全 文 ：养阴活血方药对糖尿病大鼠肾脏的保护作用
及机制探讨
梁金环，栗彦宁，齐锦生，李 彬
（河北医科大学 生物化学与分子生物学教研室，河北 石家庄０５００１７）
［摘要］ 目的：探讨养阴活血方药（ｎｏｕｒｉｓｈｉｎｇｙｉｎａｎｄｐｒｏｍｏｔｉｎｇｂｌｏｏｄｆｌｏｗｒｅｃｉｐｅ，ＮＹＰＢＲ）对糖尿病大鼠肾脏
的保护作用机制。方法：ＳＤ大鼠随机分为正常组、模型组和ＮＹＰＢＲ组，后两组大鼠腹腔注射链脲佐菌素复制糖尿
病模型。正常组和模型组自由饮水。ＮＹＰＢＲ组按人与动物间体表面积折算的等效剂量比值灌喂给药 （含生药１ｇ
·ｍＬ－１），每只大鼠３ｍＬ·ｄ－１。１０周后，ＲＴＰＣＲ检测肾皮质诱导型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，
ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｉＮＯＳ蛋白含量，免疫组化检测过氧亚硝基阴离子（ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅ，ＯＮＯＯ－）特异
性标志物硝基酪氨酸（ｎｉｔｒｏｔｙｒｏｓｉｎｅ，ＮＴ）的生成。光镜观察大鼠肾皮质形态学变化。检测各组大鼠肾皮质超氧化
物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）活性和丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）含量及血糖、２４ｈ尿蛋白定量和肌酐
清除率。结果：与正常组相比，模型组肾皮质ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达０９０±０１０和蛋白量含量４３００±６０８增加、ＮＴ生
成８７２３±５９４明显增加，与肾皮质病理改变及肾功能减退呈一致性变化。ＮＹＰＢＲ可显著改善上述变化。结论：
ＮＹＰＢＲ可显著减轻糖尿病大鼠的肾脏损伤，此作用可能与降低ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达和蛋白含量、减少 ＯＮＯＯ－的生成
有关。
［关键词］ 糖尿病肾病；诱导型一氧化氮合酶；过氧亚硝基阴离子；养阴活血方药
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１４１７２８０５
［收稿日期］ ２００７１０２０
［基金项目］ 河北省卫生厅医学科学重点项目（０４０６２）；河北
省教育厅博士基金项目（Ｂ２００４１２２）；石家庄市科技攻关项目
（０４１４６１７３Ａ，０７１２０８０３Ａ）；河北医科大学校博士基金项目（０４００２８）；
河北省科技攻关计划项目（０７２７６１０１Ｄ７３）
［通讯作者］ 齐锦生，Ｔｅｌ：（０３１１）８６２６５６３９，Ｅｍａｉｌ：ｑｉｊｉｎｓｈ
ｅｎｇ７７７＠１６３．ｃｏｍ
糖尿病肾病（ｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ，ＤＮ）是糖尿
病特征性全身微小血管病变的肾脏表现，是糖尿病
最常见和最严重的慢性并发症之一。目前认为，氧
化应激在ＤＮ发病机制中起重要作用［１，２］。过氧亚
硝基阴离子（ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅ，ＯＮＯＯ－）及其衍生物为
氧化性最强的一类物质，故本研究探讨ＯＮＯＯ－引起
的氧化硝基化损伤是否在ＤＮ中起重要作用。糖尿
病属祖国医学消渴证，阴虚为本，并有消渴必瘀，瘀
可致消的说法。以此病机确立治则，养阴活血方药
（ｎｏｕｒｉｓｈｉｎｇｙｉｎａｎｄｐｒｏｍｏｔｉｎｇｂｌｏｏｄｆｌｏｗ ｒｅｃｉｐｅ，
ＮＹＰＢＲ）由六味地黄丸为基本方加减而成，是前期
系列研究及多年临床经验核心方剂，用此方药对大
鼠ＤＮ进行防治研究［３］，旨在揭示ＮＹＰＢＲ对糖尿病
大鼠肾脏的保护作用与ＯＮＯＯ－的关系。
１ 材料
１．１ 动物 ＳＤ雄性大鼠３２只，４月龄，清洁级，由
湖北省同济医科大学实验动物学部提供（动物合格
证书医动字第１９０２０号，编号０３１１１８）。
１．２ 药物 ＮＹＰＢＲ由六味地黄丸为基本方加减而
成，方药组成：熟地黄２０ｇ、牡丹皮２０ｇ、山药１５ｇ、
山茱萸１０ｇ、丹参２５ｇ等６味中药（购于石家庄市
乐仁堂，经鉴定为地道中药材），煎成质量浓度为
１０００ｇ·Ｌ－１生药药液。
１．３ 试剂 链脲佐菌素（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ，ＳＴＺ）购自
Ｓｉｇｍａ公司（批号０６７Ｋ１４０３）；Ｔｒｉｚｏｌ，ＲＴＰＣＲ试剂盒
购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司（批号２４０２１５），引物由北京赛百
盛公司合成，联苯胺（ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ，ＤＡＢ）、诱导
型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｉＮ
ＯＳ）一抗和二抗购自北京中山公司，抗硝基酪氨酸
（ｎｉｔｒｏｔｙｒｏｓｉｎｅ，ＮＴ）单克隆抗体购自 Ｃａｙｍａｎ公司
（批号 １２５２１０），超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓ
ｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）、丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）、肌
酐和尿蛋白检测试剂盒，均购自南京建成生物工程
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研究所（批号０６０４１７，０６０３１２，０６０１１１，０６０４１９）。
１．４ 仪器 ＰＣＲ热循环仪 ＰＴＣ－２００（美国 ＭＪ公
司）；数码医学分析系统Ｍｏｔｉｃ６０（麦克奥迪公司）。
２ 方法
２．１ 模型制备及分组 大鼠３２只，随机分为３组：
正常组（１０只），模型组（１２只）和 ＮＹＰＢＲ组（１０
只）。后２组腹腔注射 ＳＴＺ溶液（ＳＴＺ于０℃溶于
０１ｍｏｌ·Ｌ－１的柠檬酸钠缓冲液 ｐＨ４４，终浓度１０
ｇ·Ｌ－１，按４０ｍｇ·ｋｇ－１注射）复制糖尿病模型。３ｄ
后，测空腹血糖高于１６ｍｍｏｌ·Ｌ－１，尿糖以上，造
模成功。正常饲料喂养，正常组和模型组自由饮水。
ＮＹＰＢＲ组按人与动物间体表面积折算的等效剂量
灌胃给药（含生药 １ｇ·ｍＬ－１），每只大鼠 ３ｍＬ·
ｄ－１，１次灌喂。在２０～２５℃室温下，持续给药 １０
周。
２．２ 标本收集 １０周末，代谢笼收集２４ｈ尿液，记
录尿量，称量体重；股动脉放血，收集血标本，血糖仪
检测血糖；分离双肾，冷生理盐水灌洗去包膜称重，
取肾皮质一部分置于４％多聚甲醛溶液中固定，以
备光镜观察及免疫组化；其余肾皮质液氮保存，用于
检测肾皮质ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达和蛋白含量及ＳＯＤ活
性、ＭＤＡ含量。
２．３ 肾皮质 ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达水平检测 Ｔｒｉｚｏｌ一
步法提取肾皮质总 ＲＮＡ，Ａ２６０／Ａ２８０大于１８的 ＲＮＡ
样品进行ＲＴＰＣＲ。基因序列查自ＧｅｎＢａｎｋ，应用专
业引物设计软件ＰｒｉｍｅｒＰｒｅｍｉｅｒ５０设计，由北京赛
百盛生物公司合成，具体序列如下：ｉＮＯＳ，上游 ５′
ＡＧＧＡＧＣＧＡＧＴＴＧＴＧＧＡＴＴＧＴ３′，下 游 ５′ＧＴＧＡＧ
ＧＴＴＴＴＧＧＣＴＧＡＧＴＧＡ３′，扩增产物长度１２４ｂｐ，Ｔｍ，
５８５～５５６℃。内参 βａｃｔｉｎ，上游 ５′ＧＡＧＡＣＣＴ
ＴＣＡＡＣＡＣＣＣＣＡＧＣＣ３′，下游 ５′ＴＣＧＧＧＧＣＡＴＣＧ
ＧＡＡＣＣＧＣＴＣＡ３′，扩增产物长度４０４ｂｐ，Ｔｍ５２～６５
℃。扩增条件：首次循环 ９４℃ ５ｍｉｎ；后续循环 ９４
℃ ４５ｓ，５５℃ ４５ｓ，７２℃ ４５ｓ，３１个循环；末次循环
９４℃ ４５ｓ，５５℃ ４５ｓ，７２℃ ５ｍｉｎ。ＰＣＲ产物进行
１５％琼脂糖凝胶电泳后，凝胶成像分析系统进行灰
度扫描，计算目的基因的相对表达量（ｉＮＯＳ吸光度／
βａｃｔｉｎ吸光度）。
２．４ 肾皮质ｉＮＯＳ蛋白含量的检测 取肾皮质１００
ｍｇ，加入１ｍＬ蛋白提取液（００１ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＢＳ，ｐＨ
７３５，００１％ ＳＤＳ），打匀浆。离心，１３０００ｒ·
ｍｉｎ－１，１５ｍｉｎ，取上清。Ｌｏｗｒｙ法蛋白定量，ＳＤＳ
ＰＡＧＥ分离蛋白质。转膜后，５％的脱脂奶粉封闭２
ｈ，加入小鼠抗大鼠ｉＮＯＳ一抗（５％ＢＳＡ１∶５０稀释），
４℃，过夜。用 ００１ｍｏｌ·Ｌ－１的 ＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋
００５％山梨醇甲酯２０）洗膜３次，每次１０ｍｉｎ。加
入羊抗小鼠二抗（５％ＢＳＡ１∶１００稀释）室温孵育
１５ｈ。洗膜同上，化学发光法检测蛋白条带。
２．５ 肾皮质病理形态学 石蜡切片，常规 ＨＥ染
色，光镜观察肾皮质组织病理形态学变化。
２．６ 免疫组化法检测肾皮质 ＮＴ的生成 石蜡切
片常规脱蜡，３％Ｈ２Ｏ２处理，滴加小鼠抗大鼠 ＮＴ单
克隆抗体（５％ＢＳＡ１∶７５稀释），３７℃孵育１ｈ，然后
滴加羊抗小鼠二抗（５％ＢＳＡ１∶１００稀释），３７℃孵
育１ｈ，再滴加 ＨＲＰ标记的链霉卵白素工作液，３７
℃孵育１ｈ，最后ＤＡＢ显色，显微镜下观察。
２．７ 生化指标检测 用黄嘌呤氧化酶法测定 ＳＯＤ
活性，硫代巴比妥法测定 ＭＤＡ含量，血肌酐、尿肌
酐、尿蛋白的测定均按试剂盒说明操作，计算肌酐清
除率（ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅｃｌｅａｒａｎｃｅｒａｔｅ，ＣＣｒ）。
２．８ 统计学处理 实验数据以 珋ｘ±ｓ表示，用 ＳＰＳＳ
１００软件进行统计学处理分析，数据均方差齐，分
析采用两样本均数比较的ｔ检验。
３ 结果
３．１ 一般情况及生化指标 与正常组相比，模型组
大鼠体重明显减轻，肾重与体重的比值增加；血糖显
著升高；２４ｈ尿蛋白显著增加、ＣＣｒ明显降低，肾皮
质中ＳＯＤ，ＭＤＡ水平均显著升高（Ｐ＜００１）。与模
型组相比，ＮＹＰＢＲ能有效地改变这些生化指标的异
常（Ｐ＜００１，Ｐ＜００５）。（表１）。
表１ 各组大鼠一般情况和生化指标的变化（珋ｘ±ｓ，ｎ＝８）
分组
剂量
／ｇ·ｄ－１
血糖
／ｍｍｏｌ·Ｌ－１
体重
／ｇ
肾重／体重
／×１０－３
ＣＣｒ
／ｍＬ·ｍｉｎ－１
２４ｈ尿蛋白
／ｍｇ
ＳＯＤ
／Ｕ·ｍｇ－１
ＭＤＡ
／ｎｍｏｌ·ｍｇ－１
正常 － ５７６±１０１ ５１６６３±１１４１ ２３２±０３５ １７７±０１５ ３７８±０９１ ７３６４±４６９ １１３±０２７
模型 － ２４８５±４１１２） ２６２５０±１９６４２） ５３６±１２１２） ０９９±００６２） ３５９９±５５５２） １１９３６±２３３８２） ２１０±０２７２）
ＮＹＰＢＲ ３ １２４２±３７８３） ２９１８８±２２０９１） ４４９±０６９１） １３７±０１５３） ２９３０±４４５１） ９５３０±１４８３１） １６４±０３３３）
注：与正常组比２）Ｐ＜００１；与模型组比１）Ｐ＜００５，３）Ｐ＜００１
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３．２ 肾皮质病理形态学变化 结果显示，正常组未
见异常。模型组肾小球体积增大，肾小球系膜基质
增多，可见肾小球硬化。ＮＹＰＢＲ组肾脏病理损伤程
度轻于模型组（图１，箭头所指）。
Ａ．正常组；Ｂ．模型组；Ｃ．ＮＹＰＢＲ组
图１ 各组大鼠肾皮质病理形态学变化（ＨＥ，×２００）
３．３ 肾皮质ｉＮＯＳｍＲＮＡ的表达 正常组肾皮质中
ｉＮＯＳｍＲＮＡ未检出表达，模型组 ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达
量显著升高，ＮＹＰＢＲ组 ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达显著低于
模型组（Ｐ＜００１）（表２）。
表２ 各组大鼠ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达及其蛋白和ＮＴ含量
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
分组
剂量
／ｇ·ｄ－１
ｉＮＯＳｍＲＮＡ ｉ珚ＮＯＳ蛋白 ＮＴ
正常 － ０ ０ ０
模型 － ０９０±０１０ ４３００±６０８ ８７２３±５９４
ＮＹＰＢＲ ３ ０５４±００７２） ２６００±７８１１） ３０９０±５１２２）
注：与模型组比１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１
３．４ 各组大鼠肾皮质 ｉＮＯＳ的蛋白含量 Ｗｅｓｔｅｒｎ
ｂｌｏｔｉｎｇ的结果显示，正常组 ｉＮＯＳ的蛋白含量未检
测出，模型组ｉＮＯＳ蛋白含量显著增加；与模型组相
比，ＮＹＰＢＲ组ｉＮＯＳ的蛋白含量降低，有统计学意义
（Ｐ＜００５）（表２）。
３．５ 肾皮质ＮＴ含量的变化 免疫组化结果显示，
正常组ＮＴ染色呈灰蓝色（阴性），模型组ＮＴ染色呈
棕黄色（强阳性），而ＮＹＰＢＲ组ＮＴ染色强度弱于模
型组，有统计学意义（Ｐ＜００１）（图２箭头所指，表
２）。
４ 讨论
ＤＮ已成为导致慢性肾功能衰竭的主要原因。
Ａ．正常组；Ｂ．模型组；Ｃ．ＮＹＰＢＲ组
图２ 各组大鼠肾皮质ＮＴ含量的变化（×４００）
氧化应激被认为是ＤＮ发生发展的重要机制。
研究表明，糖尿病状态下高血糖可诱导肾小球
系膜细胞、肾小管上皮细胞活性氧族大量生成［４５］。
同时，多种因素可使 ｉＮＯＳ被诱导而表达增加［６］。
诱导后 ｉＮＯＳ活性较固有型 ＮＯＳ合成的一氧化氮
（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ，ＮＯ）浓度高１０００倍［７］，是引起体内
ＮＯ过量产生的主要基础。本实验结果显示，糖尿
病１０周时，肾皮质 ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达及其蛋白含量
显著增加，与肾皮质病变程度相一致，说明 ｉＮＯＳ的
过度表达可对肾皮质发挥细胞毒作用，与有关报道
相一致［８９］。
过量的ＮＯ可与Ｏ－·２ 迅速反应，生成ＯＮＯＯ
－，其
反应速率（ｋ＝６７×１０９ｍｏｌ·Ｌ－１·ｓ－１）比 ＳＯＤ清
除 Ｏ－·２ 的速率快 ３倍
［１０］。ＯＮＯＯ－及其衍生的
ＯＮＯＯＨ，ＮＯ２·，ＯＨ·等，是目前已知的氧化性最强
的一类物质。ＯＮＯＯ－可作用于蛋白质、脂质及ＤＮＡ
等大分子物质，造成强的氧化应激损伤［１１１２］。由于
半衰期很短，内生 ＯＮＯＯ－不易检测，故其硝基化酪
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氨酸生成的ＮＴ被公认为ＯＮＯＯ－生成的标志物［１３］。
本实验ＮＴ免疫组化显示，糖尿病大鼠肾皮质ＮＴ染
色最深，主要分布在肾小球，各组 ＮＴ的生成量与肾
脏病理形态学变化和肾功能紊乱相平行，说明
ＯＮＯＯ－引发的氧化硝基化损伤在 ＤＮ发病机制中
发挥了重要作用。
糖尿病相当于中医学“消渴证”。消渴之疾，阴
虚为本，燥热为标。燥热内灼，煎熬营血，而血脉瘀
滞。根据消渴证的病机特点，确立养阴活血之法则
来防治ＤＮ。ＮＹＰＢＲ由六味地黄丸为基本方加减而
成，是本室传统使用方剂，已在临床应用２０余年。
方药组成：熟地黄、牡丹皮、山药、山茱萸、丹参等６
味中药，如此配伍，养阴以培本，活血以通络，诸药合
用，共奏养阴活血之功。现代药理研究表明，熟地
黄、牡丹皮、山药、山茱萸中的某些成分如多糖类、丹
皮酚、环烯醚萜总苷等具有抗氧化作用［１４１７］。本实
验中，ＮＹＰＢＲ能够显著降低 ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达和蛋
白含量及ＯＮＯＯ－的生成，与糖尿病大鼠肾脏病理形
态学变化及肾功能紊乱的改善相一致。
糖尿病大鼠模型建立１０周后，肾皮质 ｉＮＯＳ表
达升高，ＮＴ生成增加，与肾皮质病理形态学变化和
肾功能紊乱相一致，表明 ｉＮＯＳ过量表达导致
ＯＮＯＯ－大量生成引发细胞毒性作用，是造成糖尿病
肾脏损伤的重要机制之一。ＮＹＰＢＲ可通过抑制
ｉＮＯＳ表达、降低 ＯＮＯＯ－的生成，有效延缓或减轻
ＤＮ的病理进程。
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第３３卷第１４期
２００８年７月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １４
Ｊｕｌｙ，２００８
ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｅｃｔｏｆＮｏｕｒｉｓｈｉｎｇｙｉｎａｎｄｐｒｏｍｏｔｉｎｇｂｌｏｏｄｆｌｏｗｒｅｃｉｐｅｏｎ
ｋｉｄｎｅｙｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔ
ＬＩＡＮＧＪｉｎｈｕａｎ，ＬＩＹａｎｎｉｎｇ，ＱＩＪｉｎｓｈｅｎｇ，ＬＩＢｉｎ
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ０５００１７，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｅｃｔｓｏｆＮｏｕｒｉｓｈｉｎｇｙｉｎａｎｄＰｒｏｍｏｔｉｎｇｂｌｏｏｄｆｌｏｗｒｅｃｉｐｅ（ＮＹＰＢＲ）ｏｎｔｈｅ
ｋｉｄｎｅｙｏｆｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＳＤｒａｔｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ３ｇｒｏｕｐｓａｔｒａｎｄｏｍ：ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｄｉａｂｅｔｅｓｇｒｏｕｐａｎｄＮＹＰＢＲｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ
ｌａｔｅｒｔｗｏｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｙｗｉｔｈｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎｔｏｉｎｄｕｃｅｄｉａｂｅｔｅｓｍｏｄｅｌ．ＲａｔｓｉｎＮＹＰＢＲｇｒｏｕｐｗｅｒｅｆｅｄＮＹＰＢＲ
ｓｏｌｕｔｉｏｎ（３ｇ·ｄ－１），ｗｉｔｈｄｏｓｅｅｑｕｉｖａｌｅｎｔｔｏｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｕｓｅｉｎｔｈｅｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｒａｔｓｉｎｔｈｅｏｔｈｅｒｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｆｅｄｅｑｕｉｖａｌｅｎｔｗａｔｅｒ．１０
ｗｅｅｋｓａｆｔｅｒｄｉａｂｅｔｅｓｗａｓｉｎｄｕｃｅｄ，ｔｈｅｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ（ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｒｅｎａｌｃｏｒｔｅｘｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙ
ＲＴＰＣＲ，ａｎｄｉｔｓｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｎｉｔｒｏｔｙｒｏｓｉｎｅ（ＮＴ），ａ
ｓｐｅｃｉｆｉｃｍａｒｋｅｒｏｆｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅ（ＯＮＯＯ－）．Ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｒｅｎａｌｃｏｒｔｅｘｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｏｐｔｉｃａｌｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｓｕｐｅｒ
ｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ）ａｎｄｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ）ｉｎｒｅｎａｌｃｏｒｔｅｘ，ｂｌｏｏｄｇｌｕｃｏｓｅ，２４ｈｕｒｉｎｅｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｃｒｅａｔｉｎｉｎｅｃｌｅａｒ
ａｎｃｅｒａｔｅｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｉＮＯＳｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（０９０±０１０）ａｎｄｉｔｓ
ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔ（４３００±６０８），ａｎｄＮＴｃｏｎｔｅｎｔ（８７２３±５９４）ｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｄｉａｂｅｔｅｓｇｒｏｕｐ，ｉｎａｃｃｏｒｄｗｉｔｈｔｈｅｐａｔｈｏ
ｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｒｅｎａｌｃｏｒｔｅｘａｎｄｒｅｎａｌｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．ＮＹＰＢＲｃａｎａｔｅｎｕａｔｅｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＮＹＰＢＲｃｏｕｌｄ
ｄｅｃｒｅａｓｅｉＮＯＳｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｉｔｓｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔ，ａｎｄｒｅｄｕｃｉｎｇｔｈｅｏｖｅｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＯＮＯＯ－，ｔｈｕｓｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅｋｉｄｎｅｙｏｆｄｉａ
ｂｅｔｉｃｒａｔｆｒｏｍｉｎｊｕｒｙ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｄｉａｂｅｔｉｃｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ；ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ；ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅ；ＮｏｕｒｉｓｈｉｎｇｙｉｎａｎｄＰｒｏｍｏｔｉｎｇｂｌｏｏｄｆｌｏｗｒｅｃｉ
ｐｅ ［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００７０９２７
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３０５７２３８５）
［通讯作者］ 李锋，Ｔｅｌ：（０２９）８４７７５３５１，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｆｅｎｇ＠ｆｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
大黄总蒽醌对大鼠远端结肠 ＡＱＰ２表达的调节效应
鲍军强１，李 锋１，张文生１，徐彦博１，刘 青１，王 新２，
赵一岭３，王长海１
（１．第四军医大学 西京医院 中医科，陕西 西安 ７１００３２；
２．第四军医大学 西京医院 消化内科，陕西 西安 ７１００３２；
３．第四军医大学 病理学教研室，陕西 西安 ７１００３２）
［摘要］ 目的：探讨大黄总蒽醌对大鼠远端结肠水通道蛋白２（ａｑｕａｐｏｒｉｎ２，ＡＱＰ２）表达的调节作用。方法：３２
只ＳＤ大鼠随机分为正常组，大黄总蒽醌低、中、高剂量组（０１４，２５，４５ｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，灌胃），正常组给予生理盐
水灌胃。大鼠 ５ｄ后麻醉处死，取全段结肠内粪便，干燥后检测粪便含水量；留取远端结肠，运用免疫组织化学、
Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及ＲＴＰＣＲ检测远端结肠 ＡＱＰ２表达的变化。结果：低剂量组大鼠没有出现泻下现象，其远端结肠
ＡＱＰ２表达无显著差异；中剂量组（２５ｇ·ｋｇ－１·ｄ－１）大鼠出现软便及稀便，高剂量组（４５ｇ·ｋｇ－１·ｄ－１）大鼠出
现稀便和水样便，粪便含水量显著性增加，其远端结肠 ＡＱＰ２表达亦显著降低（Ｐ＜００１）。结论：大黄总蒽醌能抑
制大鼠远端结肠ＡＱＰ２的转录与翻译、增加粪便的含水量，这可能是其泻下效应产生的机制之一。
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第３３卷第１４期
２００８年７月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １４
Ｊｕｌｙ，２００８