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8 2 肿瘤 9 8 9 1年 3 月 (第 9 卷第 2 期 )
相思子毒性蛋白质成分的研究
上海中医学院 中药研究所 方新德 孙忠鸣 应文斌 沈培芝 史芝英
相思子为豆科植物相思子 (A b a rs p r ect a oi ru,
)L 的种子 ,黄豆大小 ,外壳鲜红 ,种脐端周 围乌黑色 。
a本草纲目” 等书中均有记载 , 主治疥疮 、 顽癣 , 通九
窍 ,治心腹气 , 止热闷头痛 、 风痰等 。 已从相思子仁
分离出相思子毒蛋白 , 具有强烈的毒性。 不少研究
表明相思子毒蛋白对于多种实验动物肿瘤具有抑制
作用 , 与化疗药物环磷酸胺合并应用可增强抗癌作
用而不增加毒性。 有些实验资料表明相 思 子 毒 蛋
白比具有类似分子结构的蓖麻毒蛋白和白喉毒素有
更强的抗肿瘤活性 。 近年 , 运用单克隆 抗体 作 为
载体 , 与毒性物质结合定向地导向肿瘤靶细胞 , 进
行免疫毒素或导弹型药物的研究 , 给肿瘤带来了新
,的希望 。 相思子毒蛋白或其 A链是一种理想的 “ 弹
头 ” 。 已发现从不同来源的相思子所得的相思 子 毒
蛋白的生物活性有差异 。 我们林云南昆明产相思子
仁提得相思子毒蛋白 ,现报道如下 :
一 、 材料 相思子产自云南昆 明 , 经鉴定为豆
科植物 相 思 子 ( A b r u s p er e a t o r iu s工. ) 的 种 子。
D E A E 一 C e l l u lo s e ( D E
一 32 ) 为 W恤 tm a n 产 品。
eS p ha or 留 4 B为 P h a 1’nJ ac ia 产品 . 超滤膜型号 CL M ,
分子截留量为 1 万 。 标准蛋白为 is 卿 a 产品 。 丙烯
酞胺为化学纯试剂 , 甲叉双丙烯酞胺为 lA -dr 加 h 产
配J 。 绵羊红细胞采自同一绵羊 。 实验采用昆明种小
鼠 20 士箱 ,雌雄各半。
二 、 粗毒蛋 白提取 去壳相 思 子 仁 10 09 , 用
6侣乙酸于 犷 C浸泡过夜 ,次日用高速组织捣碎机于
o C粉碎 , 匀浆以 8 00 09 离心 20 分钟 。 沉淀部分加
入 5粥乙酸 ,同前再次高速捣碎离心 。 合并二次离心
的上清液 , 以 35男饱和度 ( N瓦 ) : 5 0 ; 处理 ,以 8 00 0 9
离心 20 分钟 , 分去沉淀部分 。 上 清液 继 续 加入
( N工工` ) 2 5 0 ` 至 9 0粥饱和度 , 再以 80 009 离心 20 分
钟 ,得沉淀部分 ,使溶于少量蒸馏水中 ,置透析袋内 ,
对水透析至无 N H丈离子 。 透析 液 以 10 0 馆 离
心 20 分钟 , 取上清液得粗蛋白。 以上操作均在 o4 C
以下进行。
三 、 相思子毒蛋白的分离纯化 粗毒蛋白经超
滤适当浓缩后以 p H S . 6 , 10 m M T ir s 一 H C I 缓冲液透
析至平衡 ,然后上 D E A E 一 C e] l ul o se 柱进行柱层析 ,
用 28 0m协紫外检测器检测洗脱液蛋白浓度 ,洗脱条
件与层析结果共得四个主要洗脱峰 ,取 L , 。。 较小 的
第 2 峰 , 经超滤浓缩至小体积 , 以 p H 7 . 7 , 10 mM
rT is扭 1C 缓冲液透析至平衡 , 上 eS p ha or s 4 B 柱 ,
用 0 . I M 半乳糖洗脱到单一峰为 纯相 思 子 毒 蛋
白。
四 、 相思子毒蛋白的鉴定 十二烷基硫 酸 钠 -
聚丙烯酞胺凝胶电泳 ( S D S 一P A G E ) 显示相思子毒
蛋白为一分子量为 65 , 00 的均一蛋白成分 。 经 刀-
统基 乙醇处理后再行 S D S 一P A G E , 可见代表 A 、 B
二条肤链的二个区带 , 分 子 量 分 别 为 30 , 00 与
3 5, 。。。 。 小鼠腹腔内给药 , 测得相思子毒 蛋 白 的
L D : 。。 为 o , 5 5协g /k g ( 4 8h ) , 较粗毒蛋白毒性 (L D I 。。
= 10阳 /k g (4 8h) )提高 1 8 倍以上相思子毒蛋白浓度
达 10 0卜g /ml 时 , 仍未见对绵羊红细胞有血凝作用 。
粗毒蛋白 2 . 5 协g /m l 浓度时 , 对绵羊红细胞即有血
凝作用 。
讨 论
相思子凝集素具有和相思子毒蛋白十分相似的
分子结构 ,但具有不同的生物活性 ,前者毒性低而对
红细胞血凝作用极强。 。上述活性侧试结果表明我们
提纯的相思子毒蛋白毒性强于文献报道 ( 1印g /k g ,
48 h)
,
. 而血凝作用很弱 , 证明已和相思子凝集素 分
离。
( 1 9 8 6 年 1 1 月 1 3 日收稿 )