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蒙古黄芪不同种质黄芪甲苷含量比较



全 文 :·研究报告·
蒙古黄芪不同种质黄芪甲苷含量比较
郭宝林1,张兰涛1,刘京晶1,黄文华1,曹金一1,武滨2
(1中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所,北京 100094;
2山西省药材公司,山西 太原 030012)
[摘要] 目的:通过原产地药材和种植1年后药材中的黄芪甲苷含量的测定,判定影响黄芪甲苷含量的主要因素。方
法:收集山西、内蒙古和甘肃主要产地的种质,收集同一份种质的原产地药材和种子,将种子种在北京和山西2个试验地,采集
生长1年以后的药材,用药典规定的HPLCELSD方法测定药材中黄芪甲苷的含量。结果和结论:①原产地药材的黄芪甲苷含
量均大于005%,符合药典标准,其中山西和内蒙古的药材略好于甘肃的药材;②种植在山西试验地的种质黄芪甲苷含量略
高于种植于北京试验地,表明山西道地产区的气候和环境条件相对比较适合蒙古黄芪生长;③比较同一采集种植1年后药材
和原产地药材黄芪甲苷含量,相关性不强,说明黄芪甲苷的积累与环境的关系可能大于种质的关系。
[关键词] 蒙古黄芪;黄芪甲苷;含量;种质;比较
[收稿日期] 20090612
[基金项目] 国家科技攻关计划项目(2004BA721A17)
[通信作者]  郭宝林,研究员,Tel:(010)62895049,Email:
guobaolin010@yahoocomcn
  黄芪甲苷(astragalosideⅣ)是中药黄芪的主要
活性成分,具有降血压、镇静、镇痛及抗氧化等作用,
常作为指标性成分应用于黄芪药材和含黄芪成药的
质量控制。但是黄芪甲苷是黄芪中的微量成分,
2005年版《中国药典》规定的黄芪甲苷的含量测定
方法,测定的是药材中的黄芪甲苷以及一些可以在
氨试液处理条件下降解为黄芪甲苷成分的总量,并
规定其质量分数不低于0040%[1]。
黄芪药材来源于蒙古黄芪 Astragalusmembrana
ceusvar.mongholicus或膜荚黄芪 A.membranaceus,近
年由于蒙古黄芪药材质量好,病虫害(如白粉病)比较
轻等原因,蒙古黄芪的种植面积日益扩大,成为了黄
芪药材的主流,主要出产于内蒙古、甘肃和山西等地。
笔者对上述三地的蒙古黄芪种质资源进行了调查,收
集了原产地药材和种子,并确保收集的材料来源于当
地的种质,尽可能保证原产地药材和种子的种质对应
性。2006年将种子种植在北京和山西省浑源县2块
实验地,在种植条件和采收时间一致的情况下,采集
直播1年的药材检测其中黄芪甲苷的含量。
1 材料
安捷伦(Agilent)1100型高效液相色谱仪;Al
tech2000蒸发光散射检测器;XWKⅢ 无油无音空
气泵;Agilent1100自动进样器。
黄芪甲苷对照品购自中国药品生物制品检定所
(批号 110781200512)。乙腈(B&J,美国)和甲醇
(天津康德科技有限公司)为色谱纯,水为双蒸水,
经045μm水系滤膜过滤。正丁醇、氨水为分
析纯。
研究材料均经过郭宝林教授鉴定为蒙古黄芪
Amembranaceusvar.mongholicus。北京试验地和山
西浑源试验地种植的一年生蒙古黄芪来源见表1,
原产地收集的蒙古黄芪的干燥根来源见表2。2块
试验地的黄芪样品是从每份种质的种植区域中随机
挖取15个植株的根,置烘箱中60℃干燥8h,取出,
粉碎成中粉,过筛。
北京试验地位于海淀区药用植物研究所
内,海拔50m,年平均气温123℃,1月份平均
气温 -37℃,极端最低气温为 -185℃,7月
份平均气温为 261℃,极端最高气温为 403
℃。年平均日照数2662h,无霜期平均为 211
d。年平均降雨量 6289mm。
山西试验地位于山西省大同市浑源县荆
庄,海拔 1050m,年平均气温 62℃,1月份平
均气温 -12℃,极端最低气温 -291℃,7月
份平均气温216℃,极端最高气温为377℃,
年平均日照数 26963h,无霜期平均为 140d。
年平均降雨量 4246mm。
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表1 北京和山西2块试验地种植一年生蒙古黄芪中黄芪甲苷质量分数 %
产地 No
黄芪甲苷
北京 山西浑源
山西省浑源县官儿乡 A1 0.03478 -
山西省天镇县 A2 0.04830 0.02222
山西省大同县 A3 0.02685 0.02162
山西省浑源县苏家坪镇 A4 0.02875 0.03655
山西省各种质平均含量 0.03467 0.02680
甘肃省陇西县菜子镇-1 A6 0.03450 0.06040
甘肃省陇西县首阳镇科技园 A7 0.05968 0.05378
甘肃省渭源县路园镇 A8 0.02562 0.07450
甘肃省渭源县莲峰镇 A9 0.01986 -
甘肃省岷县梅川镇 A10 0.03175 -
甘肃省陇西县首阳镇-1 A20 - 0.03267
甘肃省陇西县首阳镇-2 A21 - 0.07306
甘肃省陇西县首阳镇谭家庄 A23 - 0.02346
甘肃省陇西县菜子镇-2 A24 - 0.02169
甘肃省各种质平均含量 0.03428 0.04850
内蒙古区固阳县朝阳乡 A11 0.05660 0.06360
内蒙古区固阳县银号乡 A12 0.05950 0.04919
内蒙古区鄂伦春阿里河 A13 0.03864 0.05056
内蒙古区武川县哈喇合少乡 A14 0.03874 -
内蒙古区乌拉尔 A26 - 0.03571
内蒙古各种质平均含量 0.04837 0.04977
陕西省旬邑县太村镇 A5 0.03725 -
宁夏银川市 A25 0.02973 -
全部样品平均含量 0.03804 0.04422
  注:符号“-”表示无数值。
表2 蒙古黄芪种质资源的原产地药材中黄芪甲苷质量分数 %
产地 No 年限 黄芪甲苷
山西省浑源县官儿 C1 八年生(半野生) 0.0947
山西省天镇县 C2 二年生 0.0570
山西省大同县 C3 二年生 0.1020
山西省浑源县苏家坪镇 C10 三年生 0.0765
山西省浑源县荆庄 C19 二年生 0.1505
山西省灵丘县 C15 二年生 0.1003
山西省广灵县 C22 二年生 0.0950
山西省各种质黄芪甲苷平均含量 0.0966
甘肃省陇西县首阳镇1 C7 二年生 0.0903
甘肃省渭源县路园镇 C8 二年生 0.0579
甘肃各种质黄芪甲苷平均含量 0.0741
内蒙古区固阳县朝阳乡 C11 二年生 0.0780
内蒙古区固阳县银号乡 C12 二年生 0.0538
内蒙古区鄂伦春旗阿里河 C13 五年生 0.1338
内蒙古区鄂伦春旗西小园 C14 三年生 0.1150
内蒙古区集宁市 C16 二年生 0.0816
内蒙古区集宁市 C17 二年生 0.0907
内蒙古各种质黄芪甲苷平均含量 0.0922
陕西省旬邑县太村镇 C5 二年生 0.1375
陕西省旬邑县太村镇(引进山西应县) C18 二年生 0.0989
陕西省各种质黄芪甲苷平均含量 0.1182
所有种质样品黄芪甲苷平均含量 0.0949
2 方法与结果
21 色谱条件 色谱柱 MerkC18(46mm×250
mm,5μm);柱温35℃;流动相 乙腈水(34∶66),等
度洗脱;流速 1mL·min-1;ELSD参数:漂移管温度
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105℃;载气(空气)流量 27L·min-1。理论塔板
数按黄芪甲苷峰计算不低于4000。对照品和样品
的色谱图见图1。
A对照品;B样品;1黄芪甲苷。
图1 黄芪甲苷对照品和样品的HPLC图
22 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照
品适量,加甲醇制成每1mL含0522mg溶液即得。
23 供试品溶液的制备 按照药典中规定的方法,
取本品中粉约4g,精密称定,置索氏提取器中,加甲
醇40mL,冷浸过夜,再加甲醇适量,加热回流4h,
提取液回收溶剂并浓缩至干,残渣加水10mL,微热
使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次40
mL,合并正丁醇液,用氨试液充分洗涤2次,每次40
mL,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加水5mL使溶
解,放冷,通过 D101型大孔吸附树脂柱(内径 15
cm,长12cm),以水 50mL洗脱,弃去水液,再用
40%乙醇30mL洗脱,弃去洗脱液,继用70%乙醇
80mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇溶解并转移
至5mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
24 线性关系考察 精密吸取黄芪甲苷对照品溶
液4,8,16,20,24μL,注入液相色谱仪中,回归方程
为Y=14944X+49237,r=099995,在2088~
12528μg线性良好。
25 含量测定 北京和山西浑源2块试验地种植
的一年生蒙古黄芪中黄芪甲苷含量结果见表1。原
产地收集的蒙古黄芪药材黄芪甲苷含量结果见
表2。
3 讨论
31 原产地药材的质量状况 各原产地药材的黄
芪甲苷质量分数均大于005%,各主要产区的平均
质量分数均大于007%,表明蒙古黄芪药材中黄芪
甲苷含量都比较高。内蒙古和山西的药材好于甘肃
的,但是各产区内各有高低。
各地种植蒙古黄芪基本是2年采收,育苗1年,
移栽1年,秋季收获,个别因为满2年时市场价格不
好,在地里又留存1年,极个别留至5年后再采收,
但黄芪甲苷含量未见明显的随年限增多而含量增高
的趋势[23],同一产区不同采集点的含量差异较大,
年限之间的差异不显著。
32 试验地产一年生药材质量及与原产地药材质
量的相关性 山西、内蒙古、甘肃三地种植蒙古黄芪
历史依次减少,而种植面积和规模依次增加,但都是
当今蒙古黄芪的主要产区,本文依据产区大小,在各
自的核心产区获取相应的种子份数,山西4份、内蒙
古5份、甘肃9份,还有陕西和宁夏各1份,遗憾的
是在北京试验地因为春天风大,一些种子没能正常
发芽,损失5份,而山西试验地出苗后,一些被羊啃
食,损失6份,且相互不对应,使本实验数据不够完
整。
总体来看,一年生药材中黄芪甲苷的含量基本
在药典规定的含量值附近波动,应该说,蒙古黄芪种
植2年,有利于黄芪甲苷的积累,一年不能保证达到
含量标准。一般来说,种植在山西试验地的种质甲
苷含量略高于种植于北京试验地,表明山西道地产
区的气候和环境条件相对比较适合蒙古黄芪生长。
从同一种质在2个试验地的甲苷含量表现来看,内
蒙古的种质对环境选择不明显,甘肃种质选择山西
的环境条件,山西来源的3份种质中,2份反而在北
京试验地含量更高,值得进一步研究。
表1的 A编号和表2的 C编号相对应的标号
为同一个种质来源,从种植1年后药材黄芪甲苷含
量和原产地药材含量的比较来看,相关性不强,也就
是说原产地药材中含量高的种质没有表现出相应地
在2个试验地中种植以后含量也高,说明黄芪甲苷
的积累与环境的关系可能大于种质的关系,因对应
样本比较少,该结论有待进一步研究证实。
[参考文献]
[1] 中国药典一部[S]2005:212
[2] 姜勇,金芳,鲍忠,等不同来源黄芪药材中黄芪甲苷的定量
分析[J]中国中药杂志,2006,31(11):930
[3] 马玲,王坤,张芦燕,等HPLCELSD法测定不同生长年限黄
芪中黄芪甲苷的含量[J]药物分析杂志,2006,26(12):
1869
[责任编辑 吕冬梅]
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