全 文 ：#研究论文#
野生与栽培管花肉苁蓉的遗传多样性分析
崔光红t o陈 敏t o黄璐琦t 3 o刘铭庭u
kt1 中国中医科学院 中药研究所 o北京 tsszss ~
u1 中国科学院 新疆生态与地理研究所 o新疆 乌鲁木齐 {vssttl
≈摘要  目的 }研究野生与栽培管花肉苁蓉的遗传多样性 ∀方法 }采用随机扩增多态性 ⁄‘„k• „°⁄l方法对管
花肉苁蓉的 w个野生居群和 u个人工栽培居群的 tuv个个体进行了遗传多样性研究 ∀利用 °’°Š∞‘∞t1vt版软件分
析群体的遗传多样性 ∀结果 }用 ts个随机引物共扩增出清晰谱带 {z条 ∀野生居群平均多态位点百分率 uz1x| o各
居群多态位点百分率 t|1xw ∗ ux1u| o其中安迪尔居群的最高为 ux1u| ∀u个人工栽培居群的多态位点百分率仅为
tv1z|和 tt1w| ∀用 ˜°Š „法聚类可知 ow个野生居群聚为一类 ou个人工栽培居群聚为一类 o表明野生居群与人工
居群间已发生了遗传分化 ∀结论 }栽培管花肉苁蓉遗传背景单一 o再次强调野生管花肉苁蓉保护的重要性 ∀
≈关键词  管花肉苁蓉 ~• „°⁄~遗传多样性 ~保护
≈中图分类号  ≥ xyz ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussyltx2tuuz2sw
≈收稿日期  ussx2sy2uu
≈基金项目  科技部社会公益项目kusst qts|l ~国家 / 十五0科
技攻关项目kusst…„zst„s|¤l
≈通讯作者  3 黄璐琦 oר¯ }kstslywstwwtt2u|xy o∞2°¤¬¯}«∏¤±2
ª¯∏´¬ƒ uyv q±¨ ·
管花肉苁蓉 Χιστανχηε τυβυλοσαk≥¦«¨ ±®l • 1 •¬ª«·
为列当科肉苁蓉属寄生植物 o又名大芸 o有/沙漠人
参0之美誉 o具有补肾阳 !益精血 !润肠通便的功
效≈t  ∀在我国仅分布于新疆天山以南塔克拉玛干沙
漠周围各县 o其分布与寄主柽柳属 Ταµαριξ 植物不
完全同步 o其他地区如新疆北部 !甘肃 !青海 !宁夏 !
内蒙古 !陕西等地的柽柳属植物均不寄生 o自 t|x|
年首先在塔克拉玛干柽柳的根部发现后≈u  o管花肉
苁蓉逐渐成为全国肉苁蓉药材的主要来源植物≈v  o
已被5中国药典6ussx年版收载≈t  ∀然而随着肉苁
蓉需求量的急剧增长 o其野生资源受到掠夺式的采
挖 o现已被列为我国濒危保护植物物种≈w  ∀
为了实现管花肉苁蓉的可持续利用 o本课题组
经过数年的研究 o对管花肉苁蓉的人工繁育已获得
成功 o目前正处于大面积推广种植阶段 ∀然而 o在产
业化生产时如何防止物种的衰退 o以及如何尽快恢
复有限的野生居群 o保存珍贵的野生种质资源 o是实
现其可持续利用急需解决的问题 ∀解决这一问题的
基础和依据是对其野生和人工栽培居群的遗传多样
性进行比较 ∀本研究运用 • „°⁄技术≈x 对管花肉苁
蓉的 w个野生居群和 u个人工栽培居群进行研究 o
分析两者遗传多样性的差异 o以期为制定野生居群
的保护策略提供科学的依据 o同时为管花肉苁蓉种
植基地的建设提供遗传学的指导 ∀
1 材料和方法
111 材料 管花肉苁蓉野生居群采自新疆民丰县
和于田县 ∀民丰县为目前管花肉苁蓉产量最大的地
区 o分布有密度最大 o野生林相对较完整的群落 ∀采
样点民丰县安迪尔 !萨吾则克 !牙通古孜和于田县大
河沿均为主产区 o分别位于安迪尔河 !叶亦克河 !牙
通古孜河以及克里雅河的下游 o居群间相距 xs ®°
以上 ∀人工居群采自新疆于田县大芸种植场和奥依
托格拉克 ∀除奥依托格拉克居群仅有 ts个样品外 o
其余居群均随机取样 t| ∗ uz个 o样品置于硅胶中快
速干燥后 o用于 ⁄‘„提取k表 tl ∀
表 t 管花肉苁蓉采样的位置
居群 采样数 产地 海拔r°
野生居群
安迪尔k¬±´l uu 民丰县安迪尔农场 t vss
萨吾则克k¬±µl uu 民丰县萨吾则克乡 t wss
牙通古斯k¬±¶l uv 民丰县牙通古斯乡 t vxs
大河沿k≠∏´l t| 于田县大河沿 t tss
人工栽培居群
奥依托格拉克k≠∏µl ts 于田县奥依托格拉克乡 t yss
于田种植场k¤¬l uz 于田县大芸种植场 t xss
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第 vt卷第 tx期
ussy年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ tx
„∏ª∏¶·oussy
112 ⁄‘„的提取 总 ⁄‘„提取方法用高盐 !低 ³‹
法≈y  ∀⁄‘„样品经分光光度计检测 ⁄‘„ 模板的浓
度 o用 t h的琼脂糖凝胶电泳 o∞…染色 !紫外灯下观察
照相 o电泳 ⁄‘„带清晰 !拖尾较少的用于 • „°⁄分析 ∀
113 • „°⁄引物的筛选 用上海生工k≥¤±ª²±l公司
txs条随机引物kts ¥³l oux ˏ的反应体系进行扩增
筛选 ~每条引物用 u个不同居群的模板再加一个灭
菌双蒸水作空白对照 o得到对管花肉苁蓉扩增条带
清晰 !多态性强 !重复性好的 ts 条引物 }≥ttwt o
≥ttwy o≥tt{v o≥tus{ o≥txss o≥usvu o≥uswu o≥usxu o
≥usx| o≥utxx ∀
114 °≤• 扩增及产物检测 用筛选好的对全部管
花肉苁蓉模板 ⁄‘„进行 °≤• 扩增 ∀基因组 ⁄‘„根
据所测质量浓度稀释至 xs ±ª#ˏpt作为模板 ∀反应
总体积为 ux ˏo其中 ts ≅ °≤• …∏©©¨µu1x ˏoªun
t1x ˏoפ´ kx ˜#ˏptls1u ˏo§‘×°k各 u1x °°²¯ #
ptlt ˏox Λ°²¯#pt °µ¬°¨ µt ˏo模板 ⁄‘„ t ˏo灭
菌双蒸水 t{1{ ˏo上述 °≤• 扩增液均为上海 ≥¤±ª²±
的产品 ∀扩增在 °×≤ p tss扩增仪上进行 o扩增程序
为 }|w ε 预变性 x °¬±后进行 ws个循环 o每个循环
包括 |w ε s1zx °¬±ovw ε t °¬±ozu ε t1x °¬±o最后
在 zu ε 延伸 x °¬±∀扩增产物用 u1s h的琼脂糖凝
胶k含 ∞…l在 t ≅ ׄ∞缓冲液中电泳 o≥≠‘Š∞‘∞型凝
胶成像系统下观察 !拍照 ∀
115 数据的统计和分析 电泳图谱中根据分子质
量标准对照反应产物在胶上的对应位置 o估计扩增
产物分子质量的大小 o有带的记为 t o无带的记为 s o
形成 srt矩阵图输入计算机 o利用 °’°Š∞‘∞vu计算
各个居群的多态位点百分率 !‘¨¬. ¶基因多样性指数
k Ηl !≥«¤±±²±. ¶多态性信息指数kΙl !基因分化系数
kΓστl !基因多样性k Ητl !居群内基因多样性k Ησl !
‘¨¬. ¶遗传一致度kΙl和遗传距离k ∆l o并采用 ˜°Š2
 „法进行聚类分析 ∀
2 结果与分析
211 管花肉苁蓉的遗传多样性 所有样品均得到
分子质量范围在 uss ∗ u uss ¥³的条带k图 tl o共检
测到 {z 个位点 o其中 uw 个为多态性位点 o占
uz1x| h o‘¨¬. ¶基因多样性指数 Η € s1s{u v o≥«¤±2
±²±. ¶多态性信息指数 Ι € s1tux { ∀其中野生居群
多态位点百分率在 t|1xw ∗ ux1u| o多态位点百分率
最高的是安迪尔为 ux1u| ∀ ‘¨¬. ¶基因多样性为
s1syu t ∗ s1s{s s o≥«¤±±²±. ¶多态性信息指数为
s1s|x s ∗ s1tut y ∀人工栽培居群的多态位点百分
率ktv1z|和 tt1w|l !‘¨¬. ¶基因多样性ks1swx |和
s1svz yl和 ≥«¤±±²±. ¶多态性信息指数ks1sy| s和
s1sxy tl均远低于野生居群的水平k表 ul ∀
表 u 管花肉苁蓉野生居群和人工栽培居群的遗传变异
居群 个体数 总位点数 多态位点数
多态位点
百分率
‘¨¬. ¶基因
多样性k Ηl
≥«¤±±²±. ¶
指数kΙl
野生居群
安迪尔 uu {z uu ux qu| s qs{s s s qtut y
萨吾则克 uu {z tz t| qxw s qsyw t s qs|z s
牙通古斯 uv {z tz t| qxw s qsyu t s qs|x s
大河沿 t| {z t{ us qy| s qsyx s s qs|{ y
总计 {y {z uw uz qx| s qs{u v s qtux {
人工栽培居群
奥依托格拉克 ts {z tu tv qz| s qswx | s qsy| s
种植场 uz {z ts tt qw| s qsvz y s qsxy t
图 t 引物 ≥txss 的扩增效果
212 管花肉苁蓉居群间的遗传距离和聚类分析
由各居群的 ‘¨¬. ¶遗传一致度和遗传距离k表 vl可
见 ow个野生居群与 u个人工栽培居群之间的遗传
距离相差较大ks1svt v ∗ s1syt tl ∀ ˜°Š„聚类结
果k图 ul显示 w个野生居群聚为一类 ou个人工栽培
居群聚为一类 o此结果表明人工栽培居群与野生居
群已发生遗传分化 ∀
为研究地理距离对野生管花肉苁蓉遗传结构的
影响 o对各野生居群的地理距离和遗传距离进行了
¤±·¨¯ 检验 o结果地理距离与遗传距离之间没有显
著的相关性 ∀从聚类图中亦可见 o安迪尔 !萨吾则克
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第 vt卷第 tx期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ tx
„∏ª∏¶·oussy
表 v 管花肉苁蓉居群间的遗传一致度k左下l和遗传距离k右上l
居群 安迪尔 萨吾则克 牙通古斯 大河沿 奥依托格拉克 种植场
安迪尔 s qsvt x s qstu s s qstz s s qsyt t s qsw{ y
萨吾则克 s q|y| s s qst| z s qst| u s qsvt x s qsvw w
牙通古斯 s q|{{ t s q|{s x s qstx v s qsv{ t s qsvt v
大河沿 s q|{v u s q|{t s s q|{w { s qsxw v s qsx{ v
奥依托格拉克 s q|ws z s q|y| s s q|yu y s q|wz t s qstw t
种植场 s q|xu y s q|yy u s q|y| u s q|wv w s q|{y s
图 u 管花肉苁蓉居群间的 ‘¨¬. ¶遗传一致度聚类图
和牙通古斯就地理距离而言应该优先聚类 o但安迪
尔和牙通古斯首先聚类后却与大河沿聚类的现象亦
表明遗传距离与地理距离之间没有显著的相关性 ∀
3 讨论
311 野生与栽培管花肉苁蓉的遗传多样性比较 u
个人工栽培居群的遗传多样性大大低于野生居群 ∀
奥依托格拉克的管花肉苁蓉为 t||x年种植的 o以后
长期无人管理 o实际已是半野生居群 o但其遗传多样
性ktv1z| h l仍无法与野生居群相比 ∀种植场的 uz
个样品分别为 {种柽柳属植物上接种的管花肉苁
蓉 o但其遗传多样性仅为 tt1w| h o表明人工栽培的
管花肉苁蓉种源可能来源于极其有限的群体 o这为
大量的基地化种植敲响了警钟 ∀很多农作物正是在
其栽培化进程中丢失了大量的遗传变异 o纯系的栽
培品种 o常常因遗传基础的狭窄 o在突发的病虫害或
环境胁迫面前损失惨重 ∀而野生资源在长期的自然
选择过程中形成了许多优良的特性 o蕴藏着高效优
质 !耐寒抗旱 !抗病虫害等暂时还不为人类所知的基
因 ∀利用野生管花肉苁蓉作亲本 o可以选育出新的
种质 o是开展管花肉苁蓉基地化种植 !植物基因工程
研究的物质基础 ∀因此 o虽然管花肉苁蓉人工种植
面积已相当可观 o但并不能忽视野生管花肉苁蓉资
源的保护 o必须制定切实可行的保护措施和对策 ∀
312 野生管花肉苁蓉的遗传多样性 管花肉苁蓉的
遗传多样性远低于同属植物荒漠肉苁蓉的遗传多样
性 o推测狭窄的地理分布是影响其遗传多样性水平的
主要因素≈z  ∀遗传多样性较为丰富的安迪尔居群所
在的安迪尔农场位于安迪尔河的下游 o该区是民丰县
的重点保护天然森林 o有保护最完好的胡杨林和柽柳
林 ∀在公路沿途即可见到多种不同的柽柳群落交错
分布 o如柽柳2拂子茅群落 !胡杨2短穗柽柳群落 !多花
柽柳2多枝柽柳2骆驼刺群落等 ∀大河沿居群也是人
迹罕至 o生态环境保护较好的地区 ∀可见管花肉苁蓉
遗传多样性水平与其生境群落结构的多样性密切相
关 ∀该结论再次强调保护管花肉苁蓉野生种群必须
保护其现有的生态环境 o任何环境的破坏必将导致其
遗传多样性甚至种群的减少和灭亡 ∀
313 管花肉苁蓉的可持续利用措施 中药野生资
源是我国药用植物遗传育种和生物技术研究的重要
物质基础 o是生物多样性的重要组成部分 o也是中药
产业可持续发展的战略资源 ∀面对生境人为破坏严
重 !野生及栽培居群遗传多样性均较低的现状 o保护
珍贵的野生管花肉苁蓉种质资源已势在必行 ∀由于
遗传多样性主要来源于居群内 o因此 o遗传多样性大
的居群将作为优先保护的对象 o如民丰的安迪尔和
于田的大河沿可以列为管花肉苁蓉自然保护基
地≈z  ∀同时 o为了满足日益扩大的市场需求 o在加大
力度进行管花肉苁蓉种植基地建设的同时 o应积极
开展优良种质的筛选与保存工作 o提高栽培管花肉
苁蓉的品质 o最终达到管花肉苁蓉的可持续利用 ∀
≈致谢  新疆民丰县县委 !于田县县委 o特别是张立新 !
张秀成在样品采集方面给予帮助 ∀
≈参考文献 
≈t  中国药典 q一部 qussx }|s q
≈u  刘铭庭 q柽柳属植物综合研究及大面及推广应用 q兰州 }兰州
大学出版社 ot||x }vst q
≈v  何燕萍 o尹哲洙 o屠鹏飞 o等 q肉苁蓉鉴定与商品药材调查 q
中药材 ot||z ouskvl }ttz q
≈w  傅立国 q中国植物红皮书 q北京 }科学出版社 ot||u }xsu1
≈x  • ¬¯¯¬¤°¶ Š ŽoŽ∏¥¨ ¬¯® „ • o¬√¤®o ·¨¤¯ q ⁄‘„ ³²¯¼°²µ³«¬¶°¶
¤°³¯¬©¬¨§ ¥¼ ¤µ¥¬·¤µ¼ ³µ¬°¨ µ¶¤µ¨ ∏¶¨©∏¯ ¤¶ª¨ ±¨ ·¬¦ °¤µ®¨µ¶q ‘∏¦¯ ¬¨¦
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≈y  邹喻苹 o汪小全 o雷一丁 o等 q几种濒危植物及其近缘类群总
⁄‘„的提取与鉴定 q植物学报 ot||w ovy }xu{ q
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第 vt卷第 tx期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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≈z  崔光红 o陈 敏 o黄璐琦 o等 q药用肉苁蓉的遗传多样性 • „°⁄分析 q中国中药杂志 oussw ou|k{l }zuz q
Στυδψ ον γενετιχ διϖερσιτψ οφ νατυραλ ανδ χυλτιϖατεδ Χιστανχηετυβυλοσα
≤˜Œ Š∏¤±ª2«²±ªt o≤‹∞‘ ¬±t o ‹˜„‘Š ∏2 ¬´t oŒ˜ ¬±ª2·¬±ªu
(t1 Ινστιτυτε οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα , Χηινα Αχαδεµψ οφ Χηινεσε Μεδιχαλ Σχιενχεσ , Βειϕινγ tsszss , Χηινα ;
u1 Ξινϕιανγ Εχολογψ ανδ Γεογραπηψ Ρεσεαρχη Ινστιτυτε , Χηινεσε Αχαδεµψ οφ Σχιενχεσ, Υρυµθι {vsstt , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨·¨µ°¬±¨ ·«¨ ª¨ ±¨ ·¬¦§¬√ µ¨¶¬·¼ ²©±¤·∏µ¤¯ ¤±§¦∏¯·¬√¤·¨§ Χιστανχηε τυβυλοσα q Μετηοδ : tuv¬±§¬√¬§∏¤¯¶²©¶¬¬
³²³∏¯¤·¬²±¶²© Χ. τυβυλοσα o¬±¦¯∏§¬±ª©²∏µ±¤·∏µ¤¯ ³²³∏¯¤·¬²±¶¤±§·º²¦∏¯·¬√¤·¨§²±¨ ¶oº µ¨¨ ¤±¤¯¼½¨ §¥¼µ¤±§²° ¤°³¯¬©¬¨§³²¯¼°²µ³«¬¦⁄‘„
k• „°⁄l °¤µ®¨µ¶·² §¨·¨µ°¬±¨ ·«¨ ª¨ ±¨ ·¬¦√¤µ¬¤·¬²±¶¤°²±ª·«¨ ³²³∏¯¤·¬²±¶q Ρεσυλτ : „ ·²·¤¯ ²©{z ²¯¦¬k¬±¦¯∏§¬±ªuw ³²¯¼°²µ³«¬¦ ²¯¦¬l º µ¨¨
¤°³¯¬©¬¨§∏¶¬±ªts µ¤±§²° ³µ¬° µ¨¶q׫¨ ¤√ µ¨¤ª¨ ³¨µ¦¨±·¤ª¨ ²©³²¯¼°²µ³«¬¦¯ ²¦¬k°°l º¤¶uz1x|¬±·«¨ ±¤·∏µ¤¯ ³²³∏¯¤·¬²±¶q׫¨ °°¥¨·º¨¨ ±
±¤·∏µ¤¯ ³²³∏¯¤·¬²±¶¤µ¨ t|1xw ·² ux1u|1 ’©·«¨ ©²∏µ±¤·∏µ¤¯ ³²³∏¯¤·¬²±¶o „±§¬. µ¨³²³∏¯¤·¬²± «¤§«¬ª«¨¶·°°kux1u|l q ׫¨ ·º² ¦∏¯·¬√¤·¨§
³²³∏¯¤·¬²±¶«¤§ ²¯º °°ktv1z| ¤±§tt1w|l q≤¯ ∏¶·¨µ¤±¤¯¼¶¬¶∏¶¬±ª˜°Š „ µ¨√ ¤¨¯ §¨·«¤·³²³∏¯¤·¬²±¶²©±¤·∏µ¤¯ ¤±§¦∏¯·¬√¤·¨§º µ¨¨ ¶¨³¤µ¤·¨§
¬±·²·º²ªµ²∏³¶o·«¨ ©²∏µ±¤·∏µ¤¯ ³²³∏¯¤·¬²±¶¦¯∏¶·¨µ¨§¤¶²±¨ ªµ²∏³¤±§·«¨ ·º² ¦∏¯·¬√¤·¨§³²³∏¯¤·¬²±¶¦¯∏¶·¨µ¨§¤¶¤±²·«¨µªµ²∏³o¬±§¬¦¤·¬±ª
·«¤··«¨ ±¤·∏µ¤¯ ¤±§¦∏¯·¬√¤·¨§³²³∏¯¤·¬²±¶«¤§²¥√¬²∏¶§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±q Χονχλυσιον : Œ± √¬¨º ²©·«¨ ²¯º ª¨ ±¨ ·¬¦§¬√ µ¨¶¬·¼ ²©·«¨ ¦∏¯·¬√¤·¨§ Χ.
τυβυλοσα oº¨¶·µ²±ª¯¼ ¶∏ªª¨¶·¨§·«¤··«¨ ±¤·∏µ¤¯ ³²³∏¯¤·¬²±¶¶«²∏¯§¥¨ ¦²±¶¨µ√ §¨¬± ³¤µ·¬¦∏¯¤µq
[ Κεψ ωορδσ] Χιστανχηε τυβυλοσα ~ • „°⁄~ª¨ ±¨ ·¬¦§¬√ µ¨¶¬·¼
≈责任编辑 张宁宁 
≈收稿日期  ussw2tt2tu
≈通讯作者  3黄芸 oר¯ }ksvttl{yuyxyu{ o ∞2°¤¬¯}«¼|vtzxvy ƒ
·²° q¦²°
‹°≤2∞≥⁄法分析重楼商品药材中甾体皂苷的含量
黄 芸t 3 o崔力剑u o刘伟娜t o王 强v
kt1 河北医科大学 生药学教研室 o河北 石家庄 sxsstz ~u1 河北医科大学 中医学院 o
河北 石家庄 sxss|t ~v1 中国药科大学 中药分析教研室 o江苏 南京 utssv{l
≈摘要  目的 }建立重楼药材中主要生物活性成分甾体皂苷的 ‹°≤2∞≥⁄测定方法 ∀方法 }应用蒸发光散射
检测器 o以乙腈2水为流动相梯度洗脱 o流速 t °#°¬±pt o在反相 ≤t{kw1y °° ≅ txs °° ox Λ°l柱上 o测定重楼药材中
tt个甾体皂苷的含量 ∀结果 }在 vs °¬±以内 o成功地分离分析 tt个甾体皂苷 ∀精密度 !稳定性 • ≥⁄均小于 v h o加
样回收率在 |x h ∗ |z h ∀结论 }此方法对这 tt个甾体皂苷的测定具有良好的精密度 ∀结果表明该方法简便 !快
速 !选择性好 o适用于常用中药重楼的质量分析 ∀
≈关键词  重楼 ~甾体皂苷 ~含量分析
≈中图分类号  • u{w1t ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussyltx2tuvs2sw
重楼是延龄草科重楼属植物的干燥根茎≈t  ∀其
资源以西南地区的云南 !四川 !贵州最为丰富 ∀ 5中
国药典6usss年版收载的品种为华重楼k七叶一枝
花l Παρισ πολψπηψλλα ≥°¬·« √¤µ1 χηινενσισ kƒµ¤±¦«1l
‹¤µ¤和滇重楼k云南重楼l Π1 πολψπηψλλα ≥°¬·« √¤µ1
ψυννανενσισ kƒµ¤±¦«1l ‹¤±§12¤½½ u个种 ∀现代化学
及药理学研究表明 }广泛存在于重楼属植物中的甾
体皂苷是其主要的活性成分 ∀具有止血 !抑菌 !抗
癌 !调节免疫等作用 o还具有心血管作用及镇痛和镇
#svut#
第 vt卷第 tx期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ tx
„∏ª∏¶·oussy