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Studies on antiviral constituents in stems and leaves of Pithecellibium clypearia

猴耳环抗病毒有效成分研究



全 文 :Hz,6H),645(1H,d,J=20Hz,8H),749(1H,d,
J=22Hz,2′H),685(1H,d,J=84Hz,5′H),
758(1H,dd,J=22,84Hz,6′H),559(1H,d,J=
14Hz,1″H),331~416(5H,m)。13CNMR[DMSO
d6,75MHz]δ:1563(C2),1334(C3),1776(C4),
1611(C5),986(C6),1641(C7),935(C8),
1569(C9),1039(C10),1209(C1′),1154(C2′),
1449(C3′),1483(C4′),1154(C5′),1216(C
6′),1078(C1″),819(C2″),769(C3″),858(C
4″),605(C5″)。上述光谱数据与文献[5]对照基本
一致,鉴定化合物Ⅶ为槲皮素3OαD阿拉伯糖
苷。
[参考文献]
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StudiesontheflavonesinofChrozophorasabulosa
SHIXinhong,LIUYouqiang,KONGLingyi
(ChinaPharmaceutialUniversity,Nanjing210038China)
[Abstract] Objective:TostudytheflavoneconstituentsinChrozophorasabulosa(Xinjiangorigin)Method:Thecompoundswere
extractedwith95% ethylalcohol,isolatedbyvariouscolumnchromatographyandidentifiedbyspectroscopicmethodsResult:Sevenfla
vanoidswereisolatedandidentifiedasquercetin(Ⅰ),kaempferol(Ⅱ),apigenin(Ⅲ),chrysoerid(Ⅳ),isoquercitrin(Ⅴ),chrysoerin7
OβDglucoside(Ⅵ)andquercetin3OαDarabinfuranoside(Ⅶ)Conclusion:Alofthesesevencompoundswereobtainedfromthis
genusforthefirsttime
[Keywords] Chrozophorasabulosa;flavone [责任编辑 李 禾]
[收稿日期] 20050910
[基金项目] 国家自然科学基金委员会资助课题(30340051)
[通讯作者] 张永文,Tel:(010)68585566439,Fax:(010)68584194,Email:zhangyw@cde.org.cn
猴耳环抗病毒有效成分研究
李药兰1,李克明2,苏妙贤1,梁锦堂3,陈玉武2,张永文4
(1暨南大学 生命科学技术学院 化学系,广东 广州 510632;2中日友好临床医学研究所,北京 100029;
3香港中文大学 生物系,香港 沙田;4国家食品药品监督管理局 药品评审中心,北京 100038)
[摘要] 目的:对抗炎中药猴耳环的化学成分进行研究。方法:采用体外抗病毒活性追踪的方法,应用大孔吸
附树脂吸附,聚酰胺、硅胶和凝胶柱色谱技术进行分离,根据理化性质和波谱数据鉴定其结构。结果:分离并鉴定
了6个化合物:tricetiflavan(5,7,3′,4′,5′pentahydroxylflavan)(1),myricitrin(myricetin3OαLrhamnopyranoside)(2),
quercitrin(quercetin3OαLrhamnopyranoside)(3),quercetin(4),methylgalate(5)和galicacid(6)。结论:化合物1~5为
首次从该植物中分离得到,其中化合物4被发现有较好的体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)活性。
[关键词] 豆科;猴耳环;化学成分;体外抗病毒活性;呼吸道合胞病毒
[中图分类号]R284.1;R2855 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2006)05039704
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中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vol31,Issue 5
March,2006
猴耳环为豆科中含羞草亚科围涎树属植物猴耳
环 PithecelibiumclypeariaBenth,广泛分布于我国南
方各省。该植物又名围涎树、蛟龙木等,具有抗菌消
炎,活血散结作用,有清热解毒、去湿敛疮的功效。
主要用于上呼吸道感染,用于治疗咽喉炎、急性扁桃
体炎、肺炎及急性胃肠炎等。猴耳环单方制剂———
猴耳环消炎片作为抗炎及呼吸道疾病药已得到广泛
的应用,其处方为猴耳环嫩枝叶的水提浸膏。猴耳
环在治疗胃肠炎成方制剂“正胃片”中也为方中君
药。以往仅有猴耳环中没食子酸成分的报道[1]。此
前的研究发现,猴耳环水提物对呼吸道合胞病毒
(RSV,respiratorysyncytialvirus)有体外抑制作用[2]。
本研究的目的是为进一步分离、鉴定猴耳环中的化
学成分,研究其体外抗呼吸道合胞病毒的活性
(CPE,cytopathicefectreductionassay)。
采用体外抗呼吸道合胞病毒活性追踪,结果得
到包括特利色黄烷(tricetiflavan,5,7,3′,4′,5′五羟
基黄烷)、杨梅苷(myricitrin,杨梅素3OαL鼠李吡
喃糖苷)、槲皮苷(quercitrin,槲皮素3OαL鼠李吡
喃糖苷)、槲皮素(quercetin)、没食子酸甲酯(methyl
galate)和没食子酸(galicacid)在内的6个单体化合
物。除没食子酸外,其他5个化合物首次从该植物
中得到,其中槲皮素具有较好的体外抗呼吸道合胞
病毒活性。
1 仪器与试药
XT4型熔点仪(未校正);岛津 UV-260紫外可
见分光光度计;INOVA-500核磁共振仪和 E
QUINOX-55型红外光谱仪;美国 ThermoFinnigan公
司LCODECAXP型LC-(ESI)MS质谱仪;聚酰胺粉
购自浙江黄岩生物化工厂;柱色谱硅胶(200~300
目)和硅胶薄层色谱板(GF254)为青岛海洋化工有
限公司产品;SephadexLH20为 Pharmacia公司产品;
有机溶剂均为分析纯。抗病毒阳性对照药利巴韦林
(ribavirin)购自 Sigma公司。猴耳环 Pclypearia购
自广东省药材公司,产地为广东从化,由北京中医药
大学生物教研室刘启福教授鉴定。标本(编号
200301)存于中日友好临床医学研究所药物研究室。
2 提取与分离
取猴耳环干燥茎叶 1500g,粉碎,用 50%丙酮
在室温中浸泡3d,过滤。滤液减压浓缩除去丙酮,
再转溶于水(3L),过 ZTC1型大孔吸附树脂柱,顺
序用20%,50%和95%乙醇洗脱,将 50%和 95%乙
醇洗脱液合并,浓缩至干,得到350g粗提物。将粗
提物经聚酰胺柱色谱分离,分别用 20%,40%,60%
和80%的乙醇溶液洗脱,得到4个组分。将40%乙
醇洗脱组分300mg经硅胶(200~300目)柱色谱(氯
仿甲醇甲酸梯度洗脱)分离和反复 SephadexLH20
凝胶过滤色谱(甲醇和氯仿甲醇洗脱)分离得到化
合物1(150mg),2(310mg),3(30mg),4(120mg),5
(330mg)和6(230mg)。
3 结构鉴定
化合物1 白色粉末,在硅胶薄层色谱板上展
开后,在紫外光灯254nm下显示为暗斑,对FeCl3E
tOH试剂显深蓝色。ESIMSm/z:487[M+ +1+
Na],465[M+++1],319[M++1-rha]。1HNMR
(500MHz,CD3OD)δ:64(1H,d,J=15Hz,H8),
62(1H,d,J=15Hz,H6),为黄烷 A环的质子信
号;69(2H,s,H2′,6′)为黄烷 B环的质子信号。13C
NMR(125MHz,CD3OD)δ:15738(C7),15720(C
5),15668(C9),14612(C3′,5′),13402(C10),
13268(C4′),10570(C2′,6′),10156(C1′),9554
(C6),9553(C8),7770(C2),3011(C4),1948
(C3)。故确定化合物1为特利色黄烷,即:5,7,3′,
4′,5′五羟基黄烷。
化合物 2 黄色粉末,mp180~183℃,HClMg
粉反应呈玫瑰黄色。在硅胶薄层色谱板上展开后,
FeCl3EtOH试剂显蓝绿色,Molish反应阳性,推测为
黄酮苷类化合物。UV(MeOH)nm:266,355。IR
(KBr)cm-1:3438(OH),1647(C=O),1616(C=
C),1554,1535,1500(Ar)。ESIMSm/z:319(M+
+1-rha),465[M++1]。1HNMR(500MHz,CD3OD)
δ:694(2H,s,H2′,6′),636(1H,d,J=20Hz,H
8),619(1H,d,J=20Hz,H6)为黄酮苷元的质子
信号,且与杨梅素的数据基本一致[6];530(1H,s,
H1″),096(3H,d,J=61Hz,H6″)为鼠李糖苷质子
信号,根据 H6″的偶合常数确定该糖苷键为α型。
13CNMR(125MHz,CD3OD)δ:17845(C4),16526
(C7),16196(C5),15807(C2),15709(C9),
14651(C3′,5′),13719(C4′),13500(C3),12033
(C1′),10864(C2′,6′),10459(C10),10267(C
1″),9945(C6),9428(C8),7201(C4″),7124(C
5″),7110(C3″),7073(C2″),1824(C6″)。故确定
化合物2为杨梅苷[3],即:杨梅素3OαL鼠李吡喃
糖苷。
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化合物3 黄色粉末,mp180~183℃,在硅胶
薄层色谱板上展开后,FeCl3EtOH试剂显蓝绿色,
Molish反应阳性,推测为黄酮苷类化合物。UV
(MeOH)nm:265,351。IR(KBr)cm-1:3439(OH),
1649(C=O),1615(C=C),1534,1502,1450
(Ar)。ESIMS m/z:303[M+ +1-rha],448
[M+]。1HNMR(500MHz,CD3OD)δ:733(1H,s,H
2′),729(1H,d,J=83Hz,H6′),690(1H,d,J=
83Hz,H5′),属于ABX系统,为黄酮化合物B环上
的质子信号;636(1H,s,H8),619(1H,s,H6),属
AX系统,为黄酮A环上的质子信号;534(1H,s,H
1″),093(3H,d,J=60Hz,H6″),为鼠李糖苷质子
信号,根据 H6″的偶合常数确定该糖苷键为α型。
以上数据确定该化合物为槲皮素的鼠李糖苷。上述
数据与前面槲皮素的1HNMR数据对照,H6,8和5′
位的3个质子位置几乎没变,H2′,6′的 2个质子向
高场位移,鼠李糖应连接于槲皮素的 3位。13CNMR
(125MHz,CD3OD)δ:1797(C4),1659(C7),1632
(C9),1593(C5),1585(C2),1498(C4′),1464
(C3′),1363(C3),1230(C1′),1229(C6′),1170
(C5′),1164(C2′),1059(C10),1036(C1″),999
(C6),948(C8),733(C4″),722(C3″),721(C
2″),719(C5″),177(C6″)。上述数据与文献[4,5]
一致,故确定化合物 3为槲皮素3OαL鼠李吡喃
糖苷。
化合物4 黄色针状结晶(甲醇),mp310~312
℃,在硅胶薄层色谱板上展开后,FeCl3EtOH显蓝绿
色,显示为黄酮类化合物。UV(MeOH)nm:259,298
(sh),373。IR(KBr)cm-1:3438(OH),1644(C=O),
1629(C=C),1572,1501,1488(Ar)。ESIMS
m/z:301[M+ -1]。1HNMR(500MHz,CD3OD)δ:
773(1H,d,J=18Hz,H2′),762(1H,dd,J=18,
85Hz,H6′),687(1H,d,J=85Hz,H5′),为黄酮
化合物B环上的质子信号。638(1H,d,J=19Hz,
H8),617(1H,d,J=19Hz,H6),为黄酮A环上的
质子信号。13CNMR(125MHz,CD3OD)δ:1774(C
4),1656(C7),1626(C9),1583(C5),1488(C
2),1481(C4′),1463(C3′),1373(C3),1242(C
1′),1217(C6′),1163(C5′),1160(C2′),1046
(C10),993(C6),945(C8)。上述数据与文献[6]
报道的槲皮素的相应数据基本一致,而且该化合物
TLC与槲皮素标准品Rf值一致,故确定化合物4为
槲皮素。
化合物5 白色粉末,mp146~148℃。在硅胶
薄层板上展开后,FeCl3EtOH试剂显蓝黑色,显示该
化合物有酚羟基。1HNMR(500MHz,CD3OD)δ:703
(2H,s,H2,6),380(3H,s,OCH3)。13CNMR(125
MHz,CD3OD)δ:1690(C1,COO),1465(C4,6),
1400(C5),1215(C2),1101(C3,7),523(C8,
OCH3)。上述数据与文献[7]报道的没食子酸甲酯
的相应数据基本一致,故确定化合物 5为没食子酸
甲酯。
化合物6 白色粉末,mp236~238℃。1HNMR
及13CNMR数据与文献[8]报道的没食子酸的相应
数据基本一致,而且该化合物TLC与标准品Rf值一
致,故确定化合物6为没食子酸。
4 体外抗病毒活性
首先在光学显微镜下观察化合物对细胞繁殖的
作用,测定化合物的细胞毒性,并计算出样品的最大
无毒性浓度(MNCC)和半数细胞毒性浓度(CC50)[2]。
化合物的抗病毒活性通过观察样品对病毒引致的细
胞病变的抑制来测定(CPE法),并以最大无毒性浓
度为待测样品的起始浓度[2,7]。本实验的病毒为呼
吸道合胞病毒(RSV),采用的细胞为 Hep2细胞,以
抗RSV药物利巴韦林为阳性对照。实验结果显示,
化合物4(槲皮素)具有很好的体外抗呼吸道合胞病
毒活性,其半数抑制浓度 IC5025μg·mL
-1,治疗指
数SI(CC50/IC50)180,优于阳性对照药利巴韦林(IC50
30μg·mL
-1,SI208)。
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StudiesonantiviralconstituentsinstemsandleavesofPithecelibiumclypearia
LIYaolan1,LIKeming2,SUMiaoxian1,LEUNGKantong3,CHENYuwu2,ZHANGYongwen4
(1ChemistryDepartment,LifeScienceandTechnologyInstitute,JinanUniversity,Guangzhou510632,China;
2ChinaJapanFriendshipInstituteofClinicalMedicalSciences,Beijing100029,China;
3DepartmentofBiology,TheChineseUniversityofHongKong,HongKong,China;
4CenterforDrugEvaluation,StateFoodandDrugAdministration,Beijing100038,China)
[Abstract] Objective:TostudytheantiviralconstituentsinthestemsandleavesofPithecelibiumclypeariaMethod:Thecon
stituentsofPclypeariaweresystematicalyseparatedwithvariouschromatographictechniquesincombinationwithantiviralactivitymonitor
ingTheirstructureswereelucidatedbyphysicalandchemicalpropertiesandspectraldataResult:SixcompoundswereisolatedfromP
clypeariaandwereidentifiedas:tricetiflavan(5,7,3′,4′,5′pentahydroxylflavan)(1),myricitrin(myricetin3OαLrhamnopyranoside)
(2),quercitrin(quercetin3OαLrhamnopyranoside)(3),quercetin(4),methylgalate(5)andgalicacid(6)Conclusion:Compound
1~5wereobtainedfromthisplantforthefirsttimeCompound4wasfoundtoshowanobviousantirespiratorysyncytialvirus(RSV)activity
[Keywords] Fabraceae;Pithecelibiumclypearia;chemicalconstituents;invitroantiviralactivity;respiratorysyncytialvirus
[责任编辑 李 禾]
薄荷非挥发性成分研究
曾建伟1,2,钱士辉2,吴锦忠1,杨念云2
(1福建中医学院 药学系,福建 福州 350003;2江苏省中医药研究院,江苏 南京 210028)
[摘要] 目的:为促进薄荷的综合利用,对其非挥发性成分进行系统研究。方法:采用硅胶柱色谱、重结晶和
光谱法分离鉴定化合物。结果:从薄荷中分离并鉴定了8个化合物,分别是刺槐素(Ⅰ)、椴树素(Ⅱ)、蒙花苷(Ⅲ)、
正丁基βD吡喃果糖苷(Ⅳ)、熊果酸(Ⅴ)、齐墩果酸(Ⅵ)、β谷甾醇(Ⅶ)和胡萝卜苷(Ⅷ)。结论:化合物Ⅰ~Ⅴ均
为首次从该植物中分离得到。
[关键词] 薄荷;非挥发性成分;刺槐素;椴树素;蒙花苷;正丁基βD吡喃果糖苷;熊果酸
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2006)05040003
[收稿日期] 20050820
[基金项目] 国家科技部“十五”攻关项目(2001BA701A6203);
江苏省公益研究项目(M2004525)
[通讯作者] 钱士辉,Tel:(025)85639644,Email:zjwlantu@
126.com
薄荷为唇形科植物薄荷 MenthahaplocalyxBriq
的干燥地上部分,性凉味辛,具有宣散风热、清头目、
透疹之功效,用于治疗风热感冒、风温初起、头痛、目
赤、喉痹、口疮、风疹、麻疹、胸胁胀闷等[1]。现代研
究发现,薄荷含挥发油、黄酮、有机酸、氨基酸等化学
成分,对中枢、消化、呼吸、生殖等系统的药理作用明
显[2]。薄荷不仅是常用中药,更是特种经济作物。
但在薄荷产区,将提取挥发油后的薄荷残渣作为废
物弃去,这是对薄荷药材资源的一种严重浪费。为
了促进薄荷的综合利用,作者对薄荷残渣的非挥发
性成分进行了系统研究,采用溶剂萃取、硅胶柱色谱
和重结晶等方法,从薄荷的乙醇提取物中,分离得到
8个化合物,经理化常数和波谱数据鉴定,并与文献
对照,确定其分别为:刺槐素(Ⅰ)、椴树素(Ⅱ)、蒙
花苷(Ⅲ)、正丁基βD吡喃果糖苷(Ⅳ)、熊果酸
(Ⅴ)、齐墩果酸(Ⅵ)、β谷甾醇(Ⅶ)和胡萝卜苷
(Ⅷ)。其中,化合物Ⅰ~Ⅴ均为首次从该植物中分
离得到。
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中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vol31,Issue 5
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