全 文 ：［３］ 王尔彤，刘鸣远．两种药用黄芪比较生物学研究［Ｊ］．植物研
究，１９９６，１６（１）：８５．
［４］ 张东佳，杨永建，赵汝能．甘肃黄芪属药用植物资源［Ｊ］．中国
野生植物资源，２００５，２４（１）：３８．
［５］ 张丽萍，史 静，陈 阳，等．蒙古黄芪和膜荚黄芪种子酯酶同
工酶的研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００６，３１（１８）：１５３４．
［６］ 史刚荣．黄芪复合体（豆科）核型资料的聚类分析［Ｊ］．植物研
究，２００３，２３（２）：２２０．
［７］ 史刚荣．膜荚黄芪和蒙古黄芪雌雄配子体及胚胎发育的比较
研究［Ｄ］．兰州：西北师范大学，２０００．
［８］ 赵一之．中药黄芪植物分类及其区系地理分布研究［Ｊ］．植物
研究，２００６，２６（５）：５３２．
Ｓｔｕｄｙｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏ
ｐｏｗｄｅｒｙｍｉｌｄｅｗｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔＡｓｔｒａｇａｌｕｓｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
ＣＡＯＪｉａｎｊｕｎ１，ＬＩＡＮＧＺｏｎｇｓｕｏ１，２，ＷＡＮＧＷｅｉｌｉｎｇ１，ＤＵＡＮＱｉｍｅｉ１，２
（１．ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＳｃｉＴｅｃｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ７１２１００，Ｃｈｉｎａ；
２．ＳｈａｎｘｉＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｉｎＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＦｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ＆ＮａｔｕｒｅＰｒｏｄｕｃｔＬｉｂｒａｒｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ７１２１００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｍｏｎｇｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｗｈｉｃｈｂｅｌｏｎｇｔｏＡｓｔｒａｇａｌｕｓｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓａｎｄＡ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ
ｖａｒ．ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓｏｎｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｈａｂｉｔ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｐｏｗｄｅｒｙｍｉｌｄｅｗ，ａｎｄｃｌａｓｓｉｆｙｔｈｅｍｉｎｏｒｄｅｒｔｏ
ｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｂｒｅｅｄｉｎｇａｎｄｉｍｐｒｏｖｉｎｇｖａｒｉｅｔｉｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｈａｂｉｔｓ，ｉｓｏｚｙｍｅａｎｄｓｏｌｕｂｌｅｐｒｏｔｅｉｎｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅ
ｔｏｇｒａｍｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄａｍｏｎｇｔｈｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅｙｗｅｒｅｃａｔｅｇｏｒｉｚｅｄｂｙｃｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓｉｓｂａｓｅｄｏｎｔｈｏｓｅｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍｓ．Ｄｉｆｅｒｅｎｔ
ａｂｉｌｉｔｙｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｐｏｗｄｅｒｙｍｉｌｄｅｗｗａｓａｌｓｏｓｔｕｄｉｅｄｔｈｒｏｕｇｈｃｏｍｐａｒｉｎｇｄｉｓｅａｓｅｉｎｄｉｃｅｓａｍｏｎｇｓｉｘｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｈｏｗｅｄＡ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓｖａｒ．ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓｗａｓｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙｄｉｆｅｒｅｎｔｆｒｏｍＡ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ．ＴｈｅｒｅｗａｓａｓｐｅｃｉａｌｔｙｐｅｉｎｃｏｌｏｎｉｅｓｏｆＡ．
ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ，ｗｈｉｃｈｓｈｏｗｅｄｈａｉｒｙｕｐｐｅｒｅｐｉｄｅｒｍｉｓｏｆｌｅａｆｌｅｔｓａｎｄｌａｔｅｒｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｓｔｒａｇａｌｕｓｆｏｒｍｅｄｉｃｉｎｅｃｏｕｌｄｂｅ
ｃａｔｅｇｏｒｉｚｅｄｉｎｔｈｒｅｅｔｙｐｅｓＡ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓｖａｒ．ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ，Ａ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓｅａｒｌｙｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅｔｙｐｅａｎｄＡ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓｌａｔｅｆｌｏ
ｒｅｓｃｅｎｃｅｔｙｐｅ．ＡｍｏｎｇｔｈｅｍＡ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓｖａｒ．ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓｉｓｍｏｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｐｏｗｄｅｒｙｍｉｌｄｅｗ，ｗｈｉｌｅＡ．ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓｉｓｅａｓｉｌｙ
ｉｎｆｅｃｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅｅａｒｌｙｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅｔｙｐｅｉｓｅｖｅｎｍｏｒｅｅａｓｉｌｙｉｎｆｅｃｔｅｄ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ；ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ；ｐｏｗｄｅｒｙｍｉｌｄｅｗ；ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
［责任编辑 张宁宁］
［收稿日期］ ２００７０２０１
［通讯作者］ 向增旭，Ｔｅｌ：（０２５）８４３９５９８０，Ｅｍａｉｌ：ｚｘｘｉａｎｇ＠ｎｊａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
ＨＰＬＣ指纹图谱在金银花药材真伪
鉴别中的应用研究
向增旭１，高山林２
（１．南京农业大学 园艺学院 中药材研究所，江苏 南京 ２１００９５；
２．中国药科大学 中药学院，江苏 南京 ２１００３８）
［摘要］ 目的：研究金银花药材的指纹图谱测定方法，用指纹图谱的方法区别金银花道地和非道地药材。方
法：色谱柱ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ２（４６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ），柱温２０℃，流动相甲醇００５％磷酸溶液梯度洗脱，流速１ｍＬ
·ｍｉｎ－１，检测波长２３８ｎｍ。结果：道地药材共有１８个共有峰，非道地产区药材共有９个共有峰。结论：ＨＰＬＣ指纹
图谱能很好的区分道地和非道地金银花药材，为更好的控制金银花药材内在质量提供了科学依据。
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第３３卷第９期
２００８年５月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ９
Ｍａｙ，２００８
［关键词］ 金银花；道地性；ＨＰＬＣ；指纹图谱
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０９０９９６０３
《中国药典》２０００年版收载的金银花为忍冬科
植物忍冬ＬｏｎｉｃｅｒａｊａｐｏｎｉｃａＴｈｕｎｂ．红腺忍冬Ｌ．ｈｙｐｏ
ｇｌａｕｃａＭｉｑ．山银花Ｌ．ｃｏｎｆｕｓａＤＣ．或毛花柱忍冬Ｌ．
ｄａｓｙｓｔｙｌａＲｅｈｄ．的干燥花蕾或带初开的花［１］，而在
２００５年版《中国药典》只收载忍冬 Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ
Ｔｈｕｎｂ．作为金银花药材的基源植物，而把红腺忍冬、
山银花或毛花柱忍冬另列为山银花收载［２］。实际
上，除上述品种外，可供药用的品种达４７种［３］。而
且即使同一品种也会因为产地［４］、生长条件［５］、栽
培方法［６］、采集时间、储存条件等不同，而使金银花
的化学成分及其含量、药理作用等有所差异。传统
以山东平邑、费县，河南封丘、密县为金银花道地产
区。近年来，由于栽培金银花带来的良好经济效益，
湖南隆回、四川南江等地也大面积的栽培金银花。
２００５年版药典指定绿原酸和木犀草素作为金银花
的质量控制指标，但仅以个别成分指标不能全面反
映金银花的内在质量。本实验采用ＨＰＬＣ指纹图谱
技术，对１２个不同产地（包括道地和非道地产区）
的金银花样品进行比较分析，进行不同产地药材化
学成分组相似度分析，旨在通过指纹图谱技术区别
道地和非道地产区的药材，为科学评价金银花药材
质量进行方法探索。
１ 材料与方法
１．１ 材料 共收集了金银花道地区河南、山东以及
其他产区四川、湖南等地栽培的金银花药材 １２份
（表１）。
表１ 金银花药材样品编号及来源
Ｎｏ． 产地／收购地 来源
１ 河南封丘城郊 自采
２ 河南封丘杨许寨 自采
３ 河南密县 河南农业大学
４ 山东平邑羊城 自采
５ 山东平邑郑城 自采
６ 山东平邑流域 自采
７ 江苏南京 自采
８ 重庆 中国药科大学生药学教研室
９ 四川南江２号 南江县林业局
１０ 四川南江１号 南江县林业局
１１ 湖南隆回２号 隆回县林业局金银花研究所
１２ 湖南隆回１号 隆回县林业局金银花研究所
１．２ 仪器与试剂 Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＬＣ型高效液相色
谱仪（１１００泵、柱温箱、二极管阵列检测器、化学工
作站），甲醇为色谱纯，磷酸等其他试剂为分析纯，
水为超纯水，绿原酸对照品（批号０７５３９９１０，中国
药品生物制品检定所）。
１．３ 对照品溶液和供试品溶液制备 精密称取金
银花对照品２９６ｍｇ，溶解到１０ｍＬ量瓶中。临用
前吸取参照物贮备液２ｍＬ，置１０ｍＬ量瓶中，甲醇
定容至１０ｍＬ，摇匀即可；取金银花药材适量，５０～
６０℃烘干至衡重，研细，过４０目筛，精密称取药材
粉末１ｇ，置入１００ｍＬ量瓶中，加入１００ｍＬ甲醇超
声３０ｍｉｎ，放置至室温，滴加甲醇至１００ｍＬ，上清液
用０４５μｍ微孔滤膜过滤，做为供试品溶液。
１．４ 色谱条件 色谱柱 ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ２（４６ｍｍ×
１５０ｍｍ，５μｍ），流动相甲醇００５％磷酸水溶液梯
度洗脱，洗脱时间 ６０ｍｉｎ，０～２０ｍｉｎ从 ２０∶８０到
２４∶７６，２０～６０ｍｉｎ从２４∶７６到５４∶４６。流速１ｍＬ·
ｍｉｎ－１，检测波长２３８ｎｍ，柱温２０℃。
２ 结果与分析
２．１ 方法学考察 稳定性试验、精密度试验、重复
性试验结果表明，峰面积占总峰面积２％以上的峰，
其色谱峰的相对保留时间和峰面积的比值 ＲＳＤ均
小于在３％，符合指纹图谱的要求。
２．２ 金银花高效液相色谱指纹图谱的测定 １２个
金银花样品的供试品溶液按上述色谱条件进样分
析，记录６０ｍｉｎ的色谱图。用“中药指纹图谱计算
机辅助相似度评价软件”（版本２００４Ａ）处理，获得
金银花高效液相对照指纹图谱。采用自动匹配方法
进行相似性分析。对照谱图生成方法是中位数法，
时间窗宽度０５ｍｉｎ，自动匹配，计算１２个样品的相
似度系数。
从色谱图上可以明显的看出山东河南产区的金
银花的化学成分比其他产区要复杂（图１，２）。样品
１，２，３，４，５，６号来自金银花道地产区山东和河南，
共有１８个共有峰，６个药材样品之间的相似度均在
０９５以上；其他产区的７，８，９，１０，１１，１２号样品总
共有９个共有峰，样品之间的相似度均小于０９０。
３ 讨论
３．１ 提取溶剂的考察 精密称取金银花药粉（过
４０目筛）０５ｇ，置具塞锥形瓶中，分别精密加入水、
５０％甲醇、７０％甲醇、甲醇、５０％乙醇、７０％乙醇、
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Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ９
Ｍａｙ，２００８
图１ ６种道地药材ＨＰＬＣ指纹图谱
图２ ６种非道地产区金银花药材ＨＰＬＣ指纹图谱
乙醇５０ｍＬ，称定质量，超声处理３０ｍｉｎ，放冷，再称
定质量，用相应的溶剂补足失重，摇匀，上清液用
０４５μｍ微孔滤膜过滤，做为供试品溶液。分别精
密量取上述供试品溶液２０μＬ注入液相色谱仪，记
录色谱图，考察出峰数目的多少。结果水、５０％甲
醇、７０％甲醇、甲醇提取的金银花药材供试品溶液出
峰较多，因此针对这４种溶剂进行提取方法的考察。
３．２ 提取方法的考察 对水煎法、热回流法、索氏
提取法、超声提取法４种提取方法进行考察。水煎
法、热回流法、索氏提取法提取２ｈ，超声波提取
０５ｈ。提取液转移至５０ｍＬ量瓶中，加相应的溶剂
至刻度摇匀，用０４５μｍ微孔滤膜过滤，取续滤液
作为供试品溶液。分别精密量取供试品溶液１０μＬ
注入液相色谱仪，记录色谱图。对出峰多少，峰面积
大小（峰高）以及操作的易行性等方面考虑对比分
析。甲醇，７０％甲醇经热回流，索氏提取和超声波提
取，所得色谱图差别不明显，５０％甲醇索氏提取、水
煎法提取出峰较少，并且峰面积较小，考虑到实验操
作的方便，选择对金银花药材进行前处理方法为甲
醇超声０５ｈ。
经过系统比较，建立了金银花高效液相指纹图
谱的样品前处理方法。以甲醇为提取溶剂，超声波
振荡提取，提取时间３０ｍｉｎ，在３２７ｎｍ波长检测，所
得色谱图出峰多，峰形好，分离完全。
［参考文献］
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中绿原酸含量［Ｊ］．中医药学报，２００１，２９（３）：５１．
ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄｓｔｕｄｙｏｆＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆＬｏｎｉｃｅｒａｊａｐｏｎｉｃａ
ｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇｅｏａｕｔｈｅｎｔｉｃｉｔｙ
ＸＩＡＮＧＺｅｎｇｘｕ１，ＧＡＯＳｈａｎｌｉｎ２
（１．ＩｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａｌｓ，ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９５，Ｃｈｉｎａ；
２．ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｏｌｅｇｅ，ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００３８，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆＬｏｎｉｃｅｒａｊａｐｏｎｉｃａａｎｄａｐｐｌｙｉｔｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｇｅｏａｕｔｈｅｎｔｉｃｏｆ
Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅＨＰＬＣｗａｓａｐｐｌｉｅｄｉｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｄａｔａｗｅｒｅａｎａｌｙｓｅｄｂｙ＂ｃｏｍｐｕｔｅｄａｉｄｅｄｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｅ
ｖａｌｕａｔｉｏｎ＂ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｒｅｅｘｉｔｅｄｄｉｓｔｉｎｃｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｇｒｏｕｐｂｅｔｗｅｅｎａｎｄｎｏｎａｕｔｈｅｎｔｉｃｓａｍｐｌｅｓ．Ｃｏｎ
ｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇｅｏａｕｔｈｅｎｔｉｃｏｆＬ．ｊａｐｏｎｉｃａ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｇｅｏａｕｔｈｅｎｔｉｃｉｔｙ；Ｌｏｎｉｃｅｒａｊａｐｏｎｉｃａ；ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ
［责任编辑 张宁宁］
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Ｍａｙ，２００８