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Experimental study on anti-tumor effect of extractive from Celastrus orbiculatus in vivo

南蛇藤提取物体内抗肿瘤作用的实验研究



全 文 :南蛇藤提取物体内抗肿瘤作用的实验研究
张 舰 t o许运明 u o王维民 t o刘延庆 t3
kt1扬州大学 医学院 o江苏 扬州 uuxsst~ u1扬州市中医院 o江苏 扬州 uuxss|l
≈摘要   目的 }研究南蛇藤提取物体内抗肿瘤作用 ∀方法 }采用小鼠肉瘤 k≥t{sl!肝癌 k‹ ³¨¶l移植性肿瘤模
型 o观察南蛇藤醋酸乙酯 !正丁醇提取物的肿瘤抑制作用 ~并分别测定小鼠血清中超氧化物歧化酶 k≥’⁄l活性 !丙
二醛 k ⁄„l含量 ∀结果 }南蛇藤醋酸乙酯 !正丁醇提取物在 us °ª# °pt时即可明显抑制 ≥t{s和 ‹ ³¨¶移植性肿
瘤 o与阴性对照组相比 o有显著性差异 kΠ  s1stl~并可提高小鼠血清 ≥’⁄活性 o降低  ⁄„水平 ∀结论 }南蛇藤醋
酸乙酯 !正丁醇提取物具有抗小鼠肿瘤作用 ~并可增强抗氧化能力 ∀
≈关键词   南蛇藤 ~提取物 ~抗肿瘤 ~抗氧化
≈中图分类号   • u{x1x ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussylt{2txtw2sv
≈收稿日期   ussy2st2us
≈基金项目   国家中医药管理局中医药科学技术研究专项普
通课题资助项目 ksw2sx°vxl
≈通讯作者   3 刘延庆 oר¯}ksxtyl{vtsxty|o∞2°¤¬¯} ¬¯∏¼´ ƒ
¼½∏1 §¨∏1¦±
南蛇藤 Χελαστρυσορβιχυλατυσ׫∏±¥1为卫矛科南
蛇藤属植物 o药性辛温 !有小毒 o功能祛风 !除湿 !活
血 !解毒 !消肿 ≈t  ∀南蛇藤在我国及世界有广泛分
布 o近年来的药理研究证实其中某些成分具有抗肿
瘤活性 ≈uov  o但对其分离有效部位抗肿瘤的报道尚
少见 ∀本实验首次观察南蛇藤醋酸乙酯 !正丁醇提
取物对小鼠肉瘤 k≥t{sl!肝癌 k‹ ³¨¶l体内抗肿瘤的
作用 o并初步探讨其作用机制 o为其进一步研究提供
依据 ∀
1 材料与方法
111 材料
清洁级 Œ≤• 小鼠 o体重 kut ? ul ªo雌雄各半 o由
扬州大学比较医学中心提供 o合格证 ≥≤÷Žk苏 l
ussu2sss|~小鼠移植性肿瘤 }肉瘤 k ≥t{sl!肝癌
k‹ ³¨¶lo均由中国科学院上海药物研究所提供 o江
苏省肿瘤防治研究所传代保种 ~南蛇藤饮片购于广
东省中医院 o经中国药科大学中药资源研究室秦民
坚教授鉴定为卫矛科南蛇藤属植物南蛇藤 Χ1 ορβιχ2
υλατυσ的藤茎 ∀环磷酰胺 k≤×÷ o上海华联制药有限
公司 o批号 sxstsyl~≥’⁄o ⁄„试剂盒 k南京建成生
物工程研究所 l~其他为分析纯 ∀
112 方法
11211 药物用量 实验用药物在成年人 k按体重
ys ®ª计算 l的用量为 | ∗ tx ª# §pt≈w  o小鼠口服用
药量按公式 ≈x  δ… € δ„ ≅ kΡ… rΡ„ l ≅ kΩ„ rΩ… ltrv计
算 ∀ δ…为小鼠口饲用量 k°ª# ®ªpt loδ„为人体口服
用量 k°ª# ®ªpt l~Ρ„ k人体型系数 l为 tssoΡ… k小鼠
体型系数 l为 x|oΩ„ k成年人体重 l按 ys ®ª计算 o
Ω… k小鼠体重 l按 ut ª计算 ∀
11212 药品配制 南蛇藤切段粉碎成粉 o烘干 o
|xh乙醇加热回流提取 v次 o旋转蒸发仪回收溶剂
得浸膏 o拌入硅藻土 o真空低温抽干 o干燥后装入抽
滤漏斗 o依次用正己烷 !醋酸乙酯 !正丁醇分别洗脱
至无色 o分别回收醋酸乙酯 !正丁醇溶剂得南蛇藤醋
酸乙酯提取物 k≤∞l!正丁醇提取物 k≤‘l浸膏 ∀每
克浸膏相当于 xs ª生药 ∀用时以 s1|h ‘¤≤ 配¯成
所需浓度 ∀
11213 抗肿瘤作用实验 ≈y  选择肿瘤生长良好的
荷瘤小鼠 o无菌条件下取出肿瘤 o用 s1|h ‘¤≤ 按¯比
例 k≥t{s tΒvo‹ ³¨¶tΒwl制成肿瘤细胞悬液 o每只小
鼠右前肢腋窝皮下接种 s1u °∀接种后使用均衡
随机法分组 k每组雌雄各半 o组间平均体重相差不
超过 t ªlo实验组每组 ts只 o对照组每组 tw只 ∀设
阴性对照组 k溶媒 l!阳性对照组 k≤×÷ lo≤∞o≤‘给
药组各设 tsousows °ª# ®ªpt v个剂量组 ∀接种 uw
«后开始灌胃给药 o每天固定时间段给药 t次并记
录小鼠的活动情况 o给药前称体重 o根据体重变化调
整用药量 o连续 ts §∀末次给药后 uw «称体重 o摘
眼球取血后处死 o完整剥离肿瘤 !肝脏 !脾脏 !胸腺等
#wtxt#
第 vt卷第 t{期
ussy年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφΧηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ t{
≥ ³¨·¨°¥¨ µoussy
组织 ∀
11214 疗效总体评价 分别称取各组小鼠瘤量及
肝脏 !脾脏 !胸腺等器官的质量 o并计算其抑瘤率和
肝脏 !脾脏 !胸腺指数 ∀
11215 抗氧化指标 摘眼球取血 o分离得到血清 ∀
采用黄嘌呤氧化酶法测定 ≥’⁄o硫代巴比妥酸法测
定  ⁄„∀
11216 病理观察 取各组瘤块组织 o脱水透明后石
蜡包埋 o常规病理切片制备 o‹∞染色 o光学显微镜
下观察 ∀
11217 统计学处理 所得资料用 ≥°≥≥ tv1s统计
软件分析 o数据用 cξ ? σ表示 o组间比较用 τ检验 ∀
2 结果
211 小鼠活动情况观察
≤×÷组小鼠进食量较阴性对照组明显减少 o毛
发干枯 !蓬松 !无光泽 o且有中度腹泻 o体质消瘦 o活
动迟缓 ∀而 ≤∞o≤‘组小鼠较阴性对照组活动敏捷 o
进食量增加 ∀
212 疗效总体评价
≤∞o≤‘v个剂量组对小鼠 ≥t{s肿瘤均有较强
的抑制作用 o其高 kws °ª# ®ªpt l!中 kus °ª#
®ªpt l剂量组对小鼠 ‹ ³¨¶肿瘤也有较强的抑制作
用 o和阴性对照组相比 o均有显著性差异 ∀ u种肿瘤
的抑制作用均以中剂量组 kus °ª# ®ªpt l效果为好
k表 tl∀
表 t ≤∞o≤‘对 ≥t{so‹ ³¨¶作用 kcξ ? σ, ν € tsl
小鼠
肿瘤 组别
剂量
r°ª# ®ªpt
体重增
长率 rh
平均
瘤重 rª
抑瘤率
rh
≥t{s 阴性对照 p w{qvt tqxw ? squv p
≤×÷ ws tyqzw squz ? sqtsul {uqwt
≤∞ ws v{q|z sqzu ? squwul xuq|y
us vxqww sqy| ? squvul xxqtu
ts vuqut sq|w ? sqvutl v{qzy
≤‘ ws vtqys sqzv ? squ|ul xuqzz
us vyqsu sqzs ? squwul xwqws
ts vvqvv sq|z ? sqwutl vyq{t
‹ ³¨¶ 阴性对照 p v|qyu uqy| ? tqsx p
≤×÷ ws txqw| sqwv ? sqtyul {vq{u
≤∞ ws wsqzy tqux ? sqxutl xvqxv
us vxqzx tqsy ? sqxwul ysqw|
ts v{qwy tqz| ? sqwt vvqwy
≤‘ ws wsq{x tquv ? sqxuul xwqu{
us v{q|z tqsy ? sqv|ul ysqx{
ts vxqww tqzy ? sqy{ vwqxz
注 }与阴性对照组比较 tl Π  s. sx, u) Π  sqstk表 uov同 l
与阴性对照组比较 o≤∞o≤‘各处理组小鼠肝 !
脾 !胸腺指数无明显改变 o而 ≤×÷组脾 !胸腺指数明
显降低 o与阴性对照组比较差异有显著性 k表 ul∀
表 u ≤∞o≤‘对荷 ≥t{so‹ ³¨¶小鼠
的各指数 kcξ ? σ, ν € tsl
小鼠
肿瘤
组别
剂量
r°ª# ®ªpt
肝脏指数
r°ª# ªpt
脾脏指数
r°ª# ªpt
胸腺指数
r°ª# ªpt
≥t{s 阴性对照 p yxq|z ? yqz{ zqwu ? tqtz vqvx ? tqxv
≤×÷ ws yxqts ? zqsv vqss ? sqztul tq{x ? sqx{tl
≤∞ ws yxqwt ? tsqt| yq{y ? tqvs vqyw ? tqsu
us yxqs{ ? yqyy yq|y ? uqu{ vqyt ? tqwx
ts ywqwu ? |qzy yq{v ? tqu| vqsz ? sqx|
≤‘ ws ywqyz ? {qtt zqws ? tqvw vqyv ? tqx|
us ywqz{ ? yqzy zqtu ? tqxs vqsv ? sqzz
ts ywqvx ? wq|y yq{u ? tqy| vqzz ? sq|s
‹ ³¨¶阴性对照 p yuqyw ? vq|v {qy| ? vqst uqws ? sq|u
≤×÷ ws yvqu| ? wquy vqyu ? tqxyul tqyv ? sqxztl
≤∞ ws yyqwy ? wqv| zqyt ? sq|z uq{x ? sq{{
us yyqwu ? vquz {qys ? uqxu vqxv ? tqvy
ts yyq|v ? |qwz |qs{ ? uqvy uqzv ? sqzu
≤‘ ws yuq{v ? yqyy {qtx ? uqsy uqyt ? sqyy
us ywqvs ? xqxw {qss ? uqyy vquu ? tqut
ts ysqyu ? zqut zqvx ? uqws uq{x ? tqux
213 对荷瘤鼠血清抗氧化功能的影响
≤∞o≤‘中剂量组 kus °ª# ®ªpt l作用的的
≥t{so‹ ³¨¶荷瘤小鼠血清 ≥’⁄活力均有升高 o ⁄„
水平均有下降 o与阴性对照组对比均有显著性差异
k表 vl∀
表 v ≤∞o≤‘对荷 ≥t{so‹ ³¨¶小鼠 ≥’⁄和
 ⁄„的影响 kcξ ? σ, ν € tsl
小鼠肿瘤 组别
剂量
r°ª# ®ªpt
≥’⁄
r˜# °pt
 ⁄„
r±°²¯# °pt
≥t{s 阴性对照 p |sq{| ? vvqt{ uwquv ? wqtu
≤×÷ ws ttyqzx ? usq{z tzqxs ? wqw{
≤∞ ws tsyqxu ? ttqsu txqu| ? wqsu
us tyvqts ? wzqtvtl tvquz ? wqsvtl
ts ttwquv ? u|qsv txq|s ? vqy{
≤‘ ws tttqss ? uyq{x tyqxw ? vqtv
us txxqvs ? tzqswtl ttqtx ? vq||tl
ts ttvq{u ? u{qtv txqyw ? uq||
‹ ³¨¶ 阴性对照 p twtqy| ? u{qvs uvqut ? xquv
≤×÷ ws tzyq|{ ? vxqzv txqzz ? uqx{
≤∞ ws tz|q|w ? u|q{y tuqvz ? vqtv
us ustqv| ? tvqxwtl |qu| ? tq|stl
ts tz|q{| ? vxquv twqwu ? uqvy
≤‘ ws t|{qz| ? v{qxs tvqwy ? vqyy
us us|qsy ? utqsvul ttqxw ? uq{xtl
ts t{xqyy ? uxqwx twquv ? xq{t
214 病理
光学显微镜下 o≤∞o≤‘组瘤结节中坏死较多 o
肿瘤细胞较小 o核分裂数稍少 o癌巢内可见大量淋巴
#xtxt#
第 vt卷第 t{期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφΧηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ t{
≥ ³¨·¨°¥¨ µoussy
细胞浸润 ∀阴性对照组瘤结节中央可见癌性坏死 o
核分裂多见 o坏死灶中有淋巴细胞 !浆细胞反应 ∀
3 讨论
运用肿瘤动物模型观察了南蛇藤醋酸乙酯提取
物 !正丁醇提取物的抑瘤作用并从抗氧化角度探讨
其抗肿瘤机制 ∀实验结果提示南蛇藤提取物对小鼠
移植性肿瘤 ≥t{so‹ ³¨¶均具有显著的抑制作用 o与
对照组比 o有显著性差异 o以中剂量组 kus °ª#
°pt # §pt l效果较好 o在发挥抗肿瘤作用的同时 o
与阴性对照组比 o肝 !脾 !胸腺指数无明显改变 o对免
疫器官无明显不良反应 ∀
本实验中南蛇藤提取物对于提高荷瘤小鼠血清
≥’⁄活力及降低  ⁄„水平有一定作用 ∀提示南蛇
藤提取物可提高体内抗氧化酶活性和自由基清除剂
水平 o保护机体免受氧自由基的攻击 o对肿瘤的发生
发展起到一定作用 ∀
从病理学观察结果分析 o南蛇藤醋酸乙酯提取
物 !正丁醇提取物处理组肿瘤细胞增殖比率明显减
低 o肿瘤细胞较小 o瘤组织坏死明显 o提示南蛇藤提
取物具有抑制肿瘤生长和瘤组织分裂繁殖的能力以
及对该肿瘤细胞的细胞毒作用 ∀
≈参考文献  
≈t  国家中医药管理局中华本草编委会 q中华本草 ≈  q第 x分
册 q上海 }上海科技出版社 ot|||}tyyq
≈u  ≤«¤±ªƒ • o ‹¤¼¤¶«¬Žo ≤«¨ ± Œ‹ o ·¨¤¯q „±·¬·∏°²µ¤ª¨ ±·¶q uu{q
©¬√¨ ± º¨ ¤ª¤µ²©∏µ¤±¶o µ¨¬¶¶¤±·¬±¶ „ 2∞o ¤±§ ¦¼·²·²¬¬¦ ³µ¬±¦¬³¯ ¶¨
©µ²° Ρεισσαντια βυχηανανιι≈ q ‘¤·°µ²§o ussvoyykttl}twty1
≈v  ‘¤ª¤¶¨  o ’·² o ≥∏ª¬¼¤°¤ ≥o ·¨¤¯q „³²³·²¶¬¶¬±§∏¦·¬²± ¬± ‹2
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≈ q …¬²¶¦¬…¬²·¨¦«±²¯ …¬²¦«¨ °o ussvo yzk|l}t{{vq
≈w  黄太康 o丁志遵 o赵守训 o等 q现代本草纲目 ≈  q北京 }中国
医药科技出版社 ousst}t{x|q
≈x  徐淑云 o卞如廉 o陈 修 q药理实验方法学 ≈  q u版 q北京 }
人民卫生出版社 o t||w}tz| q
≈y  徐淑云 o卞如廉 o陈 修 q药理实验方法学 ≈  q v版 q北京 }
人民卫生出版社 o ussu}tzxzq
Εξπεριµ ενταλστυδψ ον αντι2τυµ ορ εφφεχτ οφ εξτραχτιϖε
φροµ Χελαστρυσ ορβιχυλατυσ ιν ϖιϖο
‹ „‘Š ¬¤±t o ÷ ˜ ≠∏±2°¬±ªu o • „‘Š • ¬¨2°¬±t o Œ˜ ≠ ¤±2´ ¬±ªt
(t. ΜεδιχαλΣχηοολοφ Ψανγζηου Υνιϖερσιτψ, Ψανγζηου uuxsst, Χηινα;
u. Ψανγζηου Ηοσπιταλοφ ΤραδιτιοναλΧηινεσε Μεδιχιν, Ψανγζηου uuxss|, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶·∏§¼ ·«¨ ¤±·¬2·∏°²µ¤¦·¬√¬·¼ ²© ¬¨·µ¤¦·¬√¨©µ²° Χελαστρυσορβιχυλατυσ ιν ϖιϖο. Μετηοδ :  ¬¦¨ ¥¨ ¤µ¬±ª
·µ¤±¶³¯¤±·¨§·∏°²µ≥t{s ¤±§ ‹ ³¨¶º µ¨¨ ∏¶¨§ ·² ¶·∏§¼ ·«¨ ©¨©¨¦·¶²©¤¦¨·²¤¦¨·¤·¨ ¤±§ ν2¥∏·¤±²¯ ¬¨·µ¤¦·¬√¨ ©µ²° Χ. ορβιχυλατυσ~ ׫¨
¦«¤±ª¨ ¶¬± ¶¨µ∏° ¦²±·¨±·¶²©≥’⁄ ¤±§°¤¯²±§¬¤¯§¨ «¼§¨ k ⁄„l ¦²±·¨±·º µ¨¨ ¤¶¶¤¼¨ §q Ρ εσυλτ: „¦¨·²¤¦¨·¤·¨ ¤±§±2¥∏·¤±²¯ ¬¨·µ¤¦·¬√¨
©µ²° Χ. ορβιχυλατυ󶬪±¬©¬¦¤±·¯¼ ¬±«¬¥¬·¨§·«¨ ªµ²º·«²©≥t{s ¤±§‹ ³¨¶·∏°²µ¬± °¬¦¨q ≥’⁄ ¦²±·¨±·º¤¶²¥√¬²∏¶¯¼ ¬±¦µ¨¤¶¨§o ⁄„ ¦²±2
·¨±·²¥√¬²∏¶¯¼ §¨ ¦µ¨¤¶¨§¬± ·«¨ ¶¨µ∏° ¤©·¨µ¨ ¬·µ¤¦·¬√¨·µ¨¤·° ±¨·q Χονχλυσιον: „¦¨·²¤¦¨·¤·¨¤±§±2¥∏·¤±²¯ ¬¨·µ¤¦·¬√¨©µ²° Χ. ορβιχυλατυσ
«¤√¨¤±·¬2·∏°²µ ©¨©¨¦·¶¤±§¤±·¬2²¬¬§¤·¬√¨¦¤³¤¦¬·¼q
[ Κεψ ωορδσ] Χελαστρυσ ορβιχυλατυσ~ ¬¨·µ¤¦·¬√ ~¨ ¤±·¬2·∏°²µ~ ¤±·¬2²¬¬§¤·¬²± ≈责任编辑 刘  
5中国中药杂志 6近况简介
5中国中药杂志 6为中国自然科学核心期刊 o中国中文核心期刊 o中国科技核心期刊 ~为 /中国科学引文数据库 0 ! /中国学
术期刊综合评价数据库 0和 /中国科技论文统计源 0来源期刊 o并且被 5中国学术期刊文摘 6收录 ∀在国际上 o被美国医学索引
 ∞⁄Œ‘∞及 5化学文摘 6k≤„l!5生物学文摘 6k…„l!5国际药学文摘 6kŒ°„l!5分析文摘 6k„„l等收录 ∀
本刊自 ussx年起由月刊改为半月刊 o每期页码为 {s页 o定价 tu元 ∀据中国科学技术信息研究所信息分析研究中心发布
的 ussw年度中国科技期刊引证报告 }5中国中药杂志 6总被引频次为 u sst~影响因子为 sqxyv~基金论文比例 sqwu∀ 5中国中
药杂志 6连续第 z年获得中国科协择优支持基础性 !高科技学术期刊经费资助 ∀
5中国中药杂志 6荣获第三届国家期刊奖百种重点期刊 ∀
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