全 文 ：征与截叶铁扫帚一致 ∀作者在实验中 o对以上 u
种显微特征进行比较研究 ∀因药用部分为全草 o
故认为应首先进行植物鉴定 o确定药材基源 o以使
显微特征准确 ∀
在实验过程中 o亦对广西玉林药材市场 !广西中
医学院制药厂提供的铁扫帚样品实验观察 o观察结
果与本品实验结果一致 ∀
≈参考文献  
≈t  中国科学院植物研究所 q中国高等植物图鉴 µ ≈   q北京 }科
学出版社 ot|zu}wywottwxq
≈u  江苏新医学院 q中药大辞典 ≈   q下册 q上海 }上海人民出版
社 ot|zz}twwwq
≈v  王伏雄 o钱南芬 q中国植物花粉形态 µ ≈   q北京 }科学出版
社 ot|zz}uxyq
≈责任编辑 张宁宁  
≈收稿日期   ussy2sz2tu
≈基金项目   四川省杰出青年学科带头人培养计划项目 ksw±
suy2swzl~四川省科技厅基础项目 ksv≠su|2sut2uul~四川省重点学
科项目 k≥⁄swusl
≈通讯作者   3 黎云祥 o∞2°¤¬¯}¼¬¯¬ƒ uyvq± ·¨
箭叶淫羊藿胚性愈伤组织诱导及其黄酮类化合物的总含量测定
韩素菊 o黎云祥 3 o胥 晓 o杨子松
k西华师范大学 四川省高校环境科学与生物多样性保护重点实验室 o四川 南充 yvzssul
箭叶淫羊藿 Επιµ εδιυµ σαγιττατυµ 为小檗科淫
羊藿属多年生宿根性草本植物 ∀有益精气 o坚筋骨 o
补腰膝 o强心力之功效 ≈tou  ∀淫羊藿药用历史悠久 o
其有效成分为淫羊藿苷等黄酮类化合物和多糖等次
生代谢产物 ≈v  ∀随着现代中药产业化的进程 o现代
科学对淫羊藿的深入研究 o新的疗效的不断发现 o以
淫羊藿为主要原料的中成药 !民族药产品不断问世 o
市场对淫羊藿需求量愈来愈大 o使其野生资源渐有
不能满足需求之虞 ∀利用现代生物技术 o试图通过
组织培养 !细胞培养探讨生产药物有效成分的设想
已在红豆杉 !人参等多种植物上作了研究 o取得了一
些有益的进展 ≈w  ∀本试验进行了箭叶淫羊藿愈伤
组织诱导和其有效成分黄酮类化合物的定量研究 o
为进一步探讨通过细胞培养 o筛选增殖快 !药用有效
成分含量高的细胞系等淫羊藿生物工程技术研究和
为淫羊藿总黄酮合成代谢的调控研究奠定了基础 ∀
1 材料与方法
1q1 材料 !试剂 !仪器 将南充金城山野生箭叶淫
羊藿 k经秦自生教授鉴定 l在 ussw年 t月移栽至学
校苗圃 ov月初采集其叶芽和花芽 o幼叶作为外植
体 ∀外植体在流水下冲洗 u «o然后在超净工作台内
用 zxh乙醇消毒 tx ¶o再用 uh次氯酸钠溶液消毒
ts ¶o期间不断摇动 o使材料各部分与消毒液充分接
触 o最后用无菌水冲洗 w ∗ x次 ∀经消毒的叶切成
s1x ¦° ≅ s1x ¦°o芽切成 s1ux ¦°的小段 o培养在附
加激素的培养基上 ∀
淫羊藿苷对照品 k购自中国药品生物制品检定
所 l∀ Š…≤ |ty紫外 2可见分光光度计 k澳大利亚
Š…≤科学仪器有限公司生产 l~倒置 ’≠ °˜≥光学
显微镜 ∀
1q2 愈伤组织的诱导及胚性愈伤组织的观察 将
幼叶 !花芽 !叶芽外植体接种于  ≥培养基 n …„ s1x
°ª# pt n uow2⁄ u1s °ª# pt的培养基上置于光照
条件下诱导愈伤组织 ∀观察外植体对愈伤组织诱导
的影响 ∀
将幼叶作为外植体接种到  ≥o≥o…x基本培养
基上 }基本培养基 n …„ ks1xot1sou1s °ª# pt l n
uow2⁄kt1sou1sow1s °ª# pt l∀分别置于黑暗和
光照中培养 k光照周期 tu «# §pt o光照强度 t xss ∗
u sss ¬¯lo观察统计不同激素组合的不同培养基中
愈伤组织的颜色 !形状 !质地以及生长情况等 ∀
增殖培养基为 } ≥培养基 . ≥培养基 n uow2⁄
u1s °ª# pt n …„ksos1xl °ª# pt o黑暗环境下培
养 ∀本实验中全部培养基添加 vh蔗糖和 s1{h琼
脂 o灭菌前 ³‹ x1{o置于人工气候箱里 o温度
kuw ? ul ε o相对湿度 zxh ∀愈伤组织每 t个月继代
t次 ∀观察胚性愈伤组织时 o取培养继代 ty §后的愈
#txxu#
第 vu卷第 uv期
ussz年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ uv
⁄ ¦¨¨°¥¨ µo ussz
伤组织用镊子夹碎于载玻片上 o再滴几滴蒸馏水 o然
后在 ’≠ °˜≥倒置显微镜下观察其细胞形态 ∀
1q3 愈伤组织中总黄酮的测定 总黄酮含量测定
采用分光光度法 ∀取愈伤组织于 ys ε 烘箱中烘至
恒重 o研细 o过 ws目筛 ∀精密称取 s1sx ª置于三角
瓶中 o加入 {xh乙醇 ts °o封口 o室温下振荡 w{ «∀
过滤 o取滤液 s1x °于试管中 o再加入 {xh乙醇 ts
°o摇匀得样品液 ∀于 uy|1xu ±°处测得 Α值 ∀用
淫羊藿苷对照品以同样方法测得标准曲线为 Χ €
ux1vw|Α p s1uuu xoρ€ s1||| so其中 Χ为总黄酮质
量浓度 kΛª# °pt l∀
2 结果与分析
2q1 外植体对愈伤组织诱导的影响 箭叶淫羊藿
幼叶能诱导出质量好的愈伤组织 o并且诱导率高达
|t1zh ∀而不管是叶芽还是花芽都难于诱导出愈伤
组织 o叶芽诱导率为 tvh o花芽诱导率仅为 |h k表
tl∀大概是受叶芽和花芽中的内源激素的影响而
使之不能诱导出愈伤组织 o即使诱导出的少部分愈
伤组织 o在后来的继代生长过程中 ozyh的愈伤组织
由于内源菌的污染而死亡 ∀在实验中发现近叶片中
脉处最易诱导幼叶形成愈伤组织 ∀在以后的重复实
验中 o还发现外植体的生理条件对胚性愈伤组织的
诱导也很重要 o组织越幼嫩 o越易诱导愈伤组织 o而
较老的组织则很难诱导 ∀
表 t 外植体对愈伤组织诱导的影响
外植体
接种外植
体数
愈伤组织
发生数
污染外植
体数
诱导率
rh
叶芽 xs y w tv1y
花芽 xs w z |1v
幼叶 xs ww u |t1z
注 }诱导率 €形成愈伤组织的外植体数 r接种的未污染的外植体
数 ≅ tssh
2q2 培养基对愈伤组织诱导的影响 以  ≥o≥和
…xv种培养基为基本培养基在黑暗和光照条件下对
箭叶淫羊藿幼叶进行愈伤组织的诱导实验的结果
k表 ul表明 o外植体在  ≥o≥ u种培养基上培养 us
§左右大部分培养基能产生淡黄色愈伤组织 o且生
长较快 o结构疏松 ∀这 u种培养基对幼叶愈伤组织
形成的影响不存在显著性的差异 o都适于淫羊藿幼
叶形成愈伤组织 ∀在 …x培养基上的外植体产生的
愈伤组织少 o颜色较暗 o且生长慢 o结构紧密 o…x培养
基不适宜用于诱导愈伤组织 ∀
2q3 光照对愈伤组织诱导及生长的影响 箭叶淫
表 u 培养基对愈伤组织诱导的影响
培养基
接种外植
体数
愈伤组织
发生数
污染外植
体数
诱导率
rh
 ≥ {t yw ts |s1t
≥ |u zw y {y1s
…x zy t{ tu u{1t
注 }统计数都选自在光照和黑暗条件培养的诱导率最高的愈伤
组织数总和 ~v种培养基为愈伤组织诱导率最高的培养基 o均为添加
s1x °ª# pt …„和 s1u °ª# ptuow2⁄的培养基
羊藿幼叶在光照和黑暗条件下都能诱导出愈伤组
织 o并且愈伤组织的颜色 o质地和出现时间基本一
致 ∀但在以后的继代培养时发现生长在光照条件下
的愈伤组织容易褐化死亡 ∀因此选择黑暗条件下诱
导愈伤组织对以后胚性愈伤组织的增殖和保存都有
利 ∀
2q4 激素和培养基对愈伤组织诱导及生长的影响
由于 …x培养基上诱导出的愈伤组织少 o且颜色黑
暗 o在这就没作统计 ∀在  ≥和 ≥培养基中愈伤组
织有 w种类型 }≠黄褐色颗粒状 o质地坚硬 o生长慢 ~
黄色颗粒状 o质地疏松 o生长快 ∀ ≈乳白色或淡绿
色颗粒状 o质地坚硬 o生长慢 ~…乳白色或白色水煮
样 o质地较疏松 o生长快 ∀继代培养在增殖培养基上
后在显微镜下观察表明 o只有第 u类愈伤组织和少
量第 tov类愈伤组织为胚性愈伤组织 o其显微镜下
观察的组织学特征为细胞核大 o核仁明显 o核质较
大 o液泡小 o颜色深 ~而非胚性愈伤组织核小 o核仁不
明显 o核质较小 o液泡大 o染色浅 k表 vl∀从表 v可
看出 o uow2⁄的质量浓度越高 o愈伤组织越疏松 ∀
但 uow2⁄高到 w1s °ª# pt时 o处理诱导的愈伤组
织为乳白色或白色 o虽然结构疏松 o但进一步培养时
容易死亡 ∀而 …„浓度越高 o愈伤组织越致密 o愈伤
组织生长越缓慢 ∀  ≥培养基和 ≥培养基都能诱
导出愈伤组织 o但在以后的继代增殖培养中发现  ≥
培养中的愈伤组织颜色变浅或者褐化死亡 ∀所以 o
诱导形成愈伤组织时最好选用 ≥培养基 n uow2⁄
u1s °ª# pt n …„ s1x °ª# pt ∀
2q5 继代增殖培养中胚性愈伤组织的观察 胚性
愈伤组织的增殖和保存是体胚发生和细胞培养的关
键 ∀将诱导出的愈伤组织用原培养基进行继代培养
一次 ovs §后把所有的愈伤组织转移继代培养在诱
导愈伤组织时 o产黄色愈伤组织且结构疏松 o增殖
快 o胚性愈伤组织多的激素组合培养基中 ∀ tx §后
取少量愈伤组织于蒸馏水中用镊子夹碎在光学显微
#uxxu#
第 vu卷第 uv期
ussz年 tu月
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⁄ ¦¨¨°¥¨ µo ussz
表 v 不同的激素浓度组合诱导幼叶愈伤
组织的颜色 !质地以及生长速度
培养基 激素组合 r°ª# pt 幼叶愈伤组织特征
t uow2⁄ t1s n …„ s1x 浅黄色 o致密 o生长慢
u uow2⁄ t1s n …„ t1s 浅黄色 o致密 o生长慢
v uow2⁄ t1s n …„ u1s 浅黄色 o致密 o生长慢
w uow2⁄ u1s n …„ s1x 黄色 o疏松 o生长快
x uow2⁄ u1s n …„ t1s 黄色 o较疏松 o生长较快
y uow2⁄ u1s n …„ u1s 浅黄色 o致密 o生长较慢
z uow2⁄ w1s n …„ s1x 乳白色 o水煮样 o生长快
{ uow2⁄ w1s n …„ t1s 乳白色 o水煮样 o生长快
| uow2⁄ w1s n …„ u1s 白色 o水煮样 o生长快
注 }培养基编号是 ≥与  ≥基本培养基中添加相同激素的培养
基编为同一号
镜下观察统计其胚性细胞率 o建立其增殖体系 k表
wl∀
表 w 继代培养增殖效果的比较
培养基
激素组合
r°ª# pt
胚性愈伤组织特征
胚性率
rh
 ≥ uow2⁄ u1s 黄色逐渐变浅 o甚至褐化 o tu
生长快
uow2⁄ u1s n …„ s1x 褐化 o生长较快 tz
≥ uow2⁄ u1s 浅黄色颗粒状 o疏松 o生长快 v|1{
uow2⁄ u1s n …„ s1x 黄色颗粒状 o较致密 o生 xy1ux
长较快
实验表明 o在  ≥培养基上继代生长的愈伤组
织有的慢慢褐化死亡 o有的生长较慢 ∀只有 uow2⁄
的 ≥培养基上生长的愈伤组织产生的胚性细胞少 o
颜色较浅 ∀而在有 uow2⁄和 …„组合的 ≥培养基
上生长的愈伤组织较疏松 o颗粒状 o颜色好 o生长快 o
胚性细胞多 o是胚性愈伤组织 o有利于继代培养 ∀因
此 o最适宜的增殖培养激素组合是 ≥培养基 n uow2
⁄ u1s °ª# pt n …„ s1x °ª# pt o黑暗培养 o温度
为 kuw ? ul ε ∀然后把所有的愈伤组织继代培养在
≥培养基 nuow2⁄ u1s °ª# pt n …„ s1x °ª# pt
上 o观察肧性愈伤组织增殖保存情况 ∀情况表明 o依
此建立的增殖体系可长期保存 o扩繁胚性愈伤组织
k图 tl∀
2q6 胚性愈伤组织中总黄酮含量的测定 胚性愈
伤组织经继代培养在 ≥培养基 n uow2⁄ u1s °ª#
pt n …„ s1x °ª# pt培养基上后 o选取各种颜色 !
质地的愈伤组织测总黄酮含量 ∀黄色颗粒疏松愈伤
组织含量是 x1vyh o最高 o与野生淫羊藿总黄酮含

图 t 淫羊藿幼叶诱导的胚性愈伤组织
量相当 ∀浅绿色愈伤组织含量 v1wuh o较低 o乳白
色为 v1sth ∀为了在以后的细胞培养中能获得高
产黄酮的愈伤组织细胞株 o在以后的继代培养中都
选择黄色 !颗粒状 !疏松的愈伤组织 ∀愈伤组织再经
继代培养半年后 o测定其总黄酮含量为 x1sth o总
黄酮含量略有下降 o但这种下降不影响以淫羊藿黄
酮为目的的细胞培养 ∀以后的继代频率不宜过高 ∀
3 结论
植物愈伤组织的诱导 !增殖及形态主要受外植
体 !培养基和培养环境三大因素的调控 o生长调节剂
对愈伤组织的诱导及分化具有十分复杂而重要的影
响 ≈x  ∀外植体类型影响愈伤组织诱导的颜色 !质地
以及生长速度和诱导率 ∀最好的外植体是淫羊藿幼
叶 ∀越靠近叶片中脉的组织 o越容易诱导出愈伤组
织 ~组织越嫩越容易诱导出愈伤组织 ∀在植物离体
培养过程中 o高浓度的生长激素对诱导愈伤组织非
常重要 ∀黑暗和适宜的温度 kuw ε l有利于诱导愈
伤组织 ∀本实验诱导出的愈伤组织总黄酮含量较
高 o与野生淫羊藿黄酮含量相当 o这样增殖培养出的
愈伤组织有利于以后悬浮培养高产淫羊藿总黄酮细
胞体系的建立 ∀
≈参考文献  
≈t  中国药典 ≈≥ q一部 qusss}uyzq
≈u  李晶晶 o于世凤 o李铁军 o等 q淫羊藿对口腔各矿化组织破骨细
胞性骨吸收的体外实验研究 ≈ q中国口腔医学杂志 oussuovz
kxl}v|tq
≈v  郭宝林 o肖培根 q淫羊藿属植物中的黄酮类成分及其分类学意
义 ≈ q植物分类学报 ot|||ovzkvl}uu{q
≈w  邱德有 q试论药用植物有效成分基因调空的研究进展 ≈ q中
药现代化 ousssoukvl}vsq
≈x  王东梅 o黄学林 o黄上志 q细胞分裂素物质在植物组织培养中
的作用机制 ≈ q植物生理学通讯 ot||yovukxl}vzvq
≈责任编辑 张宁宁  
#vxxu#
第 vu卷第 uv期
ussz年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ uv
⁄ ¦¨¨°¥¨ µo ussz