全 文 ：黔南小花清风藤中齐墩果酸的提取工艺
刘易蓉 3 o张永萍 o梁光义 o徐 剑
k贵阳医学院 附属医院 o贵州 贵阳 xxssstl
≈收稿日期 ussy2sv2s|
≈通讯作者 3 刘易蓉 o ר¯ } tvs{z{xt{{{ o ∞2°¤¬¯}¬¬¤º¤µ
·²°1¦²°
小花清风藤 Σαβια παρϖιφλορα • ¤¯¯ 1 ¬¨ ²¬¥为清
藤科清风藤属藤本植物 o主要分布于云南 !广西 !贵
州等地≈t ∀贵州产小花清风藤为布依族 !苗族的民
间药 o有清热利湿 !祛风止痛的功效≈u ∀经研究证
明 o齐墩果酸是其有效成分之一≈v ∀据文献报道 o具
有保肝 !降酶 !抗炎 !强心 !利尿 !免疫和抗癌作用 ∀
小花清风藤是贵州少数民族地区治疗肝炎的有效药
物之一 ∀作者以齐墩果酸为考察指标 o对提取工艺
进行了研究 o采用高效液相色谱法测定其含量 o现报
道如下 ∀
1 仪器与材料
日本岛津 ≤ p usts型高效液相色谱仪 o≤ p
¶²¯∏·¬²±色谱数据工作站 ∀小花清风藤采于贵州黔
南地区 o经本院生药研究室刘凡教授鉴定为 Σ1
παρϖιφλορα∀齐墩果酸对照品购自中国药品生物制品
检定所k批号 ttszs|2ussvswl ∀水为超纯水 o其他试
剂为分析纯 o甲醇为色谱纯 ∀
2 方法与结果
2 q1 提取工艺考察
2 q1 q1 色谱条件 ≥«¬° p ³¤¦® ∂° p ⁄≥ 色谱柱
kw1y °° ≅ uxs °° ox Λ°l ~流动相甲醇2水2冰醋酸2三
乙胺k{zΒtvΒs1swΒs1sul o用前超声脱气处理 ~检测
波长 uts ±° ~流速 t1s °#°¬±pt ~柱温 vs ε ∀
2 q1 q2 系统适用性实验 分别取对照品溶液 o供试
品溶液和阴性样品溶液 ts Λ注入色谱仪 o理论塔
板数以齐墩果酸峰计算不低于 t万 o齐墩果酸的保
留时间为 tz1v °¬±o阴性样品在相应的位置无干扰 o
见图 t ∀
211 q3 对照品溶液制备 精密称取齐墩果酸对照
品 x1y °ª置于 ux °量瓶中 o加入甲醇溶解 o配成
s1uuw °ª#°pt的对照品溶液 ∀
2 q1 q4 提取工艺 对小花清风藤中齐墩果酸的提
图 t 小花清风藤 °≤图
1对照品 ~
1样品 ~t1 齐墩果酸
取条件采用两步正交试验进行优选 o采用表 |kvwl
进行设计 o第一步正交试验以乙醇体积分数 !提取次
数 !回流提取时间作为考察因素 o第二步正交试验以
盐酸浓度 !盐酸用量 !回流水解的时间为考察因素 ∀
以齐墩果酸的含量作为考察指标 ∀见表 t ou ∀
表 t 第一步因素水平
水平
Α
乙醇
/ %
Β
提取次数
Χ
提取时间
r«
∆
空白
t xs t t
u zs u u
v |s v v
表 u 第二步因素水平
水平
Α
盐酸浓度
/ %
Β
盐酸用量
/倍数
Χ
空白
∆
提取时间
/ «
t tx t u
u us u v
v ux v w
实验安排与结果见表 v ow ∀
通过方差分析 o第一步正交实验因素的最佳水
平选取为 Αu Βu Χt ,第二步正交实验因素最佳水平选
取为 Αt Βu ∆v o合并两步正交试验结果所得出小花清
风藤中齐墩果酸的最佳提取条件为 }精密称取药材
小花清风藤粉末 u1s ªo用 zs h的乙醇溶液 {s °回
流提取 u次 o每次为 t «o合并提取液浓缩至 ws °o
加入 tx h的 ≤¯ ku倍量l{s °o水浴回流水解 w «o
#vzvt#
第 vt卷第 ty期
ussy年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt o¶¶∏¨ ty
∏ª∏¶·oussy
表 v 正交试验结果
试验号 齐墩果酸含量r h第一步 第二步
t s1uw{ s1uy|
u s1u{u s1vt|
v s1uvs s1vtt
w s1uuw s1vwu
x s1vxw s1ux|
y s1uws s1u{y
z s1ss| s1usx
{ s1uy{ s1uxw
| s1syx s1sx|
表 w 正交试验方差分析
方差来源 离均差 平方和 自由度 均方 Φ Π
第一步 Α s1v|| u s1uss t1tsx s1sx
Β s1v{| u s1t|x t1s{ s1sx
Χ s1vyt u s1t{t t1ss s1sx
误差 s1vyt u s1t{t
第二步 Α s1svt v u s1stx z uu1wv s1sx
Β s1ssy v u s1ssv u w1xz
∆ s1st{ s u s1ss| tu1{y s1ts
误差 s1sst w u s1sss z
加 t倍量水 o蒸去部分乙醇 o用 ≤≤¯ v萃取 w次 o每次
ts °o合并氯仿层 o浓缩至干≈w o用甲醇溶解 o定容
于 ts °的量瓶中 ∀精密吸取一定量 o以 s1wx Λ°
的滤膜过滤 o配成样品的供试溶液 o弃去初滤液 o留
续滤液备用 ∀
2 q2 含量测定
色谱条件及对照品 !供试品溶液制备同 211项 ∀
2 q2 q1 线性关系考察 分别精密配制 s1s{| y o
s1tvw w os1tz| u os1uuw s os1uy{ { os1vtv y os1vx{ |
°ª#°pt的齐墩果酸对照品溶液 o分别精密量取 ts
Λo进样 o测定结果 ∀以齐墩果酸对照品溶液的质
量浓度 Ξk°ª#°ptl为横坐标 o色谱峰峰面积值 Ψ
为纵坐标 o回归方程为 Ψ z1yu{t ≅ tsw Ξ n v1w|v ≅
tsv , ρ s1||| | o线性范围 s1s{| y ∗ s1vx{ | °ª#
°pt ∀
2 q2 q2 精密度试验 精密吸取对照品溶液 ts Λo
连续进样 x次 o测得齐墩果酸的面积积分值 o计算 o
≥⁄u1v h o表明精密度良好 ∀
2 q2 q3 稳定性试验 精密吸取供试品溶液 ts Λo
隔 t «进样 t次 o共进样 x次 o测得齐墩果酸的面积
积分值 ∀结果 ≥⁄u1t h o说明齐墩果酸在 x «内稳
定 ∀
2 q2 q4 重复性试验 精密称取小花清风藤粉末 x
份 o制备样品溶液 o再分别精密吸取 ts Λo进样 o测
定齐墩果酸的含量 o ≥⁄ t1s h o说明本方法重复性
良好 ∀
2 q2 q5 加样回收率试验 取已知含量kv1uvs °ª#
ªptl的小花清风藤药材粉末 |份 o分别加入齐墩果
酸对照品适量 o依法测定 o计算 o结果见表 x ∀
表 x 齐墩果酸加样回收率k ν vl
样品中含量
r°ª
加入量
r°ª
测定量
r°ª
回收率
r h
平均值
r h
≥⁄
r h
v1wxx t1xy{ s x1sww tst1u tsu1w t1x
v1v|| x1svu tsw1t
v1wxw x1sxu tst1{
v1uvu u1|u{ y y1swu |x1| |{1z u1x
v1u{x y1utw ||1|
v1www y1v{{ tss1x
v1uv| v1|sw { z1u|z tsv1|s tsu1t t1s
v1uuv z1txz tss1zx
v1uvx z1usx tst1yy
结果表明本方法回收率较好 o方法可行 ∀
3 结果与讨论
在本实验的色谱条件的确定中 o根据文献报道 o
齐墩果酸的紫外吸取特征 Κ°¤¬为 usz ±° o作者选用
uts ±°为检测波长 o可减少低波长时较多紫外吸收
的干扰 o提高信噪比 ∀
对于流动相的选择 o作者比较了几种不同比例
的流动相 o分别为甲醇2水2冰醋酸2三乙胺k|sΒtvΒ
s1suΒs1stl ok{{ΒtuΒs1suΒs1sul o k{zΒtvΒs1swΒ
s1sul o其中甲醇2水2冰醋酸2三乙胺k{zΒtvΒs1swΒ
s1sul分离出齐墩果酸峰形最好 o与其他众多杂质的
分离效果最佳 o故确定为本实验的流动相 ~流动相中
增加适量的冰醋酸和三乙胺可改善峰形 o同时有利
于齐墩果酸的分离 ∀
从第一步正交试验结果得知 o提取因素水平对
结果影响不大 o但从 Ρ 值可看出 o用 zs h乙醇提取
时 o齐墩果酸的含量较高 ~第二步正交试验中改变提
取条件k盐酸浓度等l o试验结果有了显著差异 o说明
了齐墩果酸在该植物中主要以苷类的形式存在 o经
过酸水解为游离形式 ∀本实验曾采用某些文献报道
中所采用超声提取的方法 o结果与回流提取的方法
相比 o其齐墩果酸的得率较少 o因此 o证明了采用本
方法提取小花清风藤中的齐墩果酸是可行的 ∀
≈参考文献
≈t 贵州植物志编辑委员会 q贵州植物志 q第 x卷 1 成都 }四川民族
出版社 ot|{{ }v| q
≈u 李朝斗 q贵州清风藤科入药植物 q中药通报 ot|{z otuk{l }wxt q
≈v 陈 谨 o邓 斌 o唐天君 q小花清风藤三萜成分的研究 o中草
药 oussw ovxktl }ty q
≈w 刘学湘 o陈建伟 q牛膝中齐墩果酸提取工艺的研究 q中国实验方
剂学杂志 ousst owkul }x q ≈责任编辑 鲍 雷
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第 vt卷第 ty期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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