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Protective effect of Panax japonics on ethanol-induced mice gastric lesion

竹节人参对小鼠乙醇性胃黏膜损伤的保护作用



全 文 :竹节人参对小鼠乙醇性胃黏膜损伤的保护作用
李有贵 o徐 刚 o陈 诗 o钟 石 o计东风 3
k浙江省农业科学院 o浙江 杭州 vtssutl
≈摘要   目的 }研究竹节人参对乙醇致小鼠胃黏膜损伤的保护作用 o并对其机制进行探讨 ∀方法 }Œ≤• 雄性小
鼠随机分为正常组 o模型组 o竹节人参低 !中 !高剂量组 kt1xov1soy1s ª# ®ªpt l和饮多安组 kt1x ª# ®ªpt lo观察预
防给予竹节人参对模型小鼠血清 !尿液中乙醇含量的影响 o测定小鼠血清 !胃组织中谷胱甘肽过氧化物酶 kŠ≥‹ 2
°÷ lo过氧化氢酶 k≤„×lo超氧化物歧化酶 k≥’⁄l的活性及丙二醛 k ⁄„lo还原型谷胱甘肽 kŠ≥‹ l的含量 ~同时通
过电镜观察小鼠胃黏膜超微结构病理变化 ∀结果 }竹节人参 kt1xov1s ª# ®ªpt l可显著降低模型小鼠血清中乙醇含
量 o加快小鼠体内乙醇通过尿液排出 ~降低模型小鼠血清 !胃组织中  ⁄„含量 o提高 Š≥‹ 含量及 Š≥‹ 2°÷ o≤„×o
≥’⁄酶活性 ~同时保护小鼠胃黏膜上皮细胞线粒体结构完整以维持其功能正常 ∀结论 }竹节人参对乙醇性胃黏膜
损伤有明显保护作用 o其作用机制之一可能是通过抑制乙醇的胃肠吸收 o促进乙醇通过尿 !粪等直接快速排出体
外 o同时加强乙醇在胃肠道的首过代谢 o提高机体的抗氧化能力 o通过对胃黏膜上皮细胞线粒体结构的保护 o可能
是其发挥解酒护胃作用的机制之一 ∀
≈关键词   竹节人参 ~乙醇性胃黏膜损伤 ~线粒体
≈中图分类号   • u{xqx ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszlut2uu{u2sw
≈收稿日期   ussy2ts2ux
≈基金项目   浙江省科技厅项目 kussw≤vuszzl
≈通讯作者   3 计东风 oר¯}ksxztl{ywsws{{o∞2°¤¬¯}§²±ª©¨±ª
ƒ ½¤¤¶q²µª
长期或大量饮酒会导致肝脏 !胃疾患 o产生大量
有毒的脂质过氧化物 ≈tou  ∀因此如何对抗乙醇的毒
副作用 o清除体内氧化自由基 o开发有效的解酒药物
已成为近年来医药工作者研究的热点 ∀竹节人参系
五加科植物 o为 5中国药典 6收载的名贵常用中药 o
其主要化学成分为竹节参皂苷 ≈vow  o近年来实验表
明 o竹节人参具有解酒作用 ≈xoy  o但作用机制有待进
一步研究 ∀为此 o本实验以小鼠为对象 o通过观察
竹节人参对小鼠血清 !胃组织中一些生化指标的影
响 o小鼠血清 !尿液中乙醇浓度及对胃黏膜超微结构
病理变化 o以观察竹节人参对小鼠乙醇性胃黏膜损
伤的保护效果及其解酒的可能机制 o为竹节人参的
开发利用提供科学依据 ∀
1 材料
1q1 药物
竹节人参 Παναξ ϕαπονιχσ ≤q „q  ¼¨o由浙江省
农业科学院农信所洪林副研究员鉴定 o采自临安青
凉峰自然保护区人工种植的 v年生根茎 oyx ε 干
燥 o常温粉碎过 tus目筛备用 k竹节人参总皂苷含
量 w1{uh o比色法测定 l~对照解酒药饮多安胶囊
k杭州市每日健康产业有限公司 o批号 ussysxtul~
xyβ红星二锅头白酒 k北京红星二锅头酒厂 o批号
ussysytxl∀实验时将竹节人参粉 !饮多安粉按要求
剂量用蒸馏水配成悬浊液灌胃给药 ∀
1q2 动物及环境
Œ≤• 小鼠 o雄性 o体重 ux ∗ u{ ªo由浙江省医学
科学院实验动物中心提供 o动物饲养合格证号 }浙医
动字 ussvsst∀环境清洁级 o温度 kux ? ul ε !相对
湿度 xsh ∗ zsh !自然光照 !自由取食与饮水 o预试
期 z §∀
1q3 主要试剂及仪器
谷胱甘肽过氧化物酶 kŠ≥‹ 2°÷ l!过氧化氢酶
k≤„×l!超氧化物歧化酶 k≥’⁄l!丙二醛 k ⁄„l!还
原型谷胱甘肽 kŠ≥‹ l以及考马斯亮蓝蛋白测定试
剂盒 k均购于南京建成生物工程研究所 o批号
ussyszuul∀ ˜ ·¯µ²¶³¨ ¦2א vtss型紫外分光光度计
k美国 o„° µ¨¶«¤°公司 l~y{|s‘气相色谱仪 k美国 o
„ª¬¯¨ ±·公司 lo测定条件 }色谱柱 §¥2yuwks1vu °° ≅
vs °ot1{ Λ°lo柱温 ws ε o载气 ‘u o恒定流速 u1s
°# °¬±pt o汽化室 tus ε o检测室 uxs ε o氢火焰
离子化检测器 o检测时间 { °¬±o净化时间 vs °¬±∀
∞’ptuvs型透射电镜 k日本 o∞’公司 l~Š¤2
#u{uu#
第 vu卷第 ut期
ussz年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ ut
‘²√ °¨¥¨ µo ussz
·¤±z|u型数码相机 k日本 oŠ¤·¤±公司 l∀
2 方法
2q1 分组与给药
Œ≤• 雄性小鼠随机分为 y组 kν € tslo正常组 !
模型组予等体积蒸馏水灌胃 o竹节人参低 !中 !高剂
量组 kt1xov1soy1s ª# ®ªpt o给药剂量参照文献
≈z o略有改动 l和饮多安组 kt1x ª# ®ªpt l每天 t
次灌胃给药 o连续 u周 ∀每次给药 t «后除正常组
外各组均按乙醇 z1| ª# ®ªpt k相当于 xyβ红星二锅
头白酒 s1vx °l体重灌胃 o连续 u周 ∀
2q2 取样
处理结束前禁食 t §o灌胃给药及白酒 t «后 o
摘眼球取血 o摘除膀胱收集尿液 ow ε 密封静置 u «o
v xss µ# °¬±pt离心 x °¬±o取血清 !尿液 w ε 密封保
存待检 ∀同时迅速剖取胃 o冰生理盐水冲洗去除内
容物 !滤纸吸湿后 o称取湿重 s1v ª左右 o加预冷的
生理盐水 o冰水中制成 tsh胃匀浆 ow ε otu sss µ#
°¬±pt离心 x °¬±o取上清液 o按试剂盒要求保存待
检 ∀
2q2q1 血清 !尿液中乙醇浓度测定 取血清 us ˏ
k尿液 s1u °lo三氯醋酸 s1t °o一定量异丙醇用
生理盐水稀释至终质量浓度 xs °ª# pt o振荡后以
v xss µ# °¬±pt离心 ts °¬±o取上清做气相色谱测
定 ≈{  ∀
2q2q2 血清 !胃组织匀浆中生化指标检测 Š≥‹ 2
°÷ o≤„×o≥’⁄o ⁄„oŠ≥‹ 以及考马斯亮蓝蛋白测
定按试剂盒说明书比色法测定 ∀
2q2q3 标本制备 沿胃大弯剪开胃 o用冰生理盐水
冲洗去胃内残渣 ou1xh戊二醛固定 o≥·∏µµ包埋 !定位 !
切片 !醋酸双氧铀 !柠檬酸铅染色 o透射电镜观察 ∀
2q3 统计方法
实验数据用 cξ ? σ表示 o统计方法为多重方差分
析 o用 ≥°≥≥ tu1s统计软件处理 ∀
3 结果
3q1 血清及尿液中乙醇相对含量变化
模型组血清乙醇相对含量明显高于其他各用药
组 o低 !中剂量竹节人参可显著降低小鼠血清乙醇相
对含量 o各给药组尿液中乙醇相对含量显著高于模
型组 k表 tl∀
表 t 各组小鼠血清及尿液中乙醇相对含量比较
kcξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
rª# ®ªpt
乙醇相对含量
血清 尿液
模型 p v1z| ? s1w| v1zy ? s1yu
竹节人参 t1x u1z{ ? s1|yvl z1w{ ? s1x{wl
v1s u1vu ? s1vxwl z1sv ? s1yywl
y1s v1ut ? s1y| w1zy ? s1yvvl
饮多安 t1x u1{t ? s1usvl x1z{ ? s1xxwl
注 }与正常组相比 tl Π  s1sxoul Π  s1st~与模型组相比 vl Π 
s1sxowl Π  s1stk表 u ∗ w同 l
3q2 血清 !胃组织匀浆中 Š≥‹ 2°÷ o≤„×酶活性的
变化
与正常组相比 o模型组小鼠血清 Š≥‹ 2°÷ o≤„×
酶活力显著降低 ~在胃组织中模型组 Š≥‹ 2°÷活力
显著降低 o≤„×酶活力有降低趋势 o但无显著性差
异 ~相对于模型组 o低 !中剂量竹节人参及饮多安可
提高小鼠血清 !胃匀浆中 Š≥‹ 2°÷活力 ~各用药组血
清 ≤„×活力与正常组间无差异显著性 o竹节人参高
剂量组中胃组织 ≤„×活力显著降低 k表 ul∀
表 u 各组小鼠血清及胃组织中 Š≥‹ 2°÷ o≤„×酶活性比较 kcξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
rª# ®ªpt
Š≥‹ 2°÷
血清 r˜# °pt 胃组织 r˜# °ªpt
≤„×
血清 r˜# °pt 胃组织 r˜# ªpt
正常 p |z1ux ? tw1tz xw1{v ? ty1su t{1ux ? t1v| ws1u{ ? ts1tv
模型 p zt1tx ? y1uvul ut1sz ? z1uwul y1yw ? u1tsul uw1v| ? {1w{
竹节人参 t1x ttu1uv ? {1tvwl vy1v{ ? tu1uuuovl t|1vw ? v1uzwl vw1v{ ? tv1{w
v1s {v1yx ? tx1|| w|1uv ? {1z{wl uz1vs ? {1|{wl xt1xy ? tx1xuwl
y1s zu1v| ? tz1z|ul us1sv ? |1uyul ut1|{ ? v1y{wl y1xt ? w1xxuovl
饮多安 t1x {z1s| ? |1yyvl vy1uu ? tx1zwuovl tz1uw ? z1s{vl uy1y| ? x1yv
3q3 血清及胃组织中 ≥’⁄酶活力变化
模型组血清 !胃组织 ≥’⁄酶活力显著降低 ~经
预防给药后 o各给药组小鼠血清中 ≥’⁄活力显著升
高 o与正常组比无差异显著性 ∀相对于模型组 o竹节
人参各剂量组胃组织中 ≥’⁄活性明显升高 o但仍显
著低于正常值 k表 vl∀
3q4 血清及胃组织中 Š≥‹ o ⁄„含量的影响
模型组血清及胃组织中 Š≥‹含量显著降低 o各
给药组血清中 Š≥‹含量显著升高 o与正常组间无差
异显著性 ~胃组织中 Š≥‹含量相对于模型组 o竹节
#v{uu#
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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表 v 各组小鼠血清及胃组织中 ≥’⁄酶活性比较
kcξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
rª# ®ªpt
≥’⁄
血清 r˜# °pt 胃组织 r˜# °ªpt
正常 p twy1xz ? tz1zt utu1v| ? ux1tt
模型 p y|1yv ? t{1uytl xz1{x ? tw1w|ul
竹节人参 t1x tt|1uv ? uw1vs |u1y| ? tx1utul
v1s txt1yy ? u|1yzwl {t1u{ ? z1stul
y1s ust1w{ ? xw1yvwl tut1wv ? us1|vuovl
饮多安 t1x tt{1x| ? vv1u{ usz1vw ? ux1v{wl
人参各剂量组有明显升高 o但仍显著低于正常值 ∀
与模型组相比 o竹节人参各剂量组及饮多安组小鼠
血清及胃组织中  ⁄„ 水平显著降低 o其中血清
 ⁄„与正常组间无差异显著性 o中 !高剂量组胃组
织  ⁄„显著低于正常值 k表 wl∀
3q5 各组小鼠胃黏膜上皮细胞线粒体变化
图 t显示 o正常组胃黏膜上皮细胞线粒体多为
圆形或卵圆形 o嵴丰富清晰可见 o呈板层状排列 o互
相平行 o垂直于线粒体长轴 o基质均质且密集 ~模型
表 w 各组小鼠血清及胃组织中 Š≥‹ o ⁄„含量比较 kcξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
rª# ®ªpt
Š≥‹ 2°÷
血清 r˜# °pt 胃组织 r˜# °ªpt
≤„×
血清 r˜# °pt 胃组织 r˜# ªpt
正常 p utt1|y ? ux1v| wx1uv ? y1uw tu1uy ? t1xs u1yz ? t1tt
模型 p tsy1|{ ? uw1usul t{1{| ? v1{xul vx1{t ? ty1x{ul v1|z ? s1y|tl
竹节人参 t1x uxt1|z ? yt1sxwl u|1xv ? {1{ytl tw1{w ? y1uywl t1yv ? t1wwwl
v1s uwt1wy ? ws1suwl u{1|t ? |1zxtl tx1xx ? ts1s{wl s1|u ? t1vvuowl
y1s tz{1sv ? xt1zyvl uz1su ? y1|vtl ts1ty ? v1{xwl s1x{ ? s1wwuowl
饮多安 t1x usw1yt ? ut1yvwl ws1tw ? {1zxvl x1vw ? u1vxwl t1vt ? s1wzwl
组胃黏膜上皮细胞线粒体肿大 !畸形 o嵴断裂 !减少
甚至消失 o基质变稀薄 o电子密度降低 ∀竹节人参
低 !中剂量组小鼠胃黏膜上皮细胞线粒体结构基本
正常 o内 k嵴 l外膜完整 o排列正常 o基质均匀 o但有
些肿胀 ~竹节人参高剂量组小鼠胃黏膜上皮细胞线
粒体嵴断裂 !残存 o基质稀薄 ~饮多安组小鼠胃黏膜
上皮细胞线粒体结构基本正常 o但嵴紊乱 !断裂 ∀
4 讨论
本实验结果显示 }竹节人参低 !中剂量组小鼠血
清乙醇相对含量明显降低 o其原因之一是胃肠中乙
图 t 小鼠胃黏膜上皮细胞线粒体
¤q正常组 ~¥q模型组 ~¦q竹节人参低剂量组 ~§q竹节人参中剂量组 ~ q¨竹节人参高剂量组 ~©q饮多安组
#w{uu#
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∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ ut
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醇通过尿液快速有效的排出了体外 ∀血清 !胃组织
生化指标检测结果发现 o酒精在胃肠道中的首过代
谢可引起胃黏膜脂质过氧化反应增强 o模型组血清 !
胃组织中  ⁄„大量生成引发了大量的脂质过氧化
反应 o同时导致血清 !胃组织中 Š≥‹的耗竭 oŠ≥‹ 2
°÷ o≤„×及 ≥’⁄活性显著降低 ~采用预先给予竹节
人参可显著抑制乙醇导致的血清 !胃组织  ⁄„含
量增加 o提高血清 !胃组织 Š≥‹ 含量及 Š≥‹ 2°÷ o
≤„×o≥’⁄酶活性 o其中血清 Š≥‹ 含量 oŠ≥‹ 2°÷ o
≤„×o≥’⁄酶活性基本恢复正常 ~胃组织中 Š≥‹含
量 !抗氧化酶 ≥’⁄活性有所升高 o但与正常组相比
仍有差异 o可能是由于氧应激产物的生成量超过了
清道夫分子 Š≥‹ oŠ≥‹ 2°÷ o≤„×和 ≥’⁄清除能力 o
过剩的氧自由基与线粒体内外膜上的不饱和脂肪酸
发生脂质过氧化反应 o致使内外膜损伤 o引起线粒体
病变 o造成 „×°形成不足 o胃黏膜功能虚弱 o机体氧
化系统和抗氧化系统进一步失衡 ~在胃黏膜上皮细
胞透射电镜中发见 o预防给予低 !中剂量竹节人参可
明显保护小鼠胃黏膜上皮细胞线粒体结构以维持其
功能正常 o但竹节人参高剂量组小鼠胃黏膜上皮细
胞线粒体结构未恢复正常 o具体原因有待进一步研
究 o饮多安解酒药物对胃黏膜上皮细胞线粒体结构
及功能亦有保护作用 ∀
≈致谢   本课题得到浙江大学分析测试中心黎军英 !
朱亚尔老师及浙江大学动物科学学院时连根教授的帮助 ∀
≈参考文献  
≈t  ¬±§µ²¶Ž’q „ ¦¯²«²¯¬¦ ¬¯√ µ¨§¬¶¨¤¶¨} ³¤·«²¥¬²¯²ª¬¦¤¯ ¤¶³¨ ¦·¶≈ q
‹ ³¨¤·²¯²ª¼o t||xouv}zq
≈u  ¬°¤×o ƒ¬¤¯²√¤o  ¶¨·¨® ’o ·¨¤¯q ’¬¬§¤·¬√¨¶·µ¨¶¶o ° ·¨¤¥²¯¬¶°
²© ·¨«¤±²¯ ¤±§¤¯¦²«²¯2µ¨ ¤¯·¨§§¬¶¨¤¶¨¶≈ q …¬²° §¨≥¦¬o ussto{
ktl}x|q
≈v  中国药典 ≈≥ q一部 qusss}tsyq
≈w  蔡 平 o邱晓星 o肖卓殷 q川产竹节人参皂甙元的薄层光密度
扫描测定 ≈ q四川医学院学报 ot||wotxkvl}uvzq
≈x  肖培根 q新编中药志 ≈  q北京 }化学工业出版社 oussu}wvvq
≈y  叶 勇 q植物天然抗氧化成分及其效果 ≈ q中国食品添加剂 o
usssow}wxq
≈z  ’ ¬¯√ ¬¨µ¤„ ≤ ≤o ° µ¨¨½„ ≤o °µ¬¨·²Šo ·¨¤¯q °µ²·¨¦·¬²± ²©Παναξ
γινσενγ ¬± ¬±­∏µ¨§°∏¶¦¯ ¶¨¤©·¨µ ¦¨¦¨±·µ¬¦ ¬¨¨ µ¦¬¶¨ ≈ q ∞·«±²2
³«¤µ°¤¦²¯o ussxo|z}uttq
≈{  ƒµ¬¨§µ¬¦« • o ≤«µ¬¶·²³«Žo ²¨ µª o ·¨¤¯q ∞·«¼¯ ª¯∏¦∏µ²±¬§¨ }
¤°¤µ®¨ µ²©µ¨¦¨±·¤¯¦²«²¯ ¦²±¶∏°³·¬²± º¬·« ¦¯¬±¬¦¤¯ ¤±§ ©²µ¨±¶¬¦
¬°³¯¬¦¤·¬²±¶≈ q „ ¦¯²«²¯o usssous}tttq
Προτεχτιϖε εφφεχτ οφΠαναξ ϕαπονιχσ ον ετηανολ2ινδυχεδ µ ιχε γαστριχ λεσιον
Œ≠²∏2ª∏¬o ÷ ˜ Š¤±ªo ≤‹∞‘≥«¬o ‹ ’‘Š ≥«¬o Œ⁄²±ª2©¨±ª
(Ζηεϕιανγ Αχαδεµ ψ οφ ΑγριχυλτυραλΣχιενχεσ, Ηανγζηου vtssut, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶·∏§¼ ·«¨ ³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨¦·¶²©Παναξ ϕαπονιχσ k°l ²± ¤¯¦²«²¯2¬±§∏¦¨§ª¤¶·µ¬¦¯¨¶¬²± ¬± °¬¦¨ ¤±§·«¨
³²¶¶¬¥¯¨° ¦¨«¤±¬¶°¶q Μετηοδ :  ¤¯¨Œ≤• °¬¦¨ º µ¨¨ µ¤±§²°¬½¨ §¬±·² ¶¬¬ ªµ²∏³¶} ±²µ°¤¯o ¦²±·µ²¯o °ktqxo vqso yqs ª# ®ªpt l ¤±§
≠¬±§∏²¤± kt1x ª# ®ªpt l1 ׫¨ °¬¦¨ º µ¨¨ ³µ¨·µ¨¤·¨§º¬·«°¥¨ ©²µ¨ ¤§°¬±¬¶·¨µ¬±ª ·¨«¤±²¯ ·²²¥¶¨µ√¨·«¨ ©¨©¨¦·²± ·«¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²© ·¨«2
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Χονχλυσιον: …¤¶¨§²± ·«¨ ¶¨ ²¥¶¨µ√¤·¬²±¶o ²±¨¦²∏¯§¦²±¦¯∏§¨ ·«¤··«¨ °¬¶¤³²·¨±·³µ²·¨¦·¬√¨¤ª¨ ±·¤ª¤¬±¶·¨·«¤±²¯2¬±§∏¦¨§ª¤¶·µ¬¦§¤°2
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[ Κεψ ωορδσ] Παναξ ϕαπονιχσ~ ·¨«¤±²¯2¬±§∏¦¨§ª¤¶·µ¬¦¯¨¶¬²±~ °¬·²¦«²±§µ¬¤
≈责任编辑 古云侠  
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第 vu卷第 ut期
ussz年 tt月
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