　　　 ０３６ ５１２ ００２６ ００３６
河北承德　 ０４１ ６２３ ００２３ ００１８
河北石家庄 ０２９ ４８４ ００１５ ００１３
河北保定　 ０５１ ４２６ ００１２ ００１４
山西太原　 ０３８ ５０３ ００３６ ００３２２
河南郑州　 ０２９ ６２１ ００６２ ００６６
河南驻马店 ０４１ ７１２ － －
河北沧州　 ０３２ ４０６ ００２１ ００１９
河北邯郸　 ０３１ ４２８ ００５９ ００５８
山东济南　 ０４９ ４３２ ００６１ ００９５
　　取本品适量，研细，取约１ｇ，精密称定，置具塞
锥形瓶中，精密加入７０％甲醇５０ｍＬ，密塞，称重，超
声处理（功率３００Ｗ，频率５０ｋＨｚ）３０ｍｉｎ，放冷，再
称定质量，用５０％甲醇补足失重，摇匀，滤过，精密
量取续滤液１０ｍＬ，置２５ｍＬ量瓶中，加５０％甲醇至
刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
３　结果
３１　色谱条件的优化
为保证被定量化合物有良好的分离度和适当的
保留时间，本研究对流动相中乙腈与水的比例及磷酸
的质量分数、色谱柱的型号分别进行了考察，选用
００３％，００５％，０１％的磷酸溶液为流动相，比较不
同浓度的磷酸对被分离化合物的分离度和峰形的影
响，发现磷酸００５％时，栀子苷、黄芩苷、番泻苷Ａ及
番泻苷Ｂ的峰形均较好，且与其他的相邻峰能够完全
分离，因此确定磷酸的质量分数为００５％；栀子金花
丸中化学成分复杂，为保证待测成分在具有良好的分
离度，本研究考察了３种不同型号的色谱柱，Ａｇｉｌｅｎｔ
ＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８
（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）和 ＤｉａｍｏｎｓｉｌＴＭＣ１８（４６
ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），发现应用ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８
时待测成分的分离度最好，因此本研究选择的色谱柱
为ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＳＢＣ１８。
应用所建立的方法，供试品溶液中的栀子苷、黄
芩苷、番泻苷Ａ及番泻苷 Ｂ得到了良好的分离，见
图１，通过比较保留时间、紫外光谱和分别加入各种
对照品的方法鉴定以上４个待测化合物的色谱峰。
３２　提取条件的选择
为了使４个待测组份均提取的比较完全，本研
究对提取溶剂、提取方法和提取时间分别进行了考
　　
Ａ混合对照品；Ｂ栀子金花丸样品；１栀子苷；
２黄芩苷；３番泻苷Ａ；４番泻苷Ｂ。
图１　典型ＨＰＬＣ图
察，通过比较２个待测成分的色谱峰面积，确定最佳
的提取条件为７０％的甲醇溶液超声提取１ｈ。
３３　工作曲线的建立
将以上４个化合物的贮备液分别稀释至６个不
同质量浓度，得系列对照品溶液，每个浓度进样 ２
次，取其峰面积平均值为纵坐标，质量浓度为横坐
标，进行回归分析，见表２。
３４　检测限和定量限
检测限是指从背景干扰中区分出被测定物的最
低浓度，即信噪比为３左右时的样品浓度，４个被测
物的检测限与定量限见表２。
３５　精密度试验
精密吸取批号（５０２４９９）栀子金花丸供试品溶
液１０μＬ，连续进样 ５次，求得样品中样品中栀子
苷、黄芩苷、番泻苷 Ａ和番泻苷 Ｂ峰面积的 ＲＳＤ分
别为０８９％，０５８％，０９７％和０９８％（ｎ＝５）。
３６　重复性试验
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表２　栀子苷、黄芩苷、番泻苷Ａ及番泻苷Ｂ的
回归曲线、检测限及定量限
化合物 线性方程
检测范围
／ｇ·Ｌ－１
ｒ
检测限
／ｎｇ
定量限
／ｎｇ
栀子苷 Ｙ＝２６８Ｘ－１１６ １１２～８４００９９９９ ２５６ ７１２
黄芩苷 Ｙ＝２２５６７Ｘ＋２２２ ２２５～３１６００９９９９ １２３ ４６５
番泻苷Ａ Ｙ＝６１１Ｘ－０６４ ４０～２１６０９９９９ ２４８ ６９２
番泻苷Ｂ Ｙ＝７０４Ｘ－０７０ ４２～２９６０９９９９ ２４０ ６４０
按上述色谱条件对同一批样品（５０２４９９）６份，
进行测定，栀子苷、黄芩苷、番泻苷Ａ和番泻苷 Ｂ含
量的ＲＳＤ分别为２３％，１９％，２７％和２１％。
３７　稳定性试验
取同一批样品（５０２４９９）供试品溶液，分别于２，
４，６，９，１２ｈ进行测定，栀子苷、黄芩苷、番泻苷 Ａ和
番泻苷 Ｂ含量的 ＲＳＤ分别小于 ２０％，１２％，２２
和３０％，表明样品在室温下放置１２ｈ内稳定。
３８　回收率试验
精密称取栀子金花丸（５０２４９９）３６份，每份０５
ｇ，分别加入高、中、低３个浓度的栀子苷、黄芩苷、番
泻苷Ａ和番泻苷 Ｂ对照品混合液，每个浓度３份，
按照前面所描述的样品溶液制备及分析方法进行测
定，见表３。
３９　样品的测定
本文共测定了１０批栀子金花丸样品，见表１。
４　讨论
本实验对提取溶剂、提取方法、提取时间分别进
行了系统考察。提取溶剂分别选取甲醇、７０％甲醇、
７０％乙醇、９５％乙醇为溶剂，对同一样品超声提取
３０ｍｉｎ，比较化合物的峰面积，发现采用７０％甲醇做
提取溶剂时各色谱峰的峰面积比其他３种溶剂均
大，因此选择７０％甲醇作为提取溶剂；本实验比较
了超声提取、加热回流和冷浸过夜３种提取方法，发
现加热回流提取的色谱峰面积与超声提取的色谱峰
面积差别不大，冷浸提取的色谱峰面积较小，考虑到
超声提取简便易操作，故选择超声提取作为样品溶
液的制备方法；本实验考察了超声３０，６０，９０ｍｉｎ３
个时间点，发现超声３０ｍｉｎ可以把待测组分提取完
全，故超声时间为３０ｍｉｎ。
表４　被测化合物的回收率
化合物
样品中量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
ＲＳＤ
／％
栀子苷 １８０ ０９２ ２６９ ９６７ ３２
１８７ ３５８ ９５３ ３１
３００ ４６４ ９４８ ３２
黄芩苷 ２５６１ １２６２ ３８０５ ９８６ １５
３００２ ５４９１ ９７６ １６
４２０６ ６６７４ ９７８ １５
番泻苷Ａ ０１３ ００９ ０２２ ９５２ ３０
０１４ ０２６ ９６１ ３８
０２０ ０３２ ９３５ ３３
番泻苷Ｂ ０１８ ００９ ０２６ ９２６ ２２
０２０ ０３７ ９３２ ３４
０３０ ０４７ ９５３ ３７
综上，样品溶液的制备条件为７０％甲醇超声提取３０
ｍｉｎ。
本实验利用ＤＡＤ检测器考察了不同波长下栀
子苷、黄芩苷、番泻苷 Ａ和番泻苷 Ｂ的峰形及峰面
积，发现检测波长为 ２８０ｎｍ时，黄芩苷、番泻苷 Ａ
和番泻苷 Ｂ的紫外吸收较强；栀子苷的最大吸收虽
然不在２８０ｎｍ，但是由于其在制剂中含量比较高，
采用２８０ｎｍ作为测定波长能够达到方法学考察的
要求，同时，对３个化合物在同一波长下测定使得方
法更加简单，增加了普适性，有利于推广普及。因
此，选择２８０ｎｍ作为含量测定波长。
本实验用同一样品处理方法，在同一色谱检测
条件下实现了栀子苷、黄芩苷、番泻苷Ａ和番泻苷Ｂ
多指标成分定量，从而控制了复方中主要药味栀子、
黄芩、大黄中的活性成分含量，为栀子金花丸的全面
质量评价和控制提供新的方法。
［参考文献］
［１］　中国药典一部 ［Ｓ］２００５：５１７
［２］　ＬｉｎＣＣ，ＷｕＣＩ，ＬｉｎＴＣ，ｅｔａｌＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ１９ｒｈｕｂａｒｂｃｏｎ
ｓｔｉｔｕｅｎｔｓｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ
ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］ＪＳｅｐＳｃｉ，２００６，２９：２５８４
［３］　ＫｏｙａｍａＪ，ＭｏｒｉｔａＩ，ＫｏｂａｙａｓｈｉＮＳｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ
ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓｉｎｒｈｕｂａｒｂｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇ
ｒａｐｈｙａｎｄｃａｐｉｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ［Ｊ］ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２００７，
１１４５：１８３
［责任编辑　周驰］
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