全 文 ：黄芪生脉胶囊与组方药材指纹图谱
色谱峰相关性研究
陈建真１，吕圭源１，陈素红２，叶 磊１
（１．浙江中医药大学，浙江 杭州 ３１００５３；
２．温州医学院，浙江 温州 ３２５０３５）
［摘要］ 目的：建立黄芪生脉胶囊ＨＰＬＣ指纹图谱，并研究复方与组方药材指纹图谱色谱峰相关性。方法：通
过ＨＰＬＣＤＡＤ联用建立复方及各药材指纹图谱，以色谱峰保留时间和紫外光谱信息为考察指标，对复方指纹图谱
色谱峰归属进行分析。结果：建立了有１６个特征峰的ＨＰＬＣ指纹图谱，对复方特征峰进行了归属分析，确定了特征
峰的药材归属。结论：该方法有助于提高黄芪生脉胶囊的质量控制水平，能较好地判别复方主要色谱峰与药材化
学组分间的相关性，可应用于中药复方化学组成及来源分析。
［关键词］ 黄芪生脉胶囊；指纹图谱；相关性研究；相似度评价
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）２３２７６８０４
［收稿日期］ ２００８０４２３
［基金项目］ 国家８６３计划项目（２００３ＡＡ２Ｚ３２６２）
［通讯作者］ 吕圭源，Ｔｅｌ：（０５７１）８６６１３６０１，Ｅｍａｉｌ：ｌｖ．ｇｙ＠
２６３．ｎｅｔ
黄芪生脉胶囊是在黄芪生脉饮基础上采用现代
提取分离技术富集有效成分精制而成的创新药物。
黄芪生脉方是在经典方“生脉散”（《内外伤辨惑
论》）（人参、麦冬、五味子）基础上，演变为黄芪生脉
饮（黄芪、党参、麦冬、五味子），具益气滋阴、养心补
肺之功效，适用于气阴两虚、心悸、气短的冠心病患
者［１］。中药色谱指纹图谱是一种综合的、量化的色
谱鉴别手段，是建立在中药成分系统研究结果之上，
随现代分析技术发展而诞生的［２３］。利用色谱方法
获取中药复方及各药材的化学指纹图谱，通过指纹
图谱中各相应色谱峰的相关性研究，建立复方与药
材化学组成之间的联系，有助于提高中药复方质量
控制水平，判别复方中各主要成分的来源，获取复方
中化学组成、化合物类型等多种信息。本实验建立
黄芪生脉胶囊高效液相指纹图谱，并对复方化学成
分指纹图谱色谱峰归属进行了研究。
１ 仪器和试药
ＶａｒｉａｎＰｒｏｓｔａｒ高效液相色谱仪（美国ＶＡＲＩＡＮ公
司，２３０三元泵，４１０自动进样器，３３０二极管阵列检测
器）；Ｍｉｌｉ－ＱＳｙｎｔｈｅｓｉｓＡ１０纯水仪（美国Ｍｉｌｉｐｏｒｅ公
司）；ＭＥＴＴＬＥＲＴＯＬＥＤＯＡＧ１３５电子天平（瑞士Ｍｅｔ
ｌｅｒＴｏｌｅｄｏ公司）；ＳＣＱ２５０型超声波清洗器（上海申波
超声公司）。乙腈、甲醇（流动相）为色谱纯试剂；超纯
水；甲醇、磷酸等均为分析纯；黄芪、党参、麦冬、南五味
子购于浙江中医药大学中药饮片厂，经本校资源鉴定
教研室黄真教授鉴定；黄芪生脉胶囊（本校自制）。
２ 方法与结果
２．１ 供试品溶液的制备
复方供试品溶液的制备：称取黄芪生脉胶囊内
容物约１５ｇ，精密称定，加甲醇３０ｍＬ，超声溶解，
过滤，除去不溶物，滤液挥干，残渣加甲醇定容至５
ｍＬ量瓶中，得部位ＦＦ。
药材供试品溶液的制备：按处方量称取黄芪、党
参、麦冬、南五味子４味药材，按复方相同制备方法
处理，得ＹＣ１，ＹＣ２，ＹＣ３，ＹＣ４４个部位。
阴性复方供试品溶液的制备：称取除某味药材
的阴性处方，按复方相同制备方法处理，得 ＹＸ１，
ＹＸ２，ＹＸ３，ＹＸ４４个部位。
２．２ 色谱条件
ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５
μｍ）；流动相乙腈０１％磷酸梯度洗脱系统，见表１；
柱温３０℃；检测波长２５４ｎｍ；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；
吸取供试品溶液 １０μＬ注入液相色谱仪，测定 ７０
ｍｉｎ的色谱图。采用计算机辅助相似性评价系统软
件对图谱进行评价。
２．３ 指纹图谱方法学考察
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表１ 流动相梯度条件
ｔ／ｍｉｎ 乙腈／％ ｔ／ｍｉｎ 乙腈／％
０ １ ５０ ４５
１０ ４ ６０ ７０
３０ １５ ７０ １００
４０ ２５
２．３．１ 精密度试验 吸取同一供试品溶液，按２．２
项连续进样５次，记录各色谱峰的保留时间和峰面
积积分值，计算各共有峰相对其内参照峰（９号色谱
峰）的相对保留时间和相对峰面积，结果共有峰的
相对保留时间 ＲＳＤ０～０１１％，相对峰面积 ＲＳＤ
０～１５９％，说明仪器精密度良好。
２．３．２ 稳定性试验 取同一供试品溶液，室温下放
置，分别于０，３，６，１２，２４ｈ，按２．２方法进样，记录各色
谱峰的保留时间和峰面积积分值，计算各共有峰相对
其内参照峰（９号色谱峰）的相对保留时间和相对峰
面积，结果相对保留时间ＲＳＤ０～０１８％，相对峰面积
ＲＳＤ０～２１２％，说明供试品溶液在２４ｈ内稳定。
２．３．３ 重现性试验 取同一批号样品５份，按２．１
项方法制备样品，按２．２项方法重复进样５次，记录
各色谱峰的保留时间和峰面积积分值，计算各共有
峰相对其内参照峰（９号色谱峰）的相对保留时间和
相对峰面积，结果相对保留时间 ＲＳＤ０～０１１％，均
小于３０％；相对峰面积 ＲＳＤ０～３５６％，其中２号
峰和１４号峰 ＲＳＤ略大于３％，其余均小于３０％，
表明方法可靠。
２．４ ＨＰＬＣ指纹图谱的建立及特征峰的标定
取１０批样品，按２．１和２．２项操作，根据１０批
样品的测定结果，所有成分的色谱峰在７０ｍｉｎ之内
出现，考虑到溶剂对保留时间小于５ｍｉｎ的色谱峰
的影响，确定共有峰１６个，其中１５号峰为１个未达
基线分离的双峰，其第２个峰为１个小肩峰，故将此
双峰视为一组峰计算峰面积，保留时间以第１个峰
的保留时间计。以保留时间约为４０ｍｉｎ的色谱峰
为参照峰，标号为９（ｓ），其他共有峰依次为１～１６。
以参照峰的保留时间作为１，计算各共有峰的相对
保留时间，见表２。
表２ １０批样品测定的相对保留时间
Ｎｏ． Ｓ１ Ｓ２ Ｓ３ Ｓ４ Ｓ５ Ｓ６ Ｓ７ Ｓ８ Ｓ９ Ｓ１０ 均值 ＲＳＤ／％
１ ０２１９ ０２１９ ０２１７ ０２１４ ０２１９ ０２２２ ０２２０ ０２２６ ０２３５ ０２１８ ０２２１ ２６５２
２ ０２９８ ０２９６ ０２９６ ０２９２ ０２９７ ０３０１ ０２９５ ０３０７ ０３１４ ０２９３ ０２９９ ２２７７
３ ０３５０ ０３４５ ０３４７ ０３４４ ０３５０ ０３５４ ０３４０ ０３５６ ０３５９ ０３３６ ０３４８ ２０６０
４ ０４３０ ０４２７ ０４３１ ０４２６ ０４３２ ０４３６ ０４２３ ０４３７ ０４３６ ０４１５ ０４２９ １５９１
５ ０４６３ ０４６２ ０４６６ ０４６１ ０４６５ ０４６６ ０４６４ ０４７４ ０４７２ ０４５８ ０４６５ １０４１
６ ０４９９ ０４９８ ０５０１ ０４９７ ０５０１ ０５０２ ０４９８ ０５０６ ０４９６ ０４９４ ０４９９ ０６８６
７ ０５１７ ０５１８ ０５２１ ０５１７ ０５２１ ０５２３ ０５１０ ０５２０ ０５１６ ０５０４ ０５１７ １１１０
８ ０７９３ ０７９７ ０７９２ ０７９３ ０７９３ ０７９９ ０７９５ ０７９８ ０７９１ ０７８８ ０７９４ ０４２６
９（ｓ） １０００ １０００ １０００ １０００ １０００ １０００ １０００ １０００ １０００ １０００ １０００ ００００
１０ １１６５ １１６７ １１６５ １１６２ １１６５ １１６１ １１６５ １１７１ １１７０ １１７０ １１６６ ０２９０
１１ １１９９ １２０２ １１９９ １１９６ １１９８ １１９５ １２０４ １２１０ １２１０ １２１５ １２０３ ０５６４
１２ １２１５ １２１８ １２１６ １２１２ １２０９ １２１１ １２１４ １２２１ １２２０ １２２１ １２１６ ０３５１
１３ １３４４ １３４８ １３４５ １３４１ １３４７ １３３９ １３４３ １３５２ １３５１ １３５４ １３４６ ０３６４
１４ １４０１ １４０５ １４０１ １３９７ １３９７ １３９３ １４０３ １４１２ １４１２ １４１６ １４０４ ０５３６
１５ １５３８ １５４２ １５３８ １５３４ １５３４ １５２９ １５４１ １５５２ １５５０ １５５８ １５４２ ０５９２
１６ １６２６ １６４２ １６２５ １６２１ １６２２ １６１６ １６２９ １６４１ １６３９ １６４７ １６３１ ０６５０
各共有峰的相对保留时间（特征峰序号）如下：
０２２１（１），０２９９（２），０３４８（３），０４２９（４），０４６５（５），
０４９９（６），０５１７（７），０７９４（８），１０００（９，ｓ），１１６６
（１０），１２０３（１１），１２１６（１２），１３４６（１３），１４０４（１４），
１５４２（１５），１６３１（１６）。代表性图谱见图１。
２．５ 样品指纹图谱与对照指纹图谱共有模式的相
似度
用国家药典委员会《中药指纹图谱相似度评价
系统》（２００４Ａ版）软件，以１０批样品的ＨＰＬＣ指纹
１～１６号为共有峰
图１ 黄芪生脉胶囊ＨＰＬＣ指纹图谱
图谱原始信号为基础，利用中位数法进行多点校正
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生成对照指纹图谱Ｒ，评价１０批样品指纹图谱的相
似度。１０批样品的指纹图谱见图２，１０批样品的相
似度分别为 ０９３３，０９５７，０８３９，０８７４，０８６９，
０８９１，０９５２，０９１１，０９１３０，０８８７，均大于０８。
图２ １０批黄芪生脉胶囊指纹图谱共有模式
２．６ 复方与药材色谱峰相关性［４５］
采用ＨＰＬＣＤＡＤ联用，照２．２项方法获取复方
供试品、药材供试品、阴性复方供试品的指纹图谱，
利用色谱峰保留时间相对偏差和紫外光谱特征为指
标考察相关性，对复方化学指纹图谱的峰归属进行
分析。主要步骤如下：
第１步：从复方和各药材指纹图谱中获取谱峰
的保留时间和紫外光谱信息。
第２步：根据全方指纹图谱中各谱峰保留值 ±
２５％设立窗口，在窗口范围内寻找匹配峰。
第３步：计算色谱峰保留时间相对偏差，以 ｔＲ
（ＦＦ）ｉ表示复方第 ｉ个指纹峰（ｉ＝１，２，３，…，ｍ）的
保留时间；ｔＲ（ＹＣｉ）ｊ表示药材（ＹＣ１，ＹＣ２，ＹＣ３，ＹＣ４）
指纹图谱中与ＦＦ部位第ｉ个指纹峰相匹配色潜峰ｊ
（ｊ＝１，２，３，…，ｐ）的保留时间，以△ｔＲ（ＹＣｉ）ｊ表示谱
峰ｔＲ（ＹＣｉ）ｊ与ｔＲ（ＦＦ）ｉ的保留时间相对偏差，计算
公式如下：△ｔＲ（ＹＣｉ）ｊ＝［ｔＲ（ＹＣｉ）ｊｔＲ（ＦＦ）ｉ］／ｔＲ
（ＦＦ）ｉ，该值越接近于０，说明两谱峰相关性越强。
第４步：对保留时间一致且阴性样品图谱中未
出现的色谱峰进行紫外光谱图比较，根据紫外光谱
信息，对全方与药材指纹谱中的相关峰进行指认，确
定特征峰的药材归属，见表３。
表３ 复方指纹图谱色谱峰的药材归属
Ｎｏ．
ｔＲ
／ｍｉｎ
△ｔＲ（ＹＣｉ）ｊ
ＹＣ１ ＹＣ２ ＹＣ３ ＹＣ４
峰归属
１ ９１６０ ００１３ ＲａｄｉｘＯｐｈｉｎｐｏｇｏｎｉｓ
２ １２３６０
３ １４２６０ ００２２ ＦｒｕｃｔｕｓＳｃｈｉｓａｎｄｒａｅＳｐｈｅｎａｎｔｈｅｒａｅ
４ １７６６０ －０００５ ＦｒｕｃｔｕｓＳｃｈｉｓａｎｄｒａｅＳｐｈｅｎａｎｔｈｅｒａｅ
５ １９１００ ００１２ ＦｒｕｃｔｕｓＳｃｈｉｓａｎｄｒａｅＳｐｈｅｎａｎｔｈｅｒａｅ
６ ２０４０７ －００１４ ＲａｄｉｘＡｓｔｒａｇａｌｉ
７ ２１０６０ ００１８ ＲａｄｉｘＡｓｔｒａｇａｌｉ
８ ３２２８７
９ ４０４８７ ００２４ ＲａｄｉｘＡｓｔｒａｇａｌｉ
１０ ４７３５３ ００１３ ＲａｄｉｘＡｓｔｒａｇａｌｉ
１１ ４８３３３ ００１０ ＲａｄｉｘＣｏｄｏｎｏｐｓｉｓ
１２ ４９３８０ ０００３ ＲａｄｉｘＡｓｔｒａｇａｌｉ
１３ ５４７４７ ０００９ ＲａｄｉｘＡｓｔｒａｇａｌｉ
１４ ５７１００
１５ ６２７９３ ０００８ ＦｒｕｃｔｕｓＳｃｈｉｓａｎｄｒａｅＳｐｈｅｎａｎｔｈｅｒａｅ
１５′１） ６２９２０ ０００１ ＦｒｕｃｔｕｓＳｃｈｉｓａｎｄｒａｅＳｐｈｅｎａｎｔｈｅｒａｅ
１６ ６６３８７ ０００１ ＦｒｕｃｔｕｓＳｃｈｉｓａｎｄｒａｅＳｐｈｅｎａｎｔｈｅｒａｅ
注：１）表示指纹谱中未分离的一组峰的第２个峰
通过全方与药材相关性研究，确认复方 ＨＰＬＣ
指纹图谱的１７个（包括一组未完全分离的峰）共有
特征峰的来源，其中２号、８号和１４号峰不能得到
归属，其余指纹峰来自黄芪（６个），党参（１个），麦
冬（１个），南五味子（６个）。经与对照品比较，１３
号峰为黄芪中所含芒柄花素，１５，１５′号峰为一组未
分离的峰，两者的光谱图相似，属同类化合物，其中
１个为五味子酯甲，１６号峰为五味子甲素。
３ 讨论
由于实验中选择了尽可能低的有机相起始体积
分数（１％），并在流动相中添加了酸抑制剂，所以５
ｍｉｎ之前的峰为在反相柱上未分离的峰，故保留时
间在５ｍｉｎ之前的峰未被考虑。保留时间约为 ４０
ｍｉｎ的色谱峰分离度、峰形较好，出峰时间居中，峰
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面积较大，故选择此色谱峰为参照峰，标号为９（ｓ）。
以单一的有效成分来控制中药质量已不能适应
中药现代化的要求，中药指纹图谱可以在不清楚全
体化学成分的情况下，有效控制中药的内在质量，提
高中药质量的稳定性。作者采用ＨＰＬＣ建立了黄芪
生脉胶囊的指纹图谱，经方法学考察和１０批样品测
定，表明该方法稳定、可靠、专属性强、重现性好。１０
批样品的相似度均大于０８，因本品系经一定的方
法纯化精制而成，工艺较复杂，故不同批次之间存在
一定的差异，但从指纹图谱看，整体面貌是一致的，
而中药色谱指纹图谱主要反映的是药物的整体特
征，因此该指纹谱对于从整体上控制黄芪生脉胶囊
质量具有实际意义。
由于本指纹图谱是在２５４ｎｍ处进行测定，这种
以单一波长检测建立的指纹图谱具有一定的局限
性，即只能检测到紫外吸收较强的物质，而对于紫外
吸收弱或紫外末端吸收的物质则无法检测得到。如
本指纹图谱中，由于黄芪黄酮类、南五味子木脂素类
成分紫外吸收较强，故在此指纹谱中有较多的反映，
而黄芪、麦冬中的皂苷类成分因属紫外末端吸收，党
参炔苷因响应值较低，故在此指纹谱中未体现出来。
因此为了能更全面地反映中药复方中的各有效成
分，建议按照复方中各类有效成分的性质，采用不同
的检测方法，分别建立复方中各有效组分的指纹图
谱，使复方中各有效组分的化学特征信息尽可能地
在图谱中有所体现，组成中药复方的多元指纹图谱，
从而对复方进行更科学、全面地评价。如本实验中，
除采用紫外检测法，还应采用蒸发光散射检测建立
复方中皂苷类成分的指纹图谱。
因中药复方配伍后成分可能发生变化，加上受
分离效果的影响，有些峰无法找出其来源，是否属于
复方配伍后新产生的物质，有待于进一步深入的研
究。如能结合液质联用等技术，有望搞清指纹谱中
主要成分的结构，从而为阐明其药效物质基础提供
科学依据。
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ＣｏｒｒｅｌａｔｉｖｉｔｙｂｅｔｗｅｅｎｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｐｅａｋｓｏｆＨＱＳＭ ｃａｐｓｕｌｅａｎｄ
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（１．ＺｈｅｊｉａｎｇＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００５３，Ｃｈｉｎａ；
２．ＷｅｎｚｈｏｕＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｏｌｅｇｅ，Ｗｅｎｚｈｏｕ３２５０３５，Ｃｈｉｎａ）
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