全 文 ：°≤法测定家犬口服葛根黄酮微丸后血浆中的葛根素含量
成旭东 t o贾晓斌 tou3 o陈 彦 t o潘国梁 t o李 霞 t o陈红霞 tou
ktq江苏省中医药研究院 o江苏 南京 utssu{~ uq江苏大学 o江苏 镇江 utustvl
≈收稿日期 ussy2s{2t{
≈基金项目 江苏省中医药管理局科学技术研究专项 k≠sv2
swl
≈通讯作者 3 贾晓斌 o ר¯} ksuxl {xyvz{s|o ∞°¤¬¯} ¬¬¤²2
¥¬±ussx «²·°¤¬¯q¦²°
葛根黄酮由中药野葛 Πυεραρια λοβαταk• ¬¯¯§ql
«º¬提取精制而得 o临床上可显著降压和改善冠脉
血流 ≈t ∀葛根中主要有效成分为葛根素等异黄酮
类化合物 ≈uov ∀研究表明葛根黄酮生物利用度较
低 ≈wox ∀为了提高葛根黄酮的生物利用度 o制备了
葛根黄酮的微丸制剂 o并以愈风宁心滴丸为对照 o利
用 ≥°∞2°≤测定了家犬口服葛根黄酮微丸后血浆
中葛根素血药浓度 ∀
1 仪器及试药
ª¬¯¨ ±·ttss高效液相色谱仪 ktvtt系列四
元梯度泵 otvtx
⁄⁄检测器 o° √¨qqsxst化
学工作站 lo ∞××∞ ×∞⁄分析天平 o± tss
超声清洗仪 k江苏昆山市超声设备有限公司 lo≤t{固
相萃取小柱 k江苏汉邦科技 l∀
葛根黄酮微丸 k自制 lo愈风宁心滴丸 k浙江尖
峰药业有限公司 lo葛根素对照品 k含量测定用 o中
国药品生物制品检定所 o批号 szxu2ussts{vlo甲醇
k色谱纯 o µ¨®公司 lo肝素钠注射液 k江苏万邦生
化医药股份有限公司 lo水为纯净水 ∀
健康家犬 y只 o体重 ktt1{ ? u1vl ®ªo雌雄各
半 o由江苏省中医药研究院实验动物中心提供 ∀家
犬给药前禁食 tu «o试验后 w «统一进食 o整个实验
过程中禁食含大豆食品 ∀
2 方法与结果
2q1 色谱条件 色谱柱为美国 ¯¯·¨¦«公司 ¯¯·¬°¤
≤t{色谱柱 kw1y °° ≅ uxs °°ox Λ°lo流动相为甲
醇 2水 kvsΒzslo检测波长 uxs ±°o柱温 vs ε o流速 t
°# °¬±pt ∀
2q2 血浆样品的制备 取 ≥°∞小柱 o用甲醇 t °
活化 o以水 t °洗去甲醇 ∀精密吸取经 w sss µ#
°¬±pt离心 ts °¬±的血浆 t °o加于 ≥°∞小柱上 o以
t °水冲洗 o精密吸取 zsh甲醇溶液 t °洗脱 o收
集洗脱液 o高速离心 kty sss µ# °¬±pt l后 o取 us Λ
进液相进行分析 ∀
2q3 专属性试验 分别吸取空白血浆 !空白血浆加
入葛根素对照品 !供试品血浆 o按 2q2项下操作 o进
样 o绘制色谱图 k见图 tlo在此色谱条件下 o葛根素
保留时间为 tt1svz °¬±o血浆内源性物质及其他杂
质基本不干扰样品的分离测定 ∀
图 t 血浆样品中葛根素 °≤图
q空白血浆 ~
q对照品 ~ ≤q血浆样品 ~ tq葛根素
2q4 标准曲线的制备 精密称取葛根素用甲醇溶
解并定容 o配成 tx1tsw Λª# °pt的对照品溶液 ∀
分别加入葛根素对照品溶液 o挥干甲醇 o再分别加入
空白血浆 t1s °o制成梯度分别为 s1s|wos1vz{o
s1zxxot1xtsou1uyyov1sutov1zzyoz1xxu Λª# °pt
的对照品血浆 o同 212项下操作 o取 us Λ进样 o以
葛根素峰面积 ≠对实际含量 ΞkΛª# °pt l进行回
归得线性方程 }Ψ zw1|szΞ p x1wsuoρ s1||| t
kν ylo表明葛根素在 s1s|w ∗ z1xxu Λª# °pt线
性关系良好 ∀
2q5 检测限 用空白血浆配制成不同浓度的对照
品血浆 o按 212项下操作 o进样 o以 Σ/Ν v计 o检测
限为 t ±ª# °pt ∀
2q6 精密度试验 分别取葛根素对照品溶液 o挥干
甲醇 o加入空白血浆 t1s °o制成含量分别为
s1vz{ou1uyyoz1xxu Λª# °pt o按照 212项下操作 o
进样 o测定 o后共连续测定 x §o计算日内 !日间精密
度 ∀结果高 !中 !低 v种含量日内 !日间精密度良好 o
≥⁄分别为 v1vh和 x1|h ∀
#ywv#
第 vu卷第 w期
ussz年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ w
ƒ ¥¨µ∏¤µ¼o ussz
2q7 稳定性试验 分别取葛根素对照品溶液 o挥干
甲醇 o加入空白血浆 t1s °o制成浓度分别为
s1vz{ou1uyyoz1xxu Λª# °pt对照品血浆各 v份 o
按照 212项下操作 o取 us Λo分别于 sotouowo{ouw
«进样测定 ∀取葛根素对照品溶液 o同法制成浓度
分别为 s1vz{ou1uyyoz1xxu Λª# °pt对照品血浆
各 v份 o分别冻存 k p us ε lo于 soxotsotxous §取
出解冻 o按照 212项下操作 o进样 us Λo测定 ~结果
表明含药血浆经 ≥°∞处理后制成的样品液较稳定 o
uw «内 ≥⁄ v1th kν ylo含药血浆冻存处理下
较稳定 ous §内 ≥⁄ y1th kν xl∀
2q8 回收率试验 分别取葛根素对照品溶液 o挥干
甲醇 o加入空白血浆 t1s °o制成含量分别为
s1vz{ou1uyyoz1xxu Λª# °pt对照品血浆各 v份 o
按照 212项下操作 o进样 o测定 o计算样品的加样回
收率 ∀结果见表 t∀
表 t 葛根素回收率试验 kν vl
加入量
rΛª# °pt
测得量
rΛª# °pt
回收率
rh
≥⁄
rh
s1vz{ s1vzy ||1x v1v
u1uyy u1syw |t1t t1w
z1xxu z1x{z tss1x t1z
2q9 犬血浆样品的测定 采用双周双交叉设计 o将
家犬随机分成两组 o单剂量给予葛根总黄酮微丸 o剂
量为 xs °ª# ®ªpt ∀给药后于 sos1vvos1yzot1so
t1xou1sov1sow1soy1so{1sotu1souw1s «o从前肢静
脉取血 v °o实验 t周后交叉 ∀血样用肝素抗凝 o
w sss µ# °¬±pt离心 ts °¬±o分离血浆 o于 p us ε 保
存备用 ∀取血浆样品 t °o按 212项下操作 o进样
us Λo测定 o以随行的标准曲线计算含量 ∀平均血
药浓度时间曲线见图 u∀
图 u 葛根素平均血药浓度曲线 kν yl
两组家犬分别给予葛根黄酮微丸与愈风宁心滴
丸 o所得药动学参数 Χ°¤¬分别为 k|xt1{{ ? vxz1tylo
kywy1zw ? {u1vxl ±ª# °pt oτ°¤¬分别为 ku1vs ?
s1yulokt1xv ? s1twl«o≤分别为 k{ wv|1uy ?
u w|x1vxlokx ywv1z| ? t vsz1x{l ±ª# «pt # °pt ∀
葛根黄酮微丸和愈风宁心滴丸比较 o达峰时间显著
延长 kΠ s1sxlo达峰浓度显著增加 kΠ s1sxl∀
以愈风宁心滴丸为对照 o家犬给予葛根黄酮微丸的
相对生物利用度为 txs1xh ∀
3 讨论
3q1 葛根有效成分葛根素口服生物利用度低 o口服
吸收后体内血药浓度很小 ∀因此 o选择合适的生物
样品处理方法显得非常重要 ∀含葛根素血浆的样品
处理方法主要有 v种 }蛋白沉淀法 ≈y !沸水法 ≈z !固
相萃取法 ≈{ o蛋白沉淀法使血药浓度下降 ~沸水法
蛋白不易除尽 o对分析干扰较大 ~固相萃取法操作简
单 o回收率高 o较适合于中药尤其是口服生物利用度
差的药物血浆样品的分析前处理 ∀
3q2 对不同洗脱溶媒进行筛选 o发现甲醇含量在
tsh以上时 o冲洗杂质时都会有不等量的药物被洗
出 ∀考虑到用水洗脱后 o杂质峰也较少 o不影响含量
测定 o故最终选用水冲洗内源性杂质 ∀
3q3 试验中对不同含量的甲醇进行了选择 o包括
vsh甲醇 oxsh甲醇 ozsh甲醇和无水甲醇 o结果表
明在上样 t °含药血浆样品 o用 t °洗脱溶剂洗
脱的条件下 ozsh 甲醇的洗脱回收率能够接近
tssh o故选择 zsh甲醇水溶液为洗脱剂 ∀
3q4 固相萃取法的回收率较高 o重复性较好 o并且
无杂质干扰 o但固相萃取小柱具有一定的使用寿命 ∀
为了延长固相萃取柱的使用寿命 o本研究还尝试了
将醇沉法和固相萃取法结合的办法 o即先将血浆蛋
白沉淀后高速离心 kty sss µ# °¬±pt l转移出上清液
再用水浴 kxs ε l挥干 o最后用蒸馏水适量复溶 o再
上固相萃取小柱 o按照 212项下的操作方法进行 o发
现提取的方法回收率都小于 zsh o这可能与蛋白沉
淀法的醇溶液提取率低以及药物复溶时水液对葛根
素的溶解效果不好有很大关系 ∀
≈参考文献
≈t 潘洪平 q葛根总黄酮和葛根素的药理作用和临床应用研究进展
≈ q广西医学 oussvouxktsl}t|wtq
≈u 曹钟灵 o李建北 o张东明 q葛属植物中异黄酮类化合物的研究进
展 ≈ q中药材 oussxou{ktl}yzq
≈v 戴 琳 o余兴华 q葛根素的药理作用及临床应用新进展 ≈ q海峡
药学 ousswotykyl}{q
≈w 吴燕红 o苏子仁 o赖小平 q愈风宁心片中葛根素在小鼠体内的药
动学和生物利用度研究 ≈ q中药新药与临床药理 oussxotxkwl}
#zwv#
第 vu卷第 w期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ w
ƒ ¥¨µ∏¤µ¼o ussz
ux|q
≈x 郭建平 o成国祥 o孙其荣 q葛根黄酮滴丸兔体内药动学 ≈ q中国
药学 ousswov|kxl}vywq
≈y 金昔陆 o朱秀媛 o王文杰 o等 q血浆中葛根素的高效液相色谱测定
法及其在狗体内的药代动力学 ≈ q药学学报 ot||zovuktsl}
z{uq
≈z 黄 熙 o任 平 o张 莉 o等 q°≤法测定犬口服养阴通脑颗粒
后血浆中的葛根素 ≈ q中国药科大学学报 ousstovukul}tuzq
≈{ 向大雄 o张 杰 o李焕德 o等 q°≤法测定犬血浆中葛根素的含
量 ≈ q药物分析杂志 ousswouwkyl}x||q
≈责任编辑 戴 畅
粗根老鹳草化学成分的研究
雷海民 3 o李 强 o柏 冬 o毕 葳 o魏璐雪
k北京中医药大学 中药学院 o北京 tsstsul
≈收稿日期 ussy2sz2st
≈基金项目 /八五 0国家中医药重点科技攻关项目 k{x2|us2
st2styl
≈通讯作者 3 雷海民 oר¯}kstsl{wzv{ywto∞2°¤¬¯}¯¨ ¬«¤¬°¬±
¼¤«²²q¦²°q¦±
老鹳草 Γερανιυµ δαηυριχυµ 为传统中药 o有祛
风湿 !通经络 !止泄痢之功效 o其单味制剂老鹳草软
膏有消炎解毒 !收敛生肌的作用 ≈t ∀粗根老鹳草作
为老鹳草的药材来源之一 o分布较广 o使用较多 o但
其化学成分却不很清楚 o作者首次对其化学成分进
行系统研究 o在前文 ≈u 研究的基础上 o继从中分离
了 x个化合物 o分别确定为没食子酸 k1 l!山柰酚
k2l!槲皮素 k3l!杨梅素 k4l!鞣花酸 k5l均为首次
从该植物中分离得到 ∀
1 仪器与材料
²¨ ·¬∏¶×«°®sx型显微熔点测定仪 k温度未校
正 l~¬¦²¯ ·¨ƒp x⁄ p ÷红外光谱测定仪 k
µ压
片 l~ ¥¨¶³¦∞型质谱仪 ~∂ ¬µ¬¤± °¨¬±¬vss型核磁
共振仪 ~
¦¨®°¤±高效液相色谱仪 ∀ ≥ ³¨«¤§¨ ¬ p
us为进口分装 o其他试剂皆为分析纯 ∀
粗根老鹳草采自陕西省眉县太白山 o由西安交
通大学药学院生药教研室徐文友教授鉴定为 Γ.
δαηυριχυµ ∀储存于本院中药基础与新药研究中心 ∀
2 提取分离
取 t ®ª粗根老鹳草全草 o切碎 o用 zsh丙酮提
取 u次 o提取液减压浓缩至 xss °o依次用乙醚 !醋
酸乙酯 !正丁醇萃取并减压浓缩至干 ∀取 us ª乙醚
萃取物 o经硅胶 减压柱色谱 o石油醚 2醋酸乙酯梯
度洗脱 o硅胶 薄层检测 o展开剂 }石油醚 2醋酸乙
酯 2甲酸 kvΒy1xΒs1xlo相同流分合并 o石油醚 2醋酸
乙酯 kzΒv ∗ tΒtsl洗脱部分合并 o经硅胶 柱色谱 o
≥ ³¨«¤§¨ ¬ pus反复纯化 o聚酰氨薄层检测 o展开
剂 }|xh乙醇 o依次得到化合物 1 ∗ 4~醋酸乙酯洗脱
部分 o蒸干 o经吡啶重结晶 o得化合物 5∀
3 结构鉴定
化合物 1 无色针状结晶 k乙醇 lo°³uvw ∗ uvy
ε o三氯化铁反应深蓝色 o ²¯¬¶«反应阴性 ∀
k
µl¦°pt }v wxsot yw|ot yttot uy|o{yz∀t 2
k⁄ ≥ 2δy ovss ½l ∆}y1|s ku ¶ouoy2 l∀tv ≤ 2
k⁄ ≥ 2δy ozx ½l∆}tut1yk≤ 2tlots{1yk≤ 2
uoylotwx1xk≤ 2voxlotvz1|k≤ 2wloty{1uk≤ 2zl∀经
与没食子酸标准品共薄层 o比移值相同 o故确定为没
食子酸 ∀
化合物 2 黄色粉末 k甲醇 lo°³uzx ∗ uzz ε ∀
三氯化铁反应绿色 o三氯化铝反应亮黄色 o ²¯¬¶«反
应阴性 ∀ ∞2 ≥ µ / ζ}u{y≈ n oux{otxvotutotsxo
|v∀ k
µl¦° pt }v wxsot yysot tzyo{{zo{t|∀t 2
k⁄ ≥ 2δy ovss ½l∆}tu1xkt o¶ox2 lo
{1svku o§§oϑ |1sou1s ½o 2uχoyχloy1xuku o
§§oϑ |1sou1s ½o 2tχoxχloy1wukt o§oϑ u1s
½o 2{loy1t{kt o§oϑ u1s ½o 2yl∀tv ≤ 2
k⁄ ≥ 2δy ozx ½l∆}twy1{k≤ 2ulotvx1xk≤ 2vlo
tzx1{k≤ 2wlotx|1tk≤ 2xlo|{1uk≤ 2ylotyv1{k≤ 2zlo
|v1xk≤ 2{lotxy1uk≤ 2|lotsv1sk≤ 2tslotut1zk≤ 2
tχlotu|1x k ≤ 2uχlo ttx1w k ≤ 2vχlo twy1{ k ≤ 2wχlo
#{wv#
第 vu卷第 w期
ussz年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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