全 文 ：¤±§·² √¨¤¯∏¤·¨·«¨ ¬µ° ¦¨«¤±¬¶°q Μετηοδ : „©·¨µµ¤·¶º µ¨¨ ¶¨±¶¬·¬½¨ §¥¼ ²√¤¯¥∏°¬± ¤±§¦«¤¯¯¨ ±ª¨ §¥¼ ·«¨ ¤±·¬ª¨ ±o ¥µ²±¦«¬¤¯ ³µ²√²¦¤2
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[ Κεψ ωορδσ] ¤¶·«°¤~ ¤¬µº¤¼ «¼³¨ µµ¨¶³²±¶¬√ ±¨ ¶¨¶~ ≤⁄wn o ≤⁄{n ~ ≥¦¤³¶∏¯¨
≈责任编辑 刘  
≈收稿日期   ussy2st2us
≈基金项目   重庆市重大科技专项资助项目 k渝科发计字
ussw2uz号 l
≈通讯作者   3 李惠芝 oר¯}ksuvly{w{xzuzoƒ¤¬}ksuvly{w{x2
vz{o∞2°¤¯}½²±ª¼¬±ƒ ¶²«∏q¦²°
茅莓提取物对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞
凋亡及其相关蛋白表达的影响
王继生 o李惠芝 3 o邱宗荫 o夏永鹏 o任凌燕
k重庆医科大学 药学院 o重庆 wssstyl
≈摘要   目的 }探讨茅莓提取物 k• °l对缺血性脑损伤的神经保护机制 ∀方法 }采用大鼠大脑中动脉阻塞造成
局灶性脑缺血 u «再灌注 uw «模型 oט‘∞标记和免疫组化的方法观察茅莓提取物 xots ª# ®ªpt ¬ª对神经细胞凋
亡数目及其相关蛋白 …¦¯2uo…¤¬表达的变化 ∀结果 }茅莓提取物 xots ª# ®ªpt显著抑制神经细胞凋亡 o增加 …¦¯2u
阳性细胞的表达 o降低 …¤¬阳性细胞的表达 o…¦¯2ur…¤¬的表达比例增加 ∀结论 }茅莓提取物抗凋亡机制可能与增加
…¦¯2u阳性细胞的表达 o降低 …¤¬阳性细胞的表达 o提高 …¦¯2ur…¤¬有关 ∀
≈关键词   脑缺血 r再灌注 ~茅莓提取物 ~细胞凋亡 ~…¦¯2u~…¤¬~…¦¯2ur…¤¬
≈中图分类号   • u{xqx ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszlsu2stvs2sv
茅莓为蔷薇科植物茅莓 Ρυβυσ παρϖιφλολιυσq的
茎叶 ∀ 5本草拾遗 6记载 o具有止血活血 !散瘀定痛 !
清热解毒之功效 o可内服 !外敷 ∀以往用于治疗吐
血 !跌打刀伤 !产后瘀滞腹痛 !痢疾 !痔疮 !疥疮等 o民
间还用其根治疗女性月经过多症 ≈t  ∀已有研究表
明茅莓提取物对脑缺血有很好的保护作用 ∀其作用
机制可能与 ‹≥°zs表达增加有关 ≈u  o本实验采用大
鼠局灶性脑缺血再灌注模型 o观察茅莓提取物脑缺
血神经细胞凋亡及其相关蛋白表达的影响 o探讨对
缺血性脑损伤的神经保护机制 ∀
1 材料和方法
1q1 药品和试剂 茅莓提取物 k• °o重庆医科大学
药物分析实验室 l∀ ט‘∞试剂盒 k美国 • ²¦«¨ 公
司 l~…¦¯2uo…¤¬抗血清 o≥„…≤o⁄„…显色试剂盒 k北
京中杉 l~其他试剂均为国产 „• 纯 ∀
1q2 动物 ≥⁄大鼠 o雄性 o体重 kvss ? usl ªo购于
第三军医大学大坪医院动物中心 o合格证号 ≥≤÷Ž
k渝 lussussvo清洁级 ∀
1q3 大鼠局灶性脑缺血模型 k „≤’l制备 按  ¤¨
²±ª¤≈v 略有改进 o将大鼠用 v1xh水合氯醛 ts °#
®ªpt腹腔注射麻醉 o仰位固定后手术 o制成右侧大脑中
动脉脑缺血模型∀大鼠在手术后约 s1x «清醒 o观察其
神经功能缺失症状 o并进行评分 ∀以动物清醒后爬行
时向左转圈 k追尾现象 lo严重时向左跌倒 o提尾时左前
肢内收屈曲为入选标准 ∀假手术组除不插线外 o其余
步骤同上 o缺血 u «后拔掉线栓 o再灌注 uw «∀
1q4 分组及给药方法 实验动物随机分为 w组 }模
型组 o假手术组 o • ° xots ª# ®ªpt处理组 o各给药组
#svt#
第 vu卷第 u期
ussz年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ u
¤±∏¤µ¼o ussz
均于  „≤’前 v §灌胃给药 o每天 t次 ∀于第 v §
给药后 t «手术 o模型组灌等量的生理盐水 o假手术
组不插入尼龙线 o其余操作相同 ∀
1q5 标本制备 大鼠于缺血 u «再灌注 uw «后 o将
其麻醉 o开胸经心脏灌流生理盐水 o然后以 wh多聚
甲醛灌流固定 o断头取脑 ∀弃小脑 o在视交叉后 t ∗ w
°°取脑片 o作脑组织冠状连续切片 tu张 o片厚 x
Λ°o一部分用于凋亡细胞检测 o一部分用于免疫组
化 ∀采用 ט‘∞法原位标记 ⁄‘„片段检测凋亡细
胞 o⁄„…呈色 ∀免疫组织染色用 ≥„…≤法 o⁄„…呈
色 ∀结果采用 …¬²°¬¤¶图象分析仪 o每张切片采集缺
血周边区具有代表性的 ts个高倍视野 o计算平均数 ∀
1q6 统计处理 实验采用 ≥°≥≥ts1s软件进行数据
分析 o数据以 cξ ? σ表示 ~多个样本均数的两两比较
采用 ´检验 oΠ  s1sx为有显著性差异 ∀
2 结果
2q1 ט‘∞标记结果 缺血组对侧仅见数个阳性
细胞散在分布 o缺血侧可见大量黄棕色阳性细胞 o以
圆形为主 o还有三角形或弯月形染色 ∀阳性细胞主
要分布缺血周边区 o比较缺血周边区阳性细胞的数
目 o以阳性细胞数来衡量 ⁄‘„受损程度 ∀模型组与
假手术组比较 o阳性细胞数明显增多 o差异非常显著
kΠ s1stl∀ • ° x ª# ®ªpt组较模型组 o其 ט‘∞
阳性细胞数减少 o差异显著 kΠ  s1sxl∀ • ° ts ª#
®ªpt组较模型组 o其 ט‘∞阳性细胞数明显减少 o
差异有非常显著意义 kΠ s1stlk图 to表 tl∀
图 t 各组凋亡细胞 k ≅ ussl
„q模型组 ~ …q• ° x ª# ®ªpt组 ~ ≤q• ° ts ª# ®ªpt组
表 t 大鼠脑缺血 u «再灌注 uw «缺血周边区
ט‘∞阳性细胞数 kcξ ? σoν € yl
组别 剂量 rª# ®ªpt ט‘∞阳性细胞数 r个
假手术 p v1us ? t1ys
模型 p z{1xu ? tt1vztl
• ° x yu1vx ? ut1u{ul
ts wv1xw ? |1{zvl
注 }与假手术组比 tl Π  s1sx~与模型组比 ul Π  s1sxovl Π  s1st
2q2 …¦¯2uo…¤¬在同侧皮层的表达 在脑组织切片
中 o…¦¯2uo…¤¬阳性表达表现为胞浆棕黄色深染 ∀假
手术组未见 …¦¯2uo…¤¬阳性表达 o模型组和受试药
物组非缺血侧脑半球除少数室管膜细胞染色阳性
外 o其余未见明显染色 ∀而模型组和受试药组缺血
侧脑半球缺血区和周边区损伤的神经元和未损伤的
神经元 …¤¬都有不同程度的表达 ∀ …¦¯2u在缺血中
心区几乎无表达 o在周边区损伤的神经元和未损伤
的神经元都有不同程度的表达 ∀由于 …¦¯2u在缺血
中心区几乎无表达 o只有 …¤¬大量表达 o而在周边区
皮层 …¦¯2u和 …¤¬都有表达 o故只比较两者在皮层
的表达变化 o以阳性细胞数进行统计 ∀模型组与假
手术组比较 o阳性细胞数明显增加多 o差异非常显著
kΠ  s1stl∀ • ° x ª# ®ªpt组较对照组 …¦¯2u阳性
细胞增多 o…¤¬阳性细胞减少 o差异显著 kΠ s1sxl∀
• ° tsª# ®ªpt组较对照组 …¦¯2u阳性细胞明显增多 o
…¤¬阳性细胞明显减少 kΠ s1stlk表 ul∀
表 u 大鼠  „≤’ uw «缺血边区 …¦¯2uo…¤¬阳性细胞数及
…¦¯2ur…¤¬kcξ ? σoν € yl
组别
剂量
rª# ®ªpt
…¦¯2u
r个
…¤¬
r个 …¦¯2ur…¤¬
假手术 p t1x{ ? s1tz t1yx ? s1ut s1|x ? s1{s
模型 p uz1yu ? v1twtl vy1yw ? z1sxtl s1zx ? s1wt
• ° x vu1x{ ? v1y{ul vw1{z ? {1t{ul t1uv ? s1wuul
ts wv1sy ? v1wxvl ut1yv ? w1{vvl t1xs ? s1zyvl
注 }与假手术组比 tl Π  s1st~与模型组比 ul Π  s1sxovl Π 
s1st
3 讨论
本实验的结果显示 o…¦¯2u蛋白在正常大鼠大脑
组织中几乎没有表达 o但在缺血再灌注后 o…¦¯2u蛋
白则出现表达 o这是机体对抗凋亡的一种反应 ∀据
报道在大脑中动脉栓塞所致的局灶性脑缺血后 o用
分子生物学方法增加脑内的 …¦¯2u的表达 o可减少
神经细胞的凋亡 o提示 …¦¯2u在缺血性脑损伤的病
理发生中可能起内源性保护作用 ≈w  ∀ …¦¯2u基因所
编码的膜相关蛋白是一种强有力的细胞死亡抑制因
#tvt#
第 vu卷第 u期
ussz年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ u
¤±∏¤µ¼o ussz
子 ∀以往的研究表明 …¦¯2u基因家族在细胞凋亡过
程中起着重要作用 ≈x  ∀ …¦¯2u基因的表达及其蛋白
增加可抑制细胞凋亡 o提高细胞存活能力 ≈y  ∀治疗
组大鼠脑组织 …¦¯2u蛋白的表达明显高于模型组 ∀
说明 • °可能通过上调 …¦¯2u蛋白的表达从而对脑
缺血再灌注所造成的损伤起到一定的保护作用 ∀
…¤¬基因所编码的膜相关蛋白是一种强有力的细胞
死亡促进因子 ∀ …¤¬增高 o促进细胞凋亡并抑制
…¦¯2u的抗凋亡作用 ≈z  ∀治疗组大鼠脑组织 …¤¬蛋
白的表达明显低于模型组 o说明 • °可能通过下调
…¤¬蛋白的表达从而对脑缺血再灌注所造成的损伤
起到一定的保护作用 ∀ …¦¯2ur…¤¬在中枢神经细胞
凋亡中起关键作用 ∀细胞凋亡的发生还与 …¦¯2ur
…¤¬有关 o比值高 o细胞存活率高 ~比值低 o细胞存活
率低 ∀测定 …¦¯2ur…¤¬有利于判断是否发生凋
亡 ≈{  ∀本研究观察到 • °组中 o…¦¯2u蛋白表达阳性
细胞数增加 o而 …¤¬的蛋白阳性细胞数下降 o…¦¯2ur
…¤¬值增加 ∀说明 • °可能通过上调 …¦¯2ur…¤¬比
值而对脑缺血再灌注所造成的损伤起到一定的保护
作用 ∀
≈参考文献  
≈t  朱志华 o张惠勤 o袁永军 q茅莓的药理研究 ≈ q中国中药杂志 o
t||sotxkzl}wvq
≈u  郑永玲 o胡常林 q茅莓提取物对局灶性脑缺血的实验研究 ≈ q
中医药研究 oussuot{kul}vzq
≈v  ≥ µ¨·¨¶¨µ o ’½¥¨ ± ×o Š∏°∏¶¯∏≥o ·¨¤¯q ׫¨ ©¨©¨¦·¶²©‘ ⁄„ µ¨2
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≈y  ≤«µ¬¶·¨¯¯¨ Šo Œµ¨±¨ ≤ °o „±±¬¨ ‘o ·¨¤¯q • ¦¨µ∏¬·° ±¨·²©¶¨√ µ¨¤¯
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≈ q ∞¬³ ‘¨ ∏µ²¯o t||{otxwkul}vztq
≈z  催 旭 o韩文涛 o刘宪霜 q°„∂ „°对老年大鼠脑缺血再灌注神
经元损伤及  受体的影响 ≈  q中国药理学通报 ousswous
kwl}wu|q
≈{  何泽云 o屈 波 o李晓峰 q参麦注射液对脑出血大鼠神经细胞
凋亡相关基因表达影响的实验研究 ≈ q中国中药杂志 ousswo
u|ktul}ttysq
Εφφεχτσ οφ Ρυβυσ παρϖιφλολιυσ ον νευροναλαποπτοσισανδ εξπρεσσιον οφ
αποπτοτσισ ρελατεδ προτειν ιν ρατ αφτερ λοχαλχερεβραλισχηεµ ιχ2ρεπερφυσιον
• „‘Š ¬2¶«¨ ±ªo Œ‹∏¬2½«¬o ± Œ˜ ²±ª2¼¬±o ÷ Œ„ ≠ ²±ª2³¨ ±ªo • ∞‘¬±ª2¼¤±
(∆επαρτµ εντ οφ Πηαρµ αχψ, Χηονγθινγ Υνιϖερσιτψ οφΜεδιχαλΣχιενχε, Χηονγθινγ wsssty, Χηινα)
[ Αβσταχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¬¨³¯²µ¨ ·«¨ ° ¦¨«¤±¬¶° ²©± µ¨√ 2¨³µ²·¨¦·¬±ª ©¨©¨¦·¶²©Ρυβυσπαρϖιφλολιυσk• °l ²± ¬¶¦«¨ °¬¦¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬±2
­∏µ¼q Μετηοδ : ׫¨ °¬§§¯¨¦¨µ¨¥µ¤¯ ¤µ·¨µ¼ º¤¶²¦¦¯∏§¨ §©²µu «·² µ¨¶∏¯·¬± ·«¨ ©²¦¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¦©²¯ ²¯º §¨¥¼ µ¨³¨ µ©∏¶¬²± ²©uw «q ט‘∞
¤¯¥¨ ¬¯±ª¤±§¬°°∏±²«¬¶·²¦«¨ °¬¦¤¯ ° ·¨«²§¶º µ¨¨ ∏¶¨§·²¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨¦«¤±ª¨ ¶²©± ∏¨µ²±¤¯ ¤³²³·²¶¬¶¤±§ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©·«¨ ¤³²³·²¶¬¶2µ¨ ¤¯·2
§¨³µ²·¨¬±¶¤©·¨µ¤§°¬±¬¶·µ¤·¬²± ²©• °q Ρ εσυλτ: • ° §¨ ¦µ¨¤¶¨§·«¨ ¤³²³·²¶¬¶²©± ∏¨µ¤¯ ¦¨ ¯¯¶o ·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©…¤¬ ³²¶¬·¬√¨¦¨¯¯¶¬± ·«¨
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¬·¬√¨¦¨¯¯¶º¤¶¬±¦µ¨¤¶¨§°²µ¨ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¤¶¦²°³¤µ¨ º¬·«·«¨ ¦²±·µ²¯ ªµ²∏³ kΠ  s1sxo Π  s1stl~ …¦¯2ur…¤¬ ¬¨³µ¨¶¶¬²± µ¤·¬² º¤¶
¬±¦µ¨¤¶¨§°²µ¨ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¤¶¦²°³¤µ¨ º¬·«·«¨ ¦²±·µ²¯ ªµ²∏³kΠ  s1sxo Π  s1stlq Χονχλυσιον: • ° «¤¶¤¦·¬²± ²©µ¨¶¬¶·¬±ª± ∏¨µ²±¤¯
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³µ¨¶¶¬²± ¤±§¬±¦µ¨¤¶¨§…¦¯2ur…¤¬ ¬¨³µ¨¶¶¬²± µ¤·¬²q
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