全 文 ：３种健脾补气方药对脾气虚证大鼠
肠道菌群的影响
彭 颖１，２，金 晶１，杨静玉２，吴春福２，李晓波１
（１．上海交通大学 药学院，上海 ２００２４０；
２．沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 １１００１６）
［摘要］ 目的：研究３种健脾补气方药对脾气虚证大鼠肠道菌群的影响，并探讨其作用机制。方法：利用运动
疲劳兼饥饱失常法复制大鼠脾气虚证模型，采用ＥＲＩＣＰＣＲ（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｌｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｃｏｎｓｅｎｓｕｓＰＣＲ）指纹
图谱分析技术观察比较灌胃给予四君子汤（含生药１０８，３６，１２ｇ·ｋｇ－１）、理中汤（１６２，５４，１８ｇ·ｋｇ－１）和补
中益气汤（１４４，４８，１６ｇ·ｋｇ－１）３种临床常用健脾补气方药对脾气虚证大鼠的治疗作用，研究其对肠道菌群的
影响。结果：造模后大鼠肠道菌群ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱条带位置、数量及丰度与健康状态相比均发生改变，说明其
肠道菌群发生了一定变化。给予３种健脾补气方药后，大鼠ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱多样性指数（ｓｈａｎｎｏｎ＇ｓｉｎｄｅｘ，Ｈ′）
有所回升，各给药治疗组与健康时期的相似性系数 （ｓｏｒｅｎｓｏｎ＇ｓｐａｉｒｗｉｓｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ，Ｃｓ）与模型组相比显著
升高。结论：ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱分析技术是分析肠道菌群变化较理想的１种方法，该技术可用于脾气虚证本质和
治疗脾气虚证药物的筛选或评价相关研究中。３种健脾补气方药对肠道菌群均具有一定的调节作用，其对肠道菌
群的调节可能为其治疗脾气虚证的作用机制之一。
［关键词］ 脾气虚证；肠道菌群；ＥＲＩＣＰＣＲ；健脾补气方药
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）２１２５３００６
［收稿日期］ ２００８０４１０
［基金项目］ 国家自然科学基金重大项目（９０４０９０１８）
［通讯作者］ 李晓波，Ｔｅｌ：（０２１）３４２０４８０６，Ｅｍａｉｌ：ｘｂｌｉ＠ｓｊｔｕ．
ｅｄｕ．ｃｎ
脾虚证是中医临床常见证候，包括脾气虚、脾阴
虚、脾阳虚及脾虚兼证等多种证型，其中脾气虚证为
“脾”功能失调最基本也最常见的病理变化，主要以
消化吸收功能减退为主，并伴有全身性气虚表现。
研究表明，脾气虚证是反映机体脾胃生理机能不足
的综合征［１］，与肠道菌群的变化有着十分密切的关
系［２４］。脾气虚证使机体出现消化吸收障碍，机体各
脏器间的平衡遭到破坏进而导致菌群失调，而菌群
失调又加重脾气虚证症状。脾虚泄泻时，肠蠕动加
快，肠道中常住菌大量排出，外源菌相应增加，有潜
在致病性的梭菌、酵母菌增多，这导致肠道脂肪酸代
谢紊乱和胆盐代谢障碍，进而又促进腹泻的发生，而
腹泻又导致肠道菌的进一步紊乱，形成恶性循
环［５］。据报道，脾虚腹泻患者的菌群失调较非脾虚
腹泻患者更为严重［２］；脾虚患者的双歧杆菌／肠杆
菌比值低于正常人［３］；腹泻型肠易激综合征脾虚证
患者的双岐杆菌、乳杆菌、消化球菌明显减少［４］。
本研究采用 ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱分析方法［６］，从肠
道菌群改变角度探讨脾气虚证本质，研究临床治疗
脾气虚证常用方药四君子汤、理中汤和补中益气汤
对脾气虚证大鼠肠道菌群的影响，并探讨其作用机
制。
１ 材料
１．１ 动物 健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠１０４只，（２００±２０）ｇ，
雌雄各半，购于沈阳药科大学实验动物中心（动物
许可证ＳＣＸ（辽）２００３００１２）。分为空白组、模型组、
阳性药组、中药反证对照组（半夏厚朴汤）、四君子
汤高中低剂量组、理中汤高中低剂量组、补中益气汤
高中低剂量组共１３组，每组８只。
１．２ 药物 阳性药：口服地衣芽孢杆菌活菌颗粒剂
（沈阳第一制药厂，批号 Ｓ２００１００２２）用温水冲泡至
１３５ｇ·Ｌ－１。４℃保存待用。半夏厚朴汤：制半夏、
茯苓、厚朴、苏叶、生姜按４∶４∶３∶３∶２的配方组成，生
药用１０倍蒸馏水浸泡２ｈ后加蒸馏水煎煮３次，每
次４０ｍｉｎ，过滤，合并３次滤液，加热浓缩至含生药
０４３ｇ·ｍＬ－１（临床等效量）。４℃保存待用。四君
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子汤：人参、白术、茯苓、甘草按１０∶９∶９∶６的配方组
成，煎煮方法同上。低浓度水浴加热浓缩至０１２ｇ
·ｍＬ－１，中浓度浓缩至 ０３６ｇ·ｍＬ－１（临床等效
量），高浓度浓缩至１０８ｇ·ｍＬ－１。４℃保存待用。
理中汤：党参、白术、干姜、炙甘草按１∶１∶１∶１的配方
组成，煎煮方法同上。低浓度水浴加热浓缩至０１８
ｇ·ｍＬ－１，中浓度浓缩至０５４ｇ·ｍＬ－１（临床等效
量），高浓度浓缩至１６２ｇ·ｍＬ－１。４℃保存待用。
补中益气汤：黄芪、人参、当归、白术、炙甘草、柴胡、
升麻、陈皮按６∶１∶１∶１∶３∶２∶２∶２的配方组成，煎煮方
法同上。低浓度水浴加热浓缩至０１６ｇ·ｍＬ－１，中
浓度浓缩至０４８ｇ·ｍＬ－１（临床等效量），高浓度浓
缩至１４４ｇ·ｍＬ－１。４℃保存待用。
１．３ 试剂 裂解液Ⅰ：１５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＣｌ，１００
ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＥＤＴＡ·Ｎａ２，ｐＨ８０。裂解液Ⅱ：１００
ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＣｌ，５００ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＴｒｉｓＨＣｌ，ｐＨ８０。
ＰＢＳ缓冲液（ｐＨ７４，０１ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸钠缓冲液）：
７７４ｍＬ１ｍｏｌ·Ｌ－１Ｎａ２ＨＰＯ４，２２６ｍＬ１ｍｏｌ·Ｌ
－１
ＮａＨ２ＰＯ４。Ｔｒｉｓ乙酸（ＴＡＥ）、Ｔｒｉｓ硼酸（ＴＢＥ）、加样
缓冲液、溴化乙锭（ＥＢ）等溶液参照文献配制［７］。
ＰＣＲ试剂盒（ｄＮＴＰｓ，Ｂｕｆｅｒ，ＭｇＣｌ２，ＨｏｔｓｔａｒＴａｑ酶）、１
ｋｂｐｌｕｓＤＮＡＬａｄｄｅｒ（１ｋｂｐ递增分子标准）购于北京
天为时代有限公司；引物由上海生工生物工程有限
公司合成；Ｎａ２ＨＰＯ４，ＮａＨ２ＰＯ４，ＥＤＴＡ·Ｎａ２，氯仿、异
戊醇、冰醋酸、ＨＣｌ等购于上海化学试剂有限公司；
Ｔｒｉｓ、溴化乙锭、溶菌酶、聚乙烯吡咯烷酮（ＰＶＰ），十
二烷基羧酸钠（ＳＤＳ），Ｔｒｉｓ饱和酚购于上海思吉生
物制品有限公司；ＡｇａｒｏｓｅＬＥ购于上海捷倍思基因
技术有限公司。
１．４ 仪器 ＰＴＣ－１００ＰＣＲ扩增仪（ＰＴＣ－１００ＴＭ
ＰｅｌｔｉｅｒＴｈｅｒｍａｌＣｙｃｌｅｒ，ＭＪ）；ＰＣＲ超净工作台（Ｈｏｌ
ｔｅｎ）；５４１７Ｒ型离心机（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）；恒温混匀器（ｅｐ
ｐｅｎｄｏｒｆ）；Ｖｏｒｔｅｘ－２涡旋混匀器（ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＩｎｄｕｓｔｉｅｓ，
Ｉｎｃ）；Ｔａｎｏｎ２０１０凝胶成像仪（上海天能公司）；Ｈ５
型水平电泳仪（北京六一仪器厂）；ＴａｎｏｎＥＰＳ１００
稳流器（上海天能公司）。
２ 方法
２．１ 脾气虚证模型复制和样品收集 除空白组外，
其他各组大鼠每日在３８℃温水中强迫其游泳至疲
劳，隔天禁食，连续２０ｄ复制脾气虚证模型［８］。第
２１天开始阳性药组灌胃给予地衣芽孢杆菌制剂
１６２ｍｇ·ｋｇ－１；反证对照组灌胃给予半夏厚朴汤
（含生药，下同）４３ｇ·ｋｇ－１；四君子汤高、中、低剂
量组分别灌胃给予１０５，３５，１２ｇ·ｋｇ－１；理中汤
各剂量组分别灌胃给予１６２，５４，１８ｇ·ｋｇ－１；补
中益气汤高、中、低剂量组分别灌胃给予１４４，４８，
１６ｇ·ｋｇ－１；其他各组给予蒸馏水，各组灌胃体积
均为００１ｍＬ· ｇ－１，连续治疗１０ｄ。
分别在造模前１ｄ、造模成功后、治疗１０ｄ后收
集新鲜粪便样品约１ｇ，置于５ｍＬ无菌的 ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ
管中，－２０℃保存备用。
２．２ 大鼠粪便样品肠道菌群总ＤＮＡ的提取 将０２
ｇ新鲜样品置于２ｍＬ离心管中，加入ＰＢＳ缓冲液，充
分均质化后离心，取上清，重复２次，合并上清后再次
低速离心去除杂质。高速离心取沉淀，沉淀用ＰＢＳ洗
涤３次。加入裂解液Ⅰ、溶菌酶及ＲＮａｓｅ３７℃温浴３０
ｍｉｎ后加入裂解液Ⅱ及ＳＤＳ冰浴５ｍｉｎ。加入饱和酚、
氯仿和异戊醇（２５∶２４∶１）进行抽提ＤＮＡ，重复氯仿 ∶
异戊醇抽提２次。加入醋酸钠及乙醇，－２０℃沉淀，
ＤＮＡ用７０％乙醇洗涤，真空干燥后１００μＬ去离子无
菌水溶解备用［９］。总 ＤＮＡ样品在１％琼脂糖凝胶
（含ＥＢ０５ｇ·ｍＬ－１）中电泳检测，电泳后在凝胶成
像仪上检测并稀释不同浓度。
２．３ ＥＲＩＣＰＣＲ扩增反应和产物检测 扩增反应体
系为 ２５μＬ，组成为：２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ
８４），５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ，１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＮＨ４ＳＯ４，２
ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＭｇＣｌ２，０２ｍｍｏｌ·Ｌ
－１ｄＮＴＰｓ，０４μｍｏｌ·
Ｌ－１ＥＲＩＣ双引物，约５０ｎｇ模板ＤＮＡ和１ＵＨｏｔＳｔａｒ
Ｔａｑ酶。引物 ＥＲＩＣ１Ｒ５′ＡＴＧＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＧＡＴ
ＴＣＡＣ３′，ＥＲＩＣ２５′ＡＡＧＴＡＡＧＴＧＡＣＴＧＧＧＧＴＧＡＧＣＧ
３′。ＥＲＩＣＰＣＲ扩增程序为９４℃５ｍｉｎ，３５个循环（９４
℃５０ｓ，４９℃３０ｓ，４６℃３０ｓ，７２℃３ｍｉｎ）后７２℃９
ｍｉｎ［１０］。ＰＣＲ产物在１×ＴＡＥ配制的１％琼脂糖凝胶
（含ＥＢ０５ｍｇ·Ｌ－１）中电泳检测，电泳缓冲液为１×
ＴＡＥ，电压５Ｖ·ｃｍ－１，５０ｍｉｎ，电泳后在凝胶成像仪
上检测并记录分析结果。ＤＮＡ分子标准为１ｋｂｐ递
增分子标准（１ｋｐｐｌｕｓｌａｄｄｅｒ）。
２．４ ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱的分析和数据处理 采
用ＴａｎｏｎＧＩＳ２０１０凝胶图像处理系统对健康、造模
和治疗后各阶段大鼠ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱进行面积
积分，Ｓｈａｎｎｏｎ＇ｓ法计算各阶段大鼠肠道菌群指纹图
谱的多样性指数（ｓｈａｎｎｏｎ＇ｓｉｎｄｅｘ，Ｈ′）。Ｓｏｒｅｎｓｏｎ配
对相似性系数法（ｓｏｒｅｎｓｏｎ＇ｓｐａｉｒｗｉｓｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｃｏｅｆｉ
ｃｉｅｎｔ，Ｃｓ）分析大鼠肠道菌群指纹图谱造模前后以
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及治疗后的相似性。
多样性指数计算公式：Ｈ′＝－Σ（ｎｉ／Ｎ）ｌｎ（ｎｉ／Ｎ）
式中ｎｉ为每个波峰的面积，Ｎ为所有波峰的面
积。
配对相似性系数（Ｃｓ）计算公式为：
Ｃｓ（％）＝２×ｊａ＋ｂ×１００％
其中，ａ是某一样品的 ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱的
条带数目，ｂ是另一样品的ＥＲＩＣＰＣＲ条带数目，ｊ是
在两图谱共有条带。
２．５ 统计分析 采用ＳＰＳＳ１００软件进行统计分析，
组间比较采用单因素方差分析（ｏｎｅｗａｙＡＮＯＶＡ），两
组比较采用配对ｔ检验，所有数据均用珋ｘ±ｓ表示。
３ 结果
３．１ 大鼠一般体征观察 除空白组外，脾气虚证模
型各组大鼠从第 ３天起，体重增长缓慢或下降，倦
怠，懒动，大便时软时干，偶有溏便；后期进食减少，
饮水无明显改变，出现明显的蜷缩、拱背、倦卧、扎
堆、眯眼、四肢不收等现象。给予健脾补气方药治疗
后，大鼠上述症状均有所好转，体重增加，粪便正常，
进食进水量有所恢复。
３．２ 脾气虚证大鼠肠道菌群 ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱
变化 脾气虚证大鼠成模后其 ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱
条带位置、数量及丰度与健康时期相比均发生变化，
说明其肠道菌群发生一定改变（图１）。但图谱条带
数量减少并不明显，即造模前后菌群种类多样性变
化不明显，可能与其慢性造模并未直接导致腹泻有
关。统计造模前后各电泳条带的出现率（表１）。造
模前各条带的出现率较分散，个体差异较大，出现率
超过６０％的只有２５０ｂｐ条带；造模后样品条带个体
差异减小，条带的出现较集中，１３００ｂｐ，８００ｂｐ，７００
ｂｐ和３０ｂｐ条带出现率均超过６０％，其中３８０ｂｐ出
现率达到８２％。
３．３ 脾气虚证大鼠肠道菌群多样性指数和相似性
系数变化 多样性指数的变化在一定程度上反映了
大鼠肠道菌群整体的变化，多样性指数降低说明肠
道菌群的种类可能减少，反之则说明菌群种类可能
增多。因此多样性指数可反映肠道菌群在造模及治
疗过程中的变动情况及变化趋势。运动疲劳兼饥饱
失常脾气虚证模型大鼠造模前后及治疗前后其多样
性指数有一定波动，反应了造模和治疗药物的作用
趋势。造模后多样性指数呈现下降的趋势，说明肠
道菌群遭到一定程度的破坏；治疗后模型组继续下
Ｃ．空白对照；１～８分别为８个不同样品；
Ａ造模前；Ｂ造模后；Ｍ１ｋｂｐ递增分子标准
（１ｋｂｐｐｌｕｓＭａｒｋｅｒ）
图１ 大鼠不同样本正常、运动疲劳兼饥饱失常造模前后
肠道菌群ＥＲＩＣＰＣＲ扩增图谱
表１ 运动疲劳兼饥饱失常脾气虚证模型大鼠造模前后
肠道菌群ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱条带出现率（ｎ＝９６）
条带
造模前
／％
造模后
／％
条带
造模前
／％
造模后
／％
１３００ｂｐ ４８ ６６ ５００ｂｐ ４０ ２６
１１００ｂｐ ２８ ３９ ４５０ｂｐ ４３ ４２
９００ｂｐ ５２ ５２ ４００ｂｐ ３４ ３２
８００ｂｐ ５７ ６２ ３８０ｂｐ ５３ ８２
７００ｂｐ ４４ ７２ ３００ｂｐ ４０ ２１
５９０ｂｐ ４１ ５０ ２５０ｂｐ ７６ ５０
５５０ｂｐ ４４ ３７
降，而各给药组均有一定程度的升高，说明药物对肠
道菌群多样性的恢复具有一定的治疗作用。
相似性系数可反映造模前后肠道菌群指纹图谱
之间的差异程度以及治疗后肠道菌群的恢复情况。
各造模组造模后指纹图谱与健康时期的相似性系数
在 ３４％ ～４３％波动，与空白组 （Ｃｓ＝６６５４±
９２９）％相比显著性降低，说明造模后肠道菌群与
健康时期相比发生了较大的变化，运动疲劳兼饥饱
失常可引起肠道菌群的失调和改变，治疗后有不同
程度的恢复（图２）。
３．４ ３种健脾补气方药对脾气虚证大鼠肠道菌群
的影响 如图２所示，空白组肠道菌群相似性系数
相对稳定，多样性指数造模前后分别为２０１±００８
和１９８±０１３，波动较小；而各造模组造模前后相
似性系数与空白组相比显著性降低，造模后多样性
指数与造模前相比均明显下降。
治疗后模型组和反证对照药物（半夏厚朴汤）
组多样性指数和相似性系数继续下降，说明运动疲
劳兼饥饱失常造模对肠道菌群造成了较大的破坏，
造模因素撤消后，肠道菌群多样性并未见明显恢复，
半夏厚朴汤对肠道菌群的紊乱并没有恢复作用，表
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１．空白组；２．模型组；３．阳性药组；４．反证组；
５７．四君子汤１２，３６，１０８ｇ·ｋｇ－１剂量组；
８１０．理中汤１８，５４，１６２ｇ·ｋｇ－１剂量组；
１１１３．补中益气汤１６，４８，１４４ｇ·ｋｇ－１剂量组
与空白组比Ｐ＜００５，Ｐ＜００１；与模型组比＃Ｐ＜００５，
＃＃Ｐ＜００１
图２ 运动疲劳脾虚模型大鼠造模前后及治疗后
Ｓｏｒｅｎｓｏｎ配对相似性系数比较
明与脾虚证治疗不相关的中药复方对此模型肠道菌
群失调无调节作用。阳性药组给药治疗后多样性指
数有 所 上 升 （造 模 后 １９０±０１０；治 疗 后
１９６±００７），相似性系数显著性增加，说明阳性对
照药对肠道菌群具有一定的调节作用。
四君子汤低剂量组治疗后多样性指数维持在治
疗前水平，相似性系数有所升高但无显著性差异。
四君子汤中、高剂量组治疗后不仅相似性系数显著
性升高，肠道菌群多样性指数也明显升高（中高剂
量造模后分别为２０７±００６和２０５±００７；治疗后
分别为２１８±００８和２１４±００９），基本恢复到造
模前状态。理中汤低剂量组给药后多样性指数维持
在治疗前水平，相似性系数显著性升高。理中汤中、
高剂量组进行治疗后不仅肠道菌群多样性指数升高
（中高剂量造模后分别为 １９４±００９和 １９８±
００８；治疗后分别为２０５±０１０和 ２１４±００９），
基本恢复到造模前状态，相似性系数显著性升高。
补中益气汤低、中、高剂量组治疗后肠道菌群多样性
指数升高（低中高剂量造模后分别为１９７±００８，
２０５±００７和２０３±０１２；治疗后分别为 ２０７±
００８，２１６±００９和２０８±００７），基本恢复到健康
状态，相似性系数均显著性升高。
可见，３种治疗方药低、中、高各剂量均对肠道
菌群有一定的调节作用，对运动疲劳兼饥饱失常脾
虚证具有一定的治疗作用。除四君子汤低剂量和理
中汤低剂量外，其余各方药剂量给药治疗后相似性
系数显著性增高，多样性指数基本恢复到造模前水
平，均具有较好的治疗作用。
４ 讨论
由于传统培养方法所能培养的细菌种类有限，
因而低估了肠道菌群的数量和多样性，且培养方法
费时费力，易受操作方法的影响。本研究所采用的
ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱分析方法，不仅能比较全面的
反映肠道菌群的整体变化状况，还可对其进行动态
和同步监测，将有助于全面认识脾虚证本质所在。
本实验中，脾气虚证大鼠造模后肠道菌群 ＥＲＩＣ
ＰＣＲ指纹图谱条带与造模前相比发生明显变化，其
多样性指数下降，造模前后相似性系数与空白组相
比显著性降低。这些结果均表明造模后肠道微生态
平衡遭到破坏后，菌群失调，即脾气虚证直接影响肠
道菌群的平衡。
四君子汤、理中汤和补中益气汤均为临床常用
治疗脾虚证方剂。有研究表明四君子汤对脾虚小鼠
肠道菌群的失调具有一定的调节功能［１１］；且可调整
衰老小鼠肠道菌群，延缓衰老［１２］；对辐射及其他原
因引起的动物胃肠道菌群失调具有调节和改善功
能［１３１４］。而理中汤、补中益气汤对肠道菌群的影响
未见报道。本研究结果显示，四君子汤、理中汤和补
中益气汤中、高剂量对脾气虚证大鼠肠道菌群的失
调均有明显的调节和改善作用，且中剂量治疗后与
健康时期的相似性系数普遍高于高剂量，疗效较好，
结果中医临床用药经验相一致。而３种方药低剂量
组中，补中益气汤低剂量对肠道菌群的调节作用较
强，理中汤低剂量次之，其次是四君子汤。３种健脾
补气方药对肠道菌群的调节可能为其治疗脾气虚证
的作用机制之一。
比较３种方药组成，其中补中益气汤和四君子
汤中，人参和白术为两方剂共用之中药，人参健脾益
气，取其扶正之意；白术健脾燥湿，助脾胃之气健运。
此外四君子汤中茯苓健脾和胃，鼓舞脾胃之气。补
中益气汤中柴胡升麻升举阳气；陈皮疏通气滞，调理
气机。两方剂另一不同之处在于一个选用甘草，另
一为炙甘草。经炮制后，炙甘草归脾、胃经，益气补
中，有缓急和作为中焦引药的作用。而理中汤中党
参性平、味甘，入脾、肺经，具补中益气等功效；白术，
性味甘苦微温，专入脾胃二经，具有健脾和胃，燥湿
利水之功效，且偏于健脾益气；干姜性味较辛辣，具
有祛风和胃的降逆作用。方药组成上的差异可能是
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造成低剂量药效不同的原因所在，这为中药的配伍
及作用机制研究提供了新的途径。
综上所述，脾虚证与消化系统关系最为密切，导
致肠道菌群失调，肠道菌群在维持人类健康起着非
常重要的作用，因此研究肠道菌群的组成变化可以
从一个侧面整体上反映机体的生理功能状况。
ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱分析技术是分析肠道菌群变化
较理想的一种方法，该技术可对脾虚证不同证候在
疾病发生发展及治疗中进行动态连续的观察研究，
找到脾虚证相关分子指标，探讨脾虚证的本质，进而
对治疗脾虚证药物进行筛选或评价。
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ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅＪｉａｎｐｉＢｕｑｉｒｅｃｉｐｅｓｏｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｆｌｏｒａｏｆ
Ｐｉｑｉｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｒａｔ
ＰＥＮＧＹｉｎｇ１，２，ＪＩＮＪｉｎｇ１，ＷＵＣｈｕｎｆｕ２，ＹＡＮＧＪｉｎｇｙｕ２，ＬＩＸｉａｏｂｏ１
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏＴｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００３０，Ｃｈｉｎａ；
２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＳｈｅｎｙａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００１６，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｔｈｒｅｅＪｉａｎｐｉＢｕｑｉｒｅｃｉｐｅｓｏｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｆｌｏｒａｏｆＰｉｑｉｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｒａｔｗｉｔｈ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙｍｅｔｈｏｄｓａｎｄａｔｅｍｐｔｔｏｃｌａｒｉｆｙｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｔｈｅｒａｐｙ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＲａｔｍｏｄｅｌｏｆＰｉｑｉｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙ
ｅｘｅｒｃｉｓｅｆａｔｉｇｕｅｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙｄｉｅｔｉｎｃｏｎｔｉｎｅｎｃｅａｎｄｔｈｅｎａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｄｅｃｏｃｔｉｏｎｓｏｆＳｉｊｕｎｚｉｔａｎｇ（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｃｒｕｄｅｄｒｕｇ）
（１０８，３６，１２ｇ·ｋｇ－１），Ｌｉｚｈｏｎｇｔａｎｇ（１６２，５４，１８ｇ·ｋｇ－１）ａｎｄＢｕｚｈｏｎｇＹｉｑｉｔａｎｇ（１４４，４８，１６ｇ·ｋｇ－１）ｒｅｃｉｐｅｓ
ｗｈｉｃｈｗｅｒｅｉｎｃｏｍｍｏｎｕｓｅｏｆｃｌｉｎｉｃｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＴＣＭ）．ＷｉｔｈａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＥＲＩＣＰＣＲ（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｌｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ
ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｃｏｎｓｅｎｓｕｓＰＣＲ）ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔａｎａｌｙｓｉｓ，ｔｈｅｅｆｉｃａｃｙｏｎＰｉｑｉｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙａｎｄｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｒｃｏｆｌｏｒａｏｆｔｈｅｓｅｒｅｃｉｐｅｓ
ｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄａｎｄｅｖａｌｕａｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＲｅｍａｒｋａｂｌｅｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆＥＲＩＣＰＣＲｐｒｏｆｉｌｅｗｅｒｅｆｏｕｎｄｂｅｔｗｅｅｎＰｉｑｉｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｓｔａｔｅｒａｔｓａｎｄ
ｎｏｒｍａｌｒａｔｓ．ＴｈｅＳｈａｎｎｏｎ＇ｓＩｎｄｅｘ（Ｈ′）ｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｗｈｅｎｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈａｌｄｏｓｅｓｏｆｔｈｒｅｅＪｉａｎｐｉｂｕｑｉｒｅｃｉｐｅｓｄｅｃｏｃｔｉｏｎｓａｎｄＳｏｒｅｎｓｏｎ′ｓ
ｐａｉｒｗｉｓｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ（Ｃｓ）ｗａｓａｌｓｏｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＥＲＩＣＰＣＲｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｃａｎｂｅｕｔｉｌｉｚｅｄ
ａｓａｎｉｎｉｔｉａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｃｈａｎｇｅｓｏｆｔｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｔｈａｔａｒｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｄｉｓ
ｅａｓｅ．ＩｔｃａｎａｌｓｏｂｅｕｓｅｄｔｏｂｕｉｌｄａｂｅｔｅｒｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆＰｉｑｉｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙａｎｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｅｆｅｃｔｏｆＴＣＭｏｎ
Ｐｉｑｉｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．ＴｈｒｅｅＪｉａｎｐｉＢｕｑｉｒｅｃｉｐｅｓａｒｅｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｏｐｒｏｄｕｃｅｐｒｏｎｏｕｎｃｅｄｒｅｃｏｖｅｒｙａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｆｌｏｒａｏｆＰｉｑｉ
ｄｅｆｉｃｉｅｎｔｒａｔｓ，ｗｈｉｃｈｍａｙｂｅｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄｏｎｅｏｆｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｔｈｅｉｒｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｐｉｑｉｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ；ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ；ＥＲＩＣＰＣＲ；ＪｉａｎｐｉＢｕｑｉｒｅｃｉｐｅｓ
［责任编辑 古云侠］
·４３５２·
第３３卷第２１期
２００８年１１月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ２１
Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２００８