全 文 ：川产贝母种质资源遗传多样性的 ＩＳＳＲ分析
黎开强１，吴卫１，郑有良１，代勇２，向丽２，廖凯１
（１．四川农业大学 农学院，四川 雅安 ６２５０１４；
２．成都恩威集团公司，四川 成都 ６１００４１）
［摘要］ 目的：为阐明川产贝母资源间亲缘关系提供更多证据。方法：利用ＩＳＳＲ分子标记技术对川产１０个种１变种共
１９份材料进行分析，采用ＮＴＳＹＳ软件计算材料间相似系数，并用 ＵＰＧＭＡ法构建了系统树。结果：从３５个 ＩＳＳＲ引物中共筛
选出１１个多态性明显、反应稳定的引物，在１９份供试材料ＤＮＡ中共扩增出１７９条谱带，其中多态性条带１６３条，占８６８％。
材料间ＩＳＳＲ标记遗传相似性系数（ＧＳ）在０５６９～０８５５。聚类分析结果显示，所有供试材料均可区分开，并聚为４组。第 Ｉ
组包括川贝母、甘肃贝母、长腺贝母和短丝贝母，第Ⅱ组由暗紫贝母和浓蜜贝母组成，槽鳞贝母、浙贝母、瓦布贝母和梭砂贝母
聚为第Ⅲ组，湖北贝母单独为第Ⅳ组。试验结果还表明，来源于同一地区的多数川产贝母材料可分别聚在一起。结论：ＩＳＳＲ
标记适用于川产贝母资源的遗传多样性研究，但药典收载的川贝母药材的４种基原植物种间及其与其他川产贝母属各物种间
尚不能仅通过采用ＩＳＳＲ标记技术进行分子鉴定。此外，ＩＳＳＲ聚类结果同川产贝母资源的地理分布有一定关系。
［关键词］ 贝母属；聚类分析；遗传多样性；ＩＳＳＲ；分子鉴定
［收稿日期］ ２００９０１０８
［基金项目］ 国家“十一五”科技支撑计划项目（２００６ＢＡＩ０６Ａ１３１）
［通信作者］ 吴卫，Ｔｅｌ：（０８３５）２８８２１０８，Ｅｍａｉｌ：ｅｗｕｗｅｉ＠ｓｉｃａｕ．
ｅｄｕ．ｃｎ
贝母属ＦｒｉｔｉｌａｒｉａＬ．隶属于百合科 Ｌｉｌｉａｃｅａｅ，为
多年生草本植物。中药川贝母为川贝母 Ｆｒｉｔｉｌａｒｉａ
ｃｉｒｈｏｓａＤ．Ｄｏｎ、暗紫贝母 Ｆ．ｕｎｉｂｒａｃｔｅａｔａＨｓｉａｏ＆
Ｋ．Ｃ．Ｈｓｉａ、甘肃贝母 Ｆ．ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉＭａｘｉｍ．＆
Ｂａｔａｌ．及梭砂贝母 Ｆ．ｄｅｌａｖａｙｉＦｒａｎｃｈ．的干燥鳞茎，
具有清热润肺、止咳化痰之功效，为常用中药材之
一［１］。贝母属全世界约有１３０种，主要分布在北半
球南温带地区，尤以地中海地区、亚洲东部至中部
和北美洲的种类为多。据 《中国植物志》记载，
我国产２０种和２个变种，其中四川 （８种）和新
疆 （６种）种类最丰富［２］。《四川植物志》记载我
国产４３种和 １９个变种，其中四川 １５种 ４变种，
是我国贝母种类集中分布的地区［３］，而且该地区
还具有一些保持较多原始性状的种类［４］。有关贝
母属的研究主要集中在群落生态［５６］、形态解剖
学［７８］、有效成分［９］和药理［１０１１］等方面。关于其遗
传多样性研究，曾有李玉锋等利用ＲＰＡＤ技术对贝
母种质资源遗传多样性进行了分析［１２］。Ｎｉｎａ等采
用ＩＴＳ，ｍａｔＫ，ｒｐｌ６基因对来源于地中海和北美洲
的３７种贝母进行了系统发育关系的研究［１３］。但尚
未见利用ＩＳＳＲ分子标记技术对贝母属进行种间遗
传多样性的报道。简单序列重复区间 ＩＳＳＲ（ｉｎｔｅｒ
ｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ）是一种基于微卫星系列的
分子标记技术，具有重复性好、稳定性高、多态性
丰富等优点，已广泛地用于种质资源鉴定、物种亲
缘关系、植物分类、进化和遗传多样性研究。川贝
母生长地海拔高，生境独特，人烟稀少，截至目前
川贝母药材绝大多数仍依靠采挖野生资源。由于生
长缓慢、过量采集和生境恶化等原因，其蕴藏量急
剧下降，因此对川产贝母种质资源的有效保护已刻
不容缓。以往人们对川贝母属植物的分类认识主要
依据形态解剖的差别，但川贝母植物形态特征随环
境变化较大，尤其是花的颜色，在不同生长环境及
不同的生长时期，往往表现出不同的颜色。同时，
川产贝母属植物引种栽培后，不同种间可能出现异
花授粉结实，并以营养繁殖的方式保存下来，导致
众多变异个体的出现，这种种间杂种的出现更加增
加了物种划分的困难。因此，很有必要进行 ＤＮＡ
水平上的遗传多样性的研究。
为此，本研究采用 ＩＳＳＲ分子标记技术，对川产
贝母１０种１变种共１９份材料进行分析，旨在揭示
川产贝母属植物的遗传多样性、种群间和种群内的
遗传分化程度，为阐明川产贝母属资源的亲缘关系
和遗传演化奠定基础，这对川贝母物种划分、生物多
样性的保护及其资源的可持续利用具有重要意义。
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１ 材料和方法
１．１ 材料 供试材料主要来源于四川省甘孜州折多
山恩威贝母基地和阿坝州茂县，由四川农业大学植物
教研室杨光辉教授鉴定，材料编号、学名及来源见表１。
表１ 供试材料编号及来源
Ｎｏ． 种名 学名 采集地
１ 川贝母 Ｆｒｉｔｉｌａｒｉａｃｉｒｈｏｓａ 四川省甘孜州金汤
２ 川贝母 Ｆ．ｃｉｒｈｏｓａ 四川省甘孜州理塘
３ 川贝母 Ｆ．ｃｉｒｈｏｓａ 四川省甘孜州理塘
４ 长腺贝母 Ｆ．ｕｎｉｂｒａｃｔｅａｔａｖａｒ．ｌｏｎｇｉｎｅｃｔａｒｅａ 四川省甘孜州折多山
５ 川贝母 Ｆ．ｃｉｒｈｏｓａ 四川省甘孜州折多山
６ 川贝母 Ｆ．ｃｉｒｈｏｓａ 四川省甘孜州道孚
７ 川贝母 Ｆ．ｃｉｒｈｏｓａ 四川省甘孜州道孚
８ 暗紫贝母 Ｆ．ｕｎｉｂｒａｃｔｅａｔａ 四川省甘孜州折多山（原产地不详）
９ 暗紫贝母 Ｆ．ｕｎｉｂｒａｃｔｅａｔａ 四川省阿坝州茂县
１０ 长腺贝母 Ｆ．ｕｎｉｂｒａｃｔｅａｔａｖａｒ．ｌｏｎｇｉｎｅｃｔａｒｅａ 四川省甘孜州折多山
１１ 梭砂贝母 Ｆ．ｄｅｌａｖａｙｉ 四川省阿坝州茂县
１２ 甘肃贝母 Ｆ．ｐｒｚｅｗａｌｓｋｉ 四川省甘孜州折多山
１３ 瓦布贝母 Ｆ．ｗａｂｕｎｅｓｉｓ 四川省阿坝州茂县
１４ 湖北贝母 Ｆ．ｈｕｐｅｈｅｎｓｉｓ 四川省甘孜州折多山（原产地不详）
１５ 浓蜜贝母 Ｆ．ｍｅｌｅａ 四川省阿坝州茂县（野生）
１６ 浓蜜贝母 Ｆ．ｍｅｌｅａ 四川省阿坝州茂县（家种）
１７ 短丝贝母 Ｆ．ｄａｊｉｎｅｎｓｉｓ 四川省甘孜州折多山
１８ 槽鳞贝母 Ｆ．ｓｕｌｃｉｓｑｕａｍｏｓａ 四川省阿坝州茂县
１９ 浙贝母 Ｆ．ｔｈｕｎｂｅｒｇｉ 四川省阿坝州茂县
１．２ ＤＮＡ提取 采用 ＣＴＡＢ法。取鲜叶约３ｇ在
液氮冷冻下研磨成粉末，置于５０ｍＬ离心管中，加入
１５ｍＬ预热至 ６５℃的 ２×ＣＴＡＢ提取缓冲液（１００
ｍｍｏｌ·Ｌ－１，ＴｒｉｓＨＣｌｐＨ８０，１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＥＤＴＡ），
６５℃水浴保温１～２ｈ，其间倒转离心管数次，取出
离心管冷至室温。加入等体积氯仿异戊醇（２４∶１），
混匀。冰浴 ３０ｍｉｎ后，３５００ｒ·ｍｉｎ－１（离心 １５
ｍｉｎ）。取上清液加等体积无水乙醇沉淀 ＤＮＡ。勾
出ＤＮＡ，７０％乙醇冲洗２～３次，９５％乙醇清洗１次，
无水乙醇清洗１次，晾干，溶于ＴＥ置于－２０℃冰箱
保存。ＤＮＡ质量用１０％琼脂糖电泳检测，ＤＮＡ纯
度和浓度通过紫外吸收法测定。
１．３ 引物设计 引物序列设计参考 Ｆａｎｇ等［１４］、
Ｎａｇａｏｋａ等［１５］的文献，由上海Ｓａｎｇｏｎ公司合成。
１．４ 反应体系和扩增程序 ＰＣＲ扩增参照 Ｎａｇａｏ
ｋａ等［１５］的程序。反应总体积 ２５μＬ，其中含 １Ｕ
ＴａｑＤＮＡ聚合酶（上海 Ｐｒｏｍｅｇａ），１０×ＰＣＲｂｕｆｅｒ，
１５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＭｇＣｌ２，０２ｍｍｏｌ·Ｌ
－１ｄＮＴＰｓ，２×
１０－４ｍｍｏｌ·Ｌ－１引物和３０ｎｇ模板ＤＮＡ。扩增前在
９４℃预变性２ｍｉｎ，之后进行４５个循环，每循环９４
℃变性１ｍｉｎ，５０℃退火１ｍｉｎ，７２℃延伸２ｍｉｎ，完
成最后一个循环后，在７２℃保温１０ｍｉｎ，４℃保存。
在ＭＪＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｃＰＴＣ２２０型热循环仪上进行。
１．５ 扩增产物的检测 用琼脂糖凝胶电泳直接分
辨出明显且清晰扩增带的引物，其扩增产物用２％
琼脂糖凝胶电泳分离。溴化乙锭染色，凝胶成像仪
上观察照相、记录。
用琼脂糖电泳不能分辨出明显清晰谱带的引
物，其扩增产物采用银染方法进行检测。扩增产物
经４％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染检测。银
染程序主要参见 Ｓａｎｇｕｉｎｅｌｔｉ［１６］的程序并经改进简
化，凝胶在含０５％醋酸的１０％乙醇中固定６ｍｉｎ，
蒸馏水漂洗６ｍｉｎ，用０２％ ＡｇＮＯ３，溶液中染色
１２ｍｉｎ，蒸馏水快速冲洗，在含 ０４％甲醛的
１５％ ＮａＯＨ溶液中显色 ３～５ｍｉｎ，用 ０７５％
Ｎａ２ＣＯ３终止显影３ｍｉｎ，最后用清水冲洗后在空气
中形成干胶保存、拍照。
１．６ 数据处理 每份材料电泳条带按有或无记录，
电泳条带清晰存在时赋值为 １，否则赋值为 ０。用
ＮＴＳＹＳＰＣ（ｖｅｒｓｉｏｎ２１０）软件系统计算材料间遗传
相似系数（ＧＳ）。根据ＧＳ值按不加权成对群算术平
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均法（ＵＰＧＭＡ，ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄｐａｉｒｇｒｏｕｐｍｅｔｈｏｄｗｉｔｈ
ａｒｉｔｈｍｅｔｉｃｍｅａｎｓｃｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓｉｓ）进行遗传相似性聚
类，绘制树状聚类图。
２ 结果与分析
２．１ 扩增产物的多态性 采用３５个 ＩＳＳＲ引物对
随机选择的２份贝母材料进行ＰＣＲ扩增，从中筛选
出１１个稳定性强、重复性好、多态性丰富的引物对
所有贝母材料进行扩增。扩增结果见表２。从ＩＳＳＲ
扩增条带统计结果来看，１１个引物共得到１７９条扩
增带，其相对分子质量在２００～２０００ｂｐ，其中多态
性带１６３条，多态性条带百分率为８６８％，不同引
物扩增出的清晰条带数在５～４０，平均每个引物扩
增出的片段条数为１６３条，扩增的多态性条带数范
围为３～３７，每个引物的多态性百分率为 ６０％ ～
１００％，平均每个ＩＳＳＲ引物扩增出的多态性条带的
数目为１４８。各扩增图谱中，没有发现明显的物种
特征性条带。引物８２７的扩增结果见图１，引物８２６
的扩增结果见图２。
表２ 多态性ＩＳＳＲ引物扩增结果
引物 序列
扩增
带数
多态性
条带数
多态性带
百分率／％
４ ５′ＨＶＨ（ＴＣＣ）５３′ ４０ ３７ ９２５
８０８ ５′（ＡＧ）８Ｃ３′ ５ ４ ８００
８１０ ５′（ＡＧ）８Ｔ３′ ３６ ３４ ９４４
８１１ ５′（ＧＡ）８Ｃ３′ ８ ８ １０００
８１５ ５′（ＣＴ）８Ｇ３′ ６ ４ ６６６
８２３ ５′（ＴＣ）８Ｃ３′ ５ ４ ８００
８２６ ５′（ＡＣ）８Ｃ３′ ３１ ３０ ９６７
８２７ ５′（ＡＣ）８Ｇ３′ ８ ８ １０００
８４５ ５′（ＣＴ）８ＲＧ３′ ５ ３ ６００
８４９ ５′（ＧＴ）８ＹＡ３′ ９ ９ １０００
８５９ ５′（ＧＴ）８ＲＣ３′ ２６ ２２ ８４６
注：Ｒ＝Ａ／Ｔ，Ｙ＝Ｇ／Ｃ，Ｈ＝Ａ／Ｔ／Ｃ，Ｖ＝３Ａ／Ｇ／Ｃ。
Ｍ．ＴＩＡＮＧＥＮＴＭＤＮＡＭａｒｋｅｒⅢ；１～１９．同表１中的
试验材料编号一致。
图１ ＩＳＳＲ引物８２７的扩增图谱（琼脂糖电泳）
２．２ 遗传相似系数 所有贝母材料间的 ＧＳ平均
Ｍ．ｐＵＣ１９ＤＮＡ／ＭｓｐⅠ（ＨｐａⅡ）ｍａｒｋｅｒ；１～１９．同表１中
的试验材料编号一致。
图２ ＩＳＳＲ引物８２６的扩增图谱（银染）
值为０７１３，变化范围为０５６９～０８５５。本试验收集
了不同居群的川贝母、暗紫贝母、长腺贝母和浓蜜贝
母，分析其各自种内平均遗传相似系数，见表３，发现
浓蜜贝母的种内平均ＧＳ（０７８４）最大。其次是川贝
母，其种内 ＧＳ平均值为０７６９。暗紫贝母和长腺贝
母类内ＧＳ平均值相对较小，分别为０７４８，０７４３。
比较川产贝母资源各物种间遗传相似系数，见
表３，甘肃贝母和浓蜜贝母间的遗传差异最大，ＧＳ
平均值 ０５６９。瓦布贝母和浙贝母间相似程度最
高，ＧＳ平均值为０８５５。
进一步比较川产贝母属资源种内和种间 ＧＳ
值，不难发现川贝母和浓蜜贝母种间 ＧＳ平均值小
于川贝母和浓蜜贝母各自种内平均 ＧＳ值。尽管暗
紫贝母与多数其他种的种间 ＧＳ平均值均小于其种
内平均ＧＳ值，但浓蜜贝母与暗紫贝母种间 ＧＳ值高
于暗紫贝母种内平均 ＧＳ值。此外，尽管长腺贝母
与多数其他种的种间ＧＳ平均值均小于其种内平均
ＧＳ值，而甘肃贝母、川贝母与长腺贝母种间 ＧＳ值
却高于长腺贝母种内平均ＧＳ值。
２．３ ＩＳＳＲ标记揭示的贝母种质资源间的聚类分析
基于遗传相似系数矩阵，利用 ＵＰＧＭＡ法进行聚
类分析。获得１０个种１变种１９个居群的亲缘关系
树状聚类图，见图３。从图中可以看出，以所有供试
材料的平均遗传相似系数０７２为阈值，可将这些材
料聚为４组，第 Ｉ组包括川贝母、甘肃贝母、长腺贝
母和短丝贝母，第 Ｉ组由暗紫贝母和浓蜜贝母组
成，槽鳞贝母、浙贝母、瓦布贝母和梭砂贝母聚为第
ＩＩ组，湖北贝母单独为第 ＩＶ组。从聚类图中可以
看出，不同居群的川贝母、暗紫贝母、长腺贝母和浓
蜜贝母均分别划分在同一组中。
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表３ 川产贝母资源种间和种内基与ＩＳＳＲ标记的平均遗传相似系数
种间 川贝母 暗紫贝母 长腺贝母 梭砂贝母 甘肃贝母 瓦布贝母 湖北贝母 浓蜜贝母 短丝贝母 槽鳞贝母
川贝母 ０７６９
暗紫贝母 ０７１８ ０７４８
长腺贝母 ０７６６ ０７００ ０７４３
梭砂贝母 ０７０８ ０７３２ ０７３６ －
甘肃贝母 ０７２７ ０６０６ ０７５６ ０６２４ －
瓦布贝母 ０７１８ ０７１３ ０７０１ ０８４７ ０６５８ －
湖北贝母 ０６６７ ０６８４ ０６４５ ０６８６ ０６１３ ０６７５ －
浓蜜贝母 ０６８７ ０７５２ ０６７４ ０７４２ ０５９７ ０７４４ ０７３４ ０７８４
短丝贝母 ０７３４ ０６４２ ０６９４ ０６９２ ０６７５ ０６９５ ０６６７ ０６３８ －
槽鳞贝母 ０７０７ ０６７２ ０６９３ ０７３３ ０６６７ ０７６４ ０６４５ ０７０１ ０７５３ －
浙贝母 ０７３６ ０６９４ ０７１４ ０７５９ ０６９７ ０８５５ ０６２３ ０７０６ ０６４６ ０７６６
注：“－”表示该物种仅有１份供试材料，无种内ＧＳ值。
图３ １９份川产贝母供试材料基于ＩＳＳＲ遗传相似系数的聚类图
进一步分析以上结果，可以看出许多来源于同
一地区的材料聚在一起。如第 Ｉ组中的川贝母、甘
肃贝母、长腺贝母和短丝贝母均来自甘孜州不同地
区，第Ｉ组的暗紫贝母、栽培和野生浓蜜贝母全部
来源于阿坝州茂县，划分为第 ＩＩ组的梭砂贝母、瓦
布贝母、浙贝母和槽鳞贝母也均来源于阿坝州茂县。
说明川产贝母种质资源根据 ＩＳＳＲ分子标记划分的
类群同地理分布有一定的关系。
３ 讨论
在本试验中，供试材料经过适合的引物扩增，
ＤＮＡ多态性好，条带清晰，且聚类结果可以将所有
材料区分开，可见ＩＳＳＲ标记可以用于川产贝母资源
的遗传关系研究。从 ＩＳＳＲ标记扩增结果来看，１９
份川产贝母种质的遗传多样性为８６８％，各种质间
遗传相似系数均在０５６９～０８５５，表明川产贝母资
源间存在比较丰富的遗传多样性。且川产贝母资源
不仅在种间存在遗传差异，种内也存在遗传多样性。
如不同居群的川贝母、暗紫贝母、长腺贝母和浓蜜贝
母均各自存在不同程度的遗传差异。
从形态特征来看，瓦布贝母、浙贝母和湖北贝母
叶多轮生，叶状苞片多枚，梭砂贝母叶片肥厚宽大，
一般认为是比较原始的种类。试验表明，浙贝母、瓦
布贝母和梭砂贝母亲缘关系较近，湖北贝母和其他
种间亲缘关系最远。与李玉锋应用ＲＰＡＤ分子标记
技术分析发现浙贝母、梭砂贝母和瓦布贝母亲缘关
系较近的结果一致［１２］。而其余具叶互生、对生特征
的供试材料，除槽鳞贝母外，分别聚在Ⅰ和Ⅱ组中。
可见ＵＰＧＭＡ法聚类的结果与《四川植物志》中的形
态分类结果有一致性。又如，短丝贝母除雄蕊花丝
短于花药这个特征外，其余性状和甘肃贝母几乎无
差异［１７］，本试验结果发现二者聚在一个大类中，也
说明了二者亲缘关系的确比较近。此外，罗毅波等
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对横断山及其邻近地区的贝母属的研究中，发现甘
肃贝母与暗紫贝母不仅在地理分布上几乎完全重
叠，且这２个种在花被片的颜色上也不能截然分开。
典型的甘肃贝母花被片为黄色，有深紫色斑点，川贝
母花被片外面为深紫色，内面多为黄绿色，具紫色或
紫褐斑点或斑带，但中间还存在一些过渡类型，花被
片特征极为相似。认为二者在未弄清这种颜色差异
的遗传背景之前，仍应将其作为独立的种处理［１７］。
本试验将甘肃贝母与暗紫贝母聚在不同类中，从某
种程度上支持了将二者划分为不同种的观点。
当然，本试验结果与形态分类结果也存在不尽
一致之处。按照传统形态分类，长腺贝母是暗紫贝
母的变种。但本试验结果却表明，长腺贝母和川贝
母亲缘关系较近。分析其原因，按照《四川植物
志》，长腺贝母其余特征均与暗紫贝母一致，仅蜜腺
较长［３］。但此次收集的长腺贝母材料的植物特征
更类似于川贝母，仅蜜腺很长，是一般川贝母的３～
５以上倍。前期曾对长腺贝母、暗紫贝母以及川贝
母的核型进行过分析，发现川贝母的核型为３Ａ型，
暗紫贝母中不同居群既有３Ａ也有３Ｂ型，长腺贝母
核型为３Ｂ型，且长腺贝母和暗紫贝母均有随体，而
川贝母中无随体。所以，至于浓蜜贝母与川贝母和
暗紫贝母间真实亲缘关系，以及三者不同居群中是
否存在一些过渡类型还有待进一步探讨。为此，作
者将收集更多川产贝母资源进行比较。
本试验结果还表明，川产贝母种质资源根据
ＩＳＳＲ分子标记划分的类群同地理分布有一定的关
系。即来自相同或相近区域的川产贝母资源有聚在
一起的趋势。分析其原因，因贝母为异花传粉植物，
兼以种子和鳞茎繁殖方式，同一地区的不同川产贝
母资源间可能出现异花授粉结实，并以营养繁殖的
方式保存下来［１８］，这种基因交流弱化了物种间的遗
传差异，导致了其后代遗传相似性增加。
尽管所有材料均可利用 ＩＳＳＲ标记技术全部区
分开，但该技术并不能将所有不同物种完全区分在
不同类中。从聚类结果来看，《中国药典》收载的４
种川贝母药材原植物种中，暗紫贝母和梭砂贝母分
别聚在Ｉ和 ＩＩ组中，但川贝母和甘肃贝母聚为一
大类。即采用ＩＳＳＲ分子标记能将药典收载的具有
典型形态特征的梭砂贝母和暗紫贝母区别开来，但
对川贝母与甘肃贝母间的鉴定还存在一定困难。同
时，试验还发现浓蜜贝母与暗紫贝母种间 ＧＳ平均
值大于暗紫贝母种内平均 ＧＳ值，甘肃贝母和川贝
母与长腺贝母种间ＧＳ平均值大于长腺贝母种内ＧＳ
平均值。也就是说，《中国药典》收载的川贝母药材
原植物种与其他四川产贝母属资源也无法完全通过
ＩＳＳＲ标记技术进行鉴定。
近年来，种间鉴定分类、亲缘关系与系统发育研
究除用核基因组分子标记和和核糖体 ＩＴＳ序列外，
还用叶绿体基因组ｒｂｃＬ，ｔｒｎＬＦ，ｍａｔＫ序列来进行研
究［１９］，不同基因组的进化速度不一，综合形态性状、
核基因组和叶绿体基因组的信息，可以得出更为科
学的鉴定、分类和系统进化结论。因此，针对川产贝
母种质资源种间亲缘关系与分子鉴定问题，将进一
步开展其ＩＴＳ和ｍａｔＫ序列分析和比较。
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ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｍｏｎｏｐｈｙｌｙｏｆＦｒｉｔｉｌａｒｉａａｎｄＬｉｌｉｕｍ
（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ；Ｌｉｌｉａｌｅｓ）ａｎｄｔｈｅｉｎｆｒａｇｅｎｅｒｉｃｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＦｒｉｔｉｌ
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·３５１２·
第３４卷第１７期
２００９年９月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ １７
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００９
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ＬＩＫａｉｑｉａｎｇ１，ＷＵＷｅｉ１，ＺＨＥＮＧＹｏｕｌｉａｎｇ１，ＤＡＩＹｏｎｇ２，ＸＩＡＮＧＬｉ２，ＬＩＡＯＫａｉ２
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｔｙ，Ｙａ＇ａｎ６２５０１４，Ｃｈｉｎａ；
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ＦｒｉｔｉｌａｒｉａｆｒｏｍＳｉｃｈｕａｎｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅＩＳＳＲｍａｒｋｅｒｔｅｃｈｎｉｑｕｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｓｔｕｄｙｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｏｆ
ｎｉｎｅｔｅｅｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｉｎｔｅｎｓｐｅｃｉｅｓａｎｄｏｎｅｖａｒｉｅｔａｌｓｐｅｃｉｅｓｏｆｇｅｎｕｓＦｒｉｔｉｌａｒｉａ．ＧｅｎｅｔｉｃｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓｗｅｒｅｃａｌｃｕｌａｔｅｄｂｙｕｓｉｎｇＮＴＳＹＳ
ｓｏｆｔｗａｒｅａｎｄｔｈｅｄｅｎｄｒｏｇｒａｍｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｂｙｕｓｉｎｇＵＰＧＭＡｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｅｌｅｖｅｎｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍ３５ＩＳＳＲｐｒｉｍｅｒｓ，
ａｎｄ１７９ＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｅｒｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒｏｍ１９ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｏｆｗｈｉｃｈ，１７９ｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｅｒｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
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Ｆ．ｄａｊｉｎｅｎｓｉｓｗｅｒｅｉｎｔｈｅｆｉｒｓｔｇｒｏｕｐ；ＴｈｅｓｅｃｏｎｄｇｒｏｕｐｗａｓｔｈｅｃｌｕｓｔｅｒｏｆＦ．ｃｉｒｈｏｓａａｎｄＦ．ｍｅｌｅａ（ｗｉｌｄａｎｄｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｓｐｅｃｉｅｓ）；
ＴｈｅｔｈｉｒｄｇｒｏｕｐｗａｓＦ．ｓｕｌｃｉｓｑｕａｍｏｓａ，Ｆ．ｔｈｕｎｂｅｒｇｉ，ｗａｂｕｎｅｓｉｓａｎｄＦ．ｄｅｌａｖａｙｉ；Ｆ．ｈｕｐｅｈｅｎｓｉｓａｌｏｎｅｆｏｒｍｅｄｔｈｅｆｏｕｒｔｈｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎ
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ｓｐｅｃｉｅｓｏｆｇｅｎｕｓＦｒｉｔｉｌａｒｉａｆｒｏｍＳｉｃｈｕａｎｐｒｏｖｉｎｃｅｃｏｕｌｄｎｏｔｂｅｇａｉｎｅｄｂｙｕｓｉｎｇＩＳＳＲｍａｒｋｅｒｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅｃｌｕｓｔｅｒｒｅｓｕｌｔ
ｏｆｇｅｎｕｓＦｒｉｔｉｌａｒｉａｈａｄｓｏｍｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓｗｉｔｈｔｈｅｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｆｒｉｔｉｌａｒｉａ；ｃｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓｉｓ；ｇｅｎｅｔｉｃｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；ＩＳＳＲ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
［责任编辑 吕冬梅］
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第３４卷第１７期
２００９年９月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ １７
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