全 文 ：天然冰片、合成冰片对栀子提取物黏膜促渗作用研究
陆　洋，杜守颖，姚宗玲，赵沛月，翟永松
（北京中医药大学 中药学院，北京 １００１０２）
［摘要］　目的：探讨天然冰片（艾片）、合成冰片对栀子提取物黏膜促渗作用并进行比较。方法：以离体蛙皮为模型进行
体外黏膜渗透试验，研究艾片、合成冰片对栀子提取物指标成分栀子苷表观渗透系数Ｐａｐｐ的影响，考察艾片及合成冰片对栀子
苷稳定性影响，比较各组１０ｈ累积渗透率。以效应面法研究提取物浓度、艾片浓度及渗透转速对Ｐａｐｐ的影响。结果：艾片组和
合成冰片组的Ｐａｐｐ分别是对照组的１４４，１７７倍，均具有极显著性差异（Ｐ＜００１），两促渗组间也具有显著性差异（Ｐ＜
００５）。在蛙皮作用下，对照组和合成冰片组栀子苷８ｈ左右开始降解，艾片组１２ｈ内未发生降解。艾片组及合成冰片组１０ｈ
累计渗透率相当，约为对照组１３倍。效应面试验设计结果表明，艾片浓度对Ｐａｐｐ具有极显著性影响（Ｐ＜００１），渗透转速则
对渗透时滞（ｔｉｍｅｌａｇ）作用明显（Ｐ＜００１）。结论：艾片和合成冰片均能促进栀子苷的渗透，合成冰片的促渗作用更强。艾片
及合成冰片均能降低蛙皮对栀子苷降解作用，艾片的保护作用更佳。艾片对黏膜屏障的作用较合成冰片弱，但保护作用更
强，使用较高浓度的艾片可以提高栀子提取物的黏膜吸收，降低时滞，同时保护栀子苷不易被生物内源性物质破坏。
［关键词］　天然冰片；合成冰片；栀子提取物；黏膜渗透；稳定性
［收稿日期］　２００８１１０７
［基金项目］　国家“十一五”科技支撑计划（２００６ＢＡ１０６Ａ１７）
［通信作者］　杜守颖，博士，教授，博士生导师。研究方向：中药新
剂型与新技术。Ｔｅｌ：（０１０）８４７３８６４５，Ｅｍａｉｌ：ｄｕｓｈｏｕｙｉｎｇ＠２６３．ｎｅｔ
［作者简介］　陆洋，在读博士，主要从事中药经鼻给药系统研究，Ｅ
ｍａｉｌ：ｌａｎｄｏｃｅａｎ２８＠１６３．ｃｏｍ。
　　冰片有天然冰片和合成冰片之分，天然冰片主
要成分为右旋龙脑（梅片）或左旋龙脑（艾片），合成
冰片为消旋体，主含龙脑和异龙脑，多数中药制剂均
使用合成冰片［１］。冰片性偏寒凉，在临床上的应用
极为广泛，特别是在心脑血管疾病中的应用尤引人
关注，发挥开窍和佐使引经作用。由于合成冰片与
天然冰片化学成分有别，两者对药物黏膜渗透的影
响及差别未见有关报道。本研究选择临床常与冰片
配伍使用的栀子为模型药物，以离体蛙皮模型研究
天然冰片与合成冰片对栀子提取物中栀子苷的黏膜
渗透的影响，为临床组方用药提供依据。
１　材料
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱仪，Ａｇｉｌｅｎｔ化学工作
站（美国惠普）；ＣＸ１００型超声波清洗器（北京医疗
设备厂）；赛多利斯 ＢＳ１１０Ｓ型电子分析天平（北京
赛多利斯公司）；ＴＰ２Ａ智能透皮试验仪（南京红蓝
电子科技有限公司）。
牛蛙，体重４００～５００ｇ，由北京中医药大学实验
动物中心提供。
药品与化学试剂　栀子苷对照品（中国药品生
物制品检定所，批号 １１０７４９２００４１０）；栀子提取物
（由本实验室采用水提醇沉法提取后过柱精制所
得，栀子苷质量分数为３６８％）；合成冰片（北京同
仁堂药店）；艾片（贵州金色制药有限责任公司，符
合《贵州省中药材、民族药材质量标准》艾片项下有
关规定）；乙腈（美国 Ｍｅｒｃｋ公司，色谱纯）；纯净水
（杭州娃哈哈集团）其余试剂均为分析纯。
２　方法
２．１　色谱条件　ＤｉａｍｏｎｓｉｌＴＭ钻石Ｃ１８（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ）；流动相 乙腈水（１４∶８６）；检测波长２３８
ｎｍ；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；进样量１０μＬ；柱温 室温。
栀子苷相对保留时间１０３０ｍｉｎ，渗透液无相关物质
干扰（图１）。
２．２　线性关系考察 精密称取栀子苷对照品适量，
用流动相溶解并稀释为 ２２８，４５６，１１４，２２８，
５７０，１１４ｇ·Ｌ－１的对照品溶液，准确量取各对照品
溶液１０μＬ进样。以样品的峰面积（Ａ）对对照品溶
液质量浓度（Ｃ），应用最小二乘法线性回归处理后
得方程为Ａ＝１６３１０Ｃ＋３９９５，ｒ＝１０，在质量浓度
２２８～１１４ｇ·Ｌ－１，方程的线性良好，符合试验
要求。
２．３　离体蛙皮及药物的准备　离体动物黏膜（口
腔黏膜、鼻黏膜、阴道黏膜等）来源有限［２］，蛙皮与黏
膜的结构十分相似［３］，因此采用离体蛙皮模型研究
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Ａ．空白渗透液；Ｂ．栀子苷对照品；Ｃ．栀子苷渗透样品；１．栀子苷。
图１　栀子苷蛙皮渗透ＨＰＬＣ图
黏膜渗透。牛蛙断颈处死，分离蛙腹部皮肤，用生理
盐水反复冲洗，至无混浊为止。用塑料薄膜包裹后
－２０℃冷冻保存，一周内用完。
分别精密称取合成冰片及艾片５００ｍｇ，置于１０
ｍＬ量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，即得５０
ｇ·Ｌ－１的合成冰片及艾片溶液。
２．４　体外渗透试验［４５］　将蛙皮固定在渗透扩散装
置的扩散室与接收室之间，外侧皮肤面向扩散室。
在接收室中注入脱气生理盐水作为接收液，排除气
泡，使液面完全与皮肤内层接触，３００ｒ·ｍｉｎ－１磁力
搅拌，３７℃恒温，扩散室中加入１ｍＬ２０ｇ·Ｌ－１栀
子提取物水溶液及１００μＬ冰片（合成冰片或艾片）
溶液（对照组为无水乙醇），计时。在设定时间取样
１ｍＬ并补加相同体积的新鲜接收液。样液用ＨＰＬＣ
测定栀子苷含量，计算相应时间的栀子苷质量浓度
Ｃ，按下式计算累积透过量（Ｑ）。
Ｑ＝（ＶＣｎ＋∑
ｎ－１
ｉ＝１
Ｃｉ×１）／Ｓ
　　式中Ｑ为累积透过量（μｇ·ｃｍ－２）；Ｖ为接收室
中接收液的体积（ｍＬ）；Ｃｎ为第ｎ个取样点测得的药
物质量浓度（ｇ·Ｌ－１）；Ｓ为渗透面积（ｃｍ２）。
以累积透过量Ｑ对时间 ｔ做图［６］，其斜率为药
物的渗透速率Ｊｓｓ（μｇ·ｃｍ
－２·ｍｉｎ－１），药物的表观
渗透系数Ｐａｐｐ＝Ｊｓｓ／Ｃ，Ｃ为扩散池中药物浓度。
２．５　蛙皮对栀子提取物稳定性的研究　预试验结
果表明蛙皮中有关内源性物质对栀子苷有较强的降
解作用，需对栀子提取物稳定性作一定研究。取质
量浓度为８０ｍｇ·Ｌ－１栀子提取物生理盐水溶液２５
ｍＬ，按０１ｇ·ｍＬ－１加入剪碎的蛙腹皮，分别加入
５０ｇ·Ｌ－１的合成冰片及艾片溶液及无水乙醇１００
μＬ，３７℃水浴恒温，３００ｒ·ｍｉｎ－１磁力搅拌，于０，２，
４，６，８，９，１０，１１，１２ｈ取样０５ｍＬ，过滤，ＨＰＬＣ测定
各时间点栀子苷含量。
２．６　累积渗透率时间曲线　以生理盐水为接收
液，按“体外渗透试验”项下方法研究栀子苷１０ｈ累
积渗透率时间曲线。
２．７　效应面法研究不同因素对 Ｐａｐｐ及渗透时滞
（ｔｉｍｅｌａｇ）的影响　选择栀子提取物浓度（ＣＧｅ）、艾
片浓度（ＣＢ）和渗透池转子转速（ｒｏｔａｔｉｏｎｓｐｅｅｄ）作为
考察对象，根据“体外渗透试验”项下方法进行渗透
试验，为减小误差，每个试验点平行３份，取平均值
计算。采用 Ｄｅｓｉｇｎｅｘｐｅｒｔ７０软件以 ＢｏｘＢｅｈｎｋｅｎ
效应面法研究各因素对 Ｐａｐｐ及 ｔｉｍｅｌａｇ影响并拟合
相关方程，相关因素水平见表１。
表１　ＢｏｘＢｅｈｎｋｅｎ试验设计各因素及其水平
水平
Ａ
ＣＧｅ／ｇ·Ｌ－１
Ｂ
ＣＢ／ｇ·Ｌ－１
Ｃ
转子转速／ｒ·ｍｉｎ－１
－１ ５ １５ ２５
０ ５ １０ １５
１ １５０ ３００ ４５０
３　结果
３．１　合成冰片和艾片对栀子苷促渗效果的比较　栀
子苷黏膜渗透过程见图２。合成冰片、艾片对栀子苷黏
膜渗透蛙皮模型的促透参数见表２。合成冰片、艾片对
栀子苷黏膜促渗作用显著，其栀子苷蛙皮渗透Ｐａｐｐ分别
是对照组的１７７，１４４倍，具有极显著差异（Ｐ＜００１），
合成冰片促渗效果较艾片更强（Ｐ＜００５）。
３．２　合成冰片及艾片对栀子提取物在蛙皮渗透液
中稳定性的影响　由图３可以看出，蛙皮内源性物
质对对照组栀子提取物中栀子苷８ｈ开始有显著的
降解作用。将对照组数据以ｌｎＣ对时间ｔ做图［７］，对
图中最后３点（１０，１１，１２ｈ）做线性回归，得回归方
程ｌｎＣ＝－１９９９ｔ＋１１３３９，ｒ＝０９９００。蛙皮有
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■对照组；◆天然冰片（艾片）组；▲合成冰片组（图３，４同）。
图２　不同冰片促渗栀子苷蛙皮渗透累计渗透量
Ｑｔ曲线
关物质对栀子苷的降解符合一级反应，速率常数
Ｋ＝１９９９ｈ－１，半衰期为０３４７ｈ。合成冰片和艾片
对这种降解作用具有较好的抑制作用。使用合成冰
片后，１０ｈ开始降解，降解速率常数００５９ｈ－１，半衰
期为１１６６ｈ。艾片组的保护作用较强，栀子苷在
１２ｈ内未发生明显变化。
３．３　累积渗透率时间曲线　从药物累积渗透率
时间曲线（图４）可以看出，栀子苷能以较快的速率
透过蛙皮，对照组、艾片组及合成冰片组的１０ｈ累
积渗透率分别为（４８９±４４）％，（６１５±３０）％，
（６５４±３７）％。合成冰片较艾片促渗效果更强。
表２　不同冰片促渗栀子苷蛙皮渗透曲线方程及表观渗透系数Ｐａｐｐ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
组别 Ｑｔ方程 ｒ Ｐａｐｐ／ｃｍ·ｍｉｎ－１
对照组 Ｑ＝１８２５４ｔ－００４ ０９９８９ ０４１±００５１，２）
天然冰片（艾片）组 Ｑ＝２６２１７ｔ＋００１ ０９９６３ ０５９±００９３）
合成冰片组 Ｑ＝３２２９６ｔ－００９ ０９９７７ ０７３±００６
　　注：１）Ｐ＜００１ｖｓ合成冰片，２）Ｐ＜００１ｖｓ天然冰片，３）Ｐ＜００５ｖｓ合成冰片。
图３　不同冰片对蛙皮渗透液作用下栀子提取物
稳定性的影响（ｎ＝３）
图４　不同冰片促渗栀子苷蛙皮渗透累积渗透率
Ｒｔ曲线（ｎ＝３）
３．４　效应面法研究不同因素对 Ｐａｐｐ及渗透时滞的
影响　使用 Ｄｅｓｉｇｎｅｘｐｅｒｔ７０软件，以 Ｐａｐｐ和 ｔｉｍｅ
ｌａｇ为响应值分别用线性方程、二次多项式非线性方
程和三次多项式非线性方程对试验结果进行拟合，
通过Ｆ检验，由二次多项式拟合结果较好。同时，
略去影响较小项，优化拟合结果［８］，所得方程如下
所示。
Ｐａｐｐ＝０８４８－４８２×１０
－３Ａ－５８３×１０－３Ｂ－
１２７×１０－３Ｃ＋２３３×１０－４Ａ２＋９６３×１０－４Ｂ２＋
２２３×１０－６Ｃ２（ｒ＝０９５５５，Ｐ＝００００３）。
对于 Ｐａｐｐ而言，各因素的重要性依次递减为：
Ｂ＞Ｃ２＞Ｂ２＞Ａ２＞Ａ＞Ｃ。由此可以看出，艾片浓度对
Ｐａｐｐ影响最为显著。而 Ｐａｐｐ随着转速的增加则显示
出先减小后增大的趋势。
对于时滞来说，各因素的重要性依次递减为：
Ｃ＞Ａ２＞ＡＣ＞Ｂ＝ＡＢ＞Ａ２。转子转速对时滞影响最为
明显。同时随着栀子提取物浓度由低到高，时滞呈
现出抛物线变化。
４　讨论
合成冰片和艾片均能明显提高栀子提取物栀子
苷体外蛙皮渗透，且合成冰片效果更强，这与胡利
民［９］等报道的天然冰片及合成冰片对大鼠胃黏膜
屏障影响结果相一致。合成冰片对黏膜的屏障作用
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有较大的影响，这也可能是艾片对栀子苷的保护作
用要优于合成冰片的原因所在。累积渗透率时间
曲线与稳定性试验有所出入，在１０ｈ左右并没有发
生明显降解，这可能是因为在稳定性试验中使用的
是剪碎的蛙腹皮，内源性物质更易释放的缘故。通
过效应面试验可以看出，对Ｐａｐｐ来说，影响的关键是
加入艾片的浓度，高浓度的艾片可以带来更大的促
渗效果。而蛙皮没有角质层，故渗透过程的时滞作
用并不明显，这与黏膜吸收特点一致，但是更高的释
放转速可以进一步减小时滞，这也提示良好充分的
黏膜血液流动是减少吸收时滞的必要保证。通过大
鼠在体鼻灌流初步实验表明，栀子苷在大鼠鼻黏膜
有较好的吸收，没有明显的时滞，２ｈ左右可以吸收
约２０％的灌流药物，这与本实验模型中对照组渗透
结果一致，提示使用蛙皮渗透模型可以较好的模拟
栀子苷鼻黏膜吸收。试验中必须使用脱气渗透介
质，否则实验过程中会产生大量气泡吸附于蛙皮上，
影响实验结果，如有气泡也应及时排出。动物皮肤
个体差异对渗透结果也有一定的影响，笔者比较了
不同质量的牛蛙的腹皮及背皮，结果表明使用
４００～５００ｇ牛蛙腹皮的重现性最佳，误差较小。
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Ｓｔｕｄｙｏｎｎａｔｕｒａｌｂｏｒｎｅｏｌａｎｄｓｙｎｔｈｅｔｉｃｂｏｒｎｅｏｌａｆｅｃｔｉｎｇｍｕｃｏｓａｌ
ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｇａｒｄｅｎｉａｅｘｔｒａｃｔ
ＬＵＹａｎｇ，ＤＵＳｈｏｕｙｉｎｇ，ＹＡＯＺｏｎｇｌｉｎｇ，ＺＨＡＯＰｅｉｙｕｅ，ＺＨＡＩＹｏｎｇｓｏｎｇ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１０２，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｎａｔｕｒａｌｂｏｒｎｅｏｌａｎｄｓｙｎｔｈｅｔｉｃｂｏｒｎｅｏｌｏｎｍｕｃｏｓａｌｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｏｆＧａｒｄｅｎｉａ
ｅｘｔｒａｃｔ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔａｋｅｎｆｒｏｇｓｋｉｎａｓａｖｉｔｒｏｍｏｄｅｌｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｖｉｔｒｏｍｕｃｏｓａｌｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｔｈｅｉｍｐａｃｔｓｏｆｔｈｅｎａｔｕｒａｌｂｏｒｎｅｏｌｓａｎｄｓｙｎ
ｔｈｅｔｉｃｂｏｒｎｅｏｌｓｏｎｔｈｅＰａｐｐｏｆｔｈｅＪａｓｍｉｎｏｉｄｉｎｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ，ａｎｄｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｂｏｒｎｅｏｌｓｏｎｔｈｅｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆＪａｓｍｉｎｏｉｄｉｎｗｅｒｅｉｎｖｅｓ
ｔｉｇａｔｅｄ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｔｈｅ１０ｈａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｅａｃｈｇｒｏｕｐｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｉｎｆｌｕｅｎｃｅｆａｃｔｏｒｓ，ｓｕｃｈａｓＣＧｅ，ＣＢａｎｄｒｏｔａｔｉｏｎ
ｓｐｅｅｄｏｎＰａｐｐｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙｕｓｉｎｇｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅＰａｐｐｏｆＪａｓｍｉｎｏｉｄｉｎｏｆｎａｔｕｒａｌｂｏｒｎｅｏｌａｎｄｓｙｎｔｈｅｔｉｃｂｏｒ
ｎｅｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅ１４４ｆｏｌｄａｎｄ１７７ｆｏｌｄｏｆｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜００１）．Ｆｏｒｔｗｏｂｏｒｎｅｏｌｇｒｏｕｐｓ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓａｌｓｏｓｈｏｗｅｄａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｔｏｏ（Ｐ＜００５）．Ｊａｓｍｉｎｏｉｄｉｎｂｅｇａｎｔｏｄｅｇｒａｄｅａｂｏｕｔ８ｈａｆｔｅｒｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｆｒｏｇｓｋｉｎｆｏｒｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｓｙｎｔｈｅｔｉｃｂｏｒｎｅｏｌ
ｇｒｏｕｐ，ｂｕｔｗａｓｓｔａｂｌｅｗｉｔｈｉｎ１２ｈｆｏｒｎａｔｕｒａｌｂｏｒｎｅｏｌｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆ１０ｈｗａｓｓａｍｅｆｏｒｄｉｆｅｒｅｎｔｂｏｒｎｅｏｌ
ｇｒｏｕｐｓ，Ｉｔｗａｓａｂｏｕｔ１３ｆｏｌｄｏｆｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．ＴｈｅＣＧｅｈａｄａｓａｌｉｎｅｎｃｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎｔｈｅＰａｐｐ（Ｐ＜００１）ａｎｄＣＢｈａｄａｓａｌｉｅｎｃｅ
ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎｔｉｍｅｌａｇ（Ｐ＜００１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＢｏｔｈｔｈｅｎａｔｕｒａｌｂｏｒｎｅｏｌａｎｄｓｙｎｔｈｅｔｉｃｂｏｒｎｅｏｌｃａｎａｃｃｅｌｅｒａｔｅｔｈｅｐｅｒｍｅａｔｉｏｎｏｆＪａｓｍｉ
ｎｏｉｄｉｎａｎｄｔｈｅｓｙｎｔｈｅｔｉｃｂｏｒｎｅｏｌｈａｓｓｔｒｏｎｇｅｒｅｆｅｃｔｏｎｔｈｅＰａｐｐ．Ｂｏｔｈｔｗｏｄｉｆｅｒｅｎｔｂｏｒｎｅｏｌｃａｎｒｅｄｕｃｅｔｈｅｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｅｆｅｃｔｏｆｆｒｏｇｓｋｉｎ
ｔｏＪａｓｍｉｎｏｉｄｉｎ，ｂｕｔｔｈｅｎａｔｕｒａｌｂｏｒｎｅｏｌｈａｓａｂｅｔｅｒｐｒｏｔｅｃｔｅｆｅｃｔｏｎｉｔ．Ｂｙｕｓｉｎｇｍｏｒｅｎａｔｕｒａｌｂｏｒｎｅｏｌ，ｔｈｅｍｕｃｏｓａｌｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｏｆ
Ｇａｒｄｅｎｉａｅｘｔｒａｃｔｃａｎｂｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｔｈｅｔｉｍｅｌａｇｃａｎｂｅｒｅｄｕｃｅｄ，ａｎｄＪａｓｍｉｎｏｉｄｉｎｈａｓｂｅｔｅｒｓｔａｂｉｌｉｔｙ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　ｎａｔｕｒａｌｂｏｒｎｅｏｌ；ｓｙｎｔｈｅｔｉｃｂｏｒｎｅｏｌ；ｇａｒｄｅｎｉａｅｘｔｒａｃｔ；ｍｕｃｏｓａｌｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ；ｓｔａｂｉｌｉｔｙ
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