全 文 ：水飞蓟素对小鼠肝细胞
微粒体及线粒体膜流动性的影响
吴东方t o彭仁秀u o叶丽萍v o于 萍v
kt q武汉大学 人民医院药学部 o湖北 武汉 wvssys ~ u q武汉大学 医学院 药理学系 o湖北 武汉 wvsszt ~
v q武汉大学 药学院 o湖北 武汉 wvsszul
≈摘要  目的 }观察水飞蓟素 ¶¬¯¼°¤µ¬±对小鼠肝微粒体及线粒体膜流动性的影响 ∀方法 }以 „‘≥ o⁄°‹ 为荧
光探针标记肝微粒体及线粒体膜浅层及深层 o测定肝微粒体及线粒体膜荧光强度k Φl o荧光偏振度k Πl及平均微粘
度kΓl ∀结果 }水飞蓟素能增高肝微粒体及线粒体膜浅层流动性 o同时能降低肝微粒体及线粒体膜深层流动性 ∀
≤≤ w¯亦可导致肝微粒体及线粒体膜浅层流动性增加及肝微粒体及线粒体膜深层流动性降低 o而给予水飞蓟素
tws ou{s °ª#®ªp t后 o能使增高的肝微粒体及线粒体膜浅层流动性降低 o亦能使降低的肝微粒体及线粒体膜深层流
动性增高 ∀结论 }水飞蓟素对肝损伤的保护作用可能与水飞蓟素恢复肝微粒体及线粒体的膜流动性有关 ∀
≈关键词  水飞蓟素 ~肝脏 ~微粒体 ~线粒体 ~膜流动性
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvls|2s{zs2sv
水飞蓟素 ¶¬¯¼°¤µ¬±是从一二年生草本植物水
飞蓟 Σιλψβυ µ µ αριανυ µ kql Š¤¨µ·± 种子中提取
的黄酮类混合物 o其主要成分为 ¶¬¯¼¥¬±o¶¬¯¼§¬¤±¬±和
¶¬¯¼¦«µ¬¶·¬±¨ ∀水飞蓟素不仅是一种自由基清除
剂≈t  o亦是脂肪氧化酶抑制剂≈u  o同时能对抗 ¬¦µ²2
¦¼¶·¬±2• o°¬¦µ²¯¬√及四氯化碳k≤≤ w¯l等诱导的动物
肝细胞损伤≈v2x  o并能改善酒精肝硬化患者的肝功
能≈y  o其机制与抗脂质过氧化 o清除氧自由基 o稳定
肝细胞膜等有关 o但水飞蓟素对肝亚细胞器的作用
未见文献报道 ∀为进一步了解水飞蓟素对肝细胞损
伤的保护作用 o本实验观察了水飞蓟素对 ≤≤ w¯ 肝损
伤小鼠肝微粒体及线粒体膜流动性的影响 o以探讨
水飞蓟素对肝亚细胞器的有效作用 ∀
1 材料
1 q1 药品与试剂 水飞蓟素为德国马博士大药厂
生产 o批号 …stswtuyy o临用前用生理盐水配制 o
≤≤ w¯以植物油配成 s qt h溶液 ∀t oy2二苯基2t ov ox2
己三烯kt oy2§¬³«¨ ±¼¯2t ov ox2«¨ ¬¤·µ¬¨±¨ o⁄°‹l ot2苯
胺2{2萘磺酸 kt2¤±¬¯¬±²±¤³«·«¤¯ ±¨¨ 2{2¶∏¯³«²±¬¦¤¦¬§o
„‘≥l购于 ≥¬ª°¤公司 ∀其余试剂均为国产分析纯 ∀
1 q2 实验仪器 ˜ ∂2uust紫外分光光度计k日本岛
≈收稿日期  ussu2tu2ts
≈通讯作者  ר¯ }ksuzl{{swt|t|2{{|y
津l o• ƒ2xsss荧光分光光度计k日本岛津l o°‹¶2u≤
型精密酸度计k上海磁仪厂l ∀
1 q3 动物 雄性昆明种小鼠 zs只 o体重 t{ ∗ us ªo
由卫生部武汉生物制品研究所提供 o动物合格证 o
t|2svt ∀实验前在本院动物室饲养 u §∀
2 方法
2 q1 动物处理 vs只小鼠随机分为对照组 o水飞
蓟素低剂量组和水飞蓟素高剂量组 o分别经口给予
水飞蓟素 tws ou{s °ª#®ªp t o每天 t次 o连续 z §o对
照组给等体积生理盐水 ∀另外 ws只小鼠随机分为
对照组 o≤≤ w¯ 组 o≤≤ w¯ n水飞蓟素低剂量组和 ≤≤w
n水飞蓟素高剂量组 o每组小鼠 ts只 ∀水飞蓟素低
剂量组和水飞蓟素高剂量组分别经口给予水飞蓟素
tws ou{s °ª#®ªp t o每天 t 次 o连续 z §o对照组和
≤≤ w¯组给等体积生理盐水 ∀末次给药后 u «给 ≤≤ w¯
ts °ª#®ªp t o其他组给等体积橄榄油 ∀禁食 oty «
后断头处死 ∀
2 q2 标本制备 小鼠断头放血后 o立即剖腹 o取出
肝脏 o在冰生理盐水中清洗 v次 o吸干 o称重 o剪碎 o
用 xs °°²¯#pt ×µ¬¶2‹≤¯及 t qtx h Ž≤¯匀浆缓冲
液k³‹ z qwl制备肝匀浆 ∀按差速离心法分离肝线粒
体≈z  o钙沉淀法≈{ 分离肝微粒体 o以 s qux °²¯ #p t
蔗糖溶液按 u ®ª#p t肝悬浮 op vs ε 冰箱保存 ∀以
上操作均在 w ε 下进行 ∀
#sz{#
第 u{卷第 |期
ussv年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ |≥ ³¨·¨°¥¨µoussv
2 q3 荧光强度的测定及生化分析 以牛血清白蛋
白k…≥„l为标准品 o按 ²ºµ¼法≈| 测定蛋白质含量 ∀
参照文献≈ts 方法 o以 „‘≥为荧光探剂标记膜脂质
区浅层 oux ε 恒温 o测定膜荧光强度k Φl o激发光波
长 v|s ±° o发射光波长 wzu ±° ∀按文献≈tt 方法 o
以 ⁄°‹ 标记膜脂质区深层 oux ε 恒温 o激发光波长
vyu ±° o发射光波长 wvu ±° o在荧光分光光度计上
k加偏振片l测定膜荧光强度 o据荧光强度计算出标
记膜的荧光偏振度k Πl及平均微粘度kΓl ∀膜流动
性以 Φ及 Γ值表示 oΦ及值越高 o膜流动性越低 ~反
之 o膜流动性越高 ∀
2 q4 统计学处理 采用 ≥°≥≥ ts qs统计软件对数
据进行方差分析 o并用 θ检验进行组间比较 ∀
3 结果
3 q1 水飞蓟素对正常肝微粒体及线粒体膜流动性
的影响 由表 t可见 o给予水飞蓟素 tws ou{s °ª#
®ªp t后 o肝微粒体及线粒体膜荧光偏振度 Π值 !平
均微粘度 Γ值均增高k Π s qsxl o表明水飞蓟素能
降低肝微粒体及线粒体膜深层流动性 ∀对 „‘≥标
记的膜脂质浅层 o水飞蓟素能降低肝微粒体及线粒
体膜荧光强度 Φ值k Π s qstl o表明水飞蓟素能升
高肝微粒体及线粒体膜浅层流动性 ∀
表 t 水飞蓟素对小鼠正常肝微粒体和线粒体膜流动性的影响k ξ ? σ, ν € tsl
标本 探针 参数 对照组 水飞蓟素低剂量组 水飞蓟素高剂量组
微粒体 „‘≥ Φ v| qv ? s qtx vs qy ? u qvuul vt qy ? t qzvul
⁄°‹ Π s qust ? s qssv s qut{ ? s qsswtl s qut| ? s qssztl
Γ t qxxu ? s qsw| t q{ws ? s qsv{tl t q{w{ ? s qtustl
线粒体 „‘≥ Φ ws qv ? t qzy vv q| ? u qt|ul vv q{ ? t q{zul
⁄°‹ Π s qtzv ? s qssy s qt|v ? s qss{tl s qt|x ? s qsswtl
Γ t quwt ? s qsyu t qwzx ? s qttttl t qw{t ? s qsxstl
注 }与对照组比较 tl Π s qsx ul Π s qst
3 q2 水飞蓟素对 ≤≤ w¯ 肝损害微粒体及线粒体膜流
动性的影响 给予 ≤≤ w¯后 o肝微粒体及线粒体膜荧
光强度 Φ值降低k Π s qstl o而荧光偏振度 Π值 !平
均微粘度 Γ值均增高k Π  s qsx oΠ  s qstl o表明
≤≤ w¯可增高肝微粒体及线粒体膜脂质浅层流动性 o
降低肝微粒体及线粒体膜深层流动性 ∀给予水飞蓟
素 tws ou{s °ª#®ªp t后 o肝微粒体及线粒体 Φ值增
高k Π s qsx oΠ s qstl o而肝微粒体及线粒体 Π值
及 Γ值均降低k Π s qsx oΠ s qstl o表明水飞蓟素
能使增高的肝微粒体及线粒体膜浅层流动性降低 o
使降低的肝微粒体及线粒体膜深层流动性增高 o结
果见表 u ∀
表 u 水飞蓟素对 ≤≤ w¯肝损害小鼠肝微粒体及线粒体膜流动性的影响k ξ ? σ, ν € tsl
标本 探针 参数 对照组 ≤ ≤ w¯ ≤ ≤ w¯ n水飞蓟素低剂量 ≤≤ w¯ n水飞蓟素高剂量
微粒体 „‘≥ Φ vs qv ? s q|tx ux qt ? s q|xtul vv qs ? s q|xtwl v| qz ? u qytwl
⁄°‹ Π s qusu ? s qssw s quty ? s qssxtl s qusv ? s qss{vl s qt{u ? s qssxwl
Γ t qxyu ? s qsxs t qz{v ? s qs{wtl t qxzs ? s qtsvvl t qvy{ ? s qsx{wl
线粒体 „‘≥ Φ v| qv ? t qxy vs qz ? t qyvul vv qu ? u qvtvl vz qv ? t q|xvl
⁄°‹ Π s qtzu ? s qss{ s qust ? s qsswul s qt{u ? s qssxvl s qtzt ? s qsuvwl
Γ t quxt ? s qszu t qxxy ? s qsx{ul t qvuu ? s qsx{vl t qtzv ? s qsu{wl
注 }与对照组比较 tl Π s qsx ul Π s qst 与 ≤ ≤ w¯组比较 vl Π s qsx wl Π s qst
4 讨论
近年研究已逐渐表明 o水飞蓟素对多种肝细胞
损伤动物模型及酒精性肝硬化病人均有保护作
用≈v2x  ∀其作用机制可能与捕获肝细胞产生的毒性
自由基 o稳定肝细胞膜及提高细胞的抗渗抗溶能力
有关 ∀已知适当膜流动性对膜功能及酶活性是必要
的 o如物质转运 !能量转换 !细胞识别等 o都与膜流动
性密切相关≈tu  ∀而且膜流动性的变化不仅影响膜
酶的作用及膜蛋白功能的表达 o亦影响正常的体内
药物代谢 ∀另有文献报道≈tv  o≤≤ w¯致肝损伤改变膜
流动性的原因可能与脂质过氧化的裂解产物以及磷
脂酶 ≤ 活化而致磷脂键断裂有关 ∀本实验通过观察
水飞蓟素对正常肝微粒体及线粒体膜流动性的影
响 o发现水飞蓟素能增加肝微粒体及线粒体膜浅层
流动性 o降低肝微粒体及线粒体膜深层流动性 ∀同
时 o在 ≤≤ w¯诱导的肝损伤小鼠中 o≤≤ w¯ 使肝微粒体
及线粒体膜脂质浅层流动性增加 o而使肝微粒体及
线粒体膜脂质深层流动性降低 ∀在给予水飞蓟素后
#tz{#
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则使肝微粒体及线粒体膜脂质浅层和深层流动性恢
复 ∀本实验结果提示水飞蓟素能调节肝微粒体及线
粒体膜流动性 o使膜流动性处于合适的运动状态 ∀
一方面 o通过恢复膜脂质浅层流动性缓解脂质过氧
化造成的膜脆性增大 o使柔顺性增加 o从而减轻膜损
伤 ∀另一方面 o通过恢复膜深层流动性增加膜屏障
作用 o减少脂质过氧化产物等毒性物质进入膜内 o对
细胞造成损伤 ∀因此 o水飞蓟素对肝损伤的保护作
用可能基于水飞蓟素能恢复肝微粒体及线粒体的膜
流动性 ∀
≈参考文献 
≈t   ∏µ¬¨¯ ° oŠ¤µ¦¬¤³¬±¤ × o° µ¨¨½ „ ∂ o¨·¤¯ q≥¬¯¼°¤µ¬± °µ²·¨¦·¶„2
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• ¶¨ot||s oz }uxy q
≈v   µ¨¨¬¶« Ž „ o…∏±±¨ µ⁄ o • ¤ª¯¤±§ ⁄ • o ·¨¤¯ q °µ²·¨¦·¬²± „2
ª¤¬±¶·¬¦µ²¦¼¶·¬±2• Œ±§∏¦¨§ ‹ ³¨¤·²·²¬¬¦¬·¼ ¥¼ ≥¬¯¼°¤µ¬±}…¬²2
¦«¨ °¬¶·µ¼o ‹¬¶·²³¤·«²¯²ª¼ o¤±§ ¨·«¤¯¬·¼ q °«¤µ° • ¶¨ot||t o{ }
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„×°¤¶¨ „¦·¬√¬·¬¨¶²© ≤¬µµ«²·¬¦• ¤·¬√ µ¨} ∞©©¨ ¦·²© ≥¬¯¼°¤µ¬±q
„³³¯ ײ¬¬¦²¯ ot||s ots }u{t q
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·¬√¨ ∞©©¨ ¦·¶ ²© ≥¬¯¼°¤µ¬± ¤ª¤¬±¶· ≤¤µ¥²± × ·¨µ¤¦«¯²µ¬§¨2¬±§∏¦¨§
¬³¬§ ° µ¨²¬¬§¤·¬²± ¤±§ ‹ ³¨¤·²·²¬¬¦¬·¼ ¬± ¬¦¨ q ∞√¬§¨ ±¦¨ ·«¤·
≥¬¯¼°¤µ¬± „¦·¶…²·«¤¶¤± Œ±«¬¥¬·¬²± ²©  ·¨¤¥²¯¬¦„¦·¬√¤·¬²± ¤±§
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…¬²¦«¨ ° „¦·¤ot|zz owyx }vyu q
≈{  徐叔云 o卡如濂 o陈 修 q药理实验方法学 q第二版 q北京 q人民
卫生出版社 ot||w qw{{ q
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≈ts  祁颂平 o刘春梅 o张家俊 o等 q用荧光探剂研究赤芍成分的衍生
物对线粒体膜流动性的影响 q生物化学与生物物理学报 o
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≈tt  沈 杰 o张席锦 o聂松青 o等 q消炎痛对大鼠肝线粒体 o微粒体
wx≤¤摄取及膜流动性的影响 q生理学报 ot||s owukwl }vxy q
≈tu  杨福愉 q生物膜流动性 q生物化学与生物物理学报 ot|{w oty }
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Τηε Εφφεχτσ οφ Σιλψµ αριν ον
Ηεπατιχ Μιχροσοµ αλ ανδ Μιτοχηονδριαλ Μεµ βρανε Φλυιδιτψιν Μιχε
• ˜ ⁄²±ª2©¤±ªt o°∞‘Š • ±¨2¬¬∏u o ≠ ∞ ¬2³¬±ªv o ≠ ˜ °¬±ªv
kt q⁄¨ ³¤µ·° ±¨·²© °«¤µ°¤¦¼ o • ±¨°¬± ‹²¶³¬·¤¯ ²© • ∏«¤± ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ o • ∏«¤± wvssys o ‹∏¥¨¬o≤«¬±¤~
u q⁄¨ ³¤µ·° ±¨·²© °«¤µ°¤¦²¯²ª¼ o  §¨¬¦¤¯ ≤²¯¯¨ ª¨ ²© • ∏«¤± ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ o • ∏«¤± wvsszt o ‹∏¥¨¬o≤«¬±¤~
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ²¥¶¨µ√¨·«¨ ©¨©¨ ¦·¶²©¶¬¯¼°¤µ¬± ²± «¨ ³¤·¬¦°¬¦µ²¶²°¤¯ ¤±§ °¬·²¦«²±§µ¬¤¯ °¨°¥µ¤±¨ ©¯∏¬§¬·¼¬± °¬¦¨ q
Μετηοδ : ¬√ µ¨°¬¦µ²¶²°¤¯ ¤±§ °¬·²¦«²±§µ¬¤¯ °¨°¥µ¤±¨ ¶º µ¨¨ ¤¯¥¯ §¨¥¼ „‘≥ ¤±§⁄°‹ q ¨°¥µ¤±¨ ©¯∏²µ¨±¶¨±·¬±·¨±¶¬·¼ k Φl o©¯∏²2
µ¨±¶¨±·³²¯¤µ¬½¤·¬²±k Πl ¤±§ °¬¦µ²√¬¶¦²¶¬¯¼kΓl ²© ¬¯√ µ¨°¬¦µ²¶²°¨¤±§ °¬·²¦«²±§µ¬¤ º µ¨¨ §¨·¨µ°¬±¨ §q Ρεσυλτ : ≥¬¯¬±¦µ¨¤¶¨§·«¨ ¬¨·¨µ2
±¤¯ °¨°¥µ¤±¨ ©¯∏¬§¬·¬¨¶²© ¬¯√ µ¨°¬¦µ²¶²°¨¤±§ °¬·²¦«²±§µ¬¤o¤±§ §¨¦µ¨¤¶¨§·«¨ ¬±·¨µ±¤¯ °¨°¥µ¤±¨ ©¯∏¬§¬·¬¨¶²© ¬¯√ µ¨ °¬¦µ²¶²°¨¤±§
°¬·²¦«²±§µ¬¤q°µ¨·µ¨¤·° ±¨·º¬·« ≤≤ w¯ o·«¨ ¬¨·¨µ±¤¯ °¨°¥µ¤±¨ ©¯∏¬§¬·¼ ²© ¬¯√ µ¨°¬¦µ²¶²°¨¤±§ °¬·²¦«²±§µ¬¤ º µ¨¨ ¬±¦µ¨¤¶¨§o¤±§·«¨
¬±·¨µ±¤¯ °¨°¥µ¤±¨ ©¯∏¬§¬·¬¨¶²© ¬¯√ µ¨ °¬¦µ²¶²°¨¤±§ °¬·²¦«²±§µ¬¤ º µ¨¨ §¨¦µ¨¤¶¨§q „©·¨µª¬√ ±¨ ¶¬¯ tws ou{s °ª#®ªp t o·«¨ ¬±¦µ¨¤¶¨§
¬¨·¨µ±¤¯ °¨°¥µ¤±¨ ©¯∏¬§¬·¬¨¶²© ¬¯√ µ¨°¬¦µ²¶²°¨¤±§ °¬·²¦«²±§µ¬¤ º µ¨¨ ²¯º µ¨¨§ o¤±§·«¨ §¨¦µ¨¤¶¨§¬±·¨µ±¤¯ °¨°¥µ¤±¨ ©¯∏¬§¬·¬¨¶²© ¬¯√2
µ¨°¬¦µ²¶²°¨¤±§ °¬·²¦«²±§µ¬¤ º µ¨¨ ±¨¦«¤±¦¨§¬± ¤§²¶¨2§¨ ³¨ ±§¨ ±·°¤±±¨ µqΧονχλυσιον : × «¨ ³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨ ¦·¶²©¶¬¯ ²± ¬¯√ µ¨¬±­∏µ¼
°¤¼ ¥¨ µ¨ ¤¯·¨§·²·«¨ µ¨¦²√ µ¨¼ ²©·«¨ °¨°¥µ¤±¨ ©¯∏¬§¬·¬¨¶²© ¬¯√ µ¨°¬¦µ²¶²°¨¤±§ °¬·²¦«²±§µ¬¤q
[ Κεψ ωορδσ] ¶¬¯¼°¤µ¬± ~ ¬¯√ µ¨~ °¬¦µ²¶²°¨~ °¬·²¦«²±§µ¬¤~ °¨°¥µ¤±¨ ©¯∏¬§¬·¼ ≈责任编辑 古云霞 
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