全 文 ：·研究论文·
药用石斛遗传多样性的 ＳＲＡＰ标记研究
樊洪泓１，李廷春２，邱 婧１，李正鹏１，３，林 毅１，蔡永萍１
（１．安徽农业大学 生命科学学院，安徽 合肥 ２３００３６；
２．安徽省烟草研究所，安徽 凤阳 ２３３１００；３．安徽科技学院 生命科学学院，安徽 凤阳 ２３３１００）
［摘要］ 目的：利用 ＳＲＡＰ分子标记技术进行药用石斛的遗传多样性研究。方法：采用在本实验中优化的
ＳＲＡＰ反应体系，应用ＮＴＳＹＳ软件对９种供试石斛的ＳＲＡＰＰＣＲ结果进行分析。结果：从中筛选得到４０对多态性
引物组合，共产生１７８２条多态性条带，平均每个引物组合产生４４５５条多态性条带，显示了较高的多态性比率。
聚类分析４０对引物组合的扩增结果，供试材料分为２大类，Ｊａｃｃａｒｄ’ｓ遗传相似系数在０３３０２～０７８９２。结论：
ＳＲＡＰ技术可有效地应用于药用石斛的遗传多样性及亲缘关系的研究。
［关键词］ 药用石斛；遗传多样性；ＳＲＡＰ
［中图分类号］Ｓ５６７ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０１０００６０５
［收稿日期］ ２００６１２１０
［基金项目］ 安徽省教育厅自然科学重点科研项目（２００６ＫＪ０５４Ａ）
［通讯作者］ 林毅，Ｔｅｌ：（０５５１）５７８６４０６
石斛属 Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ为兰科第二大属，多年生草
本植物，全球计有１５００种，除个别种外，皆属附生
兰类，我国现共有７６种［１］。可益胃生津，滋阴清热。
用于阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗
不明［２］。由于石斛生境独特，繁殖困难，加之过
度采收，因此一直是价格昂贵的紧缺药材。目前我
国药材市场上流通的商品石斛原植物来源有４０多
种，其中多数为兰科石斛属植物，少数来自兰科金
石斛属、石仙桃属、石豆兰属、贝母兰属及蜂腰兰
属，商品石斛品种混乱复杂，严重影响了药品安全
性、有效性。由于石斛类药材的形态学上的差异较
小，但是化学成分差异大，用显微鉴定、理化性质
鉴定等困难较大［３］。近年来，随着分子生物学技
术的发展，ＤＮＡ分子标记技术逐渐应用到药用石
斛的鉴定。目前，应用较为广泛的分子标记技术主
要有ＲＦＬＰ，ＲＡＰＤ，ＡＦＬＰ，ＩＳＳＲ以及核酸序列分
析等，丰富了对石斛属植物的认识，结合形态学、
显微结构、生理生化等方法能够更加准确的鉴别石
斛属植物。
２００１年，Ｌｉ和Ｑｕｉｒｏｓ［４］发展了一种新型的分子
标记———相关序列扩增多态性（ＳＲＡＰ，ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅ
ｌａｔｅｄａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ），该标记通过独特的引
物设计对 ＯＲＦｓ进行扩增。目前，该分子标记技术
已应用于多种植物中［５７］。但 ＳＲＡＰ标记技术应用
于药用植物，还未见报道。本试验通过建立石斛属
植物ＳＲＡＰ最优的反应体系，将 ＳＲＡＰ分子标记技
术应用到石斛属植物的遗传多样性研究，构建其亲
缘关系的分子系统树，为合理利用和开发药用石斛
资源奠定理论基础。
１ 材料与方法
１．１ 材料
植物材料来源见表１，均存放于安徽农业大学
生命科学学院标本室。
表１ 用于ＳＲＡＰ分析的石斛材料
Ｎｏ． 植物名称 产地
１ 霍山石斛 Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍｈｕｏｓｈａｎｅｎｓｅ（野生） 安徽
２ 铜皮石斛 Ｄ．ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ（野生） 安徽
３ 杂交石斛 ｈｙｂｒｉｄｅ（栽培） 安徽
４ 罗河石斛 Ｄ．ｌｏｈｏｈｅｎｓｅ（野生） 广东
５ 铁皮石斛 Ｄ．ｏｆｉｃｉｎａｌｅ（野生） 安徽
６ 重唇石斛 Ｄ．ｈｅｒｃｏｇｌｏｓｕｍ（野生） 江西
７ 铁皮石斛 Ｄ．ｏｆｉｃｉｎａｌｅ（野生） 云南
８ 大苞鞘石斛 Ｄ．ｗａｒｄｉａｎｕｍ（栽培） 云南
９ 铁皮石斛 Ｄ．ｏｆｉｃｉｎａｌｅ（野生） 浙江
注：杂交石斛为霍山石斛×铜皮石斛的Ｆ１代，本实验室培育
１．２ 试剂与仪器
ＣＴＡＢ，Ｔｒｉｓ，β巯基乙醇，ＥＤＴＡ，尿素等均购自
美国 ＡＭＲＥＳＣＯ公司；ＲＮＡ酶，ｄＮＴＰｓ，扩增引物，
Ｔａｑ酶，引物均来自上海生工生物工程技术服务有
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限公司，见表２。美国ＭｉｌｉＰＯＲＥ超纯水系统，德国
Ｓｉｇｍａ３Ｋ－３０冷冻高速离心机，德国 ＷｈａｔｍａｎＢｉ
ｏｍｅｔｒａ公司Ｔ１Ｔｈｅｒｍｏｃｙｃｌｅｒ扩增仪。
表２ 试验所用引物的序列
名称 序列（５′→３′） 名称 序列（５′→３′）
ｍ１ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＴＡ ｅｍ３ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＧＡＣ
ｍ２ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＧＣ ｅｍ４ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＴＧＡ
ｍ３ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＴ ｅｍ５ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＡＡＣ
ｍ４ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＣＣ ｅｍ６ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＧＣＡ
ｍ５ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＡＧ ｅｍ７ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡＡ
ｍ６ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＴＡＡ ｅｍ８ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＴＧ
ｍ７ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＴＣＣ ｅｍ９ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＧＡ
ｍ８ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＴＧＣ ｅｍ１０ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＡＧ
ｅｍ１ ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＡＡＴｅｍ１１ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＣＣＡ
ｅｍ２ ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＧＡＡＴＴＴＧＣ
注：ｍ１～ｍ５，ｅｍ１～ｅｍ６参照文献［４］报道的序列合成；ｍ６～
ｍ８，ｅｍ７～ｅｍ１１参照文献［８］报道的序列合成
１．３ 总ＤＮＡ的提取
总ＤＮＡ的提取方法参考ＣＴＡＢ法［９］，并做了改
进。称取１００ｍｇ幼嫩的植物组织用液氮研磨至粉
末状，加入８００μＬ６５℃预热的２×ＣＴＡＢ提取缓冲
液，混匀后，６５℃水浴４０ｍｉｎ，４℃ １２０００ｒ·ｍｉｎ－１
离心１５ｍｉｎ。取上清液，等体积 Ｔｒｉｓ饱和酚氯仿
异戊醇（２５∶２４∶１）抽提１０ｍｉｎ，４℃１２０００ｒ·ｍｉｎ－１
离心１０ｍｉｎ。再吸取上清液，等体积氯仿异戊醇
（２４∶１）抽提１０ｍｉｎ，４℃ １２０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０
ｍｉｎ。取上清液，加入 １／１０体积的 ３ｍｏｌ·Ｌ－１的
ＮａＡｃ，２倍体积预冷的无水乙醇，－２０℃静置 ３０
ｍｉｎ，１２０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ；７０％乙醇洗沉淀２
次，室温晾干，加入适量 ＴＥ缓冲液溶解；重复上述
氯仿异戊醇抽提及乙醇沉淀２个步骤，可见 ＤＮＡ
的絮状沉淀，用无菌牙签挑出沉淀，７０％乙醇洗沉淀
２次，无水乙醇洗１次，室温晾干，加入５０μＬＴＥ缓
冲液溶解，放入－２０℃冰箱备用。
提取的总ＤＮＡ，采用０８％的琼脂糖凝胶电泳检
测其纯度及完整性。用ＴＵ－１８００ＳＰＣ紫外可见分光
光度计检测其在２６０ｎｍ的吸收值，以及λＤＮＡ荧光
半定量法标定其质量浓度到１０ｎｇ·μＬ－１备用。
１．４ ＳＲＡＰＰＣＲ反应体系的优化
根据有关文献报道［１０］和试验要求对 ＳＲＡＰ反
应体系中的一些重要参数进行梯度设置，并严格控
制其他参数和反应条件，确保试验的准确性和可比
性。在试验中采用的是同一对引物（ｍ８～ｅｍ３），同
一种石斛（霍山石斛）的总 ＤＮＡ。扩增程序依据文
献［４］报道的程序。
１．５ ＳＲＡＰ扩增产物的电泳检测
扩增产物与 ６×ＬｏａｄｉｎｇＢｕｆｅｒ（４０％蔗糖，
０２５％溴酚蓝，０２５％二甲苯青 ＦＦ）混匀后，取 １０
μＬ用于６％聚丙烯酰胺凝胶（７ｍｏｌ·Ｌ－１尿素）电
泳分析，电泳缓冲液为１×ＴＢＥ。电泳时，用２０００Ｖ
的电压７０Ｗ的功率预电泳 ３０ｍｉｎ，上样后用同样
的功率电泳约２ｈ，至二甲苯青 ＦＦ为胶板２／３处。
电泳后银染，银染方法参照文献［１１］方法。
１．６ 数据分析
试验中以２５０ｂｐＤＮＡＬａｄｄｅｒＭａｒｋｅｒ作相对分
子质量标记，电泳图谱中的每一条带（２５０～３０００
ｂｐ）均视为１个分子标记。每个样品的扩增带按有
或无记录，有带赋值为１，无带赋值为０，得到原始数
据矩阵。用 ＮＴｓｙｓｐｃ２０２软件计算各品种间的
Ｊａｃｃａｒｄ’ｓ遗传相似系数，按非加权配对算术平均法
（ＵＰＧＭＡ）建立各品种间亲缘关系的聚类图。
２ 结果与分析
２．１ ＳＲＡＰＰＣＲ最适反应体系
２．１．１ Ｍｇ２＋浓度对 ＰＣＲ结果的影响 Ｍｇ２＋浓度
是ＰＣＲ反应中的一个重要因素。试验结果表明（图
１，泳道 １～６），Ｍｇ２＋浓度为 １０～２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１
时，ＰＣＲ扩增的条带较少且弱；Ｍｇ２＋浓度为 ２５～
３０ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，扩增的条带较多，带型清晰且稳
定；Ｍｇ２＋浓度＞３０ｍｍｏｌ·Ｌ－１，带型数量虽无明显
变化，但背景值增高，带型有些弥散。
图１ 石斛ＳＲＡＰ反应体系的优化结果
注：１～６．Ｍｇ２＋浓度分别为１０，１５，２０，２５，３０，３５ｍｍｏｌ·Ｌ－１；
７～１２ＤＮＡ用量分别为５，１０，２０，３０，４０，６０ｎｇ；１３～１６引物浓度分别为
０４，０６，０８，１０μｍｏｌ·Ｌ－１；１７～２２．ｄＮＴＰｓ浓度分别为５０，１００，１５０，２００，
２５０，３００μｍｏｌ·Ｌ－１；２３～２６．Ｔａｑ酶用量分别为０５，１０，１５，２０Ｕ
２．１．２ ＤＮＡ模板浓度对ＰＣＲ结果的影响 由图１
（泳道７～１２）可以看出，模板ＤＮＡ的浓度对于ＰＣＲ
的结果影响较大。２５μＬ的反应体系中，ＤＮＡ用量
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为５～１０ｎｇ时，扩增出的条带较少且不清晰；２０～
６０ｎｇ时，带型清晰且稳定；３０ｎｇ的用量为最佳。
２．１．３ 引物浓度对ＰＣＲ结果的影响 引物浓度偏
高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间
形成二聚体的机会，所以试验中应选择以最低引物
量产生所需要的结果为好。试验结果表明（图１，泳
道１３～１６），引物浓度为０８μｍｏｌ·Ｌ－１时，扩增的
效果最佳。
２．１．４ ｄＮＴＰｓ的浓度对 ＰＣＲ结果的影响 ｄＮＴＰｓ
的质量与浓度和 ＰＣＲ扩增效率有密切关系。研究
结果表明（图１，泳道１７～２２），ｄＮＴＰｓ的浓度过低或
过高（５０，３００μｍｏｌ·Ｌ－１）时，基本没有扩增产物；
ｄＮＴＰｓ的浓度为１００，１５０，２５０μｍｏｌ·Ｌ－１时，虽有扩
增产物，但扩增效率较低，条带较少且弱；２００μｍｏｌ
·Ｌ－１的 ｄＮＴＰｓ，得到的扩增效果最佳。
２．１．５ Ｔａｑ酶浓度对 ＰＣＲ结果的影响 Ｔａｑ酶浓
度和质量对扩增结果至关重要。Ｔａｑ酶浓度太低，
将导致扩增效率降低；浓度过高，ＰＣＲ反应的稳定
性降低，并会出现非特异性扩增带，导致假阳性，甚
至有时只出现亮的通带，而无任何扩增带。图１（泳
道２３～２６）反映出，Ｔａｑ酶的用量为１Ｕ时，ＰＣＲ扩
增结果较好。
综上所述，石斛 ＳＲＡＰ最优的反应体系为：２５
μＬ的反应体系中，模板 ＤＮＡ量 ３０ｎｇ，Ｍｇ２＋浓度
２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１，０８μｍｏｌ·Ｌ－１的上下游引物，２００
μｍｏｌ·Ｌ－１的ｄＮＴＰｓ以及Ｔａｑ酶１Ｕ。
２．２ ＳＲＡＰ扩增结果
试验中，从８８个引物组合中，筛选出４０个重复
性好、扩增条带清晰且多态性丰富的引物组合，进行
ＳＲＡＰ扩增及数据分析，见表 ３。４０个引物组合共
产生１９７７条清晰条带，平均每个引物产生４９条。
其中，多态性条带１７８２条（９０１４％），每个引物组
合的多态性条带数在３３～５５条不等，平均每个引物
组合产生 ４４５５条多态性条带。代表性带谱见图
２。
２．３ 亲缘关系的聚类分析
对供试的石斛材料基于上述４０个引物组合产
生的１９７７个标记数据，用 ＮＴｓｙｓｐｃ２０２软件计算
各品种间的Ｊａｃｃａｒｄ’ｓ遗传相似系数，利用 ＵＰＧＭＡ
聚类分析方法构建供试石斛材料的亲缘关系分子系
统树，见图３。９种石斛遗传相似系数在０３３０２～
０７８９２，见表 ４。在遗传相似系数 ０４２的水平
表３ ４０个引物组合的扩增结果
组合名称 总带数
多态性
条带数
组合名称 总带数
多态性
条带数
ｍ２ｅｍ８ ５４ ５０ ｍ８ｅｍ７ ４４ ３７
ｍ２ｅｍ７ ４４ ４２ ｍ８ｅｍ９ ５１ ４５
ｍ２ｅｍ４ ４４ ３６ ｍ７ｅｍ９ ５６ ５０
ｍ５ｅｍ７ ４５ ４０ ｍ１ｅｍ８ ５９ ５４
ｍ５ｅｍ４ ５９ ５５ ｍ１ｅｍ６ ５２ ４９
ｍ３ｅｍ７ ４８ ４６ ｍ６ｅｍ８ ４９ ４３
ｍ３ｅｍ８ ４０ ３９ ｍ６ｅｍ６ ５４ ４８
ｍ３ｅｍ９ ４７ ４１ ｍ７ｅｍ３ ４５ ４３
ｍ３ｅｍ１０ ５０ ４５ ｍ７ｅｍ４ ４０ ３８
ｍ３ｅｍ１１ ４８ ４３ ｍ６ｅｍ１１ ４８ ４８
ｍ３ｅｍ３ ４３ ４２ ｍ１ｅｍ３ ４１ ３５
ｍ３ｅｍ６ ４９ ４６ ｍ１ｅｍ２ ４９ ４５
ｍ４ｅｍ４ ５０ ４８ ｍ１ｅｍ１ ４８ ４７
ｍ４ｅｍ９ ４０ ３３ ｍ７ｅｍ９ ５２ ４２
ｍ４ｅｍ１１ ４５ ３９ ｍ７ｅｍ１０ ５７ ４９
ｍ４ｅｍ７ ４８ ４３ ｍ７ｅｍ６ ５６ ５２
ｍ８ｅｍ２ ５５ ５１ ｍ５ｅｍ１０ ５５ ４８
ｍ８ｅｍ３ ５３ ４８ ｍ６ｅｍ８ ４２ ３６
ｍ８ｅｍ５ ５６ ４７ ｍ１ｅｍ１１ ５４ ４７
ｍ８ｅｍ６ ５８ ５１ ｍ１ｅｍ９ ４９ ４１
图２ 部分引物组合的扩增图
Ａ．引物组合ｍ７～ｅｍ４；Ｂ．引物组合ｍ１～ｅｍ６；Ｃ．引物组合ｍ６～
ｅｍ６；１．霍山石斛；２．霍山铜皮；３．杂交石斛；４．罗河石斛；５．霍山
铁皮；６．重唇石斛；７．云南铁皮；８．大苞鞘石斛；９．浙江铁皮
图３ 供试石斛材料的ＵＰＧＭＡ聚类图
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表４ 根据ＳＲＡＰ标记计算的相似系数
因素 霍山石斛 霍山铜皮 杂交石斛 大苞鞘石斛 霍山铁皮 重唇石斛 云南铁皮 罗河石斛 浙江铁皮
霍山石斛 １００００
霍山铜皮 ０６８９４ １００００
杂交石斛 ０７３４８ ０７７４５ １００００
大苞鞘石斛 ０３６２９ ０４０３８ ０３６２９ １００００
霍山铁皮 ０５６１３ ０５８０４ ０５５３４ ０３４５１ １００００
重唇石斛 ０４１７３ ０４６２２ ０４６４６ ０４３１７ ０４８５６ １００００
云南铁皮 ０４２６８ ０４７６２ ０４６８６ ０３３０２ ０７１０５ ０４６２９ １００００
罗河石斛 ０３８２６ ０４３７８ ０４０８７ ０４７２９ ０４５６６ ０５６３６ ０４３９０ １００００
浙江铁皮 ０４６７７ ０５０２３ ０４９１９ ０３６２０ ０７３４２ ０４７０６ ０７８９２ ０４４８６ １００００
上，供试的９种石斛材料分为２个大类：Ⅰ和Ⅱ。Ⅰ
类分为Ａ，Ｂ２个小类，Ａ类包括霍山石斛、铜皮石斛
以及杂交石斛，其中杂交石斛与铜皮石斛的遗传相
似系数为０７７４５，亲缘关系最近；Ｂ类包括铁皮石
斛的３个不同居群，相互间的遗传相似系数均在
０７０以上，亲缘关系较近。Ⅱ类分为 Ｃ，Ｄ２个小
类，Ｄ类由重唇石斛和罗河石斛聚类而成，其遗传相
似系数为０５６３６；Ｃ类由大苞鞘石斛单独构成。
３ 讨论
３．１ 石斛的亲缘关系 本研究采集了药用石斛主
要产区的代表性石斛品种，利用筛选出的４０个引物
组合对９种石斛所进行的研究表明：安徽省霍山地
区的３种石斛———霍山石斛、铜皮石斛及铁皮石斛，
比较其相互间的遗传相似系数发现，霍山石斛在分
类地位上更接近于铜皮石斛（遗传相似系数为
０６８９４），而与铁皮石斛的亲缘关系相对较远（遗传
相似系数为０５６１３）。从聚类图上可以看出，本实
验室选育的杂交石斛与其父本铜皮石斛的亲缘关系
更近，与蔡永萍等［１２］对杂交石斛的生理生化研究的
结果一致。浙江、云南和霍山３个居群的铁皮石斛
中，浙江居群与云南居群的亲缘关系最近，遗传相似
系数为０７８９２；浙江居群与霍山居群间的遗传相似
系数为０７３４２，云南居群与霍山居群间的遗传相似
系数为０７１０５。通过分析发现，３个居群的铁皮石
斛间的遗传关系的亲疏与丁鸽等［１３］研究的结果一
致，铁皮石斛居群地理分布的远近与居群间的遗传
关系的亲疏呈良好的相关性。观赏植物大包鞘石斛
与其他供试的药用石斛虽为同属植物，但其与药用
石斛间的遗传相似系数均较低，在 ０３３０２～
０４７２９，表明它们之间的亲缘关系较远。
３２ 分子标记技术在药用石斛中的应用 近年来，
已有多种分子标记技术应用于药用石斛的报道。
Ｌａｕ等［１４］对１６种石斛内转录间隔区 ＩＴＳ２ＤＮＡ测序
的结果表明，ＩＴＳ２区可作为区分石斛种间、石斛与外
类群的分子标记。丁小余等［１５］建立了枫斗类石斛
的ｒＤＮＡＩＴＳ区碱基全序列数据库，可对枫斗类石斛
待鉴定种进行鉴别。张铭［１６］曾用 ＲＡＰＤ技术对２６
种石斛进行聚类分析，并对铁皮石斛特异性条带进
行测序，从而设计出一对长度为２０ｂｐ的铁皮石斛
高度特异性的引物。也有报道指出利用叶绿体的
ｍａｔＫ基因序列区分石斛与其混淆品［１７］。
本试验将新发展起来的ＳＲＡＰ分子标记技术应
用于药用石斛的遗传多样性与亲缘关系的研究中，
建立了适用于石斛属植物稳定可靠、重复性强的
ＳＲＡＰ反应体系，为药用石斛的分类鉴定和道地性
鉴定提供了又一可靠的依据。
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ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｍｅｄｉｃｉｎａｌＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｂｙＳＲＡＰ
ＦＡＮＨｏｎｇｈｏｎｇ１，ＬＩＴｉｎｇｃｈｕｎ２，ＱＩＵＪｉｎｇ１，ＬＩＺｈｅｎｇｐｅｎｇ１，３，ＬＩＮＹｉ１，ＣＡＩＹｏｎｇｐｉｎｇ１
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｉｆｅｉ２３００３６，Ｃｈｉｎａ；
２．ＡｎｈｕｉＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＴｏｂａｃｃｏＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｆｅｎｇｙａｎｇ２３３１００，Ｃｈｉｎａ；
３．ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＡｎｈｕｉＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｅｎｇｙａｎｇ２３３１００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｍｅｄｉｃｉｎａｌＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｂｙＳＲＡＰ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ９
ｓｐｉｃｅｓＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄＳＲＡＰｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ．ＴｈｅＮＴＳＹＳｓｏｆｔｗａｒｅｗａｓｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｍａｒｋｅｒｓ．
Ｒｅｓｕｌｔ：Ｆｏｒｔｙｐｒｉｍｅｒｐａｉｒｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍ８８ａｍｐｌｉｆｉｅｄ１７８２ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｂａｎｄｓｗｉｔｈａｎａｖｅｒａｇｅｏｆ４４．５５ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃｂａｎｄｓｐｅｒ
ｐｒｉｍｅｒｐａｉｒ．ＣｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓｉｓｕｓｉｎｇＵＰＧＭＡｍｅｔｈｏｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｄａｔａｏｆＳＲＡＰａｍｐｌｉｆｉｅｄｂａｎｄｓｂｙ４０ｐｒｉｍｅｒｐａｉｒｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ９ｓｐｉｃｅｓ
ｏｆｃｏｕｌｄｂｅｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｅｄｉｎｔｏｔｗｏｍａｉｎｇｒｏｕｐｓ．Ｊａｃｃａｒｄ＇ｓｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔｒａｎｇｅｄｆｒｏｍ０．３３０２０．７８９２．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ
ｏｆｔｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔＳＲＡＰｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｉｓｅｆｉｃｉｅｎｔｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｍｅｄｉｃａｌＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｍｅｄｉｃｉｎａｌＤｅｎｄｒｏｂｉｕｍ；ｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；ＳＲＡＰ
［责任编辑 张宁宁］
［收稿日期］ ２００７０６０１
［基金项目］ 国家科技攻关计划项目（２００４ＢＡ７２１Ａ２０）；国家“十一五”科技支撑计划项目（２００６ＢＡＩ０６Ａ１２１１）
［通讯作者］ 郭巧生，Ｔｅｌ：（０２５）８４３９６５９１，Ｅｍａｉｌ：ｇｑｓ＠ｈｅｒｂｓｔｉｍｅｓ．ｃｏｍ
药用菊花不同栽培类型叶片超微结构比较研究
郭巧生，王桃银，汪 涛，梁迎暖
（南京农业大学 中药材研究所，江苏 南京 ２１００９５）
［摘要］ 目的：研究药用菊花不同栽培类型的叶片超微结构。方法：利用透射电镜对药用菊花不同栽培类型
叶片结构进行观察。结果与结论：叶片超微结构中均有叶绿体、线粒体、淀粉粒和过氧化物酶体等，但不同栽培类
型之间细胞器、超微结构及数量等差异较大。研究结果从一个侧面解释了杭菊的抗性较强，因而得到大面积推广；
同时也为药用菊花的育种提供参考资料。
［关键词］ 药用菊花；叶绿体；超微结构
［中图分类号］Ｓ５６７ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０１００１００５
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第３３卷第１期
２００８年１月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １
Ｊａｎｕａｒｙ，２００８