全 文 ：杜仲醇提物对小鼠急性肝损伤的保护作用
周程艳１，余海平２，王树华１，刘许歌１，上官丽娟１
（１．华北煤炭医学院 药学系，河北 唐山 ０６３０００；
２．唐山市中医医院，河北 唐山 ０６３０００）
［收稿日期］　２００８０６１５
［通信作者］　周程艳，Ｅｍａｉｌ：ｘｕｅｆａｎｏｎ＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ
　　中药在抗肝损伤、肝纤维化方面有着广阔的应
用前景，因此从天然药物中发掘抗肝损伤、肝纤维化
药物已成为国内外研究的热点［１］。杜仲 Ｅｕｃｏｍｍｉａ
ｕｌｍｏｉｄｅｓ主治腰脊疼，有补中益精气、坚筋骨、除阴
下痒湿、小便余沥、安胎、久服轻身不老的功效［２］。
笔者已对其水提物抗四氯化碳（ＣＣｌ４）肝损伤的作
用进行了研究，效果显著。本次进一步观察了杜仲
醇提物抗ＣＣｌ４肝损伤的作用，与杜仲水提物的疗效
相比较效果更佳，为深入研究杜仲提供资料。
１　材料
１．１　动物
清洁级昆明种小鼠，雌雄各半，体重１８～２２ｇ。
由河南省实验动物中心提供，合格证号 ＳＣＸＫ（豫）
２００５～０００１。
１．２　试剂与药物
谷丙转氨酶（ＡＬＴ）和谷草转氨酶（ＡＳＴ）试剂盒
（批号２００８０５２７），超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）测试盒、
丙二醛（ＭＤＡ）测试盒、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ
Ｐｘ）测试盒和考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒（批号
２００８０５１４），以上试剂盒均为南京建成生物工程研究
所产品。联苯双酯（浙江医药股份有限公司新昌制
药厂，批号０７０８０６）。ＣＣｌ４，分析纯，天津市药通化
学试剂有限公司，批号２００６０２１５），实验时用花生油
配成００８％ ＣＣｌ４乳液。杜仲Ｅｕｌｍｏｉｄｅｓ，购于唐山
市药材有限公司，经华北煤炭医学院药物化学教研
室边洪荣教授鉴定。
１．３　仪器
Ｂｉｏｆｕｇｅｓｔｒｕｔｏｓ型高速低温离心机（ＫｅｎｄｒｏＬａ
ｂｏｒａｔｏｒｙｐｒｏｄｕｃｔｓ）。ＪＹ９２２Ｄ型超声波细胞粉碎机
（宁波新芝科器研究所）。ＹＫＨⅠ型液体快速混合
器（江西医疗器械厂）。ＴＵ１８００紫外分光光度计
（北京普析通用仪器有限公司）。ＲＥ５２ＡＡ型旋转
蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。ＤＫ８Ｄ数显恒温
水浴锅（金坛市医疗仪器厂）。
２　方法
２．１　杜仲醇提物的制备及其质量控制标准
２．１．１　杜仲皮的质量标准鉴定　笔者参照２００５年
版《中国药典》记载的高效液相色谱法对杜仲的有
效成分进行了测定［３］，本品含松脂醇二葡萄糖苷
（Ｃ３２Ｈ４２Ｏ１６）为０２５％，符合药典要求。并对其进行
了５种重金属元素的含量测定，所含砷、铅、汞、镉、
铝分别为 ０００７５７，００４４６，０００７，００１３０，
０００５４６４μｇ·ｇ－１，符合药典要求。
２．１．２　杜仲醇提物的制备及其质量控制标准　将
杜仲皮粉碎成粗粉，用乙醇加热提取２次，合并提取
液，滤过，浓缩至无醇味，稀释至所需浓度，于４℃冰
箱保存备用。通过计算，其提取物占生药的比例
６６７％。
杜仲醇提物成分群主要为各种黄酮类，并有一
些多糖。笔者应用高效液相色谱法，对醇提物中的
标志性成分松脂醇二葡萄糖苷进行测定，质量分数
３５８％。
２．２　杜仲醇提物对ＣＣｌ４致小鼠肝损伤的影响
小鼠６０只，雌雄各半，随机分为６组，每组１０
只，即正常组、模型组、阳性药物组、杜仲醇提物高、
中、低剂量组。阳性药组给予联苯双酯 ０６０ｇ·
ｋｇ－１，杜仲醇提物高、中、低剂量组分别给予含生药
量１６３８０，８１９０，４０９５ｇ·ｋｇ－１，正常组和模型组
给予蒸馏水。灌胃给药，连续１０ｄ。末次给药后禁
食不禁水，８ｈ后，除正常组外，其余各组均腹腔注
射００８％ＣＣｌ４花生油溶液００１ｍＬ·ｇ
－１，１２ｈ后眼
球取血，分离血清。
２．３　检测指标
检测血清中的 ＡＬＴ，ＡＳＴ的活性；取肝脏、脾脏
称量，计算肝、脾指数；取一部分肝脏用生理盐水制
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成１０％的肝匀浆，用于检测肝组织中的 ＳＯＤ的活
性、ＭＤＡ和ＧＳＨＰｘ的水平。
２．４　数据处理
各组实验数据均以 珋ｘ±ｓ表示，采用统计软件
ＳＰＳＳ１３０进行组间ｔ检验，Ｐ＜００５有显著性差异。
３　结果
３．１　对小鼠肝脏、脾脏系数的影响
模型组小鼠肝、脾质量明显增加，肝、脾指数显
著升高（Ｐ＜００５）。杜仲醇提物各剂量组小鼠肝、
脾指数显著降低（Ｐ＜００５），并呈现良好的剂量依
赖性。结果表明，杜仲醇提物能明显对抗 ＣＣｌ４致肝
损伤小鼠肝、脾指数的升高（表１）。
表１　杜仲醇提物对肝损伤小鼠的肝、脾质量及肝、脾指数的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
肝脏
质量／ｇ 肝指数（×１０－２）
脾脏
质量／ｇ（×１０－２） 脾指数（×１０－２）
正常　　　 － ０４０±００５６ １０３±０３８ ６９８±０１０１ ０２５±００５２
模型　　　 － ０５８±００３４ ２７６±０５８１） １１０３±０１２ ０５２±００４８１）
联苯双酯　 ０６０ ０４３±００１４ １４２±０２６２） ７９０±０１５ ０３２±００４７２）
杜仲醇提物 １６３８０ ０４８±００９８ １４７±０３６２） ８００±０６９ ０３０±００４１２）
　 ８１９０ ０５１±００６５ １８２±０２４２，３） ８９０±０５３ ０４１±００５６２，３）
　 ４０９５ ０５５±００３６ ２００±０７９１，４） １０００±０５４ ０４８±００３４１，４）
　　注：与正常组比较１）Ｐ＜００１；与模型组比较２）Ｐ＜００１；与高剂量组比较３）Ｐ＜００１；与中剂量组比较４）Ｐ＜００１（表２，３同）。
３．２　对小鼠血清中ＡＬＴ，ＡＳＴ的影响
模型组小鼠血清中 ＡＬＴ，ＡＳＴ活性显著升高
（Ｐ＜００１）；而杜仲醇提物各剂量组大鼠血清中ＡＬＴ，
ＡＳＴ活性显著降低（Ｐ＜００１），并呈现良好的剂量依
赖性。表明杜仲醇提物能显著对抗ＣＣｌ４导致的肝损
伤小鼠血清中ＡＬＴ，ＡＳＴ的活性升高（表２）。
表２　杜仲醇提物对肝损伤小鼠血清中ＡＬＴ，ＡＳＴ
活性的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０） Ｕ·Ｌ－１
组别
剂量
／ｇ·ｋｇ－１
ＡＬＴ ＡＳＴ
正常　　　 － ３５２２±１９２ ３７６１±５０２
模型　　　 － １８９４２±９５４１） １５６７２±５１９１）
联苯双酯　 ０６０ ３５８５±１１４７２） ５０３８±７６７２）
杜仲醇提物 １６３８０ ４５９８±５６４２） ５２０６±９５６２）
　 ８９９０ ８６３１±８４０２，３） ８２９３±７２６２，３）
　 ４０９５ １２０８７±６８９２，４） １０２３６±１０４５２，４）
３．３　对小鼠肝组织中 ＳＯＤ活性，ＭＤＡ，ＧＳＨＰｘ水
平的影响
模型组小鼠肝组织中 ＳＯＤ活性、ＧＳＨＰｘ水平
显著降低（Ｐ＜００１），ＭＤＡ水平显著增加（Ｐ＜
００１）；而杜仲醇提物各剂量组小鼠肝组织中 ＭＤＡ
的含量显著降低（Ｐ＜００１），肝组织中的 ＳＯＤ的活
力和ＧＳＨＰｘ的水平显著增强（Ｐ＜００１），并且杜仲
醇提物各剂量组效果呈现良好的剂量依赖性。表明
杜仲醇提物能显著对抗 ＣＣｌ４导致的肝损伤小鼠肝
组织中ＭＤＡ升高，显著对抗肝组织中 ＳＯＤ活力和
ＧＳＨＰｘ水平的降低（表３）。
３．４　肝脏组织病理学变化
正常组小鼠肝小叶结构清楚，肝细胞正常，未见
明显病理改变。模型组小鼠肝细胞呈多发灶状坏
死，肝细胞体积明显增大，广泛水肿，可见部分肝细
表３　杜仲醇提物对肝损伤小鼠肝组织中ＳＯＤ活性和ＭＤＡ，ＧＳＨＰｘ水平的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别 剂量／ｇ·ｋｇ－１ ＳＯＤ／Ｕ·ｇ－１ ＭＤＡ／ｎｍｏｌ·ｇ－１ ＧＳＨＰｘ／μｇ·ｇ－１
正常　　　 － １３２５０±１００１ １９９０±９１５ ２２２０２±３１４
模型　　　 － ７０９０±５２３１） ４６５８±１２６１） ９５９０±９１４１）
联苯双酯　 ０６０ １２８１６±５９８２） １８６９±９０１２） ２０２６９±４５７２）
杜仲醇提物 １６３８０ １２６２５±９５６２） １９９９±８５４２） ２００４８±８４７２０
　 ８９９０ １０００６±４９１２，３） ２９１４±５８９２，３） １７０８１±４８３２，３）
　 ４０９５ ８０５９±３５８２，４） ３８９２±４１２２，４） １３００１±１１４８２，４）
胞脂肪变性；肝组织汇管区小叶周边充血和有大量
炎细胞浸润，偶见碎屑状坏死，与正常组比较有显著
性差异，提示造模成功。阳性药联苯双酯组小鼠肝
细胞水肿不明显，伴点状坏死，汇管区少量炎细胞浸
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润。杜仲醇提物各剂量组的病变程度明显减轻，肝
细胞再生明显，但肝细胞仍然存在一定程度的水肿、
脂肪变性，偶有点状坏死，汇管区少量炎细胞浸润
（图１）。
Ａ．正常组；Ｂ．模型组；Ｃ．阳性药组；Ｄ．杜仲醇提物１６３８０ｇ·ｋｇ－１组；Ｅ．杜仲醇提物８９９ｇ·ｋｇ－１组；Ｆ．杜仲醇提物４０９５ｇ·ｋｇ－１组。
图１　杜仲醇提物对肝脏组织病理学的影响（ＨＥ，×２０）
４　讨论
笔者以往的研究显示，杜仲水提物显示具有较
好的抗肝损伤作用。本次结果亦显示杜仲醇提物也
具有明显的抗肝损伤作用，而且随着剂量的增加呈
现良好的剂量效应关系。结果显示，杜仲可对抗
ＳＯＤ，ＧＳＨ的降低和 ＭＤＡ的升高，因此推测其抗肝
损伤的机制可能与增强小鼠清除自由基的能力有
关。同时杜仲亦可抑制自由基启动的脂质过氧化反
应，从而使肝细胞受到自由基攻击时可因其过度消
耗而减少，因此对肝细胞有良好的保护作用，上述结
果表明，杜仲抗肝损伤的作用是多层次、多靶点的。
对其抗肝损伤作用的有效成分进行分析，初步表明
其提取物中有效抗肝损伤的成分为多糖类和黄酮
类。多糖类和黄酮类均易溶解于水和乙醇中，但是
以在乙醇中溶解为较好。亦不排除有可能是其他有
效成分，有待进一步深入系统研究，将杜仲开发成为
新的抗肝损伤药物。
［参考文献］
［１］　ＦｒｉｅｄｍａｎＳＬ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓ，ａｎｉｎｔｅ
ｇｒａｔｅｄｃｅｌｕｌａｒｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｔｉｓｓｕｅｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２０００，
２７５：２２４７．
［２］　江苏新医学院．中药大辞典．上册［Ｍ］．上海：上海科学技术出
版社，１９８６：２０９０．
［３］　中国药典一部［Ｓ］２００５：１１４
［责任编辑　古云侠］
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