全 文 ：中国药品生物制品检定所);栀子产自湖北省(经课题组鉴定
为茜草科植物栀子 Gardenia jasminoides Ellis.的干燥成熟
果实);甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯。
2　方法和结果
2.1　色谱条件　固定相:UltimateTM C18键合硅胶柱(4.6 mm
×250 mm , 5 μm), 流动相:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(90∶10∶
0.03∶0.06), 流速:0.6 mL·min-1 , 温度:25 ℃, 波长:210
nm[ 7] 。
2.2　栀子熊果酸提取条件优选　以药材粒径 、甲醇加入量 、
超声提取时间 、超声提取次数四因素三水平 , 以熊果酸收率
为指标 ,选用 L9(34)正交表优选栀子熊果酸提取。条件为:
栀子药材粉碎为 50 目粉末 , 加入甲醇量为药材量的 5 倍 ,每
次超声提取 60 min ,超声提取 3 次 , 可使熊果酸收得率达到
最大 ,且经济合理[ 7-9] 。
2.3　线性关系考察　精密称取熊果酸化学对照品 2.0 mg
(60 ℃减压干燥 24 h), 用无水甲醇定容于 10 m L量瓶中 ,即
得0.2 g·L-1的熊果酸对照品溶液。熊果酸在 0.1 ～ 3.0 μg
范围内与峰面积 A 呈现良好的线性关系 ,其回归方程为 A=
452 850.960 3M -12 954.882 87 , r=0.999 6(n=7)。
2.4　精密度试验　精密吸取上述熊果酸对照品溶液 10 μL ,
其积分面积 RSD为 1.754%(n=5), 表明该方法 、该仪器测
定熊果酸精密度符合要求。
2.5　稳定性试验　精密吸取上述熊果酸对照品溶液 10 μL ,
每隔 30 min 测定一次 , 其积分面积 RSD%为 3.49(n=5)。
表明熊果酸用该方法在该仪器上3.5 h 内测定结果较稳定 ,
符合要求。
2.6　重复性试验　照前面“2.2”栀子熊果酸的提取工艺 ,测
得栀子熊果酸含量 RSD为1.802%, 表明该方法重复性试验
符合要求。
2.7　加样回收率试验　照前面“2.2”栀子熊果酸的提取工
艺提取 ,取该溶液 2 mL , 加入上述熊果酸对照品溶液 0.3
mL , 平均加样回收率为 101.9%, 表明该方法测定栀子熊果
酸的加样回收率符合要求。见表 1。
表 1　湖北栀子熊果酸加样回收率试验(n=5)
Tab 1　Result o f recove ry te st(n=5)
序号 样品含量/mg
加样量
/mg
回收率
/ %
平均回收率
/ %
RSD
/ %
1 0.063 38 0.06 102.03
2 0.063 27 0.06 103.23
3 0.063 15 0.06 102.42 101.9 1.15
4 0.063 53 0.06 101.78
5 0.063 48 0.06 100.04
2.8　3 批湖北栀子熊果酸含量测定　按照“2.2”的提取条件
提取 3 批湖北栀子熊果酸 ,按照上述测定条件分别测定熊果
酸含量 ,测定结果见表 2。
[ 作者简介] 翁何霞 ,女 ,副教授,电话:0377-63526113 , E-m ail:w engh exia@yahoo.com.cn　[ 通讯作者] 李耿 ,男 ,电话:010-84205625 , E-m ail:
ligeng001@yahoo.com.cn
表 2　湖北栀子熊果酸含量(n=3)
Tab 2 　Content o f ur so lic acid in F ructus ga rdeniae from
Hubei province(n=3)
批次 熊果酸收率(m g·g -1药材) RSD/ %
1 0.399±0.016 4.027
2 0.375±0.004 1.109
3 0.351±0.016 4.433
3　讨论
经过采集湖北 、江津 、宜宾 、纳溪 、乐山 、青川 、云南 、贵
州 、湖南 、河南等地的栀子并测定熊果酸含量 ,发现湖北栀子
含量最高 ,证实其确为质量优良的道地栀子药材 , 与传统认
识一致。
试验发现 ,上述熊果酸对照品溶液积分面积为 1.5×105
～ 2.5×105 ,峰高为 6×103 ～ 7 ×103 , 理论塔板数约 1.2×
104时 , 峰高法计算结果与真实值的误差为 1.240%, 积分面
积计算结果与真实值的误差为 1.415%, 表明峰高法比积分
面积法更接近真实值 ,尤其适用于熊果酸峰与齐墩果酸及其
衍生物峰未完全分开时。考虑到湖北栀子中熊果酸峰与齐
墩果酸及其衍生物峰完全分开 ,且峰高法计算结果与峰面积
法计算结果差异无显著性 , 出于习惯考虑 , 本实验仍采用峰
面积法测定湖北栀子熊果酸含量。
冰醋酸主要用于改善熊果酸与齐墩果酸及其衍生物图
谱分离度 ,由于冰醋酸具有挥发性 , 对熊果酸与齐墩果酸及
其衍生物图谱分离度存在一定程度的波动。若改用不具有
挥发性的磷酸 ,则能改善熊果酸与齐墩果酸及其衍生物图谱
分离度的波动性 ,可能更容易成功 , 有待于进一步研究。
熊果酸提取温度最好在60 ℃以下 ,样品溶液置于0 ℃冰
箱中贮存 ,测定时分析室的温度控制在25 ℃左右 ,以避免熊
果酸分解对结果造成影响。
参考文献:
[ 1] 　李开泉 ,陈武 ,熊筱娟 , 等.乌索酸化学 、药理及临床应用进展
[ J] .中成药 , 2002 , 24(9):709-711.
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汁的影响[ J] .中药材 , 2003 , 26(8):578-581.
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诱导凋亡[ J] .武汉大学学报(医学版), 2005, 26(3):375-378.
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凋亡的实验研究[ J] .中药材 , 2005 , 28(4):297-301.
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墩果酸的含量[ J] .中成药 , 2006 , 28(12):1790-1793.
[收稿日期] 2007-04-23
高效液相色谱法测定当归补血口服液
中黄芪甲苷的含量
翁何霞1 ,李耿2 　(1.南阳医学高等专科学校 , 河南 南阳
473058 ;2.中日友好医院全国中西医结合心血管病中心中
药学实验室 ,北京 100029)
[ 摘要] 　目的:测定当归补血口服液中黄芪甲苷的含量。方
·675·中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2008 Ap r , Vol 28 , No.08
法:用高效液相色谱法 , 固定相为 Shim-Pack-vp-ODS(150
mm ×4.6 mm , 4.6 μm), 流动相为乙腈-水(70∶30), 流速为
1.00 m L·min -1 ,检测波长为 203 nm , 柱温为 35 ℃。结果:
黄芪甲苷对照品在0.052 ～ 0.52 g·L -1范围内 ,峰面积(A)与
进样量(C)有良好的线性关系 , 回收率为 98.39%, RSD 为
0.7%。结论:该方法操作简单 , 结果准确 , 重复性好 , 可排
除其他成分干扰 ,可用于当归补血口服液中黄芪甲苷的含量
测定。
[ 关键词] 　当归补血口服液;黄芪甲苷;高效液相色谱法
[中图分类号] R927.2　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-
5213(2008)08-0675-03
　　当归补血口服液由当归 、黄芪 2味中药组成 , 收载于《中
华人民共和国卫生部药品标准》新药转正标准第 34 册[ 1] ,具
有补养气血 ,提高机体免疫功能的作用 ,临床多用于血虚症。
国家标准中含量测定项下仅测定了当归中的阿魏酸含量 ,不
能全面评价药物质量[ 2-3] ;本实验以高效液相色谱法测定当
归补血口服液中黄芪甲苷的含量 , 用于该制剂的质量控制 ,
现报道如下。
1　材料
日本岛津 LC-10A TVP 泵 , SPD-10AVP 紫外检测器 ,
浙江大学 N2000 色谱数据工作站;当归补血口服液(郑州协
和制药厂 ,批号 20041225 , 20050322 , 20050628);黄芪甲苷对
照品(中国生物制品检定所 , 批号 0781-200109);水为纯化
水;甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
2.1.1　供试品溶液的制备　精密吸取本品 10 m L , 置分液
漏斗中 ,用水饱和的正丁醇提取 3 次 , 每次 10 mL , 合并提取
液 ,再用 1%氢氧化钠溶液洗涤 2 次 ,每次 10 mL , 弃去碱水
层 , 50 ℃水浴蒸干后 , 用甲醇溶解并定容至 10 m L ,微孔滤膜
(0.45 μm)滤过 , 即得。
2.1.2　对照品溶液的制备　精密称取黄芪甲苷对照品 5.20
mg , 用甲醇定容 10 mL ,即得质量浓度为0.52 g·L -1的溶液 ,
作为对照品储备液。
2.1.3　阴性对照溶液的制备　取缺黄芪的处方药 , 按处方
及工艺要求制备空白试样 ,取空白样品 10 mL ,按“ 2.1”项下
的方法制备阴性样品溶液。
2.2　色谱条件　岛津 Shim-packVP-ODS 液相色谱柱;流动
相:乙腈-水(70∶30);流速:1.0 mL·min-1 ;检测波长:203
nm;柱温:35 ℃;理论塔板数以黄芪甲苷峰计为9 972。结果
黄芪甲苷与其他成分分离较好 ,无干扰 , 见图 1。
2.3　线性关系考察　依次精密量取对照品储备液 0.50 ,
1.00 , 2.00 , 5.00 mL , 分别用甲醇稀释定容至 10 mL , 得
0.026 , 0.052 , 0.104 , 0.260 , 0.520 g·L-1的标准溶液系列 ,
分别取 20 μL 进样 , 以色谱峰面积积分值(A)对质量浓度
(C)进行回归 , 得回归方程 A=122 5+355 4C, r=0.998 6。
表明黄芪甲苷在0.052～ 0.52 g·L-1范围内呈良好的线性关
系。
2.4　精密度试验　取供试品溶液 , 连续进样 6 次 , 每次 20
μL , 测定黄芪甲苷峰面积积分值 ,结果 RSD为0.31%, 表明
图 1　当归补血口服液的高效液相色谱图
A.黄芪甲苷对照品;B.当归补血口服液;C.阴性对照样品
Fig 1　HPLC ch romatogram of Danggui Buxue oral liquid
A.referen ce;B.Danggui Bu xue oral liquid ;C.negat ive con trol
本方法精密度良好。
2.5　稳定性试验　取供试品溶液 , 按上述色谱条件 , 分别在
0 , 1 , 2 , 4 , 8 , 12 h 测定黄芪甲苷峰面积 , 结果 RSD 为0.96%,
表明供试品溶液在 12 h 内稳定。
2.6　重复性试验　取同一批样品(批号 20050322), 平行取
样 5 份 , 按样品测定方法 , 测定计算黄芪甲苷的含量 , 结果
RSD为1.01%。
2.7　回收率试验　精密吸取已知含量的当归补血口服液供
试品(批号 20050322 , 黄芪甲苷含量:0.249 g·L -1)10 mL 6
份 ,分别准确加入黄芪甲苷标准品2.03 , 2.51 , 2.96 mg ,混合
均匀后 , 按照供试品制备 、提取 、测定的同样方法操作 , 结果
见表 1。
表 1　回收率试验结果
Tab 1　Results of recover y
加入量/mg 测得量/mg 回收率/ % 平均回收率/% RSD/%
2.03 2.01 99.01
2.03 1.98 97.54
2.03 1.97 97.04
2.51 2.49 99.20
2.51 2.45 97.61 98.27 0.75
2.51 2.48 98.8
2.96 2.91 98.31
2.96 2.92 98.65
2.96 2.91 98.31
2.8　样品测定　取 3 批样品 , 按上述方法制成供试品溶液 ,
以上述方法测定当归补血口服液供试品中黄芪甲苷的含量 ,
结果见表 2。
表 2　样品测定结果(n=3)
Tab 2　Results of sample determination(n=3)
批号 含量平均值/ g·L -1 RSD/ %
20041225 0.255 0.46
20050322 0.249 0.38
20050628 0.247 0.45
3　小结
本方法能实现黄芪甲苷与有关物质的有效分离 , 黄芪
甲苷峰形好 ,含量测定结果重复性好 , 可用于评价当归补血
口服液质量。
参考文献:
[ 1] 　新药转正标准第 34册[ S] .1997:15.
[ 2] 　赵陆华.中药高效液相色谱法应用技术[ M] .北京:中国医药科
·676· 中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2008 Apr , Vol 28 , No.08
技出版社 , 2004:919-934.
[ 3] 　张莲珠.HPLC测定黄芪甲苷概况[ J] .中成药 , 2005 , 27(5):
587-589.
[ 收稿日期] 2007-05-20
高效液相色谱法测定知柏地黄丸中芒
果苷的含量
陈岳蓉 , 刘海青 　(青海省药品检验所 , 青海 西宁
810000)
[ 摘要] 　目的:建立知柏地黄丸中芒果苷的含量测定方法。
方法:采用高效液相色谱法测定该药中芒果苷的含量 , 色谱
条件:Agilent ODS C18柱(4.6 mm ×250 mm , 5 μm)为色谱
柱 ,甲醇-0.1%磷酸溶液(25∶75)为流动相 , 流速 1.0 m L·
min-1 ,检测波长 316 nm。结果:芒果苷在0.132 ～ 0.660 mg
·L -1范围内呈现良好的线性关系 , r=0.999 7 , 平均加样回
收率为98.14%, RSD为 0.55%。结论:该方法准确 、专属性
强 ,可用于知柏地黄丸的质量控制。
[ 关键词] 　知柏地黄丸;芒果苷;高效液相色谱法
[中图分类号] R927.2　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-
5213(2008)08-0677-02
　　知柏地黄丸(浓缩丸)是由知母 、熟地黄 、黄柏 、山茱萸等
8 味中药组成的中药成方制剂 ,具有滋阴降火之功效 , 临床用
于治疗阴虚火旺 , 潮热盗汗 , 口干咽痛 , 耳鸣遗精 ,小便短赤
之症[ 1] 。知柏地黄丸(浓缩丸)收载于卫生部药品标准 ,原标
准项下除了收载的显微鉴别项和常规检查外 ,无其他检测项
目[ 1] 。处方中知母为君药[ 2] , 主要含黄酮类成分 , 其化学成
分含有芒果苷。为了进一步完善该品种质量标准 , 本实验建
立了高效液相色谱法测定知柏地黄丸中(浓缩丸)的芒果苷
的含量测定方法[ 3] ,取得了较为满意的结果 , 现报道如下。
1　材料
Ag ilent高效液相色谱仪及工作站(美国安捷伦公司),
Ag ilent 1100 紫外检测器;TU-1201 型紫外分光光度计(北
京通用仪器厂);芒果苷对照品(中国药品生物制品检定所 ,
批号 111607-200402);知柏地黄丸(浓缩丸 , 河南省宛西制药
股份 有限公 司 , 批号 040209 , 040715 , 041014 , 041210 ,
051210);甲醇为色谱纯;水为纯化水;其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:Ag ilent ODS C18柱(250 mm×4.6
mm , 5 μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(25∶75);检测波
长:316 nm;流速:1.0 mL·min -1 ;柱温:室温;进样量:10 μL。
2.1.1　检测波长的选择　取芒果苷甲醇溶液于紫外分光光
度计上绘制紫外吸收光谱 , 波长范围 200 ～ 500 nm , 根据测
定结果 ,最大吸收波长为 316 nm。
2.1.2　系统适用性试验　在上述色谱条件下 , 分别精密吸
取供试品溶液 、对照品溶液 、阴性对照溶液各 10 μL , 分别注
入色谱仪。供试品色谱图中 ,在与对照品色谱图相应保留时
间上 ,有一相同的色谱峰 , 而阴性对照在此无干扰。 色谱图
见图 1。
[作者简介] 陈岳蓉 ,女 ,副主任药师,电话:0971-8232182 , E-m ail:yu erongchen@163.com
图 1　高效液相色谱图
A.对照品;B.阴性对照;C.供试品;1-芒果苷
Fig 1　HPLC ch romatograms
A.referen ce sub stan ce;B.n egative;C.sample;1-m angiferin
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液　精密称取芒果苷对照品16.5 mg , 置
250 mL 量瓶中 , 用甲醇溶解并稀释至刻度 , 作为对照品溶液
(0.066 g·L-1)。
2.2.2　供试品溶液　取知柏地黄丸样品适量 , 研细 , 取细粉
约 5 g , 精密称定 , 置 100 mL 锥形瓶中 , 加石油醚(60 ～
90 ℃)40 mL ,超声处理(功率 250 W ,频率 50 kHz)20 min ,
放冷 ,滤过 ,弃去滤液 , 挥干 , 残渣精密加入甲醇 50 m L , 称
定 ,水浴回流提取 1 h ,取出 , 放冷 , 再称定 , 用甲醇补足减失
的质量 ,摇匀 , 取上清液 ,滤过 , 取续滤液即得。
2.2.3　阴性对照液　按处方比例称取除去知母药材的其他
药材适量 ,依照知柏地黄丸的制备工艺和供试品溶液的制备
方法 ,即得阴性对照溶液。
2.3　线性试验　分别精密吸取芒果苷对照品溶液(0.066 g
·L-1)2 , 4 , 6 , 8 , 10μL ,注入液相色谱仪 , 测定峰面积 ,以峰
面积(Y)对进样量(X)回归 , 得回归方程:Y =3 690.2 X -
3.3 , r=0.999 7 , 芒果苷在0.132 ～ 0.660 μg 范围内线性关
系良好。
2.4　精密度试验　精密吸取芒果苷对照品溶液 10 μL , 按以
上色谱条件重复进样 5 次 , 测定峰面积。 结果 RSD 为
0.56%(n = 5), 表明仪器精密度良好。
2.5　稳定性试验　取供试品溶液 , 于制备后 0 , 3 , 6 , 9 ,
24 , 48 h 进样 , 每次 10 μL。 测定峰面积。 结果 RSD 为
0.97%(n=6)。表明供试品溶液在 48 h 内稳定。
2.6　重复性试验　取同批样品(批号 051210)6 份 , 按供试
品溶液制备方法制备 , 进样 , 测定 , 计算含量 , RSD 为1.32%
(n=6),表明本法重复性良好。
2.7　回收率试验　精密称取已知芒果苷含量的样品(0.32
mg·g-1)9份 , 分别精密加入芒果苷对照品适量 , 按“ 2.2.2”
项下供试品溶液的制备方法制备成 50 mL 溶液 , 按“ 2.1”项
下色谱条件进样 10 μL , 测出峰面积 ,由回归方程计算芒果苷
的含量 ,结果见表 1。
2.8　样品的含量测定　取知柏地黄丸样品适量 , 按上述
“ 2.2.2” 项下制备供试品溶液及“ 2.1”项下色谱条件 , 进样
10 μL , 测出峰面积 ,由回归方程计算芒果苷的含量。结果批
号为 040209 , 040715 , 041014 , 041210 , 051210 的芒果苷的
含量分别为0.53 , 0.47 , 0.32 , 0.35 , 0.44 mg·g-1。
3　讨论
实验过程中曾考察了样品的不同的溶剂(甲醇 ,乙醇 ,醋
酸乙酯)、不同的提取时间(0.5 , 1 , 1.5 h)及不同的流动相
(乙腈-水 , 甲醇-水 ,甲醇-0.1%磷酸溶液)对芒果苷含量的影
响 ,结果表明 , 用甲醇加热回流 1 h , 流动相为甲醇-0.1%磷酸
·677·中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2008 Ap r , Vol 28 , No.08