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丹参功能基因组学研究Ⅱ
———丹参毛状根不同时期基因表达谱分析
崔光红１，黄璐琦１，邱德有２，袁 媛１，付桂芳１
（１中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００；２中国林业科学院 林业研究所，北京 １０００９１）
［摘要］ 目的：研究丹参毛状根不同时期的基因表达谱，发掘丹参功能基因。方法：通过比较不同时期丹参毛
状根的生长量和次生代谢产物含量确定用于 ｃＤＮＡ芯片杂交的材料。采用间接标记法进行探针标记后进行杂交
反应，ＧｅｎｅＰｉｘＰｒｏ４０软件对芯片图像进行分析，数据用 Ｌｏｗｅｓｓ方法进行归一化处理。采用两倍差异标准结合 Ｔ
检验来确定差异表达基因。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ点杂交检验４个基因与芯片杂交结果的一致性。差异基因单向测序后经过
ｇａｐ４软件拼接聚类，然后利用ＢＬＡＳＴＸ，ＢＬＡＳＴＮ进行比对分析，利用ＧｅｎｅＯｎｔｏｌｏｇｙ和 ＫＥＧＧ进一步预测基因的功
能。结果：３０～４５ｄ为丹参毛状根的快速增殖期，４５～６０ｄ为丹参次生代谢产物的快速积累期。将４５，６０ｄ丹参毛
状根分别与３０ｄ材料进行杂交，得到２０３个差异基因。４个基因 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ点杂交的结果与芯片杂交结果一致。测
序后得到１７２条ＥＳＴ，拼接聚类后形成１１４个Ｕｎｉｇｅｎｅ，其中功能已知基因６２个，功能未定的假想蛋白３４个，相似
性较低的未鉴定基因９个，无显著相似性的基因９个。“ＧＯ”分类中６７个基因得到注释，ＫＥＧＧ分析中７４个基因得
到注释，２６个有详细的代谢途径分析。结论：得到一系列次生代谢相关基因如细胞色素 Ｐ４５０、二萜合酶等基因片
段，为深入开展丹参功能基因组学研究提供了基础。
［关键词］ 丹参；毛状根；基因表达谱；ｃＤＮＡ芯片
［中图分类号］Ｓ５６７ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１３１２６７０６
［收稿日期］ ２００６１２１９
［基金项目］ 国家重点基础研究发展计划（２００６ＣＢ５０４７００）；国
家高科技研究发展计划（２００３ＡＡ２Ｚ２０４０）
［通讯作者］ 黄璐琦，Ｔｅｌ：（０１０）６４０１４４１１２９５５
随着植物功能基因组研究的广泛与深入，独具
特色又有广阔应用前景的药用植物次生代谢合成相
关功能基因的研究逐渐成为研究的热点［１］。丹参
ＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｈｉｚａＢｇｅ疗效明确，化学成分研究较
为深入，含有类异戊二烯和苯丙烷类两大代谢途
径［２，３］，但仅有３羟基３甲基戊二酰辅酶 Ａ还原酶
（ＨＭＧＲ）和４香豆酸辅酶Ａ连接酶（４ＣＬ）等少量参
与次生代谢的基因得到克隆［４］。因此，大规模寻找
次生代谢关键酶基因是丹参分子生物学研究的重要
内容。本研究以不同时期丹参毛状根为研究材料，
探索已构建丹参ｃＤＮＡ芯片［５］在其功能基因组学研
究中的可行性，为中药材功能基因组研究提供一套
完整、快捷的研究思路和途径。
１ 材料与方法
１１ 材料 丹参毛状根为发根农杆菌１５８３４直接
感染的方式进行Ｒｉ质粒转化诱导的毛状根，由邱德
有研究员提供［６］。取生长良好的丹参毛状根（各
０１ｇ）继代培养于６，７Ｖ固体培养基上，置于２５℃
培养箱中暗培养，分别于３０，４５，６０ｄ收获，称重，每
个时间点３次重复。
１２ 次生代谢产物分析 将毛状根研碎，取适量粉
末用７０％甲醇回流提取后分别进行高效液相指纹
图谱分析［７］，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系
统２００４Ａ版（国家药典委员会）提取不同样品的共
有峰，所有样品峰面积均小于１００ｍＡＵ，没有得到基
线分离的峰不予提取。
１３ ｃＤＮＡ芯片杂交 将３０ｄ材料作为参照，分别
与４５ｄ和６０ｄ的材料进行杂交，重复２次，每组均
采用正反标记以消除染料的误差。采用 ＣＴＡＢＬｉＣｌ
法［８］提取丹参毛状根 ＲＮＡ并进行快速琼脂糖电泳
检测，用 ＧｅｎｅＱｕａｎｔ核酸定量仪测定 Ａ２６０，Ａ２８０比值
和浓度。
丹参ｃＤＮＡ芯片包含４３５４个克隆，制作方法
见前文［５］。芯片探针标记采用文献［９］方法，由博
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奥生物芯片有限公司完成。采用间接标记法进行探
针标记，包括双链ｃＤＮＡ合成、Ｔ７介导的 ＲＮＡ体外
转录合成 ｃＲＮＡ、随机引物反转录、ｃＤＮＡ用 ＫＬＥ
ＮＯＷ酶标记等步骤，将不同样品分别用 ｃｙ３，ｃｙ５进
行标记，然后溶于３０μＬ杂交液中（３×ＳＳＣ，０２％
ＳＤＳ，５×Ｄｅｎｈａｒｔ’ｓ，２５％甲酰胺），于４２℃杂交过
夜。杂交结束后，先在４２℃左右含０２％ ＳＤＳ，２×
ＳＳＣ的液体中洗５ｍｉｎ，而后在０２×ＳＳＣ中室温洗
５ｍｉｎ，玻片甩干后进行扫描。
１４ 芯片图像的采集与数据分析 芯片用 ＬｕｘＳ
ｃａｎ１０Ｋ／Ａ双通道激光扫描仪（ＣａｐｉｔａｌＢｉｏ公司）进
行扫描，得到Ｔｉｆ格式的黑白灰度图，分别代表２种
荧光信号。用ＧｅｎｅＰｉｘＰｒｏ４０图像分析软件（Ａｘｏｎ
Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ公司）对芯片图像进行分析，数据用
Ｌｏｗｅｓｓ方法进行归一化。采用两倍差异标准结合 Ｔ
检验方法来确定差异表达基因。两倍差异表达即２
个样品信号比值大于２的基因为表达上调基因，比
值小于０５的基因为表达下调基因。
１５ 差异基因拼接聚类 将上述确定的 ２０３个
差异基因利用载体通用引物 Ｔ７为测序引物进行
单向测序，针对测序后为 ＰｏｌｙＡ的序列再用 Ｔ３引
物反向测序。利用 ＳｔａｄｅｎＰａｃｋａｇｅ（ｈｔｐ：／／ｓｔａｄｅｎ．
ｓｏｕｒｃｅｆｏｒｇｅ．ｎｅｔ）软件包中的序列组装程序进行序
列组装。输入文件格式为峰图文件（ａｂｌ），参数
设定标准为：如果２个片段在至少４０ｂｐ范围内有
大于８０％的一致性序列就可得到拼接和延伸。拼
接后形成重叠群（ｃｏｎｔｉｇｓ）和单拷贝（ｓｉｎｇｌｅｔｓ），判
断所有这些 ＥＳＴ序列最终代表多少个独立基因
（ｕｎｉｇｅｎｅ）。
１６ Ｕｎｉｇｅｎｅ生物信息学分析 序列对齐值（ｓｃｏｒｅ）
大于８０且序列同一性大于３５％的搜索结果认为有生
物学意义上的显著相似性［１０］。挑选其中分值最高的
蛋白质作为相应 ＥＳＴ最有可能的翻译产物。对于
ＢＬＡＳＴＸ比对分值小于８０的序列在核苷酸水平上使
用ＢＬＡＳＴＮ程序进行同源性分析，序列对齐分值大于
１５０，序列同一性大于６５％的条件下被认为有生物学
意义上的高度同源性。对于 ＢＬＡＳＴＮ和 ＢＬＡＳＴＸ比
对都没有注释结果（ｎｏｈｉｔｓ）的序列及其搜索阀值满
足Ｅｖａｌｕｅ＞１０５的 ＥＳＴ认为是可能的新基因片段。
由于丹参已有１万余条ＥＳＴ序列，因此，将本次实验
的所有 ＥＳＴ均与 ｅｓｔｏｔｈｅｒｓ数据库进行 ＢＬＡＳＴＮ比
对。为了估计差异基因所表达的功能已知基因和新
基因数目，根据ＢＬＡＳＴ搜索相似性将ＥＳＴ划分为四
大类 别［１１］。利 用 ＧＯ （ｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏｇｙ）（ｈｔｐ：／／
ｗｗｗｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏｇｙｏｒｇ）将上述 Ｕｎｉｇｅｎｅ按参与“生物
学过程ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ＿ｐｒｏｃｅｓｓ”、“细胞中的组成ｃｅｌ＿ｃｏｍ
ｐｏｎｅｎｔ”以及实现“分子功能ｍｏｌｅｃｕｌａｒ＿ｆｕｎｃｔｉｏｎ”进行
分类［１２］。利用ＫＥＧＧ（ｋｙｏｔｏｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆｇｅｎｅａｎｄ
ｇｅｎｏｍｅｓ）数据库（ｈｔｐ：／／ｗｗｗｇｅｎｏｍｅｊｐ／ｋｅｇｇ）预测
基因产物在代谢中的地位和作用［１３］。
１７ 芯片结果的 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交验证 用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ
点杂交技术对６０／３０ｄ（Ⅲ１／Ｉ２）杂交结果中的部分
基因进行了验证。ＰＣＲ产物经切胶纯化后取约５００
ｎｇ采用ＮＥＢｌｏｔＰｈｏｔｏｔｏｐｅＫｉｔ（Ｂｉｏｌａｂｓ）试剂盒进行探
针标记。提取丹参毛状根总 ＲＮＡ，将质量浓度调节
至２００ｎｇ·μＬ－１。样品变性后，点膜（杂交膜Ｉｍｍｏ
ｂｉｌｏｎＮｙ＋，Ｍｉｌｉｐｏｒｅ）、交联，预杂交１ｈ后，４２℃杂
交１２ｈ。利用 ＰｈｏｔｏｔｏｐｅＳｔａｒＤｅｔｅｃｔｉｏｎＫｉｔ（Ｂｉｏｌａｂｓ）
试剂盒进行检测，经过压片、显影、定影后照相观察，
根据光密度确定基因的表达量。
２ 结果
２１ 不同时期毛状根生长量和次生代谢产物分析
毛状根３０ｄ鲜重分别为５９５，６０３，５８５ｇ；４５ｄ
分别为１３９２，１４６１，１３５０ｇ；６０ｄ分别为 １３３０，
１４０２，１４８５ｇ。可见，３０ｄ与４５ｄ和６０ｄ的生长
量差异显著，而４５ｄ与６０ｄ的生长量没有明显差
异。高效液相指纹图谱共提取１８个共有峰，其中
１７个为已知成分，另一个为未知成分。从峰面积的
柱状图可见，３０，４５ｄ的１８个成分峰面积相差不大，
有的３０ｄ还高于４５ｄ的，而６０ｄ时，除丹参素、丹
酚酸Ｅ区别不大外，其余成分的峰面积均显著高于
３０ｄ和４５ｄ的（图１）。由此可见，３０～４５ｄ为丹参
毛状根生长的快速增殖期，而４５～６０ｄ为丹参次生
代谢产物的快速积累期。
２２ 总 ＲＮＡ的提取 ＲＮＡ样品电泳条带清晰，
２８Ｓ比１８ＳｒＲＮＡ条带的亮度接近２：１，ＲＮＡ完整无
降解。Ａ２６０／Ａ２８０大于１８０，总 ＲＮＡ的量大于２０μｇ
（表１），能满足芯片杂交实验要求。
２３ 差异基因确定 芯片杂交结果背景低，杂交信
号清晰。得到各组的差异基因分别为：Ｉ２／Ｉ２表达
上调基因２５个，下调基因１６个；Ｉ３／Ｉ３上调１５个，
下调８５个；Ⅲ１／Ｉ２上调１９４个，下调１７４个；Ⅲ２／Ｉ３
上调１１３个，下调１１７个。为避免芯片实验本身和
人为带来的误差，取各个组合的共同差异基因２０３
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图１ 丹参毛状根不同时期成分柱状图
峰１丹参素；峰２原儿茶醛；峰３咖啡酸；峰４未知；峰５ｆｅｒｕｌｉｃａｃｉｄ；峰６丹酚酸Ｄ；峰７丹酚酸Ｅ；峰８迷迭香酸；峰９紫
草酸；峰１０丹酚酸Ｂ；峰１１丹参酮Ｂ；峰１２丹参酮Ⅱ；峰１３二氢丹参酮；峰１４ｍｅｔｈｌｔａｎｓｈｉｎｏｎａｔｅ；峰１５隐丹参酮；峰１６丹参
酮Ⅰ；峰１７ｄｅｈｙｄｒｏｍｉｌｔｉｒｏｎｅ；峰１８丹参酮ⅡＡ
表１ 丹参毛状根ＲＮＡ质量浓度和纯度
编号 时间／ｄ Ａ２３０ Ａ２６０ Ａ２８０ 质量浓度／μｇ·μＬ－１ 总量／μｇ 电泳结果
Ⅰ２ ３０ ７．２０９ １６．６５６ ７．５５３ ３．３ ４９．５ ＲＮＡ可用
Ⅰ３ ３０ ６．４０３ １３．６９２ ６．３７８ ２．７４ ４１．１ ＲＮＡ可用
Ⅱ２ ４５ ４．１０６ ９．６３４ ４．４１１ １．９３ ２８．９５ ＲＮＡ可用
Ⅱ３ ４５ ５．７４４ １２．６６ ５．８８４ ２．５３ ３７．９５ ＲＮＡ可用
Ⅲ１ ６０ ０．５２９ １．４８５ ０．７７６ ０．５９ ２９．５ ＲＮＡ可用
Ⅲ２ ６０ ０．５６４ １．３８５ ０．７２６ ０．５５ ２７．５ ＲＮＡ可用
个进行测序分析，得到１７２条高质量的ＥＳＴ序列。
２４ ＥＳＴ拼接聚类 经过去除载体序列后１７２条
ＥＳＴ的有效序列长度从３９０ｂｐ至７９６ｂｐ。全部片
段总长度为１０３２００ｂｐ，平均长度为６００ｂｐ。利用
ｇａｐ４进行序列拼接后，共得到２５个重叠群（ｃｏｎｔｉｇ）
和８９个单拷贝 ＥＳＴ（ｓｉｎｇｌｅｔ），共计１１４个独立基因
（Ｕｎｉｇｅｎｅ），其中单拷贝基因占所有基因数的
７８０７％。Ｕｎｉｇｅｎｅ序列长度３９０～１３４０ｂｐ。
２５个重叠群中，１３个ｃｏｎｔｉｇ的ＥＳＴ片段在不同
杂交组合中的表达行为一致，如 ｃｏｎｔｉｇｃｈｉｐ２０ｃ０３的
４条 ＥＳＴ在６０／３０ｄ杂交中均表现为上调基因。９
个ｃｏｎｔｉｇ中的ＥＳＴ片段在不同杂交结果中表现不稳
定，如ｃｏｎｔｉｇｃｈｉｐ４５ｄ１０的５条 ＥＳＴ中有４条在４５／
３０ｄ中上调而在６０／３０ｄ中下调，另１条仅在６０／３０
ｄ中下调。另外还有３个ｃｏｎｔｉｇ的 ＥＳＴ片段在不同
结果中出现了完全相反的情况，如 ｃｏｎｔｉｇｃｈｉｐ０１ｅ０６
的７条 ＥＳＴ中６条为６０／３０ｄ表达下调基因，另１
条为６０／３０ｄ表达上调基因。出现这种情况的原因
一方面是这些基因的表达不稳定，另一种可能是芯
片在杂交、数据采集及分析过程发生了偏差。
通过ＥＳＴ聚类分析，按 Ｕｎｉｇｅｎｅ的表达情况分
为６类以便以后的功能分析。Ⅰ类：４５／３０ｄ表达上
调的１个；Ⅱ类：４５／３０ｄ表达下调的５个；Ⅲ类：６０／
３０ｄ表达上调的６４个；Ⅳ类：６０／３０ｄ表达下调的
３２个；Ⅴ类：表达不一致的９个；Ⅵ类：表达完全相
反的３个。
２５ Ｕｎｉｇｅｎｅ同源性比较及注释结果的功能分类
ＢＬＡＳＴＸ分析发现，共有１０４个Ｕｎｉｇｅｎｅ代表１６０个
ＥＳＴ与登陆在ＮＣＢＩ非冗余蛋白质数据库中的蛋白
质序列存在相似性，占有效 ＥＳＴ总数的９３０２％，这
其中有９个基因虽然与已知序列同源，但功能仍然
未知。对 ＢＬＡＳＴＸ没有搜索到的序列进行 ＢＬＡＳＴＮ
分析，只有１个Ｕｎｉｇｅｎｅ存在相应的同源物。其余９
个Ｕｎｉｇｅｎｅ共代表１１条ＥＳＴ在国际公用蛋白质、核
酸数据库中没有注释信息（即没有注释结果的 ｎｏ
ｈｉｔｓ）。根据ＢＬＡＳＴ相似性将所有Ｕｎｉｇｅｎｅ分为四类
如下：功能已知基因共６２个代表８６条ＥＳＴ；功能未
定的假想蛋白共３４个代表６５条 ＥＳＴ；相似性较低
的未鉴定基因共９个代表１０条ＥＳＴ；无显著相似性
的基因共９个代表１１条 ＥＳＴ（表２）。与已知丹参
ＥＳＴ序列比对发现，６２个 Ｕｎｉｇｅｎｅ代表１０５条 ＥＳＴ
与已知丹参ＥＳＴ序列同源，共代表６９８条ＥＳＴ。
得到注释的基因中Ｉ类１个注释为Ｌｅｃｔｉｎ，Ⅱ类
４个得到注释，Ⅲ类５３个得到注释，Ⅳ类２９个得到
注释，Ⅴ类６个得到注释，Ⅵ类３个均得到注释。从
注释结果看，Ⅲ类基因中有较多参与次生代谢产物
合成的相关基因，而其他类基因多与生长相关。功
能已知和未定的同源性最高的蛋白质分别来自３５
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表２ 丹参ＥＳＴＢＬＡＳＴ及与已有丹参ＥＳＴ序列比对情况
类别
ＥＳＴ
总数（％）
Ｕｎｉｇｅｎｅ
数目（％）
与ｄｂＥＳＴ库比较
Ｕｎｉｇｅｎｅ ＥＳＴ ｄｂＥＳＴ库
功能已知基因 ８６（５０） ６２（５４３８） ４０ ６４ ５９０
功能未定的假想蛋白 ６５（３７７９） ３４（２９８２） １７ ３６ ７５
相似性较低的未鉴定基因 １０（５８１） ９（７８９） ２ ２ １５
无显著相似性（ＮＳＨ）基因 １１（６３９） ９（７８９） ３ ３ １８
合计 １７２ １１４ ６２ １０５ ６９８
个物种，其中主要是拟南芥（３８／９６，３９５８％ ），其次
是水稻（１１／９６，１１４６％）和大豆（４／９６，４１７％）。
这一结果与丹参ＥＳＴ大规模测序后的结果一致［１４］。
２６ ＧＯ分类 通过ＧＯ分类（２００６０５０７）共有６７
个基因得到注释，其中Ⅱ类基因３个，Ⅲ类４１个，Ⅳ
类１９个，Ⅴ类３个，Ⅵ类１个。Ⅱ类的３个基因中，
参与２个 “生物学过程”分支，具有４个分子功能；
Ⅲ类的４１个基因中，参与２７个“生物学过程”，１５
个“细胞中的组分”定位于胞质深胶（ｃｙｔｏｓｏｌ）、细胞
质（ｃｙｔｏｐｌａｓｍ）等，具有５１个分子功能，如 ｅｎｔｃｏｐａ
ｌｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ活性，细胞色素 Ｐ４５０活性
等；Ⅳ类１９个基因中，参与１８个“生物学过程”，１３
个在“细胞中的组分”定位，具有１９个分子功能，如
蛋白结合、转录因子活性等；Ⅴ类的３个基因中，参
与４个“生物学过程”，具有５个分子功能如转录因
子、转移酶活性等。Ⅵ类１个基因参与 “生物学过
程”，“细胞中的组分”定位于线粒体电子传递链
（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｅｌｅｃｔｒｏｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｃｈａｉｎ），“分子功能”
为ＡＢＣ转运子（ＡＴＰｂｉｎｄｉｎｇｃａｓｓｅｔｅＡＢＣｔｒａｎｓｐｏｒｔ
ｅｒ）。可见，有的基因参与了不止一个生物过程或具
有不止一个分子功能。Ⅲ类基因中具有较多的分子
功能，主要集中在各种催化、激酶以及转录因子活性
方面，而Ⅳ类基因的分子功能集中在核酸结构组分
及应对外界刺激方面。
２７ 代谢途径分析 通过 ＫＥＧＧ分析，共有７４个
基因得到注释，２６个有详细的代谢途径分析，其中
Ⅱ类基因１个，Ⅲ类基因１４个，Ⅳ类１１个，共参与
２９个不同的代谢途径（表３）。将上述代谢途径按
ＫＥＧＧ代谢图谱进行分类，Ⅱ类３个途径有２个参
与碳水化合物代谢、１个参与能量代谢；Ⅲ类２２个
途径中６个途径参与碳水化合物代谢，５个参与次
生代谢，５个参与氨基酸代谢，３个参与外源物质降
解和代谢，另３个分别参与脂类代谢和遗传信息中
的转录以及细胞中的行为控制。Ⅳ类４个途径中２
个参与碳水化合物代谢以及能量代谢及转录。
可见，Ⅲ类基因具有重要意义，其他类基因主要
为生长相关的基础代谢基因。有些不同的基因参与
了同一条代谢途径，如 Ｐ４５０基因和 Ｏｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓ
ｆｅｒａｓｅ均参与芪，香豆素和木质素生物合成途径，分
别催化不同的步骤，２ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｍａｌａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ，
ＶＡＬＲＳ，ＢＣＡＴ２均参与缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸生
物合成。这些基因的注释为丹参功能基因的研究提
供了重要的基础。
２８ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ点杂交验证 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ点杂交结果显
示，ｌｅｃｔｉｎ在３０ｄ中的表达量高于６０ｄ的，而ｓｉｎａｐｙｌ
ａｌｃｏｈｏｌｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ｃｏｐａｌｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ，
２ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｍａｌａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ均为 ６０ｄ的表达量高于
３０ｄ的（图２）。此结果与芯片杂交结果完全一致，
表示芯片结果可靠。
３ 讨论
３１ 芯片的重复性 影响芯片数据准确性的主要
原因为２种误差：生物学误差和实验系统误差［１５］。
其中有些误差是可以人为控制的，而有些误差是无
法控制的，如生物个体的差异以及ＲＮＡ标记过程中
所需荧光染料都带来不可避免的误差。减少误差的
最好方式是重复实验。重复实验的方法有多种，由
于样本的限制及实验成本的限制，并不是重复越多
越好，在实验设计时要充分考虑到具体的实验性质
加以灵活掌握。一种最简单的重复方式是芯片上的
探针重复，如每个探针在芯片上点２个甚至更多的
重复点。但这只能消除部分实验误差，生物学误差
以及标记的误差仍然不能消除。因此，还需进行生
物学重复以降低生物学误差，采用正反荧光标记实
验以降低荧光染料带来的误差。本研究充分考虑了
上述各种因素，采用了多种重复的方法，包括每个探
针在芯片上重复点制２次，每组实验采用２个生物
学重复，并采用正反标记的方法以最大限度的消除
各种误差，保证实验数据的准确可靠。
３２ 芯片结果 通过芯片分析可见，虽然４５与３０
ｄ毛状根生长量差异显著，但并没有得到较多的差
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表３ 丹参差异基因ＰＡＴＨＷＡＹ分类
类型 ｃｏｎｔｉｇ号 基因 代谢途径
Ⅱ类 ｃｈｉｐ３７ｃ１２ ｐｈｏｓｐｈｏｅｎｏｌｐｙｒｕｖａｔｅｃａｒｂｏｘｙｋｉｎａｓｅ［ＡＴＰ］，ｐｕｔａｔｉｖｅ／ＰＥＰ；ｃａｒ
ｂｏｘｙｋｉｎａｓｅ，ｐｕｔａｔｉｖｅ／ＰＥＰＣＫ，ｐｕｔａｔｉｖｅ
三羧酸循环、丙酮酸代谢、碳固定
Ⅲ类 ｃｈｉｐ１６ｇ０９ ｃｏｐａｌｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ／ＣＰＳ／ｅｎｔｋａｕｒｅｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅＡ
（ＧＡ１）
二萜生物合成
ｃｈｉｐ２８ｃ０３
ｃｈｉｐ０３ａ０２
ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ｆａｍｉｌｙｐｒｏｔｅｉｎ 抗坏血酸代谢、六氯环己烷降解、芴降解、
柠檬油精和蒎烯降解、芪、香豆素和木质素
生物合成ｃｈｉｐ０２ｃ０３
ｃｈｉｐ３５ｆ１０
ｃｈｉｐ０７ｆ０９ Ｏｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ｆａｍｉｌｙ３ 芪、香豆素和木质素生物合成
ｃｈｉｐ０６ｆ０３ ２ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｍａｌａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ１ 缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸生物合成、丙酮
酸代谢
ｃｈｉｐ４１ｄ０９ ｖａｌｙｌｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ／ｖａｌｉｎｅｔＲＮＡｌｉｇａｓｅ（ＶＡＬＲＳ） 缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸生物合成、氨酰
ｔＲＮＡ生物合成
ｃｈｉｐ２８ｈ１２ ｂｒａｎｃｈｅｄｃｈａｉｎａｍｉｎｏａｃｉｄａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ２／ｂｒａｎｃｈｅｄｃｈａｉｎａ
ｍｉｎｏａｃｉｄｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ２（ＢＣＡＴ２）
缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸降解、缬氨酸、
亮氨酸、异亮氨酸生物合成、泛酸和辅酶生
物合成
ｃｈｉｐ０４ｈ１０ ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅＳｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ２ 蛋氨酸代谢
ｃｈｉｐ３２ｈ０７ ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ｐｕｔａｔｉｖｅ ＤＤＴ降解、色氨酸代谢、丙酸酯代谢
ｃｈｉｐ１３ｄ０５ ｍｙｏｉｎｏｓｉｔｏｌ１ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ 链霉素生物合成、肌醇磷酸代谢
ｃｈｉｐ３７ｄ０７ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＤｂｅｔａ１／ＰＬＤｂｅｔａ１ 甘油磷脂代谢
ｃｈｉｐ３５ｅ０６ ｍｙｂｆａｍｉｌｙｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ 日夜节律
Ⅳ类 ｃｈｉｐ０４ｅ０４ ｃｌａｓｓＩＶｃｈｉｔｉｎａｓｅ（ＣＨＩＶ） 氨基糖类代谢
ｃｈｉｐ１９ｇ０４ Ｌｇａｌａｃｔｏｎｏ１，４ｌａｃｔｏｎｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ 抗坏血酸代谢
ｃｈｉｐ０１ｇ１０ ｃａｒｂｏｎｉｃａｎｈｙｄｒａｓｅ 氮代谢
ｃｈｉｐ１０ａ０３ ６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ２１（ＲＰＬ２１Ｃ） 核糖体
ｃｈｉｐ３５ｈ０８ ４０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＳ１５（ＲＰＳ１５Ｄ）
ｃｈｉｐ４０ｄ０６ ６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ３２（ＲＰＬ３２Ｂ）
ｃｈｉｐ４３ｈ０２ ６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ３４
ｃｈｉｐ２５ｂ１０ ６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ３７ａ
ｃｈｉｐ４４ｂ１０ ｌａｒｇｅｓｕｂｕｎｉｔｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ２７
ｃｈｉｐ１５ｈ１０ ６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ２３（ＲＰＬ２３Ｃ）
ｃｈｉｐ３９ｈ０４ ６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ３７（ＲＰＬ３７Ｃ）
图２ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ点杂交结果
１，３，５，７，９毛状根３０ｄ；２，４，６，８，１０毛状根６０ｄ；分别使用探
针ａｃｔｉｎ（１，２）；ｌｅｃｔｉｎ（３，４）；ｓｉｎａｐｙｌａｌｃｏｈｏｌｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（５，６）；
ｃｏｐａｌｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ（７，８）；２ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｍａｌａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ（９，
１０）
异基因。而６０与３０ｄ杂交结果中差异基因较多，
且多集中在次生代谢方面。该结果可能与ｃＤＮＡ建
库材料的选择有关。建库材料所选用的根为丹参次
生代谢产物合成和积累的主要场所，缺乏与生长发
育相关的基因导致４５／３０ｄ差异基因明显偏少。
芯片分析结果并不是研究的最终目的，它只是
为后续研究工作搭建一个平台。由于时间有限，仅
对部分基因的表达和功能作了进一步的验证。即便
如此，作者已从４０００多个基因中筛去了绝大部分
无表达差异的基因，这是传统基因筛选方法所不能
达到的。对于这些用芯片方法筛选出的重要功能基
因如Ｐ４５０、二帖合酶以及金属硫蛋白基因等，将在
随后进行深入研究，陆续进行报道。
［致谢］ 北京大学药学院天然药物学系果德安教授研
究组在丹参次生代谢产物分析方面提供支持。
［参考文献］
［１］ 魏小勇，方 花，李杰芬，等中药功能基因研究［Ｊ］中国中
西医结合杂志，２００５，２５（２）：１８１
［２］ ＩｋｅｓｈｉｒｏＹ，ＭａｓｅＩ，ＴｏｍｉｔａＹＡｂｉｅｔａｎｅｔｙｐｅｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓｆｒｏｍ
Ｓａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｈｉｚａ［Ｊ］Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８９，２８：３１３９
［３］ 赵淑娟，章国瑛，刘 涤，等丹参水溶性酚酸类化合物药理及
生物合成途径研究进展［Ｊ］中草药，２００４，３５（３）：３４１
［４］ ＺｈａｏＳＪ，ＨｕＺＢ，ＬｉｕＤ，ｅｔａｌＴｗｏｄｉｖｅｒｇｅｎｔｍｅｍｂｅｒｓｏｆ４
ｃｏｕｍａｒａｔｅ：ｃｏｅｎｚｙｍｅａｌｉｇａｓｅｆｒｏｍＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｈｉｚａＢｕｎｇｅ［Ｊ］．
ＪＩｎｔｅｇｒＰｌａｎｔＢｉｏｌ，２００６，４８（１１）：１３５５
·１７２１·
第３２卷第１３期
２００７年７月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １３
Ｊｕｌｙ，２００７
［５］ 邱德有，宋经元，马小军，等．丹参毛状根生物反应器大规模
培养的研究［Ｊ］分子植物育种，２００４，２（５）：６９９
［６］ 刘爱华丹参的成分分析及其体内代谢研究［Ｄ］北京：北
京大学药学院，２００６：１１６
［７］ 崔光红，黄璐琦，唐晓晶，等丹参 ｃＤＮＡ芯片构建及表达谱
的研究Ⅰ丹参 ｃＤＮＡ芯片的构建［Ｊ］中国中药杂志，
２００７，３２（１２）：１１３７
［８］ ＳｈｉＹＨ，ＺｈｕＳＷ，ＭａｏＸＺ，ｅｔａｌＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅｐｒｏｆｉｌｉｎｇ，ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，ａｎｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｕｄｉｅｓｒｅｖｅａｌａｍａｊｏｒｒｏｌｅ
ｆｏｒｅｔｈｙｌｅｎｅｉｎｃｏｔｏｎｆｉｂｅｒｃｅｌｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ［Ｊ］ＰｌａｎｔＣｅｌ，２００６，
１８：６５１
［９］ ＡｎｄｅｒｓｏｎＩ，ＢｒａｓｓＡＳｅａｒｃｈｉｎｇＤＮＡｄａｔａｂａｓｅｓｆｏｒｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓｔｏ
ＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｓ：ｗｈｅｎｉｓａｍａｔｃｈｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ［Ｊ］Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，
１９９８，１４（４）：３４９
［１０］ 高瑞娟，戴大鹏，马荣才，等结球白菜结球前期基因表达序
列标签（ＥＳＴ）分析［Ｊ］农业生物技术学报，２００４，１２（１）：２４
［１１］ ＴｈｅＧｅｎｅＯｎｔｏｌｏｇｙＣｏｎｓｏｒｔｉｕｍＧｅｎｅＯｎｔｏｌｏｇｙ：ｔｏｏｌｆｏｒｔｈｅｕｎｉ
ｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｂｉｏｌｏｇｙ［Ｊ］ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔ，２０００，２５：２５
［１２］ ＫａｎｅｈｉｓａＭ，ＧｏｔｏＳ，ＨａｔｏｒｉＭ，ｅｔａｌＦｒｏｍｇｅｎｏｍｉｃｓｔｏｃｈｅｍｉ
ｃａｌｇｅｎｏｍｉｃｓ：ｎｅｗｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｉｎＫＥＧＧ［Ｊ］ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ
Ｒｅｓ，２００６，３４：Ｄ３５４
［１３］ 李 瑶基因芯片与功能基因组［Ｍ］北京：化学工业出版
社，２００４：５０
［１４］ 闫亚平基于 ＥＳＴ技术的丹参大规模基因克隆及其外源基
因转化技术研究［Ｄ］西安：陕西师范大学，２００５
［１５］ 胡松年基因表达序列标签（ＥＳＴ）数据分析手册［Ｍ］杭
州：浙江大学出版社，２００５：１０６
ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｏｍｉｃｓｓｔｕｄｉｅｓｏｆＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａⅡ
———ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔａｇｅｏｆｈａｉｒｙｒｏｏｔ
ＣＵＩＧｕａｎｇｈｏｎｇ１，ＨＵＡＮＧＬｕｑｉ１，ＱＩＵＤｅｙｏｕ２，ＹＵＡＮＹｕａｎ１，ＦＵＧｕｉｆａｎｇ１
（１ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ；
２ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＣｈｉｎｅｓｅａｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００９１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＳｔｕｄｙｉｎｇｔｈｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｓｔａｇｅｈａｉｒｙｒｏｏｔｏｆＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｈｉｚａ，ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｆｉｎｄ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｓｅｃｏｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＨＰＬＣａｎｄｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙ
ｃＤＮＡｍｉｃｒｏａｒａｙ．ｃＤＮＡｌａｂｅｌｅｄｗｉｔｈａｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｄｙｅ（Ｃｙ５ａｎｄＣｙ３ｄＣＴＰ）ｗａｓｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙＥｂｅｒｗｉｎｅ＇ｓｌｉｎｅａｒＲＮＡａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｍｅｔｈｏｄａｎｄｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｅｎｚｙｍａｔｉｃｒｅａｃｔｉｏｎ．ＴｈｅｍｉｃｒｏａｒａｙｓｗｅｒｅｓｃａｎｎｅｄｗｉｔｈａＳｃａｎＡｒａｙＥｘｐｒｅｓｓｓｃａｎｎｅｒｕｓｉｎｇＳｃａｎＡｒａｙ２．０ｓｏｆｔ
ｗａｒｅａｎｄｑｕａｎｔｉｆｉｅｄｂｙｓｉｇｎａｌｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓｏｆｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｐｏｔｓｆｒｏｍｔｈｅ１６ｂｉｔＴＩＦＦｉｍａｇｅｓｕｓｉｎｇＧｅｎｅＰｉｘＰｒｏ４．０．Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｎｏｒｍａｌｉｚａ
ｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｄａｔａａｎａｌｙｚｅ．Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｗａｓｕｓｅｄｔｏｔｅｓｔｔｈｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｍｉｃｒｏａｒａｙ．Ｄｉｆｅｒｅｎｔｅｘ
ｐｒｅｓｓｅｄｇｅｎｅｓｗｅｒｅｓｅｑｕｅｎｃｅｄａｎｄａｎａｌｙｚｅｄｂｙｇａｐ４ｓｏｆｔｗａｒｅ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｙｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｗｉｔｈＢＬＡＳＴＸ，ＢＬＡＳＴＮ，ＧＯａｎｄＫＥＧＧ．
Ｒｅｓｕｌｔ：Ｇｒｏｗｔｈｒａｔｅａｎｄｓｅｃｏｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｔａｇｅｆｒｏｍ３０ｄｔｏ４５ｄｗａｓｔｈｅｇｒｏｗｔｈｓｔａｇｅ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｓｔａｇｅ
ｆｒｏｍ４５ｄｔｏ６０ｄｗａｓｔｈｅｓｅｃｏｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｓｔａｇｅ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｌｙ３０ｄｈａｉｒｙｒｏｏｔｗａｓｃｈｏｓｅｎａｓａｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，ｗｈｉｃｈｗａｓｈｙ
ｂｒｉｄｉｚｅｄｗｉｔｈ４５ｄａｎｄ６０ｄｈａｉｒｙｒｏｏｔｓｅｐａｒａｔｅｌｙ．Ｔｏｔａｌ２０３ｄｉｆｅｒｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｅｄｇｅｎｅｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅ
ｓｕｌｔｗａｓｉｄｅｎｔｉｃａｌｗｉｔｈｔｈｅｍｉｃｒｏａｒａｙｒｅｓｕｌｔ．Ａｆｔｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｄ，ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ１７２ｇｅｎｅｓｃｌｕｓｔｅｒｅｄｉｎｔｏ１１４ｃｌｕｓｔｅｒｓ（Ｕｎｉｇｅｎｅｓ）．Ａｍｏｎｇ
ｔｈｅｍ，６２ｕｎｉｇｅｎｅｓｈａｄｋｎｏｗｎｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，３４ｕｎｉｇｅｎｅｓｗｅｒｅｈｙｐｏｔｈｅｔｉｃａｌｐｒｏｔｅｉｎ，９ｕｎｉｇｅｎｅｓｗｅｒｅｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓｗｉｔｈｎｏｓｉｍｉｌａｒｉｔｙａｎｄ９
ｕｎｉｇｅｎｅｓｗｅｒｅｕｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈｌｏｗｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ．Ｔｏｔａｌ６７ｇｅｎｅｓｗｅｒｅｃｌａｓｓｉｆｉｅｄｉｎｔｏｃｅｌｕｌａｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｎｔｏｌｏｇｙ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒｆｕｎｃ
ｔｉｏｎｏｎｔｏｌｏｇｙａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｏｎｔｏｌｏｇｙｂａｓｅｄｏｎＧＯａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｏｔａｌ２６ｇｅｎｅｓ，ｗｈｉｃｈｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ２９ｍｅｔａｂｏｌｉｃｒｅｌａｔｅｄｅｎｚｙｍｅｓ，
ｗｅｒｅｌｏｃａｔｅｄｉｎｍｅｔａｂｏｌｉｃｍａｐｓｂａｓｅｄｏｎＫＥＧＧｐａｔｈｗａｙｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｓｅｖｅｒａｌｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｓｅｃ
ｏｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄｓｕｃｈａｓＰ４５０ａｎｄｃｏｐａｌｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅｓ．ｃＤＮＡｍｉｃｒｏａｒａｙｗａｓａｕｓｅｆｕｌｔｏｏｌｆｏｒ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｏｍｉｃｓｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｓａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｈｉｚａ；ｈａｉｒｙｒｏｏｔ；ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇ；ｃＤＮＡｍｉｃｒｏａｒａｙ
［责任编辑 张宁宁］
·２７２１·
第３２卷第１３期
２００７年７月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １３
Ｊｕｌｙ，２００７