全 文 ：高效液相色谱质谱联用分析鉴别葛根的异黄酮成分
李晓明１，２，杨 滨１，黄璐琦１
（１．中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００；
２．澳门科技大学，澳门）
［收稿日期］ ２００７０７１９
［通讯作者］ 黄璐琦，Ｔｅｌ：（０１０）６４０１４４１１２９５５，Ｅｍａｉｌ：
ｈｕａｎｇｌｕｑｉ＠２６３ｎｅｔ
葛根为豆科植物野葛 Ｐｕｅｒａｒｉａｌｏｂａｔａ（Ｗｉｌｄ．）
Ｏｈｗｉ的干燥根茎，为常用中药［１］，有解肌退热、生
津、透疹、升阳止泻的功能；异黄酮类和多酚类是其
主要化学成分，已发现的异黄酮类成分有：大豆苷
元４′，７二葡萄糖苷［２］、３′羟基葛根素（ＰＧ１）、３′
甲氧基葛根素（ＰＧ３）［２］、３′羟基葛根素４′Ｏ脱氧
己糖苷、３′甲氧基葛根素木糖苷、３′甲氧基大豆苷
元、大豆苷元７Ｏ甲醚、３′甲氧基大豆苷元７Ｏ甲
醚、３′甲氧基刺芒柄花素、３′甲氧基大豆苷、鹰嘴豆
芽素Ａ［３］、葛根素、葛根素７木糖苷、葛根素木糖苷
（ＰＧ２）［４］、葛根素４′ＯβＤ葡萄糖苷（ＰＧ６）［５］、大
豆苷、大豆苷元［６］、刺芒柄花素７ＯβＤ葡萄糖
苷［７］、刺芒柄花素、大豆苷元８Ｃ芹糖基（１→６）葡
萄糖苷、染料木素８Ｃ芹糖基（１→６）葡萄糖苷、染
料木苷、金雀异黄素、染料木素８Ｃ葡萄糖苷［８］、６″
Ｏ丙二酸单酰大豆苷、３′羟基４′ＯβＤ葡萄糖基葛
根素［９］。本研究采用高效液相色谱质谱联用技术
对野葛的异黄酮类成分进行鉴别分析。
１ 仪器与试药
ＬＣＭＳ／ＭＳ（美国 Ｂｒｕｋｅｒ／ＨＰ公司），Ｅｓｑｕｉｒｅ－
ＬＣ－ＭＳ离子阱液 －质联用仪。ＬＣＭＳ（美国 Ｍｉ
ｃｒｏｍａｓｓＬＣＴ质谱仪）。
葛根素（批号１１０７５２２００５１１；供含量测定用）、
大豆苷（批号１１１７３８２００５０１；供含量测定用）、大豆
苷元（批号１５０２２００１０１；供鉴别用），均购自中国药
品生物制品检定所；甲醇为色谱纯，甲酸为分析纯，
水为高纯水。葛根药材为在河南辉县郭亮村采集的
新鲜野葛根，经黄璐琦研究员鉴定为野葛 Ｐ．ｌｏｂａ
ｔａ，药材经自然干燥和粉碎处理。
２ 方法
２．１ 对照品溶液的制备 分别精密称取对照品葛
根素６０ｍｇ、大豆苷１５ｍｇ、大豆苷元１１ｍｇ置同
一５０ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，
即得。
２．２ 供试品溶液的制备 精密称取葛根原粉（４０
目）０２５ｇ置平底烧瓶中，精密加甲醇水（３∶１）２５
ｍＬ，称重，加热回流提取 ３０ｍｉｎ，取出，放冷，再称
重，用甲醇水（３∶１）补足失重，摇匀，过滤，取续滤液
２ｍＬ，置１０ｍＬ量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，０４５
μｍ滤膜滤过，即得。
２．３ 液相色谱仪 Ｗａｔｅｒｓ２６９５ＨＰＬＣ系统，Ｗａｔｅｒｓ
２９９６ＰＤＡ检测器（检测波长２５４ｎｍ）；安捷伦ＴＣＣ１８
色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），柱温３０℃；流动相
为甲醇（Ａ）０１％甲酸水溶液（Ｂ），流速为１ｍＬ·
ｍｉｎ－１。梯度洗脱 ０～３ｍｉｎ，２２％ Ａ；３～１０ｍｉｎ，
２２％～３０％ Ａ；１０～２５ｍｉｎ，３０％ ～３５％ Ａ；２５～３５
ｍｉｎ，３５％ ～５５％ Ａ；３５～４０ｍｉｎ，５５％ ～５８％（Ａ）；
４０～４５ｍｉｎ，５８％ Ａ；４５～５０ｍｉｎ，５８％～２２％ Ａ。
２．４ 质谱条件 电喷雾离子化源，正离子模式检
测。铲削器电压３００Ｖ；毛细管出口补偿电压８００
Ｖ；离子阱驱动４５８；扫描范围ｍ／ｚ１５～１２００；载气
为氦气。
２．５ 测定法 精密吸取供试品溶液１０μＬ，对照品
溶液５μＬ，注入液相色谱仪。
３ 结果与讨论
３．１ 色谱条件的选择 葛根含有大量的多酚、异黄
酮和三萜等类化合物，成分比较复杂，大豆苷元及其
苷类极性相差较大，在用ＨＰＬＣ分离时，仅用等度洗
脱的方法不能得到有效的分离。作者使用甲醇
０１％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，并建立了
液相色谱测定葛根中异黄酮类成分的方法。样品中
葛根素、大豆苷和大豆苷元在４５ｍｉｎ内得到完全的
分离，其他的苷类成分也得到有效的分离。葛根样
品经液相色谱分离后得到１７个色谱峰（图１），其中
峰４，５，１１，１３，１５，１６由于离子化不好，基线干扰较
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第３３卷第１１期
２００８年６月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １１
Ｊｕｎｅ，２００８
大，未取得质谱数据。
图１ 葛根的液相色谱图
３．２ 裂解规律 在质谱图中，碳苷和氧苷很容易鉴
别，葛根素和大豆苷其相对分子质量均为４１６，在本
实验条件下，大豆苷由于糖苷键断裂，脱掉１个葡萄
糖基，得到基峰碎片离子ｍ／ｚ２５５［Ｍ－１６２＋Ｈ］＋，
与大豆苷元的准分子离子峰 ｍ／ｚ２５５［Ｍ＋Ｈ］＋一
致，而其准分子离子峰 ｍ／ｚ４１７［Ｍ＋Ｈ］＋则相对较
弱（相对丰度１２％）；葛根素因为是碳苷键则相对稳
定，则其准分子离子峰ｍ／ｚ４１７［Ｍ＋Ｈ］＋相对较强，
因此，碳苷的断裂另有方式。作者发现在质谱图中，
葛根素有一碎片离子峰 ｍ／ｚ２９７［Ｍ－１２０＋Ｈ］＋，
３′羟基葛根素为 ｍ／ｚ３１３［Ｍ－１２０＋Ｈ］＋，３′甲氧
基葛根素为ｍ／ｚ３２７［Ｍ－１２０＋Ｈ］＋，它们都遵循同
一断裂方式 ［Ｍ－１２０＋Ｈ］＋，这些结果与 Ｒｏｎｇ
等［３］描述的碳苷断裂方式一致。另外，从黄酮与异
黄酮苷元的质谱裂解规律来看，［Ｍ－ＣＯ］也是主要
的裂解方式之一。在异黄酮苷的情况下，如大豆苷
的［Ｍ－ＣＯ］通常发生在脱糖基以后，也就是 ｍ／ｚ
２２７［Ｍ－１９０（１６２＋２８）＋Ｈ］＋，但在苷元的情况下
则未见［Ｍ－ＣＯ］碎片离子峰。
３．３ 各色谱峰的解析与认定 峰 １的一级质谱
（ＭＳ）为 ｍ／ｚ５７９３［Ｍ＋Ｈ］＋；二级质谱（ＭＳ２）为
ｍ／ｚ４５９１，４１７１，３５１１，２９７１，２５５１，从ＭＳ２看，此
化合物应为碳苷。因此，确认该成分为葛根素４′Ｏ
Ｄ葡萄糖苷。
峰２ ＭＳ为ｍ／ｚ５７９３［Ｍ＋Ｈ］＋；其ＭＳ２为ｍ／
ｚ４１７１，２５５１，与峰１不同，此 ＭＳ２图比较简单，没
有［Ｍ－１２０＋Ｈ］＋，确认此成分应为大豆苷元４′，７
二葡萄糖苷。
峰３ ＭＳ为 ｍ／ｚ４３３１［Ｍ＋Ｈ］＋；ＭＳ２为 ｍ／ｚ
４１５１，３９７１，３７９１，３６７１，３５１１，３１３１，２９４９，
２８３１，其中 ３１３１符合［Ｍ－１２０＋Ｈ］＋规律。因
此，该成分应为碳苷，经过比对已报道的色谱数
据［３］，确认此化合物应为３′羟基葛根素。
峰６ ＭＳ为 ｍ／ｚ４１７３［Ｍ＋Ｈ］＋；ＭＳ２为 ｍ／ｚ
３９９１，３８１１，３６３１，３５１１，３３５１，３２１，３０７，２９７１，
２６７，其中２９７１符合［Ｍ－１２０＋Ｈ］＋规律，而且紫
外光谱图、质谱图与对照品葛根素的一致。因此，确
认此化合物为葛根素。
峰７ ＭＳ为 ｍ／ｚ４４７３［Ｍ＋Ｈ］＋；ＭＳ２为 ｍ／ｚ
４２９３，４１１１，３９３１，３８１１，３６５１，３５１１，３３７１，
３２７１，３０８１，２９７１，此化合物也为碳苷，比对已报道
的色谱数据［３］，确认此化合物是３′甲氧基葛根素。
峰８ ＭＳ为 ｍ／ｚ５４９３［Ｍ＋Ｈ］＋；ＭＳ２为ｍ／ｚ
４１７１，３９９１，３８１１，３６３１，３５１１，３３５１，３２１，３０７，２９７１，
２６７。确认它的结构应是葛根素７木糖苷。
峰９ ＭＳ为ｍ／ｚ５４９３［Ｍ＋Ｈ］＋；其ＭＳ２为ｍ／
ｚ４１７１，３９９１，３８１１，３６３１，３５１１，３３５１，３２１，
３０７，２９７１，２６７，２５３，峰９与峰８不同之处在于前者
的ＭＳ２多了２５３这个碎片离子，因此该结构与峰９
不同。ｍ／ｚ２５３碎片离子的出现说明五碳糖是直接
与六碳糖连接的，而不是连在大豆苷元的母核上，因
为大豆苷的７Ｏ糖苷键很容易断裂，碎片离子峰的
相对丰度比分子离子峰高；根据以上分析，确认此化
合物为葛根素木糖苷。
峰１０ ＭＳ为 ｍ／ｚ４１７１［Ｍ＋Ｈ］＋，其 ＭＳ２为
ｍ／ｚ２５５１（相对丰度１００％），与对照品大豆苷的质
谱图、液相色谱图和紫外光谱图一致，确认该化合物
为大豆苷。
峰 １２ ＭＳ为 ｍ／ｚ５６５３［Ｍ＋Ｈ］＋（丰度
１００％），其 ＭＳ２为 ｍ／ｚ５４７５，４３３１，４１５１，３９７１，
３６７１，３３７１，３１３１，２９５１，２６５２，２２７２，１７７１，紫
外光谱也显示其最大吸收峰为２６１５ｎｍ，与大豆苷
元以及葛根素不同，红移了将近１２ｎｍ，此化合物的
结构为染料木素８Ｃ芹糖基（１→６）葡萄糖苷，其异
黄酮母核Ａ环５位上有取代羟基，此取代羟基与邻
位羰基氧原子结合成氢键，造成最大吸收峰的偏移。
峰１４ ＭＳ为 ｍ／ｚ５０３１［Ｍ＋Ｈ］＋，其 ＭＳ２为
ｍ／ｚ２５５１（相对丰度１００％），紫外光谱显示其为大
豆苷元衍生物，可能与Ｈｉｒａｋｕｒａ等于１９９７年从野葛
植物中提取分离得到的丙二酸单酰大豆苷（６″Ｏ
ｍａｌｏｎｙｌｄａｉｄｚｉｎ）［９］为同一化合物。
峰１７ 分子离子峰为ｍ／ｚ２５５［Ｍ＋Ｈ］＋（相对
丰度１００％），与大豆苷元的质谱图以及液相色谱图
一致，确认此化合物为大豆苷元。
［致谢］ 中国中医科学院中药所杨健帮助进行部分
ＨＰＬＣＭＳ测定。
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第３３卷第１１期
２００８年６月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １１
Ｊｕｎｅ，２００８
［参考文献］
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［９］ ＫａｚｕｈｉｒｏＨｉｒａｋｕｒａ，ＭａｋｏｔｏＭｏｒｉｔａ，ＫａｏｒｕＮａｋａｔａ，ｅｔａｌ．Ｐｈｅｎｏｌｉｃ
ｇｌｕｃｏｓｉｄｅｓｆｒｏｍｔｈｅｒｏｏｔｏｆＰｕｅｒａｒｉａｌｏｂａｔａ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，
１９９７，４６（５）：９２１．
［责任编辑 王亚君］
［收稿日期］ ２００７０５１３
［基金项目］ 中南林业科技大学科研启动经费（科研１０１０６４８项）
［通讯作者］ 文瑞芝，Ｔｅｌ：１３７８７１２１５４２，Ｅｍａｉｌ：ｃｓｕｆｔ＿ｗｒｚ＠
１２６．ｃｏｍ
顶空固相微萃取气相色谱质谱联用分析
紫锥菊干根中挥发性成分
文瑞芝１，曾 栋２，袁利萍１，肖红波１
（１．中南林业科技大学 理学院，湖南 长沙 ４１０００４；
２．湖南省疾病预防控制中心 理化科，湖南 长沙 ４１０００５）
目前作为紫锥菊药用品种开发研究的菊科紫锥
菊属植物主要有３种（紫锥菊Ｅｃｈｉｎａｃｅａｐｕｒｐｕｒｅａ、狭
叶紫锥菊Ｅ．ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ和淡白紫锥菊Ｅ．ｐａｌｉｄａ）。
紫锥菊是一种具有多种免疫功效的植物，已有综
述［１］和专业文献［２５］对其活性成分及产品活性的治
疗效果与检测分析进行了报道，其提取物因具有良
好的免疫刺激性、细菌生物抑制活性、抗炎及伤口康
复等效果而被广泛用作一种免疫促进剂。其实，紫
锥菊挥发性成分在其药理学中起到重要作用，关于
该药用植物挥发性物质的分析研究鲜见报道。
固相微萃取（ＳＰＭＥ）技术除已用于水和体液介质
中低浓度的有机污染物分析外［６，７］，还被广泛应用于
样品中易挥发物的顶空分析［８，９］。有文献报道紫锥菊
根部与地上植物体间成分存在较大差异，其根部较地
上植株含有较多的挥发性成分。本研究利用 ＳＰＭＥ
技术结合ＧＣＭＳ对生长在我国境内的紫锥菊干根中
挥发性成分进行了初步的分离分析研究。
１ 仪器及条件
ＨＰ６８９０系列气相色谱仪，ＨＰ５９７３质量选择检
测器ＭＳＤ（Ｈｅｗｌｅｔ－Ｐａｃｋａｒｄ，ＵＳＡ）；ＨＰ－５ＭＳ石英
毛细管柱（２５０μｍ×３００ｍ，０２５μｍ）。进样口（不
分流模式）温度为２５０℃；柱温初始温度５０℃维持
１ｍｉｎ；以４℃·ｍｉｎ－１升至２５０℃维持１００ｍｉｎ；载
气为高纯 Ｈｅ，流速为 １ｍＬ·ｍｉｎ－１；ＥＩ源，温度为
２３０℃；四极杆温度１５０℃；ＭＳＤ质量扫描范围 ｍ／ｚ
４０～８００，倍增电压 ＥＭ（Ｖ）１４２４。电子天平（上海
ＭｅｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏ集团），ＦＺ１０２微型植物试样粉碎机
（天津市泰斯特仪器有限公司），ＰｏｌｙｓｔａｔＣＣ１恒温水
浴箱（Ｈｕｂｕｒ，ＵＳＡ）。
５－７３３０型ＳＰＭＥ装置和萃取瓶均购自Ｓｕｐｅｌｃｏ
公司（Ｂｅｌｅｆｏｎｔｅ，ＰＡ，ＵＳＡ），备有７，１００μｍ聚二甲
基硅氧烷（ＰＤＭＳ）纤维涂层和 ８５μｍ聚丙烯酸酯
（ＰＡ）纤维涂层；所购涂层参照操作说明书在 ＧＣ进
样口高温活化。
整株紫锥菊干植物采集于九汇现代中药有限公
司（湖南）药材种植基地，经湖南师范大学化学研究
所陈波教授鉴定为菊科紫锥菊属植物紫锥菊 Ｅ．
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第３３卷第１１期
２００８年６月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １１
Ｊｕｎｅ，２００８