全 文 ：理化检验-化学分册 PTCA(PA RT B:CHEM .ANA L.) 2008年　第 44卷　5　
工作简报
光度法测定杜仲藤中总黄酮
毕和平 , 韩长日 , 陈明松
(海南师范大学 化学系 , 海口 571158)
摘　要:石油醚索氏提取除杂 ,甲醇索氏提取杜仲藤中各部位的总黄酮含量 ,所得提取液用甲醇定
量稀释至 100 mL ,分取 1.0 mL于 10 mL 容量瓶中 ,并在碱性溶液中与铝(Ⅲ)反应后在510 nm波长处
测定所生成络合物的吸光度 。用芦丁作标准制作校准曲线 ,其回归方程为 C=0.096 69 A-
0.000 763 ,相关系数为 0.999 3。按此方法分析了杜仲藤样品 ,测得茎中总黄酮量为 93.0 mg · g-1
(n=6 ,相对标准偏差为 1.62%),叶中为 96.4 mg ·g-1(n=6 ,相对标准偏差为 0.44%)。
关键词:光度法;总黄酮;杜仲藤;芦丁
中图分类号:O657.31　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-4020(2008)05-0453-02
Photometric Determination of Flavonoids in Parabarium Micranthum
BI He-ping , HAN Chang-ri , CHEN Ming-song
(Dept.of Chemistry , Hai′nan Normal Univ ersity , H aikou 571158 , China)
Abstract:The sample w as ex tracted with methano l by refluxing at 80 ℃ in a Soxhlet′s ex tractor after
removal o f its im purities by r efluxing with petro leum e ther under the same condition.The ex tract w as diluted to
100 mL in a vo lumetric flask with methanol , an aliquo t of 1 m L was transfer red to a 10 m L vo lumetric flask and the
flavono ids were determined by its reaction with A l(Ⅲ)in an alkaline solution.Abso rbance o f the complex fo rmed
was measured at 510 nm.Rutin was used as standard in the prepa ration o f calibra tion curve , the linearity of w hich
was show n by the linea r reg ression equation o f C(mg · L-1)=0.096 69 A-0.000 763 (r=0.999 3).In apply ing
the propo sed method to analy sis o f Parabarium micranthum , 93.0 mg · g-1(n=6 , RSD=1.62%)of flavono ids
were found in the stems , and 96.4 mg · g -1(n=6 , RSD=0.44%)w ere found in the leaves.
Keywords:Photome try;Flavonoids;Parabarium micranthum;Rutin
　　黄酮类化合物是植物中非常重要的一类天然有
机化合物 ,具有降脂 、抗血栓 、抗氧化 、降糖等多种生
理活性。杜仲藤为夹竹桃科植物 ,又称假杜仲 、土杜
仲 、结衣藤 、白皮胶藤等 ,为多年生藤本植物 ,主要分
布于我国广东 、海南 、广西 、云南 、贵州等省区 。全株
供药用[ 1 , 2] ,具有祛风活络 ,强筋壮骨等功效;主治
风湿痹痛 ,腰肌劳损 ,腰腿痛 ,跌打损伤 ,外伤出血
等[ 3] 。杜仲是杜仲科杜仲属植物 ,为一科一属落叶
乔木 ,具有补中益气 、坚筋骨 、强志 、安胎等功效[ 4] 。
在中草药的实际应用中 ,经常造成两者的错收 、错用
或有意混用。为从化学成分含量上区分杜仲藤和杜
收稿日期:2007-01-18
作者简介:毕和平(1955-),男 ,山西新绛人 ,教授 ,主要从事天
　然药物化学研究。
仲 ,及进一步开发和利用杜仲藤的药用价值 ,本工作
采用光度法对杜仲藤中总黄酮含量进行了测定 。
1　试验部分
1.1　仪器与试剂
721型分光光度计;索氏提取器(自制)。
亚硝酸钠溶液:50 g ·L-1(临用新配);硝酸铝
溶液:100 g ·L-1 ;氢氧化钠溶液:40 g ·L-1 。
芦丁标准溶液:0.200 g · L-1 , 称取芦丁标样
20.0 mg ,甲醇溶解并定容于 100 mL 容量瓶中 ,
摇匀 。
试剂均为分析纯。
1.2　标准曲线制备
移取芦丁标准溶液 0.0 , 1.0 , 2.0 , 3.0 , 4.0 ,
5.0 mL于10 mL 容量瓶中 ,各加甲醇至 5.0 mL ,再
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理化检验-化学分册 毕和平等:光度法测定杜仲藤中总黄酮
加入 50 g · L-1亚硝酸钠溶液 0.5 mL ,摇匀 ,室温
放置 6 min;加入 100 g ·L -1硝酸铝溶液 0.5 mL ,
摇匀 ,室温放置 6 min;加 40 g · L-1氢氧化钠溶液
4.0 mL ,摇匀 ,室温放置 15 min。以试剂空白作参
比于 510 nm 波长处 ,分别测定芦丁标准溶液的吸
光度 。以芦丁浓度 C(g · L-1)为纵坐标 ,吸光度 A
为横坐标 ,绘制标准曲线(图略)。
1.3　样品处理与测定
取自然晾干的杜仲藤茎和叶 ,粉碎过 850 μm
(20目)筛。分别称取已粉碎的杜仲藤各部位样品
1.000 0 g ,用脱脂纱布包好 ,放入索氏提取器中 ,加
入石油醚(沸程 60 ～ 90 ℃)200 mL ,加热回流至提
取液无色 ,放冷 ,弃去石油醚液 。将药渣中石油醚挥
干 ,加甲醇 90 mL 后 ,于 80 ℃水浴中继续提至无
色。提取液移入 100 mL 容量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,
摇匀 。从 100 mL 提取液中移取 25.0 mL 于
100 mL容量瓶中 , 用甲醇定容 。移取提取液
1.0 mL于 10 mL 容量瓶中 ,按 1.2节方法操作 ,并
在标准曲线上计算总黄酮含量[ 5] 。
2　结果与讨论
2.1　测定波长的选择
移取 0.200 g · L-1芦丁标准溶液 2.0 mL ,按
试验方法操作 ,经扫描 ,得其吸收光谱如图 1所示 ,
其最大吸收波长为 510 nm 。
图 1　芦丁标样显色后的吸收光谱
Fig.1　Absorption spect rum of ru tin af ter
i ts color reaction w ith Al(Ⅲ)
2.2　试剂浓度的选择
试验结果表明:亚硝酸钠质量浓度在40 ～ 100 g
·L-1 ,硝酸铝质量浓度在 80 ～ 120 g ·L-1 ,氢氧化
钠质量浓度 30 ～ 75 g ·L -1之间 ,吸光度恒定 。测
定时加入由以上 3 种试剂配成的混合溶液 ,其浓度
分别为 50 g · L-1亚硝酸钠溶液 , 100 g ·L -1硝酸
铝溶液和 40 g ·L-1氢氧化钠溶液 。
2.3　样品空白的选择
试验结果表明:不加入硝酸铝和亚硝酸钠 ,只加
入氢氧化钠溶液后比没有加入时的测定值略高 。为
了抵消样品提取液中某些化学成分与碱作用生成有
色物质而引起的误差[ 6-10] ,选择在加入样品提取液
1.0 mL 后 ,再加入甲醇 4.0 mL ,蒸馏水 1.0 mL 和
40 g ·L -1氢氧化钠溶液 4.0 mL 作为样品空白。
2.4　显色稳定性
试验结果表明:在室温≤28 ℃的环境中 ,显色
时间在 10 ～ 60 min范围内 ,吸光度没有变化 。在试
验选择的测定时间内 ,黄酮类化合物与铝离子生成
的络合物色泽是稳定的 。
2.5　标准曲线线性
试验结果表明:芦丁标准溶液的质量浓度在
0.10 g ·L-1以内呈线性 ,标准曲线的回归方程 C=
0.096 69 A-0.000 76 ,相关系数为 0.999 3。
2.6　精密度和回收率试验
按试验方法 ,分别对杜仲藤茎和叶的提取液平
行测定了 6次 ,杜仲藤茎中总黄酮测定结果为93.7 ,
94.0 ,94.4 ,93.7 ,90.6 , 91.7 mg · g-1 ,平均含量为
93.0 mg · g-1 ,相对标准偏差为 1.62%;杜仲藤叶
中总黄酮测定结果为 96.0 , 96.4 ,97.1 ,96.7 , 96.0 ,
96.4 mg · g-1 ,平均含量为 96.4 mg · g-1 ,相对标
准偏差为 0.44%。回收率平行测定了 5次 ,加入量
为 100μg ,回收率在 99.0%～ 101.0%间 。
本法测得杜仲藤茎和叶中的总黄酮含量相差不
大 ,分别为 9.30%和 9.64%。文献[ 11]报道 ,杜仲
茎和叶中的化学成分基本相似。以杜仲叶中的总黄
酮含量为例 ,由于产地 ,提取方法等不同 ,总黄酮含
量除个别可达 25.43%以外[ 12 , 13] ,绝大多数含量均
在 0.83%～ 2.69%之间。可见 ,杜仲藤叶中总黄酮
含量明显地高于杜仲叶中总黄酮含量[ 14-16] ,值得大
力研究和开发利用 。
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(下转第 457页)
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理化检验-化学分册 李晓银等:柿皮黄色素主要成分的鉴别及提取工艺条件的选择
效果最好;当温度达到60 ℃时 ,提取率反而降低 ,可
能是温度越高对柿皮黄色素的破坏越大 ,而且长时
间处在较高温度下对柿皮黄色素的稳定性不利。试
验选择提取温度为 50 ～ 60 ℃。
试验结果表明:柿皮黄色素提取率随时间的延
长而增大 ,并且曲线的斜率随时间的增大而减小 ,当
浸提时间达 2.5 h时 ,萃取率随浸提时间的增加出
现下降趋势 ,由于时间的延长 ,柿皮黄色素出现了少
量的分解 。试验选择提取时间为 2.5 ～ 3 h为宜。
2.4.3　不同浸提次数对柿皮黄色素提取的影响
由于单次浸提对柿皮黄色素的提取不够完全 ,
有必要对柿皮进行多次提取 ,以充分利用柿皮资源 。
以无水乙醇为提取剂 ,在料液比 1 g ∶20 mL ,浸提
温度 50 ℃,浸提时间 2.5 h 的浸提条件下 ,试验了
浸提次数对柿皮黄色素提取效果的影响 ,结果表明:
浸提 1次﹑ 2次 ,柿皮黄色素溶出率较高 ,而浸提第
三次时 ,色素溶出量非常低 ,提取液已接近无色。试
验选择 2次浸提 。
2.5　正交试验
由以上单因素试验可知 ,柿皮黄色素浸提料液
比 、浸提温度 、浸提时间 、浸提次数对提取率均有显
著的影响 ,因此 ,以浸提料液比 、浸提温度 、浸提时
间 、浸提次数 4因素设计正交试验 ,通过正交试验最
优的浸提工艺条件为:浸提料液比为 1 g ∶20 mL ,
浸提温度 60 ℃,浸提时间 2.5 h ,浸提次数 2次。在
最优浸提条件下做三组重复试验 ,其提取率分别为
80.75 ,80.73 ,80.78 mg/100 g 。由此可见 ,在试验
条件下 ,试验重现性较好。
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