全 文 ：干旱、盐胁迫处理对丹参无菌苗中丹参素含量的影响
韩立敏，俞嘉宁，魏新丽，王?之
（陕西师范大学 生命科学学院教育部药用植物资源与天然药物化学重点实验室，陕西 西安 ７１００６２）
［收稿日期］ ２００６１１２９
［基金 项 目］ 国 家 “十 一 五”科 技 支 撑 计 划 项 目
（２００６ＢＡＩ０６Ａ１２）
［通讯作者］ 王?之，Ｔｅｌ：（０２９）８５３０８３１７，Ｅｍａｉｌ：ｚｚｗａｎｇ＠
ｓｎｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
丹参ＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｈｉｚａＢｇｅ．为唇形科鼠尾草属
植物，所含的丹参素是一种水溶性酚酸类化合物，具
有抑制血小板聚集、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗炎
及增强机体免疫作用，是抗心肌缺血的有效成
份［１］。因此，提高丹参药材中丹参素的含量具有重
要的经济价值，研究丹参中丹参素的积累与环境因
子的关系具有一定的意义。
干旱和盐碱是影响植物生长和产量提高的重要
限制因子，其在逆境中都是降低了环境的渗透势而
导致植物细胞失水，产生渗透胁迫，从而迫使植物在
其自身范围内进行相应的渗透调节［２］。研究表明，
次生代谢产物的合成与积累在植物耐旱性、抗寒性
和耐盐性中具有重要作用，植物会根据所处的环境
条件及其变化来决定合成次生代谢产物的种类及数
量［３６］。本实验采用自然干旱和 ２５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１
ＮａＣｌ处理丹参无菌苗，来研究环境因子对丹参水溶
性有效成分丹参素积累的影响和作用，以探讨药用
植物次生代谢物质的生产和积累与环境之间的关
系，为药用植物资源的开发和利用提供依据。
１ 材料
１．１ 仪器与试剂 日本ＨＩＴＡＣＨＩ高效液相色谱系
统、分析天平、索氏提取器、旋转蒸发仪、移液器等。
ＭＳ固体培养基，ＮａＣｌ，甲醇，三蒸水，丹参素钠对照
品（陕西省药品检验所，批号８５５２００１０２）。
１．２ 无菌苗的栽培 丹参无菌苗，由陕西师范大学
生命科学学院 ＧＡＰ工程研究中心提供。在无菌条
件下将已继代培养２次的丹参的嫩尖作为外植体接
种于 ＭＳ基本培养基中，置于光照培养室，（２５±２）
℃，光照强度２０００ｌｘ，每天１４ｈ光照培养２～３个
月，期间继代培养１次。选择生长势基本一致的丹
参作为实验材料。
１．３ 材料的盐胁迫处理 将丹参幼苗从培养基中取
出，洗净残留培养基，吸干水分，各取２０株分别放入
２５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１的 ＮａＣｌ溶液中，置于光照培养箱内
［２０００ｌｘ，（２５±２）℃］，在０，３，６，９，１２ｈ时取样，迅
速将幼苗下部浸入盛水的大烧杯中冲洗根部表面的
盐溶液，擦干后放至分析天平上称量，记录鲜重。每
个处理皆放在培养皿中于６０℃烘箱中烘至恒重，称
重其干重。研磨成粉备用（每处理设３个重复）。
１．４ 材料的干旱胁迫处理 将丹参幼苗从培养基
中取出，洗掉残留培养基，吸干水分，置于光照培养
箱中［２０００ｌｘ，（２５±２）℃］，自然干旱处理，在０，
３，６，９，１２ｈ时取样，每个时间梯度处理２０株丹参，
记录鲜质量。按上述方法烘至恒重，称其干质量。
研成粉末备用（每个处理设置３个重复）。
２ 方法与结果
２．１ 对照品与供试品溶液的制备 对照品溶液的
制备：精密称取２ｍｇ丹参素钠对照品置于１０ｍＬ量
瓶中，加三蒸水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成０２
ｍｇ·ｍＬ－１的丹参素钠对照品溶液，放于４℃冰箱中
备用。供试品的制备［７］：精密称取丹参幼苗粉末
０３ｇ，置索氏提取器中，加３０％甲醇１５０ｍＬ，回流
提取５ｈ，真空旋转蒸发仪浓缩至干，５ｍＬ三蒸水溶
解，转移至１５ｍＬ离心管中，０４５μｍ微孔滤膜过
滤，即得。
２．２ 色谱条件 色谱柱ＬｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒＣ１８（４６ｍｍ×
１５０ｍｍ，５μｍ，ＨａｎｂｏｎＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｏｌｏｇｙ），流动相
甲醇水（１∶１０）（冰醋酸调 ｐＨ至４０）［８］，检测波长
２８０ｎｍ；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温为室温。
２．３ 标准曲线的制作［９］ 分别取制得 ０２ｍｇ·
ｍＬ－１的丹参素钠对照品溶液３，６，９，１２，１５，１８，２１μＬ
进样，记录色谱图（图１），以峰面积为纵坐标，丹参素
进样量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程为：
Ｙ＝７２６×１０５Ｘ－３５８×１０４，（ｒ＝０９９９２），表明丹参
素在１０８～３７８μｇ具有良好的线性关系。
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第３３卷第１０期
２００８年５月
中 国 中 药 杂 志
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Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １０
Ｍａｙ，２００８
２．４ 精密度试验 取丹参素钠对照品溶液，连续进
样６次，每次２０μＬ，测定峰面积，结果峰面积 ＲＳＤ
２４％，表明仪器精密度较好。
２．５ 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于０，
２，４，６，８ｈ进样 ２０μＬ，测定峰面积，结果峰面积
ＲＳＤ１９％，表明４℃保存下供试品溶液中丹参素
在８ｈ内基本稳定。
２．６ 重复性试验 取同一批丹参样品３份，按上述
供试液的制备方法制备样品，按选定的色谱条件测
定，计算含量，结果含量 ＲＳＤ２３％，表明重复性良
好。
２．７ 加样回收率 精密称取丹参素质量分数为
１３８ｍｇ·ｇ－１，经干旱处理９ｈ时的丹参幼苗粉末６
份，每份近０３６ｇ，加入０２ｍｇ·ｍＬ－１对照品溶液１
ｍＬ，依上述供试液的制备，按选定的色谱条件测定，
计算回收率（表１）。
表１ 丹参加样回收率
测定量／μｇ 回收率／％ 平均回收率／％ ＲＳＤ／％
６５９５４ ９２３７
６４８２４ ８６０９
６４６３５ ８５０４
８９２３ ４２３
６５４３４ ８９４８
６４８９１ ８６４６
６６５９２ ９５９１
注：将对照品丹参素钠含量折算成丹参素含量后，样品中含量均
为４９３２６μｇ，加入量均为１８００２μｇ
图１ 丹参素钠对照品及丹参幼苗供试品的ＨＰＬＣ图谱
Ａ．丹参素钠对照品；Ｂ．供试品
２．８ 含水量 丹参苗经干旱和盐处理后分别称鲜
重，然后放于烘箱中烘至恒重，称量并记录干重。按
（鲜重－干重）／鲜重×１００％，计算含水量（表２）。
表２ 干旱、盐胁迫下丹参苗含水量的变化 ％
处理
处理时间／ｈ
０ ３ ６ ９ １２
干旱胁迫 ９０７７ ８４１２ ７６９９ ４７４２ ３４０２
盐胁迫 ９０７７ ８７９２ ８５４９ ８１８５ ８１０４
由表２可看出，丹参体内含水量随干旱和盐胁
迫处理时间的延长而逐渐降低，干旱胁迫处理的降
低幅度大于盐胁迫处理的降低幅度。干旱胁迫处理
１２ｈ，丹参苗已严重萎蔫，含水量降至 ３４０２％；而
２５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＣｌ处理 １２ｈ后，丹参苗略有萎
蔫，含水量仅降至８１０４％。
２．９ 样品含量的测定 精密吸取已制备的供试品
溶液２０μＬ进样，分别对各处理的样品进行测定，记
录峰面积，通过回归方程计算不同处理下每克丹参
材料中丹参素的含量。结果表明，干旱胁迫处理３
ｈ、相对含水量为８４１２％时，丹参素含量开始上升，
干旱处理９ｈ丹参素的量达最高（１３８ｍｇ·ｇ－１），
至干旱处理 １２ｈ，植株已明显萎蔫，丹参素降为
１１２ｍｇ·ｇ－１，但仍高于对照。２５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＣｌ
处理同期丹参组培苗时，虽然与干旱处理有类似变
化趋势，但是处理６ｈ，９ｈ时，丹参素含量上升幅度
很小，仅为１３２７％～３６０６％，略高于对照。
３ 讨论
丹参素是丹参的次生代谢产物，属于酚酸类化
合物。实验结果表明，经干旱和 ２５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１
ＮａＣｌ处理的丹参在０～９ｈ时丹参素含量呈上升趋
势，可能是丹参在受到盐胁迫和干旱胁迫处理后体
内代谢方式出现相应的调整，从原先的初生代谢为
主转向以次生代谢为主的代谢方式，产生大量的具
有抗逆作用的次生代谢物质以维持自身的生存［１０］，
因此表现出丹参素在丹参体内含量升高。但干旱、
盐胁迫处理９～１２ｈ丹参素含量又有所下降，其原
因可能是９ｈ后胁迫严重使次生代谢受阻。据报
道，在环境胁迫的条件下，植株生长下降，次生代谢
产物数量增加；在良好环境条件下，植株生长快，次
生代谢产物数量少；但当环境严重胁迫时，植株生长
和次生代谢又都受阻碍［１１］。
据实验结果可知含水量的变化与丹参素含量有
密切关系。随着含水量的降低，丹参素的含量呈升
高再降低但总体比对照高的趋势。其中含水量为
４７４２％（９ｈ）时使丹参素质量分数达到了最大值
（１３９ｍｇ·ｇ－１），而盐胁迫含水量为８１８５％时丹
参素质量分数达最大（０８９ｍｇ·ｇ－１），但是，干旱
使丹参素增加的幅度（７１０１％ ～１１２３３％）远远大
于盐胁迫下丹参素增 加 的 幅 度 （１３２７％ ～
３６０６％）。表明干旱胁迫更有利于丹参中丹参素
的积累，其原因可能是因为植物遭到干旱和盐造成
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Ｍａｙ，２００８
的渗透胁迫时通过在细胞内积累无毒溶质来平衡由
于液泡内失水、无机离子积累所造成的细胞质渗透
压的变化，从而对细胞起保护作用，丹参素含量总体
升高，而盐胁迫下植物不仅受到渗透胁迫还受到离
子毒害作用，使得胞内的离子平衡和跨膜电化学梯
度都需要重建，因此盐胁迫下丹参素含量升高幅度
较小。
［参考文献］
［１］ ＺｈｏｕＬＸ，ＭｏｓｅｓＣｈｏｗ，ＺｕｏＺ．Ｉｍｐｒｏｖｅｄｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｍｅｔｈｏｄ
ｆｏｒＤａｎｓｈｅｎｐｒｏｄｕｃｔｓｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｏｆｂｏｔｈｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃａｎｄｌｉ
ｐｏｐｈｉｌｉｃａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ［Ｊ］．ＪＰｈａｒｍＢｉｏｍｅｄＡｎａｌ，２００６，
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学意义［Ｊ］．西北林学院学报，２００５，２０（３）：１５０．
［１１］ 苏文华，张光飞，李秀华，等．植物药材次生代谢产物的积累
与环境的关系［Ｊ］．中草药，２００５，３６（９）：１４１５．
［责任编辑 张宁宁］
［收稿日期］ ２００７０２０１
［基金项目］ 云南省省院省校合作项目（２００１ＺＣＢＦＢ０１Ｌ０５３）；
云南省创新人才培引计划（２００４ＰＹ０２２７）；科技部“十一五”科技支
撑计划（２００６ＢＡＩ０９Ｂ０３）
［通讯作者］ 陈昱君，Ｔｅｌ：（０８７６）８８８１５３０，Ｅｍａｉｌ：ｙｎｃｙｊ＠
ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ
土壤处理对三七根腐病控制作用研究
王 勇１，马承铸２，陈昱君１，李世东３，刘云芝１，杨建忠１
（１．云南省文山州三七科学技术研究所，云南 文山 ６６３０００；
２．上海市农业科学院 植物保护研究所，上海 ２０１１０６；
３．中国农业科学院 植物保护研究所，北京 １０００８１）
三七（Ｐａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ）是我国特有的名贵中
药材，三七的治疗及保健功效正日益受到人们的重
视。然而三七病害一直困绕着三七生产，其中三七
根腐病是影响三七产量的最主要因素。前人对该病
的发生与防治作过一些研究，如罗文富等［１］认为导
致根腐病的病原有多种，伍敦祥［２］、李忠义［３］等探
讨了部分药剂对该病的防治效果。本实验拟通过对
土壤处理技术的研究，探索出一条控制根腐病的新
途径，指导三七生产。
１ 材料
Ａ．９８％大扫灭粉剂（上海市农业科学院植物保
护研究所提供）１５ｇ·ｍ－２土壤熏蒸处理；Ｂ．９８％大扫
灭粉剂２０ｇ·ｍ－２土壤熏蒸处理；Ｃ．９８％大扫灭粉剂
４０ｇ·ｍ－２土壤熏蒸处理；Ｄ．７０％敌克松可湿性粉剂
（上海金桥化工厂生产）１５ｇ·ｍ－２土壤消毒处理；Ｅ．
不施药处理。
２ 方法
试验地设在砚山县郊址村民委本所试验场内，
选择已连作３年的地块进行。试验设种子、种苗２
组，各处理随机区组排列，每处理重复４次，每组各
２０个小区。种子试验小区面积１２５ｍ２，播种５００
粒。种苗试验小区面积３０ｍ２，定植１８０株。
土壤的熏蒸处理在墒面平整、土壤细碎的基础
上，根据各处理用药量将９８％大扫灭粉剂均匀撒施
于土表，随即人工翻耙入土，浇水至透后覆膜熏蒸土
壤１０ｄ，揭膜散毒１０ｄ即可播种移栽。用７０％敌克
松可湿性粉剂１５ｇ·ｍ－２与适量细土混合后均匀撒施
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第３３卷第１０期
２００８年５月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １０
Ｍａｙ，２００８