全 文 ：冻干鲜鱼腥草超临界 ＣＯ２流体萃取工艺
和提取物 ＧＣＭＳ分析
孟 江１，２，董小萍３，周毅生２，姜志宏１，梁士贤１，赵中振１
（１．香港浸会大学 中医药学院，香港；
２．广东药学院 中药学院，广东 广州 ５１００００；
３．成都中医药大学 药学院，四川 成都 ６１００８１）
［摘要］ 目的：优选超临界ＣＯ２流体萃取冻干鲜鱼腥草提取物的工艺，分析冻干鲜鱼腥草提取物的组成。方
法：以甲基正壬酮含量为指标，采用正交试验法对超临界ＣＯ２流体萃取冻干鲜鱼腥草提取物的条件进行了优选，并
用ＧＣＭＳ法对提取物成分进行分析。结果：最佳萃取工艺：萃取压力１５０００ｋＰａ，萃取温度３５℃，萃取时间２０ｍｉｎ。
鉴定了冻干鲜鱼腥草提取物中出３８种成分，并测定了其相对含量。结论：该工艺合理，能够有效保证提取物的质
量。
［关键词］ 超临界ＣＯ２流体萃取；冻干鲜鱼腥草；正交实验，ＧＣＭＳ分析
［中图分类号］Ｒ２８４．２ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）０３０２１５０３
［收稿日期］ ２００５０８０１
［通讯作者］ 赵中振，Ｔｅｌ：（００８５２）３４１１２４２４，Ｅｍａｉｌ：ｚｚｚｈａｏ＠
ｈｋｂｕ．ｅｄｕ．ｈｋ
鱼腥草为三白草科 Ｓａｕｒｕｒａｃｅａｅ蕺菜属植物蕺
菜ＨｏｕｔｕｙｎｉａｃｏｒｄａｔａＴｈｕｎｂ．的地上部分［１］，也是卫
生部ｌ９９８年公布的药食两用的一种植物。鱼腥草
具有清热解毒、消肿排脓、利尿涌淋及止痰化咳等功
效，并对多种细菌有抑制作用［２］。现代药理研究表
明新鲜鱼腥草的水蒸气蒸馏物对单纯疱疹Ⅰ型病毒
（ＨＳＶⅠ）、流感病毒和人体免疫缺乏Ⅰ型病毒
（ＨＩＶⅠ）有直接抑制活性，且无细胞毒性［３］。对鱼
腥草挥发油化学成分及提取工艺的研究已有一些报
道［４，５］，但多以鱼腥草干品为材料，且仅以挥发油出
油率为指标来评价工艺。本课题组曾对鲜鱼腥草
ＧＣＭＳ，ＨＰＬＣＭＳ指纹图谱方面进行研究报道［６，７］，
现以甲基正壬酮为指标成分，利用超临界 ＣＯ２流体
萃取研究了冻干鲜鱼腥草的提取物的提取工艺，并
对其成分进行ＧＣＭＳ分析，以期为鲜药的临床应用
与开发提供科学依据。
１ 仪器与试药
ＳＦＸＴＭ２－１０型超临界萃取分析仪（美国 ＩＳＣＯ
公司），ＱＰ２０１０气质联用仪 （美国惠普公司），Ｍｏｄｅｌ
７７５３０冷冻干燥机（瑞士ＬＡＢＣＯＮＣＯ公司）。
甲基正壬酮对照品（批号０８３４９５０１，中国药品
生物制品检定所），正十八烷（批号０３０２１０，中国同
济微量元素研究所），其他试剂均为分析纯。
鱼腥草新鲜全草样品于２００４年８月采集于四
川雅安鱼腥草ＧＡＰ栽培种植基地，原植物经香港浸
会大学邬家林教授鉴定。新鲜药材先保存于
２０
℃冰柜中，预冻１２ｈ，然后冷冻干燥４８ｈ。冻干品取
出后密闭保存（经测定药材冻干品的含水量约为
４％～６％）。
２ 方法与结果
２．１ 气相色谱条件
ＤＢ－５ｍｓ弹性石英毛细管色谱柱（０２５ｍｍ×３０
ｍ，０２５μｍ）。升温程序：初始温度６０℃保持１０ｍｉｎ，
以１℃·ｍｉｎ－１至８０℃，保持１５ｍｉｎ，以２℃·ｍｉｎ－１至
２００℃，以２０℃·ｍｉｎ－１至２２０℃，保持５ｍｉｎ。载气为
氦气，流速０８ｍＬ·ｍｉｎ－１；进样口温度２２０℃。
２．２ 质谱条件
离子源为ＥＩ，电离电压７０ｅＶ，离子源温度２００
℃，溶剂延迟时间，７ｍｉｎ，质谱扫描范围 ｍ／ｚ４０～
４００；扫描周期０５ｓ。
２．３ 超临界ＣＯ２流体萃取及含量测定
２．３．１ 正交试验优化萃取条件 参考有关文献［８］，
影响ＣＯ２超临界流体萃取效果的主要因素有萃取压
力、萃取温度和萃取时间，以此３者作为考察因素，并
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中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ ３
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００７
结合预试验情况，每因素选取３个水平，按Ｌ９（３
４）正
交表安排试验，以甲基正壬酮含量作为衡量提取效率
的客观指标，优选最佳工艺，为了提高统计分析的可
靠性，每一条件下重复３次试验，测定结果取其平均
值供统计分析用。因素水平见表１。
表１ 因素水平
水平
Ａ
温度
／℃
Ｂ
压力
／ｋＰａ
Ｃ
时间
／ｍｉｎ
１ ３５ １５０００ ２０
２ ４０ ２００００ ３０
３ ４５ ２５０００ ４０
２．３．２ 供试品溶液制备 将冷冻干燥的样品粉碎，
过４０目筛，精密称取约１ｇ，置萃取釜中。按正交设
计表条件进行萃取，将萃取物流出管通入预先放置
约含２０ｍＬ醋酸乙酯的三角烧瓶中，以收集萃取物。
超临界流体流速２ｍＬ·ｍｉｎ－１。
２．３．３ 供试品中甲基正壬酮含量的测定 精密称
取甲基正壬酮对照品和正十八烷内标物加醋酸乙酯
分别配制成 ２３７ｍｇ·ｍＬ－１的对照品标准溶液和
２３９ｍｇ·ｍＬ－１的内标溶液。分别吸取甲基正壬酮
对照品溶液 ０２５，０５，０７５，１０，１２５，１５，１７５
ｍＬ于１０ｍＬ量瓶中，加入内标溶液１００μＬ，并用醋
酸乙酯稀释至刻度，摇匀，以０２２μｍ微孔滤膜滤
过，各标准溶液分别无分流进样５μＬ，在前述色谱
条件下分析。以对照品峰面积与内标物峰面积比
（Ｘ）为横坐标，以对照品进样量质量浓度（ｍｇ·
ｍＬ－１）（Ｙ）为纵坐标，得回归方程为Ｙ＝００５５３Ｘ－
００２６８，ｒ＝０９９９１，结果表明甲基正壬酮在００６～
０４０ｍｇ·ｍＬ－１呈良好线性。
各样品萃取物分别无分流进样５μＬ进行色谱
分析，按回归方程计算，求得各供试品中甲基正壬酮
的含量。
２．３．４ 结果分析 方差分析见表２，３。正交试验
方差分析表明，因素 Ａ（温度）对冻干鲜鱼腥草挥发
油的提取有显著影响，而因素 Ｂ（压力）、因素 Ｃ（时
间）、对冻干鲜鱼腥草提取物的提取无显著影响。
由Ｒｊ得出影响因素大小顺序为 Ａ＞Ｃ＞Ｂ，由此得出
最佳工艺为Ａ１Ｂ１Ｃ１，即在萃取压力为１５０００ｋＰａ、萃
取温度为３５℃的条件下萃取２０ｍｉｎ。
取鱼腥草样品１ｋｇ按照理论最佳工艺Ａ１Ｂ１Ｃ１，
进行扩大重复试验（ｎ＝３），甲基正壬酮的质量浓度
为００８４７ｍｇ·ｍＬ－１，试验结果一致。
表２ 正交试验结果 ｍｇ·ｍＬ－１
Ｎｏ． 甲基正壬酮 Ｎｏ． 甲基正壬酮
１ ００９５６ ６ ００２０４
２ ００５３５ ７ ００１０１
３ ００４６１ ８ ００２０２
４ ００１９８ ９ ０００２７
５ ０００７４
表３ 方差分析表
方差来源 离均差平方和 自由度 方差 Ｆ Ｐ
Ａ ０００５４ ２ ０００２６８ ５４ ＜００５
Ｂ ００００６ ２ ００００２９ ６
Ｃ ０００１０ ２ ００００５０ １０
误差 ００００１ ２ ０００００５
注：Ｆ００５（２２）＝１９００，Ｆ００１（２２）＝９９
２．４ 冻干鲜鱼腥草提取物的ＧＣＭＳ分析
取过４０目筛的冷冻干燥样品约１ｇ，按正交试
验优选超临界 ＣＯ２流体萃取的最佳条件提取，得到
提取液，在前述色谱条件下分析，经计算机检索（质
谱数据库ＮＩＳＴ１４７，ＮＩＳＴ２７）及人工解析质谱并与标
准图核对，用峰面积归一化法定量测出它们的相对
含量，结果见表４。
表４ 冻干鲜鱼腥草提取物的化学成分组成
峰号 化合物 分子式
相对分
子质量
相对含量
／％
１ α水芹烯 αｐｈｅｌａｎｄｒｅｎｅ Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ００８
２ α蒎烯 αｐｉｎｅｎｅ Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ０８４
３ 莰烯 ｃａｍｐｈｅｎｅ Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ００２
４ β水芹烯 βｐｈｅｌａｎｄｒｅｎｅ Ｃ１０Ｈ１６ １３６ １８４４
５ β蒎烯 βｐｉｎｅｎｅ Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ２４８
６ β月桂烯 βｍｙｒｃｅｎｅ Ｃ１０Ｈ１６ １３６ １３９５
７ １甲基４（１甲基亚乙基）环 Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ００９
己烯１ｍｅｔｈｙｌ４（１
ｍｅｔｈｙｌｅｔｈｙｌｉｄｅｎｅ）ｃｙｃｌｏｈｅｘｅｎｅ
８ β百里香素 βｃｙｍｅｎｅ Ｃ１０Ｈ１４ １３４ ２２３
９ β萜品烯 βｔｅｒｐｉｎｅｎｅ Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ００３
１０ 柠檬烯 ｌｉｍｏｎｅｎｅ Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ００５
１１ ３，７二甲基１，３，６辛三烯 Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ７９
３，７ｄｉｍｅｔｈｙｌ１，３，６ｏｃｔａｔｒｉｅｎｅ
１２ 罗勒烯 ｏｃｉｍｅｎｅ Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ００２
１３ 萜品烯４醋酸酯 Ｃ１２Ｈ２０Ｏ２ １９６ １５２
ｔｅｒｐｉｎｅｎｅ４ａｃｅｔａｔｅ
１４ 水合香桧烯 ｓａｂｉｎｅｎｅｈｙｄｒａｔｅ Ｃ１０Ｈ１８Ｏ １５４ ００６
１５４蒈烯４ｃａｒｅｎｅ Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ００７
１６ 桉叶素 ｃｉｎｅｏｌｅ Ｃ１０Ｈ１８Ｏ １５４ ００５
１７ 萜品醇 βｔｅｒｐｉｎｅｏｌ Ｃ１０Ｈ１８Ｏ １５４ ０１３
１８ １甲基４（１甲基乙基） Ｃ１０Ｈ１８Ｏ １５４ ００６
２环己烯醇１ｍｅｔｈｙｌ４（１
ｍｅｔｈｙｌｅｔｈｙｌ）２ｃｙｃｌｏｈｅｘｅｎ１ｏｌ
１９ ４甲基１（１甲基乙基）３ Ｃ１０Ｈ１８Ｏ １５４ ８６９
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Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ ３
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００７
续表４
峰号 化合物 分子式
相对分
子质量
相对含量
／％
环己烯醇４ｍｅｔｈｙｌ１（１
ｍｅｔｈｙｌｅｔｈｙｌ）３ｃｙｃｌｏｈｅｘｅｎ１ｏｌ
２０ 壬醇１ｎｏｎａｎｏｌ Ｃ９Ｈ２０Ｏ １４４ ００４
２１３环己烯１甲醇 Ｃ１０Ｈ１８Ｏ １５４ ００２
３ｃｙｃｌｏｈｅｘｅｎｅ１ｍｅｔｈａｎｏｌ
２２ 正癸醛 ｄｅｃａｎａｌ Ｃ１０Ｈ２０Ｏ １５６ １０４６
２３ 十八（烷）醛 ｏｃｔａｄｅｃａｎａｌ Ｃ１８Ｈ３６Ｏ ２６８ ００１
２４ 乙酸龙脑酯 ｂｏｒｎｙｌａｃｅｔａｔｅ Ｃ１２Ｈ２０Ｏ２ １９６ ００３
２５ 甲基正壬酮２ｕｎｄｅｃａｎｏｎｅ Ｃ１１Ｈ２２Ｏ １７０ ３５７
２６ 鱼腥草素 ｈｏｕｔｕｙｎｉｎｕｍ Ｃ１２Ｈ２２Ｏ２ １９８ ８５１
２７ 十一醛 ｕｎｄｅｃａｎａｌ Ｃ１１Ｈ２２Ｏ １７０ ００４
２８ 香叶醇乙酸酯 ｇｅｒａｎｙｌａｃｅｔａｔｅ Ｃ１２Ｈ２０Ｏ２ １９６ ０４４
２９ 月桂醛 ｄｏｄｅｃａｎａｌ Ｃ１２Ｈ２４Ｏ １８４ １０８８
３０ 乙酸十二酯 ｄｏｄｅｃｙｌａｃｅｔａｔｅ Ｃ１４Ｈ２８Ｏ２ ２２８ ００５
３１２十三烷酮 ２ｔｒｉｄｅｃａｎｏｎｅ Ｃ１３Ｈ２６Ｏ １９８ ０６
３２ 斯巴醇 ｓｐａｔｈｕｌｅｎｏｌ Ｃ１５Ｈ２４Ｏ ２２０ ００２
３３ α毕橙茄醇 αｃａｄｉｎｏｌ Ｃ１６Ｈ３２Ｏ ２４０ ００２
３４ 十八烷醛 ｏｃｔａｄｅｃａｎａｌ Ｃ１８Ｈ３６Ｏ ２６８ ０１６
３５２十二烷酮 ２ｄｏｄｅｃａｎｏｎｅ Ｃ１２Ｈ２４Ｏ １８４ ００２
３６ 十六酸 ｈｅｘａｄｅｃａｎｏｉｃａｃｉｄ Ｃ１６Ｈ３２Ｏ２ ２５６ ００３
３７９二十碳烯 ９ｅｉｃｏｓｅｎｅ Ｃ２０Ｈ４０ ２８０ ００１
３８ 叶绿醇 ｐｈｙｔｏｌ Ｃ２０Ｈ４０Ｏ ２９６ ０９２
３ 讨论
鱼腥草挥发油的提取工艺研究以往均以出油率
为指标，本研究首次用其提取物中有效成分之一甲
基正壬酮含量为指标，考察确定了超临界 ＣＯ２流体
萃取冻干鲜鱼腥草的最佳条件，所得工艺能够有效
保证挥发油的质量。
对鱼腥草的研究和开发利用，大都用鱼腥草干
品或提取挥发油制成注射剂。而鱼腥草的有效成分
鱼腥草素（癸酰乙醛）极不稳定，易氧化聚合［９］，致
使鱼腥草及其制剂质量不稳定，影响临床疗效。本
研究首次用冷冻干燥方法对冻干鲜鱼腥草进行保鲜
处理，提高了有效成分的含量，为研制开发能保留鱼
腥草性、质、气、味的鲜药产品奠定基础。
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ｆｒｅｓｈＨｏｕｔｕｙｎｉａｃｏｒｄａｔａａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌｂｙＧＣＭＳ
ＭＥＮＧＪｉａｎｇ１，２，ＤＯＮＧＸｉａｏｐｉｎｇ３，ＺＨＯＵＹｉｓｈｅｎｇ２，ＪＩＡＮＧＺｈｉｈｏｎｇ１，ＫｅｌｖｉｎＳｚｅＹｉｎＬｅｕｎｇ１，ＺＨＡＯＺｈｏｎｇｚｈｅｎ１
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅｏｆＨｏｎｇＫｏｎｇＢａｐｔｉｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＨｏｎｇＫｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ；
２．ＧｕａｎｇＤｏｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１００００，Ｃｈｉｎａ；
３．ＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００８１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｄｕｒｅｏｆｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌｆｒｏｍＨｃｏｒｄａｔａｕｓｉｎｇｔｈｅＳＦＥＣＯ２ａｎｄａｎａｌｙｚｅｔｈｅ
ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｄｕｒｅｏｆｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌｆｒｏｍｆｒｅｓｈＨｃｏｒｄａｔａｗａｓｏｐｔｉｍｉｚｅｄｗｉｔｈ
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ｇｕａｒａｎｔｅｅｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＳＣＣＯ２；ｆｒｅｓｈＨｏｕｔｕｙｎｉａｃｏｒｄａｔａ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ；ＧＣＭＳ ［责任编辑 鲍 雷］
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