全 文 ：大孔吸附树脂分离纯化菝葜总黄酮
李文霞１，颜 彦２，叶晓川２，杨祥良２
（１．华中科技大学 化学系，湖北 武汉 ４３００７４；
２．华中科技大学 生命科学与技术学院，湖北 武汉 ４３００７４）
［摘要］ 目的：研究大孔吸附树脂富集、纯化菝葜总黄酮的工艺条件及参数。方法：以总黄酮收率为指标，对
工艺条件进行了筛选。结果：６种大孔吸附树脂和１种聚酰胺中，Ｄ１４０型树脂具有最佳的吸附及洗脱参数，其静态
吸附容量以干树脂计为１４８７ｍｇ·ｇ－１。最佳吸附条件：药液质量浓度为０５ｇ·ｍＬ－１（以生药量计），吸附流速为
２ＢＶ·ｈ－１，吸附量为１８ＢＶ；洗脱最佳条件：以１０ＢＶ蒸馏水、５ＢＶ的２０％乙醇依次洗脱，弃去洗脱液；再用５～１０
ＢＶ，６０％乙醇以流速１ＢＶ·ｈ－１进行洗脱，总黄酮的收率为８４７２％。结论：Ｄ１４０型树脂综合性能较好，适于菝葜
总黄酮的分离纯化。
［关键词］ 大孔吸附树脂；菝葜总黄酮；分离纯化
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１３１２９２０４
［收稿日期］ ２００６０６２３
［通讯作者］ 杨祥良，Ｔｅｌ：（０２７）８７７９２１４７，Ｆａｘ：（０２７）８７７９
４５１７，Ｅｍａｉｌ：ｖａｎｇｘｌ＠ｍａｉｌ．ｈｕｓｔ．ｅｄｕ．ｃｎ
中药菝葜为百合科植物菝葜 ＳｍｉｌａｘｃｈｉｎａＬ．的
根茎，具有消肿止痛，祛风利湿，活血化瘀及抗肿瘤
等作用［１３］，临床上主要用于盆腔炎、附件炎等妇科
炎症的治疗，其含有的化学成分主要有皂苷类、黄酮
类、甾醇类等［４５］。黄酮类化合物具有多种生物活
性，已有文献报道，菝葜醋酸乙酯提取物（黄酮所在
部位）是治疗妇科炎症的最有效部位［５］。本研究采
用大孔吸附树脂分离纯化菝葜总黄酮，对６种大孔
吸附树脂及聚酰胺进行了筛选，并对菝葜总黄酮的
分离纯化工艺进行了初步的研究。
１ 仪器与试剂
ＵＶ－２１０２ＰＣ型紫外可见分光光度计（尤尼柯
仪器有限公司）；芦丁对照品（含量测定用，中国药
品生物制品检定所，００８０９７０５）；菝葜药材（由湖北
福人药业有限公司提供，经叶晓川研究员鉴定为百
合科植物菝葜的根茎）；大孔吸附树脂Ｄ１０１，ＡＢ－８
（南开大学化工厂），ＨＰＤ５００（河北沧州宝恩化工有
限公司），ＸＤＡ－１，ＬＳＡ－２０（西安蓝晓科技有限公
司），Ｄ１４０（成都晨光化工研究所）；其他试剂均为分
析纯。
２ 方法与结果
２．１ 总黄酮含量测定方法［６］
２．１．１ 对照品溶液的制备 称取经６０℃减压干燥
至恒重的芦丁对照品２０ｍｇ，精密称定，用７０％乙
醇溶解，定容至１００ｍＬ，即配成２００５μｇ·ｍＬ－１的
对照品溶液，放置备用。
２．１．２ 标准曲线的绘制 准确吸取上述配好的标
准溶液１０，２０，３０，４０，５０，６０ｍＬ置于２５ｍＬ
量瓶中，分别加蒸馏水至６ｍＬ，加入５％亚硝酸钠
１０ｍＬ，摇匀，放置 ６ｍｉｎ；加入 １０％硝酸铝 １０
ｍＬ，摇匀，放置６ｍｉｎ；加入４％氢氧化钠１００ｍＬ，
加水至刻度，摇匀，放置１５ｍｉｎ，在５００ｎｍ处测吸收
值，以吸收值为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制标准
曲线，回归方程为Ｙ＝１１００６Ｘ－０００６，ｒ＝０９９９６。
在８０２～４８１２μｇ·ｍＬ－１，芦丁质量浓度与吸收值
强度间具有良好线性。
２．２ 不同型号吸附树脂筛选研究
２．２．１ 树脂静态吸附实验 准确称取一定量预处
理的大孔吸附树脂（相当于干树脂 ２ｇ）及聚酰胺
（相当于干聚酰胺２ｇ）以蒸馏水洗至无醇味，加于
２５０ｍＬ具塞三角瓶中，精密加入浓度为３９７７ｍｇ·
ｍＬ－１的样品液２０ｍＬ，每隔１０ｍｉｎ，振摇２０ｓ，持续２
ｈ，静置２４ｈ，滤过。将滤出的树脂另置１００ｍＬ锥形
瓶中，精密加入７０％乙醇２０ｍＬ，每隔１０ｍｉｎ，振摇
２０ｓ，持续２ｈ，滤过。按２．１项下操作测定吸收值，
计算总黄酮含量。结果见表１。
从表１可知，在相同条件下，大孔吸附树脂的种
类不同，不但吸附能力不同，其解吸能力也是不同
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表１ ６种树脂和聚酰胺静态饱和吸附量及
静态洗脱率测定
树脂
种类
吸附后质量
浓度／ｍｇ·ｍＬ－１
吸附量
／ｍｇ·ｇ－１
（干树脂）
洗脱量
／ｍｇ·ｇ－１
（干树脂）
洗脱率
／％
ＨＰＤ５００ １０１ ２６８３ １７１６ ６３９３
ＸＤＡ－１ ０６９ ３１０５ １７６７ ５６９２
ＬＳＡ－２０ １６２ １９３６ １３４５ ６９４７
ＡＢ－８ １２６ ２３５９ １３３９ ５６７７
Ｄ１０１ １５４ ２０３６ １１９８ ５８８４
Ｄ１４０ ０８５ ２６７４ １９０９ ７１３９
聚酰胺 ０７４ ３０１３ １４７７ ４９０３
注：上柱总黄酮量均７９５４ｍｇ
的，实验表明 Ｄ１４０解吸率最高，达 ７０％以上，
ＬＳＡ－２０洗脱率也可达６９％，ＨＰＤ５００，ＸＤＡ－１，ＡＢ
－８解吸率均达到５０％以上。
２．２．２ 动态吸附实验 准确称取一定量预处理的
大孔吸附树脂（相当于干树脂８ｇ）及聚酰胺（约６
ｇ）以蒸馏水洗至无醇味。精密吸取样品液 ４０ｍＬ
（５３９１ｍｇ·ｍＬ－１），以流速２ＢＶ·ｈ－１（ＢＶ为树脂
床体积）上柱，收集过柱液，以蒸馏水洗脱至无色，
再以７０％乙醇洗脱，收集洗脱液１００ｍＬ。按２．１项
下操作测定吸收值，计算总黄酮含量，结果见表２。
表２ ６种树脂和聚酰胺动态吸附及洗脱测定
树脂
种类
上柱
总黄酮量
／ｍｇ
水洗脱
总黄酮量
／ｍｇ
７０％醇洗脱
总黄酮量
／ｍｇ
比吸附量
／％
比洗脱量
／％
ＨＰＤ５００ ２１５６３ １４９２ １５９７７ ２５１７ １９９４
ＸＤＡ－１ ２１５６３ ２３１８ １５６６２ ２５０５ １９５４
ＬＳＡ－２０ ２１５６３ ２１７５ １３５５１ ２４２３ １６９３
ＡＢ－８ ２１５６３ ２７０１ １５９２１ ２３５６ １９８８
Ｄ１０１ ２１５６３ ９３６ １７８２９ １９９９ ２２２８
Ｄ１４０ ２１５６３ １０８７ １８７２１ ２５４０ ２３２２
聚酰胺 ２１５６３ １７９５ １４７９３ ３２９１ ２４６３
表２表明，比吸附量最高者为聚酰胺，其次为
Ｄ１４０，最差的为Ｄ１０１；而比洗脱量最高的也为聚酰
胺，其次为Ｄ１４０，最差的为 ＬＳＡ－２０。由于比吸附
量及比洗脱量同等重要，作者采用综合评分法（比
吸附量和比洗脱量的权重均为１）对以上树脂的比
吸附量、比洗脱量进行综合评价。结果见图１。
图１ 动态综合评分
由图１可以看出，综合大孔吸附树脂和聚酰胺
的静态吸附性能、洗脱性能及动态吸附比吸附量、比
洗脱量，对于分离纯化菝葜总黄酮聚酰胺最好，但聚
酰胺机械强度差，不宜于工业化生产，大孔吸附树脂
Ｄ１４０均优于其他型号的树脂。因此，在后续菝葜总
黄酮分离纯化过程中作者选用上述６种树脂中最优
的Ｄ１４０大孔吸附树脂进行实验研究。
２．３ 工艺参数考察及优化
２．３．１ 上柱液质浓度的考察 取菝葜水溶液（药
液质量浓度以生药量计为 ０５ｇ·ｍＬ－１，总黄酮
９７８８ｍｇ·ｍＬ－１）１５ｍＬ，分别加水稀释０，５，１０，１５，
２０倍，加于 Ｄ１４０树脂柱上，以２ＢＶ·ｈ－１吸附后，
预吸附１ｈ，先以 １０ＢＶ水洗脱，再用 ７０％乙醇洗
脱，收集洗脱液１００ｍＬ。按２．１项下操作测定吸收
值，计算总黄酮含量，结果见图２。
图２ 上柱液浓度的考察
由图２可知，随着稀释倍数的增加，醇洗总黄酮
量有所降低，在相同条件下当药液浓度稀释 １０倍
时，醇洗总黄酮量最高，但药液不稀释时其醇洗总黄
酮量与药液浓度稀释 １０倍时接近，故药液不必稀
释，即上柱液浓度以生药量计为０５ｇ·ｍＬ－１时即
可。
２．３．２ 吸附流速的考察 取菝葜水溶液（总黄酮
９７８８ｍｇ·ｍＬ－１）１５ｍＬ，加于Ｄ１４０树脂柱上，分别
以１，２，３，４，５，６ＢＶ·ｈ－１的流速进行上柱，预吸附１
ｈ，先以１０ＢＶ水洗脱，再以７０％乙醇洗脱，收集洗
脱液１００ｍＬ。按２．１项下操作测定吸收值，计算总
黄酮含量，结果见图３。
图３ 吸附速率的考察结果
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由图３可知，随着吸附流速的增加，醇洗总黄酮
量逐渐减少，原因可能为：吸附流速过快，则溶液通
过树脂床的速度大于传质速度，传质未进行彻底即
可能泄漏。因此，在相同条件下，上柱流速慢有利于
菝葜总黄酮的吸附，即当吸附流速为１ＢＶ·ｈ－１时
吸附效果最好，但当吸附流速为２ＢＶ·ｈ－１时总黄
酮的解吸率与流速为１ＢＶ·ｈ－１时接近，考虑工作
效率，选择２ＢＶ·ｈ－１的流速进行上柱。
２．３．３ 洗脱液浓度的考察 取菝葜水溶液（总黄
酮含量９７８８ｍｇ·ｍＬ－１）１５ｍＬ，以流速２ＢＶ·ｈ－１
加于 Ｄ１４０树脂柱上，预吸附 １ｈ，分别以 ２０％，
５０％，６０％，７０％，８０％，９０％的乙醇洗脱，收集洗脱
液至１００ｍＬ，按２．１项下操作测定吸收值，计算总
黄酮含量，结果见图４。
图４ 醇体积分数的考察
由图４可知，随着乙醇体积分数的增加，醇洗总
黄酮量逐渐增加，乙醇浓度为６０％时醇洗总黄酮量
最大；乙醇体积分数继续增加时醇洗总黄酮量又逐
渐减少，所以综合考虑，选择先用５ＢＶ的２０％乙醇
洗脱，弃去洗脱液，可除去一部分杂质，然后再用
６０％乙醇洗脱即可。
２．３．４ 洗脱速率的考察 取菝葜水溶液（总黄酮
９７８８ｍｇ·ｍＬ－１）１５ｍＬ，以流速 ２ＢＶ·ｈ－１加于
Ｄ１４０树脂柱上，预吸附１ｈ，先以１０ＢＶ水洗脱，再
用５ＢＶ２０％乙醇洗脱，弃去水洗液和２０％醇洗液，
然后用６０％乙醇，分别以流速１，２，３，４，５，６ＢＶ·
ｈ－１进行吸附，收集洗脱液１００ｍＬ，按２．１项下操作
测定吸收值，计算总黄酮含量，结果见图５。
图５ 洗脱速率的考察
由图５可知，随着洗脱流速的增加，醇洗总黄酮
的量逐渐减少，原因可能为：洗脱流速过快，洗脱液
通过树脂床的速度大于传质速度，则部分洗脱液可
能未起到解吸附作用而直接流出。因此，洗脱流速
慢有利于菝葜总黄酮的洗脱，即当吸附流速为１ＢＶ
·ｈ－１时洗脱效果最好。
２．３．５ 上柱量的考察 取菝葜水溶液（以生药量
计０５ｇ·ｍＬ－１），以流速２ＢＶ·ｈ－１加于 Ｄ１４０树
脂柱上，按树脂床体积数收集洗脱液，按２．１项下操
作测定吸收值，计算流出液浓度，结果见图６。
图６ 上柱量的考察
由表图６可知，上柱量为１０倍树脂床体积时开
始泄漏，１８倍树脂床体积时达到吸附饱和。
２．３．６ 洗脱终点的确定 将吸附饱和的树脂柱先
以１０ＢＶ水洗脱，再以５ＢＶ，２０％乙醇洗脱，弃去水
洗液和２０％醇洗液，然后以６０％乙醇，１ＢＶ·ｈ－１的
流速进行洗脱，按树脂床体积依次收集洗脱液，按
２．１项下操作测定吸收值，计算洗脱液浓度，结果见
图７。
图７ 洗脱终点考察
由图７可知，在洗脱液用量为１～２ＢＶ时，随着
洗脱液用量的加大，流出液中总黄酮的含量逐渐增
加；洗脱剂用量再加大时，流出液的浓度又逐渐的降
低，当洗脱量为５～１０ＢＶ时，已基本将总黄酮洗净。
３ 小结
３．１ 在上柱液浓度考察中发现，若上柱液较稀，则
上柱液黏度较小，在一定上样流速下溶液通过树脂
床的速度大于传质速度，传质未进行彻底即可能泄
漏；若上样液太浓，则黏度较大，黄酮在树脂内部传
质速度变慢，而树脂周围的黄酮分子过多，使得某些
黄酮没来得及被吸附就流出来，两种情况均未能使
黄酮达到最大吸附量。
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３．２ 菝葜中黄酮类化合物含有游离苷元和黄酮苷，
一般来说，游离苷元难溶于水，易溶于甲醇等有机溶
剂，而黄酮苷易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶剂，洗脱
时应注意将两者均洗脱下来。由于乙醇毒性低，易
回收，本实验选择不同体积份数的乙醇作为洗脱剂。
作者通过对影响大孔吸附树脂吸附及解吸的各
种因素的一系列研究，发现 Ｄ１４０型树脂较适合于
分离纯化菝葜总黄酮。其分离纯化菝葜的最佳工艺
为：药液浓度以生药量计为０５ｇ·ｍＬ－１，吸附速率
为２ＢＶ·ｈ－１，上样量为１８倍的树脂床体积。洗脱
的最佳工艺为：先以１０ＢＶ蒸馏水进行洗脱，再以５
ＢＶ的２０％乙醇洗脱，弃去水洗液及２０％乙醇洗脱
液，然后以５～１０ＢＶ，６０％乙醇，流速为１ＢＶ·ｈ－１
进行洗脱。该工艺收率高，成本低，操作简便，避免
使用有机溶剂，安全，适宜大规模生产选用。
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ｂｙｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｒｅｓｉｎ
ＬＩＷｅｎｘｉａ１，ＹＡＮＹａｎ２，ＹＥＸｉａｏｃｈｕａｎ２，ＹＡＮＧＸｉａｎｇｌｉａｎｇ２
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｗｕｈａｎ４３００７４，Ｃｈｉｎａ；
２．ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００７４，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌｐａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆｔｈｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓｆｒｏｍＳｍｉｌａｘｃｈｉｎａ
ｗｉｔｈｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｒｅｓｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｔｅｃｈｎｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｆｏｒｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓｗｉｔｈｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓａｂ
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ｅｆｉｃｉｅｎｃｙｗｈｅｎｔｈｅｆｌａｖｏｎｅｓｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｈｅｌｉｑｕｉｄｗａｓ０５ｇ·ｍＬ－１ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔｔｏｒａｗｍａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆｄｒｕｇ１８ＢＶ（ｒｅｓｉｎｂａｄ
ｖｏｌｕｍｅ）ｗｉｔｈｔｈｅａｄｓｏｒｐｔｉｏｎｐｏｗｅｒ２ＢＶ·ｈ－１，ａｎｄｔｈｅｖｏｌｕｍｅｏｆ６０％ （ｍＬ·ｍＬ－１）ｅｔｈａｎｏｌａｓｅｌｕａｎｔ５～１０ＢＶ（ｒｅｓｉｎｂａｄｖｏｌ
ｕｍｅ）ｗｉｔｈｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎｐｏｗｅｒ１ＢＶ·ｈ－１．Ｔｈｅｏｂｔａｉｎｅｄｆｌａｖｏｎｅｓｐｒｏｄｕｃｔｈａｓｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｏｆ８４７２％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ
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［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｒｅｓｉｎ；ｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓｏｆＳｍｉｌａｘｃｈｉｎａ；ｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
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２５８７；影响因子为０．５７９；基金论文比例０．４７。另据“中国学术期刊综合引证年度报告（２００６）”：《中国中药杂志》总被引频次
为４６７６，影响因子为０９３８，５年影响因子１２２４，基金论文比０４７。
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选一等奖。荣获第五届中国百种杰出学术期刊；获得２００６年度中国科协精品科技期刊工程项目资助。
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