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Vol. 34，Issue 1
January，2009
第 34卷第 1期
2009年 1月
HPLC-UV-ELSD同时测定玄参中 5种成分的含量
杨 宪 1，杨水平 1*，张 雪 1,2，李隆云 2
（1.西南大学，重庆 400716；2.重庆市中药研究院，重庆 400065）
[摘要] 目的：采用 HPLC-UV-ELSD同时测定玄参药材中桃叶珊瑚苷、哈帕苷、哈帕俄苷、安哥拉苷 C、肉桂酸的含量。
方法：应用 SHIMADZU C18 色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以乙腈-0.4%醋酸溶液为流动相，进行二元梯度洗脱；紫外
检测波长为 280 nm，蒸发光散射检测器漂移管温度 105 ℃。结果：桃叶珊瑚苷、哈巴苷、哈巴俄苷、安哥拉苷 C和肉桂酸
5 种成分能够达到很好的分离。其线性范围分别是 0.752 0～13.54 μg，r=0.999 3（n=6）；0.828 0～14.90 μg，r=0.999 4（n=6）；
0.636 0～11.45 μg，r=0.999 7（n=6）；0.544 0～9.792 μg，r=0.999 7（n=6）；0.010 8～0.193 9 μg，r=0.999 9（n=6）。平均
回收率分别为 98.12%，RSD 2.3%（n=6）；99.14%，RSD 1.5%（n=6）；100.2%，RSD 1.9%（n=6）；98.17%，RSD 1.7%
（n=6）；100.4%，RSD 0.50%（n=6）。结论：该方法可同时测定玄参药材中上述 5 种成分的含量。
[关键词] 玄参；HPLC-UV-ELSD；桃叶珊瑚苷；哈帕苷；哈帕俄苷；安哥拉苷 C；肉桂酸
*
《中国药典》（2005年版一部）收载的玄参来
源为玄参科玄参 Scrophularia ningpoensis Hemsl.的
干燥根[1]。其化学成分主要有环烯醚萜类、苯丙素
苷、三萜皂苷、有机芳酸等。具有滋阴，降火、凉
血和解毒等功效[2]。有文献报道采用 HPLC-UV 同
时测定桃叶珊瑚苷、哈巴苷、6-O-甲基梓醇、哈巴
俄苷的方法[3]，和同时测定肉桂酸和哈巴俄苷的方
法[4]。由于桃叶珊瑚苷、哈巴苷等环烯醚萜类紫外
吸收仅较弱，且在急变的梯度条件下易受基线漂移
的影响；而苯丙素苷类成分如安哥拉苷 C，有机酸
类成分如肉桂酸在 280 nm处有良好的紫外吸收[3]，
采用单一紫外检测，无法在同一次色谱条件下兼顾
上述成分峰。本实验利用加速溶剂提取法
（accelerated solvent extraction，ASE）[5-6]，采用
HPLC-UV-ELSD在同一色谱条件下，测定不同产地
玄参药材中桃叶珊瑚苷、哈巴苷、哈巴俄苷、安哥
拉苷 C、肉桂酸等 5 种成分的质量分数。结果表明
该法良好，可为全面控制玄参内在质量提供参考。
1 仪器与试药
美国 Agilent 1100高效液相色谱系统，包括自
动进样器，四元梯度泵，在线脱气机，DAD紫外检
测器，Chemstation 化学工作站；2420 蒸发光散射

[收稿日期] 2008-03-09
[基金项目] 重庆市科委重点攻关项目 (19807)
[通信作者] *杨水平，Tel：(023)68251249，13036379503，E-mail：
yang-sp@163.com
检测器（Waters公司）；ASE 200溶剂加速提取仪
（美国 Dionex公司）。
肉桂酸对照品（中国药品生物制品检定所，批
号 110786-200703），桃叶珊瑚苷、哈巴苷、安哥
拉苷 C和哈巴俄苷由作者从玄参药材中分得，并通
过 UV，IR，NMR，MS等方法对其结构进行鉴定，
纯度均大于 98％（HPLC 测定）。15 批玄参药材
采自全国各地，经重庆市中药研究院李隆云研究员
鉴定。乙腈（Merck 公司，色谱纯）；醋酸（重庆
川东化学试剂有限公司，分析纯）；氮气为高纯氮
（纯度＞99.999%）；MiUi-Q超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 SHIMADZU C18柱（4.6 mm×250
mm，5 μm）；流动相 乙腈（A）-0.4%醋酸（B）
二元梯度洗脱，梯度洗脱：0 min，5％ A；20 min，
10％ A；50 min，55％ A。流速 0.8 mL·min-1；柱
温 30 ℃，进样量为 10 μL；肉桂酸、安哥拉苷 C、
哈巴俄苷用紫外检测器检测，检测波长为 280 nm；
桃叶珊瑚苷、哈巴苷用蒸发光散射检测器检测，漂
移管温度 105 ℃，雾化气为 N2，流速 1.2 L·min-1，
不分流模式。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取在 110 ℃干燥
至恒重的肉桂酸对照品 5.38 mg，置 50 mL量瓶中，
加 70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为肉桂酸
储备液；再精密称取哈巴俄苷 7.95 mg，安哥拉苷 C


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6.80 mg，置 25 mL量瓶中，精密量取肉桂酸储备液
1 mL至同一量瓶中，加 70%甲醇 10 mL超声溶解
并稀释至刻度，摇匀，即得肉桂酸、哈巴俄苷、安
哥拉苷 C的混合对照品溶液。精密称取桃叶珊瑚苷
9.40 mg，哈巴苷 10.35 mg，置 25 mL量瓶中，加
70%甲醇 10 mL超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即
得桃叶珊瑚苷、哈巴苷混合对照品溶液。
2.3 样品溶液的制备 取新鲜挖取的玄参根部，清
水冲洗去泥，晾干后放置烘箱 60 ℃烘干至恒重，
粉碎过筛；精密称取玄参粗粉约 1.0 g，过 65 目筛，
加 70%甲醇，萃取池体积为 15 mL，萃取温度 100
℃，压力 6.821 MPa，加速溶剂提取[5]10 min，提取
1 次。将提取液转移至 25 mL量瓶中，以 70%甲醇
定容至刻度，0.45 µm微孔滤膜过滤，即得供试品
溶液。
2.4 线性关系考察 分别精密吸取桃叶珊瑚苷、哈
巴苷的混合对照品溶液 2，8，16，20，24，30，36
μL注入液相色谱仪，用蒸发光散射检测器测定峰面
积，以进样量为横坐标（X），峰面积的对数为纵坐
标（Y），绘制标准曲线，得桃叶珊瑚苷回归方程
Y=369 152X＋16 463，r=0.999 3，最低检测限为
0.137 μg，表明桃叶珊瑚苷在 0.752～13.536 μg，进
样量与峰面积对数呈良好的线性关系；哈巴苷回归
方程 Y=344 038X＋25 844，r=0.999 4，最低检测限
为 0.105 μg。表明哈巴苷在 0.828～14.904 μg，进样
量与峰面积对数呈良好的线性关系。
分别精密吸取哈巴俄苷、安哥拉苷 C、肉桂酸
的混合对照品溶液 2，8，16，20，24，30，36 μl，
注入液相色谱仪，用紫外检测器测定峰面积，以进
样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），哈巴俄
苷回归方程 Y=758 242X＋23 183，r=0.999 7，最低
检测限为 0.028 9 μg，表明哈巴俄苷在 0.636～
11.448 μg，进样量与峰面积呈良好的线性关系；安
哥拉 C回归方程 Y=270 323X-53 595，r=0.999 7，最
低检测限为 0.257 μg，表明安哥拉苷 C 在 0.544～
9.792 μg，进样量与峰面积呈良好的线性关系；肉
桂酸回归方程 Y=1.41×10-7X＋ 2.597×10-3， r=
0.999 9，最低检测限为 0.005 38 μg，表明肉桂酸在
0.010 77～0.193 86 μg，进样量与峰面积呈良好的线
性关系。对照品与玄参药材的 HPLC-UV-ELSD 色
谱图见图 1，由图 1可知，桃叶珊瑚苷、哈巴苷、
哈巴俄苷、肉桂酸、安哥拉苷 C的的分离良好。

A. 对照品1，2 ELSD检测图谱；B. 对照品3～5 UV检测图谱；
C. 样品ELSD检测图谱；D. 样品UV检测图谱；1. 桃叶珊瑚苷；
2. 哈帕苷；3. 哈帕俄苷；4. 安哥拉苷C；5. 肉桂酸。
图1 混合对照品和玄参药材提取物HPLC图

2.5 精密度试验 取玄参样品，连续进样 6 次，
每次 10 μL，测得 5 种成分峰面积值，以桃叶珊瑚
苷计算 RSD 1.1%，以哈帕苷计算 RSD 0.81%，以
哈帕俄苷计算 RSD 为 1.6%，以肉桂酸计算 RSD
0.24%，以安哥拉苷 C 计算 RSD 为 1.9%，结果表
明精密度良好。
2.6 重复性试验 精密称取同一批样品 6 份，制
备供试品溶液进样，测定并计算 5 种成分含量，6
次测定值的 RSD 分别为：桃叶珊瑚苷 1.2%，哈帕
苷 1.6%，哈帕俄苷 1.2%，安哥拉苷 C 1.9%，肉桂
酸 0.26%。
2.7 稳定性试验 精密称取同一批供试品溶液，制
备供试品溶液后于 2，4，8，16，24 h进样，测定
峰面积值，计算 5 种成分的 RSD 分别为：桃叶珊
瑚苷 1.3%，哈帕苷 1.7%，哈帕俄苷 1.4%，安哥拉
苷 C 1.6%，肉桂酸 0.87%，结果表明供试品溶液至
少在 24 h内稳定。
2.8 回收率试验 称取已测知含量的玄参样品 5
份，每份约 0.5 g，分别加入上述 5 种对照品适量，
按供试品溶液制备方法操作，并按上述色谱条件测
定。5 种成分的平均回收率和 RSD 分别为：桃叶


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珊瑚苷 98.12%和 2.3%，哈巴苷 99.14%和 1.5%，哈
帕俄苷 100.21%和 1.9%，安哥拉苷 C 98.17%和
1.7%，肉桂酸 100.35%和 0.5%。
2.9 玄参药材含量测定 取所收集的 15 批不同产
地的玄参药材，按供试品溶液制备项下操作，结果
测得 5 种活性成分的质量分数，见表 1。
表1 不同产地玄参药材中5种活性成分的质量分数（n=3） %
来 源 桃叶珊瑚苷 哈帕苷 哈帕俄苷 安哥拉苷C 肉桂酸
浙江仙居 0.61 0.58 0.180 0.035 0.052
浙江缙云 0.53 0.73 0.059 0.031 0.061
浙江东阳 0.94 0.45 0.13 0.082 0.064
浙江馨安 1.23 0.37 0.063 0.028 0.049
浙江永康 0.91 0.45 0.046 0.075 0.062
陕西镇平 0.58 1.24 0.095 0.013 0.048
辽宁本溪 0.42 1.16 0.11 0.032 0.061
重庆武隆 1.03 1.77 0.062 0.028 0.065
重庆秀山 0.97 1.32 0.23 0.083 0.063
重庆巫山 0.93 0.51 0.19 - 0.057
湖北巴东 0.71 0.84 0.061 0.004 8 0.062
江苏南通 0.73 0.88 0.062 0.024 0.056
江苏盐城 0.49 0.83 0.19 0.013 0.073
辽宁丹东 0.55 0.54 0.054 0.015 0.069
云南大理 0.35 0.82 0.60 0.036 0.068
从所测成分的含量高低来看，15 批不同产地
的玄参药材中，桃叶珊瑚苷和哈帕苷的含量总体上
比其他 3种成分要高；从地域上看，不同产地的药
材中 5 种成分含量差别较大，这比较符合常理，但
相近地理位置的地方，5 种成分的含量也有较大差
异，其原因可能由于玄参为多年生草本植物，其有
效成分的高低与生长年限、不同地块和地形、生长
地区水分条件等微区域性有关，尚待进一步研究。
该方法操作简便，精密度高，重复性好，通过
HPLC-UV-ELSD联用，达到在一次色谱条件下综合
测定玄参药材中 5 种成分的目的。为中药材质量控
制研究提供一种新的方法。
3 讨论
3.1 提取条件优化 本研究采用了煎煮回流法（95
℃，1 h）、超声辅助提取（1 h）和加速溶剂提取 3
种方法对样品进行提取，以 5 种成分的提取率为指
标，对 3 种提取方法进行综合比较，结果表明，加
速溶剂提取法效率最高，且操作简单方便、提取时
间较短、各操作参数可控、提取过程重现性好，有
助于实现图谱的高重现性。
3.2 检测方式的选择 根据玄参的特点，桃叶珊瑚
苷和哈帕苷均只有很弱的末端吸收，而哈帕俄苷，
安哥拉苷 C 和肉桂酸的检测波长为 280 nm，无法
在同一紫外条件下兼顾 2 类成分的检测，虽 ELSD
为通用型质量检测器，不受是否有紫外吸收或吸收
强度的影响。可同时检测这 5 种成分，但由于其灵
敏度低，对哈帕俄苷，安哥拉苷 C和肉桂酸含量低
的玄参药材来说，该法同时测定 5 种成分较困难，
故采用灵敏度高的紫外检测器对这 3 种成分进行
测定。所以该文建立了 HPLC-UV-ELSD 同时测定
玄参中 5 种成分的含量。
3.3 色谱条件选择 考察了 0％，0.1％，0.2％，
0.4％，0.5％醋酸体积分数对分离度的影响。结果
不同醋酸体积分数对峰的保留时间影响较大，对峰
形及分离度亦有一定的影响。这是由于玄参中主要
成分为水溶性的环烯醚萜类化合物，流动相加入一
定浓度酸抑止剂可有效抑止玄参中呈弱酸性萜羟
基化合物解离，改善峰形。比较各个醋酸体积分数
下的分离度和峰形，以 0.4％醋酸体积分数为佳。
考察了 20，30，40 ℃柱温对分离的影响。在
30 ℃柱温条件下，各峰分离度最佳，故最后确定柱
温为 30 ℃。
3.4 ELSD 参数优化 考察了分流、不分流两种模
式对各成分响应的影响。结果表明分流后 ELSD响
应降低较大，检测灵敏度无法满足检测要求，故选
择不分流模式。在固定雾化气体流速及不分流模式
条件下，考察了 90，100，105，110 ℃漂移管温度
对峰响应值的影响，为保证高水相的流动相的蒸


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发，实验选择 105 ℃为漂移管温度。在漂移管温度
为 105 ℃条件下，考察了 0.8，1.2，2.5 L·min-1雾化
气体流速对响应的影响，结果因流动相中水相比例
较高，液滴表面张力较大，雾化气体流速的变化对
液滴大小影响较大，综合考虑，选择 1.2 L·min-1为
最终条件。
[参考文献]
[1] 中国药典. 一部[S]. 2005：76.
[2] 师 怡，许 晖，阙慧卿，等.玄参化学成分的药理作用和分析方
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[5] Giergielewicz M H， Dabrowski L， Namiesnik J. Accelerated
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酸含量的测定及其指纹图谱研究[J]. 药学学报，2007，42（5）：
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Determination of five compounds in Scrophularia ningpoensis
by HPLC-UV-ELSD

YANG Xian1，YANG Shuiping1*，ZHANG Xue1,2，LI longyun3
（1.Southwest University，Chongqing 400716;
2.Chongqing Academy of Chinese Materia Medica，Chongqing 400065，China）

[Abstract] Objective：To develop an HPLC-UV-ELSD method for the determination of aucubi，harpagide，harpagoside，
angoroside C and cinnamic acid in Scrophularia ningpoensis. Method：The analytical column was SHIMADZU C18（4.6 mm×250
mm，5 μm）. The mobile phase was acetonirile-0.4% acetic acid in a gradient elution．Initial conditions was 5% A; 0-20 min，changed
to 10% A; 20-50 min，to 55% A. The flow rate was 0.8 mL·min-1 and the column temperature was 30 ℃. The UV detector
wavelength was set at 280 nm for harpagoside，angoroside C and cinnamic acid， and the evaporative light-scattering detector
（ELSD） drift tube temperature was 105 ℃，the flow rate of nebulizer gas was 1.2 L·min-1 for aucubi and harpagide. Result：
Aucubi，harpagide，harpagoside，angoroside C and cinnamic acid was separated well. The linear calibration curves were obtained
over of 0.752-13.536 μg for aucubi（r=0.999 3，n=6），0.828 0-14.90 μg for harpagide（r=0.999 4，n=6），0.6360-11.45 μg for
harpagoside（r=0.999 7，n=6），0.5440- 9.792 μg for angoroside C，（r=0.999 7，n=6） and 0.010 8-0.193 9 μg for cinnamic acid
（r=0.999 9，n=6）.The mean recovers of five compounds were 98.12% ，99.14% ，100.21% ，98.17% and 100.35% with RSD
of 2.3%，1.5%，1.9%，1.7% and 0.5%. Conclusion：This method could simultaneously determinate the content of the five
compounds in the S. ningpoensis.
[Key words] Scrophularia ningpoensis；HPLC-UV-ELSD；aucubi；harpagide；Harpagoside；angoroside C；cinnamic acid
[责任编辑 王亚君]



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