全 文 ：入液相色谱仪中 o依法测定 o另进对照品溶液 o以外
标法计算含量 o结果见表 uo色谱图见图 t∀
表 u 样品中槲皮素含量
药材批次 产地 槲皮素 r°ª# ªpt
ussvsutx 贵州省贵定县 s1sv{ t
ussws|sx 贵州省龙里县 s1sxy u
ussxsztx 贵阳市花溪区 s1tv| z
ussxswvs 贵阳市花溪区 s1s{t |
图 t 对照品及样品 °≤图
q对照品 ~
q滇白珠供试品 ~ tq槲皮素
3 讨论
流动相组成曾考察过 ≤v 2u ≈{ kxxΒwxlo
≤v 2s1wh v °w ≈| kxx Βwxlokxs Βxslokw{ Β
xulo≤v ≤2s1wh v °w kwsΒyslo分离效果均不如
≤v ≤2s1wh v °w kvyΒywl∀滇白珠药材含有以
槲皮素为苷元的苷 o实验中曾考察过以 u1xh 硫
酸水解后再用醋酸乙酯萃取 o测得槲皮素的含量比
用甲醇 2xh盐酸 kwΒtl水解时少 o最后确定用甲醇 2
xh盐酸水解 ∀曾考察过提取时间分别为 uotos1x
«o盐酸分别为 th oxh otsh ouxh o水解时间分别
为 wxovsotx °¬±o从而确定了供试品溶液制备方法 ∀
≈参考文献
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t|{{}{{q
≈u 芮和恺 o王正坤 q中国精油植物及其利用 ≈ q北京 }科学出版
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≈w 江苏新中医学院 q中药大辞典 ≈ q上海 }上海科学技术出版
社 ot|zz}t{z|q
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中草药 ot||{ou|k{l}xs{q
≈y 马小军 o赵 玲 o赵玉娟 o等 q不同来源滇白珠中木脂素苷的含
量测定 ≈ q中国中药杂志 oussuouzktl}uxq
≈z 何 迅 q紫外分光光度法测定滇白珠药材中总黄酮的含量
≈ q贵阳医学院学报 ousstouykul}twvq
≈{ 苏流坤 o胡英杰 q反相 °≤法测定鱼腥草及其制剂中槲皮苷
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≈| 袁铁流 q°≤法测定银杏叶中槲皮素含量的研究 ≈ q湖南中
医杂志 ousssotykvl}zvq
≈责任编辑 张宁宁
≈收稿日期 ussy2sv2su
≈通讯作者 3 黄璐琦 oר¯}kstslywstwwtt2u|xy
苍术不定根诱导培养的研究
袁 媛 o吕冬梅 o黄璐琦 3 o郭兰萍
k中国中医科学院 中药研究所 o北京 tsszssl
苍术源于菊科苍术属植物苍术 Ατραχτψλοδεσ λαν2
χεαk׫∏±¥ql ⁄≤的根茎 o其功效为燥湿健脾 !驱风
散寒 !明目 ≈t ∀近年来 o随着国际市场对苍术的需
求量日益增加 o茅苍术被掠夺性采挖 o加之对茅苍术
生态环境的人为破坏 o造成茅苍术资源的枯竭 o使其
濒临灭绝 ≈u ∀目前利用生物技术进行中药资源繁
殖并大规模生产其有效成分已成为一条新的发展途
径 o但药用植物细胞培养的弊端之一是有效成分的
含量不稳定 o这主要是由于大多数有效成分均为次
生代谢产物 o其合成在细胞阶段表现不强造成的 o而
不定根培养可以解决这一问题 ≈v ∀本实验旨在利
用组织培养技术快速获得苍术的不定根 o为进一步
大规模生产其有效成分和研究苍术有效成分的代谢
途径建立技术平台 ∀
1 材料和方法
1q1 材料 苍术 Α. λανχεα种子由湖北中医学院詹
亚华教授鉴定并提供 ∀
1q2 苍术无菌苗的培养 将苍术种子用自来水浸
泡过夜后 o冲洗 v遍 ∀将种子放置于湿润滤纸上 o待
子叶展开后 o用 s1th的升汞浸泡 ts °¬±后 o再用无
菌水冲洗 u ∗ v遍 o备用 ∀将消毒好的苍术材料接种
#xy#
第 vu卷第 t期
ussz年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ t
¤±∏¤µ¼o ussz
于 tru ≥培养基中 o培养 vs §后无菌苗长成 ∀
1q3 苍术不定根的培养 分别将根和叶柄切成
s1x ¦°左右的小段 o将叶切成 s1x ¦°u左右的小块 ∀
然后将切好后的根 !叶柄 !叶 !子叶放置到含有不同
浓度植物生长调节剂的不定根诱导培养基上 ∀每
tx §继代一次 ∀待不定根长至 t ¦°左右 o将其从叶
片上剥离下来 o转至新的培养基上继续培养 ∀
114 培养基和培养条件 以 ≥培养基为基本培
养基 ∀不同诱导培养基中的植物生长调节剂浓度见
表 t∀所有培养基中的蔗糖含量为 vs ª# pt o琼脂
含量为 { ª# pt o³ x1{∀培养基在 tut ε 灭菌 us
°¬±∀培养温度为 ux ε ∀
表 t 不同诱导培养基中的植物生长调节剂浓度
培养基编号 y2
r°ª# pt r°ª# pt y2
r
t t1s s1t ts
u t1s s1u x
v t1s s1x u
w t1s s p
x t1s t1s t
2 结果与分析
2q1 不同植物生长调节剂浓度对不定根诱导和生
长的影响 主要考察了 y2
和 对苍术愈伤组
织及不定根的诱导和组织生长的影响 ∀取叶片
ks1x ¦°u l分别接种于 y种培养基上 otu §后统计愈
伤组织生长情况 o再过 t周后统计不定根生长情况 ∀
从表 u中可以看出 o接种于 s1x °ª# pt 的 ≥
培养基 kv号 l中的叶片形成愈伤组织及不定根的时
间快于其它培养基 o其在接种后 ts §左右开始形成
愈伤组织 otx §左右形成不定根 o而在其他 w种培养
基中 o愈伤组织及不定根的形成较缓慢 o约相对延迟
u ∗ v §∀ v号培养基形成的不定根呈浅绿色 o外带
有白毛 o较粗壮 !生长旺盛 o且诱导率较高 o为
v|1uvh ∀
表 u 不同植物生长调节剂浓度对
苍术不定根诱导和生长的影响
培养基
编号
接种
数
愈伤
组织数
愈伤组织
诱导率 rh
不定
根数
不定根诱
导率 rh
不定根
生长状态
t tzs t s1x| u t1tz 生长缓慢
u tws v u1tw w u1{x 生长缓慢
v tvs vv ux1v{ xt v|1uv 生长旺盛
w tzs t s1x| s s 无生长
x tws uy t{1xz x v1xz 生长缓慢
2q2 不同外植体对不定根诱导的影响 为了确定
苍术不定根的最佳诱导部位 o分别将根 !叶 !叶柄 !子
叶接种于 v号培养基上 ous §后统计不定根生长的
情况 k见表 vl∀试验表明 o在这 w种外植体中叶片
的不定根诱导率最高为 v{1{|h o且生长较旺盛 ∀
根段诱导不定根虽然启动较快 o诱导率也较高为
vsh o但长势较弱 o且有褐化现象 ∀子叶的诱导率较
低 o为 tw1u{h ∀而以叶柄为外植体 o不能诱导愈伤
组织及不定根的产生 ∀
表 v 不同外植体对不定根诱导的影响
诱导
部位
接种
数
愈伤
组织数
愈伤组织
诱导率 rh
不定
根数
不定根
诱导率 rh
根 vs tu ws1ss | vs1ss
叶片 vy | ux1ss tw v{1{|
叶柄 vx s s s s
子叶 vx tv vz1tw x tw1u{
2q3 不同植物生长调节剂对离体不定根生长的影
响 主要考察了 和
对苍术离体不定根生
长的影响 ∀取剥离的不定根分别接于含有 t1s °ª
# pt n s1u °ª# pt ×os1u °ª# pt × n
t1s °ª# pt
os1u °ª# pt × n u1s °ª# pt
的 ≥培养基中 o观察其生长情况 ∀结果表明 o
与 相比 o
可以显著促进离体不定根的生
长 ~且 t1s °ª# pt的效果优于 u1s °ª# pt o更有
利于不定根的伸长生长 ∀
3 小结
本方法将愈伤组织诱导和不定根诱导相结合 o
且采用相同的培养基 o具有操作简便 !周期短 !见效
快的优点 ∀苍术不定根诱导培养的合理方案应为 }
苍术种子萌发后 o以 s1x ¦°u的叶片为外植体接种在
≥ nt1s °ª# pt y2
ns1x °ª# pt 的培养
基上诱导并培养苍术的不定根 o在 tx §左右进行继
代培养 ∀不定根离体培养较适宜的培养基为 ≥ n
s1u °ª# pt × n t1s °ª# pt
∀在本研究中
从利用外植体诱导愈伤组织到获得可离体生长的不
定根 o大约需要 ys §∀
≈参考文献
≈t 中国药典 ≈≥ q一部 qussx}tttq
≈u ¨≥ o ¨ ≥o ∏≠ o ·¨¤¯q ׫¨ ¦²±¶¨µ√¤·¬²± ¤±§∏·¬¯¬½¤·¬²± ²©
Ατραχτψλοδεσ λανχεα k ׫∏±¥ql ⁄≤ ≈ q ° ¤¯±· ¶¨ ∞±√¬µ²±o
t||vouktl}tq
≈v 肖尊安 o熊 红 q不定根发生机理的研究进展 ≈ q生物技术通
报 oussuokvl}vtq
≈责任编辑 张宁宁
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第 vu卷第 t期
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