全 文 ：土贝母苷甲在人宫颈癌 ‹ ¨¤细胞内对线粒体的影响
王 芳t o马润娣u 3 o于立坚u
kt1 广东医学院 附属医院 o广东 湛江 xuwsst ~
u1 湛江海洋大学 广东省海洋药物重点实验室 o广东 湛江 xuwsuxl
≈摘要  目的 }探讨线粒体在土贝母苷甲kׅ≥tl诱导人宫颈癌 ‹ ¨¤细胞凋亡过程中的作用 ∀方法 }流式细
胞仪测定线粒体膜电位k∃7 °l !琼脂糖凝胶电泳分析 ⁄‘„断裂片和蛋白质免疫印迹法检测细胞色素 ¦k¦¼·¦l的表
达 ∀结果 }ׅ≥t引起人宫颈癌 ‹ ¨¤细胞凋亡 o使得 ∃7 °下降 o释放入胞质的 ¦¼·¦增加 o并具有时间 !剂量依赖
性 ~ׅ≥t还可直接作用于分离的鼠肝脏线粒体 o使之释放 ¦¼·¦~ׅ≥t的这种作用部分能够被线粒体膜保护剂环
孢菌素 „k≤¶„l阻断 ∀结论 }线粒体途径是 ׅ≥t诱导的 ‹ ¨¤细胞凋亡的途径之一 ∀
≈关键词  土贝母苷甲 ~线粒体 ~细胞色素 ¦~细胞凋亡 ~人宫颈癌 ‹ ¨¤细胞
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxluw2t|vx2sx
≈收稿日期  ussx2sv2vs
≈基金项目  广东省自然科学基金 kstt{s|l
≈通讯作者  3马润娣 oר¯ }kszx|luv{uwuw oƒ¤¬}kszx|luv{uswt o
∞2°¤¬¯}¼º¼­|xz{ ƒ ¶²«∏1¦²°
土贝母 Βολβοστεµ µα πανιχυλατυµ k¤¬¬°qlƒµ¤±2
∏´¨·k≤∏¦∏µ¥¬·¤¦¨¤¨ l是一种传统中药 o载于清代赵学
敏编著的5本草纲目拾遗6 ∀古代用它的块茎来治疗
乳岩 !乳痈 !乳腺增生和瘰疬等疾患 ∀得率较高的土
贝母苷甲kׅ≥tl在临床上显示出明显的散结毒 !
消痈肿效果≈t  ∀已有前期实验证实了 ׅ≥t可引
起 ‹ ¨¤细胞凋亡≈u  ∀
线粒体通过电子传递链产生氧给细胞提供
xs h ∗ |s h的腺苷三磷酸k„×°l o线粒体也参与细胞
解毒 !固醇类激素生物合成和热量产生 ∀有学者发
现它在细胞凋亡过程中起关键作用 ∀受到凋亡因素
刺激后 o在 „×°r§„×°存在的情况下 o细胞色素 ¦从
线粒体中释放出来 o结合到 „³¤©2t的 • ⁄ws重复区
域 o而 ³µ²¦¤¶³¤¶¨|则与 „³¤©2t氨基端的 ≤„• ⁄相互
作用 o形成的复合物激活 ¦¤¶³¤¶¨| o活化的 ¦¤¶³¤¶¨|
可自我激活 o并进一步激活 ¦¤¶³¤¶¨v o¦¤¶³¤¶¨z o从而
启动了 ¦¤¶³¤¶¨ 的级联放大≈v  ∀本实验试图观察
ׅ≥t在 ‹ ¨¤细胞内对线粒体的影响 o并探讨其与
细胞凋亡的关系 ∀
1 材料与方法
111 材料 ‹ ¨¤细胞株为本室传代保藏 ∀ ׅ≥t
由湛江海洋大学广东省海洋药物重点实验室提取分
离 o纯度  |{1x h o由陕西省中药局鉴定 ∀ ⁄∞ 培
养基为 Š¬¥¦²公司产品 ~核糖核酸酶 „ !蛋白酶 Ž!环
孢菌素 „k≤¶„l !∞Š×„与µ«²§¤°¬±¨ tuv k• «tuvl均为
≥¬ª°¤公司产品 ∀鼠抗人单克隆抗体细胞色素 ¦购
自 °«¤µ¬±ª¨±公司 o兔抗人多克隆抗体 Β2¤¦·¬± !羊抗
鼠 !羊抗兔单克隆抗体 ŒªŠ2‹• °为 ≥¤±·¤≤µ∏½公司产
品 ∀新生牛血清购自杭州四季清生物材料有限公
司 ∀其他试剂均为国产分析纯 ∀
112 方法 ‹ ¨¤细胞 o以含 tss ˜#°pt青霉素 !
tss °ª#pt链霉素 !ts h新生牛血清的 ⁄∞ 培养
基 ovz ε ox h ≤’u 的培养箱中培养 o取对数生长期
细胞用于实验 ∀
准确称取 ׅ≥t干粉 o无菌三蒸水溶解过滤除
菌 op us ε 保存备用 ∀环孢菌素 „k≤¶„l o用二甲基
亚砜k⁄≥’l配成 t °°²¯#pt母液 o再用无血清培养
基稀释成 tss Λ°²¯#pt储备液 op us ε 保存 o临用前
用无血清培养基稀释成工作液 ∀ ⁄≥’的终含量低
于 s1t h o该含量的 ⁄≥’对实验结果无影响 ∀待细
胞生长至对数增殖期 o直接加入不同浓度 ׅ≥t溶
液 o或预先加入 ≤¶„工作液作用 vs °¬±后再加入不
同浓度 ׅ≥t溶液 ∀
11211 ⁄‘„ 提取及电泳分析 参照文献≈w  o将
t ≅ tsy细胞接种于 zx °°培养瓶生长 uw «后 o加入
不同浓度的药物 o作用 uw «后 o胰酶消化 o收集细
胞 ∀°…≥洗涤 u 次 ∀每瓶加细胞裂解液 t °≈ts
#xv|t#
第 vs卷第 uw期
ussx年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ uw
⁄¨ ¦¨ °¥¨µoussx
°°²¯#pt ×µ¬¶2‹≤¯ k³‹ {1sl ot °°²¯#pt ∞⁄ׄ k³‹
{1sl os1x h ×µ¬·²± ÷2tss 及 s1t °ª#°pt ³µ²·¨¬±¤¶¨ Ž
水浴 u ∗ w «oxw ∗ xy ε ∀酚 !氯仿常规抽提 ∀加 us
ˏ×∞缓冲液≈ts °°²¯ #pt ×µ¬¶2‹≤¯ k³‹ {1sl ot
°°²¯#pt ∞⁄ׄ 含 us Λª#°pt • ‘„ 酶  ∀上样 ts
Λªr泳道 ot1{ h琼脂糖凝胶中以 x ∂#¦°pt的电压电
泳 u «o紫外灯观察 o图像扫描仪扫描 ∀
11212 流式细胞仪测定线粒体膜电位k∃7 °l的变
化 以每孔 t ≅ tsx细胞接种于 y孔培养板中 o培养
过夜后加入不同含量的药物 ∀作用不同时间后 o胰
酶消化 o收集细胞 ∀°…≥洗 u次 o细胞重悬于 s1x °
°…≥中 o加入 • «tuv使其终含量为 ts °ª#pt ovz ε
避光染 vs °¬±o°…≥ 再洗 t 次 o流式细胞仪k∞³¬¦¶
÷o≤²∏¯·¨µ≤²l检测 ∀
11213 蛋白质印迹法检测 ¦¼·¦的表达水平变化
将每孔 t ≅ tsx个的细胞加到 y孔板中 o过夜生长后
处理细胞 o在不同时间离心收集细胞 o预冷 °…≥洗
涤 u次 ∀为分离线粒体 o细胞悬浮在 xss ˏ预冷新
配的线粒体分离液≈us °°²¯ #pt ‹∞°∞≥2Ž’‹ k³‹
z1xl o ts °°²¯ #pt Ž≤¯ o t1x °°²¯ #pt ª≤¯ u o t
°°²¯#pt ∞⁄ׄ ot °°²¯ #pt ∞Š×„ ot °°²¯ #pt
⁄×× os1t °°²¯ #pt °≥ƒ ouxs °°²¯ #pt蔗糖≈x  
中 o冰上孵育 us °¬±后 o用 t °注射器及 ty号针头
吸打 ∀zxs ≅ γ 离心 x °¬±ow ε ∀上清液 tu sss ≅ γ
离心 us °¬±ow ε ∀将上清移至干净 t1x °离心管 o
tu sss ≅ γ 离心 vs °¬±∀上清为细胞胞质部分 o沉淀
为线粒体部分 o沉淀用 s1t °预冷新配的细胞裂解
缓冲液kxs °°²¯#pt ×µ¬¶2‹≤¯ o³‹ {1s otxs °°²¯#pt
‘¤≤¯ os1su h ‘¤‘v os1t h ≥⁄≥ ot °°²¯#pt钒酸钠 o
t h ‘°2ws ots Λª# °pt ¯¨ ∏³¨ ³·¬±ots Λª# °pt ¤³µ²2
·¬±¬±otss Λ°²¯ #pt °≥ƒl裂解细胞 o冰上放置 us
°¬±∀上清 !沉淀均贮存于 p us ε 备用 ∀用 ²ºµ¼. ¶
法进行蛋白质定量 ∀以 tu h ≥⁄≥2聚丙烯酰胺凝胶
电泳k≥⁄≥2°„Š∞l分离蛋白 o分离的蛋白质转移到硝
酸纤维素膜 o室温下用封闭液 x h脱脂奶粉2×ׅ≥缓
冲液ktxs °°²¯#pt ‘¤≤¯ oxs °°²¯#pt ×µ¬¶2‹≤¯ o³‹
z1x os1sx h ׺¨ ±¨2usl封闭 t «后 o分别加入用封闭
液 tΒt sss稀释的抗 ¦¼·¦抗体 ow ε 过夜后 o用 tΒt
sss稀释的辣根过氧化物酶偶联的抗鼠 ŒªŠ第二抗
体反应 u «o应用 ∞≤化学发光系统显影 ∀同时把
Β2¤¦·¬±作为内参照 ∀
11214 线粒体的分离及 ¦¼·¦的测定 处死饥饿 tu
«的 ≥⁄雄性大鼠 o切除肝脏 o称重 o用冷的 °…≥冲
洗 o剪碎放入 v °线粒体缓冲液kuts °°²¯ #pt甘
露醇 ozs °°²¯#pt蔗糖 ous °°²¯#pt ‹ ³¨¨¶2Ž’‹ o³‹
z1x ot °°²¯ #pt ∞⁄ׄ 含 s1wx h牛血清白蛋白l用
⁄²∏±¦¨ 匀浆器匀浆 ∀将匀浆液离心 ot vss ≅ γ ots
°¬±ow ε ∀将沉淀再次悬浮在 t1x °线粒体缓冲
液中 ot vss ≅ γ 离心 ts °¬±ow ε ∀收集所有上清
液 otz sss ≅ γ 离心 tx °¬±ow ε ∀所得沉淀即为线
粒体 ∀将线粒体沉淀悬浮在 v °缓冲液 …kuts
°°²¯#pt甘露醇 ozs °°²¯#pt蔗糖 ots °°²¯#pt丁
二酸 ox °°²¯#pt Ž≤¯ os1t h牛血清白蛋白 ot °°²¯
#pt ∞Š×„ o t °°²¯ #pt §„×° o ts Λª# °pt ¯¨ ∏2
³¨ ³·¬±ots Λª#°pt¤³µ²·¬±¬±otss Λ°²¯ #pt°≥ƒ 和
ts °°²¯#pt ‹∞°∞≥2Ž’‹ o³‹ z1xl中 otz sss ≅ γ 离
心 tx °¬±ow ε ∀沉淀用缓冲液 …洗 u次 o溶解在
vss ˏ的缓冲液 …中 ∀用 ²ºµ¼. ¶法测定线粒体部
分的蛋白浓度 ∀依据文献测定 ¦¼·¦的释放≈y  ∀tss
Λª的线粒体与不同浓度的药物在 vs ε 作用一定时
间后 ous sss ≅ γ离心 tx °¬±ow ε ∀收集上清 o利用
• ¶¨·¨µ± …¯²·¬±ª检测 ¦¼·¦的含量 ∀
2 结果
211 琼脂糖凝胶电泳 ux oxs oux Λ°²¯#pt n u Λ°²¯
#pt ≤¶„ oxs Λ°²¯#pt n u Λ°²¯#pt ≤¶„ 作用于体
外培养的 ‹ ¨¤细胞 uw «后 o明显观察到 ⁄‘„琼脂
糖凝胶电泳出现凋亡特征性的/梯状0条带 o预先加
入 u Λ°²¯#pt ≤¶„作用后 o⁄‘„琼脂糖凝胶电泳/梯
状0条带均比相应浓度 ׅ≥t的/梯状0条带弱k图
tl ∀随着浓度增大 o梯带明显 ∀
图 t ׅ≥t或 ≤¶„ n ׅ≥t诱导 ‹ ¨¤细胞
凋亡的 ⁄‘„电泳图
¤1 ¤µ®¨µ~¥1 空白对照 ~¦1u Λ°²¯#pt ≤¶„ n ux Λ°²¯#pt
ׅ≥t ouw «~§1ux Λ°²¯#pt ׅ≥t ouw «~¨ 1 u Λ°²¯#pt
≤¶„ n xs Λ°²¯#pt ׅ≥t ouw «~©1 xs Λ°²¯#ptׅ≥t ouw «
212 线粒体膜电位k∃Ω°l的变化 • «tuv是一种阳
离子荧光染料 o由于线粒体内膜的负电性而滞留在
#yv|t#
第 vs卷第 uw期
ussx年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ uw
⁄¨ ¦¨ °¥¨µoussx
活细胞线粒体内 o而常用其来检测 ∃Ω°变化 ∀ ≤¶„
对正常的 ‹ ¨¤细胞的 ∃Ω°无大影响 o而对受损的
‹ ¨¤细胞能够延迟 ∃Ω°的降低 o由此可见线粒体参
与了 ׅ≥t引起 ‹ ¨¤细胞的凋亡 ∀ ׅ≥t对线粒
体膜电位的影响 o具有时间 !剂量依赖性k图 ul ∀
图 u ׅ≥t对 ‹¨¯¤细胞 ∃Ω°的影响
„1不同浓度 ׅ≥t或 u Λ°²¯#pt≤¶„ n ׅ≥t作用 uw «后对
‹¨¯¤细胞 ∃Ω°的变化 ~…1 xs Λ°²¯#ptׅ≥t或 u Λ°²¯#pt≤¶„ n
xs Λ°²¯#pt ׅ≥t作用不同时间对 ‹ ¨¤细胞 ∃Ω°的变化
213 蛋白质印迹检测 可见 ‹ ¨¤细胞线粒体 !细
胞胞质 ¦¼·¦表达k图 vl ∀随 ׅ≥t药物浓度的增
加 o在 ‹ ¨¤细胞线粒体中 o¦¼·¦的表达减少 o而且
在加入 ≤¶„ 的处理组中 o¦¼·¦的表达比相应浓度
ׅ≥t 增加 ∀而在胞质中可见 ¦¼·¦的表达随
ׅ≥t浓度增加而增多 o在加入 ≤¶„ 的处理组中 o
¦¼·¦的表达比相应浓度 ׅ≥t减少 ∀在 vs Λ°²¯ #
pt ׅ≥t ovs Λ°²¯#ptׅ≥t n u Λ°²¯#pt≤¶„ 作
用不同时间段 o‹ ¨¤细胞线粒体在 uw «时 o¦¼·¦的
表达明显减少 ~在加入 ≤¶„ 的处理组中 o¦¼·¦的表
达比相应浓度 ׅ≥t增加 ∀
214 ‹ ¨¤细胞 ∃Ω°测定 ׅ≥t可使 ‹ ¨¤细胞
∃Ω°降低 o线粒体中 ¦¼·¦的表达减少 ∀为进一步证
实线粒体的这种作用 o将 ׅ≥t直接作用于分离的
线粒体 o经蛋白质印迹检测 oׅ≥t可直接使线粒体
释放 ¦¼·¦∀这种作用同样具有时间和浓度依赖性 o
而且这种作用同样可被 ≤¶„抑制k图 wl ∀
3 讨论
线粒体是一种膜性细胞器 o是细胞呼吸的场所 ∀
通过电子传递链利用碳水化合物和氧给细胞提供
xs h ∗ |s h „×° o线粒体也参与细胞解毒 !固醇类激
素生物合成和热量产生≈z  ∀近年发现线粒体在细胞
凋亡中起重要作用 o因为它要参与一般抗氧化防御
及细胞凋亡等重要生理过程的调控 ∀线粒体内外膜
通透性改变k°×l o介导 ¦¼·¦进入胞质 o并通过链式
反应形成对机体有损伤作用的活性氧 o再通过呼吸

图 v ׅ≥t对 ‹ ¨¤细胞线粒体 !细胞胞浆 ¦¼·¦的表达
„1 不同浓度 ׅ≥t作用 uw «后 ‹ ¨¤细胞线粒体 !细胞胞浆 ¦¼·
¦的表达 t1 空白对照 ~u ov ow1 ׅ≥t kts ovs oxs Λ°²¯#ptl o
uw «~x oy oz1 u Λ°²¯#pt ≤¶„ n ׅ≥ t kts ovs oxs Λ°²¯#ptl o
uw «∀…1vs Λ°²¯ #pt ׅ≥t 或 u Λ°²¯ #pt ≤¶„ n vs Λ°²¯ #pt
ׅ≥t 作用 t oy otu ouw «后 ‹ ¨¤细胞线粒体 !细胞胞浆 ¦¼·¦
的表达
图 w ׅ≥t直接使分离的线粒体释放 ¦¼·¦
„1 不同浓度 ׅ≥t或 u Λ°²¯#pt≤¶„ n ׅ≥t作用 t «后 o上清
中¦¼·¦的表达 t1 u h ×µ¬·²± ÷2tss ~ u1 空白对照 ~ v o x o
z1ׅ≥tkts ovs oxs Λ°²¯#ptl ot «~w oy o{1 u Λ°²¯#pt ≤¶„ n
ׅ≥t kts ovs oxs Λ°²¯ #ptl ot «~…1 vs Λ°²¯ #ptׅ≥t或 u
Λ°²¯#pt ≤¶„ n vs Λ°²¯#ptׅ≥t作用不同时间后 o上清中 ¦¼·
¦的表达 ~t1 空白对照 ~u ov ow ox oy1vs Λ°²¯ #pt ׅ≥t ²µu
Λ°²¯#pt≤¶„ n vs Λ°²¯#ptׅ≥t kx ots ous ows °¬±ot «l ~z1u h
×µ¬·²± ÷2tss
链电子漏 !氧化磷酸化解偶联 o向胞质转移 ∀线粒体
在细胞凋亡中的中心地位虽然在不同信号诱导的细
胞凋亡中不一定具有普遍意义 o但线粒体作为细胞
内死亡信号的感受者和放大者 o在细胞凋亡中的重
要性是勿庸置疑的 ∀线粒体 ¦¼·¦的释放是触发
¦¤¶³¤¶¨ 激活 o进而导致细胞凋亡产生是线粒体途径
的中心事件≈{  ∀在细胞浆中 o¦¼·¦通过结合凋亡蛋
白酶激活因子 „³¤©2t k¤³²³·²¶¬¶³µ²·¨¤¶¨ ¤¦·¬√¤·¬±ª©¤¦2
·²µtl和 ¦¤¶³¤¶¨ |后 o激活 ¦¤¶³¤¶¨ v是细胞凋亡的重
要过程≈v o|  ∀本研究发现 o在 ׅ≥t诱导人宫颈癌
#zv|t#
第 vs卷第 uw期
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ uw
⁄¨ ¦¨ °¥¨µoussx
‹ ¨¤细胞凋亡过程中 o胞浆 ¦¼·¦水平明显增高 o而
且与 ׅ≥t有明显的时间 !剂量依赖关系 o这种作
用可被线粒体膜保护剂 ≤¶„阻断 ∀
一般认为 ¦¼·¦是电子传递链的重要组成部分 o
定位于线粒体内膜 o是真核细胞内不可缺少的重要
因子 ∀其作为一种有效的凋亡诱导因子首先由 ¬∏
等人≈ts 证实 ∀线粒体 ¦¼·¦的释放是由于 ∃7 °的
下降 ∀ ∃7 °是由于线粒体内外膜通透性改变造成
的≈tt  ∀ Žµ²¨ °¨ µ≈tu 等报道该跨膜电位对维持线粒体
正常功能是必要的 ∀凋亡细胞线粒体 ∃7 °的下降
是线粒体膜通透性转变孔道 °×°开放的结果 ∀被
称为细胞生死开关的 °×°是由电位依赖性阴离子
通道 k ∂⁄„≤l o即孔蛋白 k³²µ¬±l !腺苷酸移位酶
k„‘×l及亲环蛋白 ⁄k¦¼¦¯²³«¬¯¬± ⁄l复合物在内外膜
交接处构成的一种复合结构≈tv  ∀环孢菌素 „ 通过
结合¦¼¦¯²³«¬¯¬± ⁄而抑制 °×°开放 o在离体它可以完
全抑制离体线粒体的 °×°开放≈tw  o本实验 ≤¶„能够
抑制线粒体膜电势下降 o使得细胞色素 ¦释放减少 o
推迟凋亡进程 ∀这一点在琼脂糖凝胶电泳中也可得
到证实 ∀
本实验证实了在苷甲诱导人宫颈癌 ‹ ¨¤细胞
凋亡过程中 o细胞胞浆 ¦¼·¦的水平有明显增高 o且
线粒体膜上通透性转变孔道开放抑制剂 ≤¶„使细胞
胞浆 ¦¼·¦水平明显降低 o提示 ׅ≥t诱导 ‹ ¨¤细
胞凋亡过程中 ¦¼·¦释放跟线粒体膜上通透性转变
孔道开放有关 ∀线粒体参与了 ׅ≥t诱导 ‹ ¨¤细
胞凋亡的过程 ∀
≈参考文献 
≈t  赵学敏 q本草纲目拾遗 q按照 tzyx年木刻版重印版 q北京 }
人民卫生出版社 ot|{v qtuv q
≈u  马润娣 o于立坚 o苏伟明 o等 q土贝母苷甲诱导 ‹ ¨¤细胞周
期阻滞和凋亡 q中国临床药理学与治疗学 oussw o| }uyt q
≈v  ¬° o‘¬­«¤º¤± ⁄o…∏§¬«¤µ§­² o ετ αλ. ≤¼·²¦«µ²°¨¦¤±§§„×° §¨2
³¨ ±§¨ ±·©²µ°¤·¬²± ²© „³¤©2tr≤¤¶³¤¶¨¶2| ¦²°³¯ ¬¨¬±¬·¬¤·¨¶¤±§¤³²³2
·²·¬¦³µ²·¨¤¶¨ ¦¤¶¦¤§¨ q Χελλ, t||z o|t }w{z q
≈w  ‹ µ¨°¤±±  o²µ¨±½ ‹  o∂²¯¯ • o ετ αλ. „ µ¤³¬§¤±§¶¬°³¯¨° ·¨«²§
©²µ·«¨ ¬¶²¯¤·¬²± ¤³²³·²·¬¦⁄‘„ ©µ¤ª° ±¨·q Νυχλ Αχιδσ Ρεσ , t||w ouu }
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≈y  ∏µª¨ ±¶° ¬¨¨µ  o ÷¬¨ „ o ⁄¨ √¨ µ¤∏¬± o ετ αλ. …¤¬ §¬µ¨¦·¯¼ ¬±§∏¦¨¶
µ¨¯¨ ¤¶¨ ²©¦¼·²¦«µ²°¨ ¦©µ²° ¬¶²¯¤·¨§ °¬·²¦«²±§µ¬¤q Προχ Νατλ Αχαδ
Σχι ΥΣΑot||{ o|x }w||z q
≈z  刘树森 q线粒体学与生物医学新前沿 q世界科技研究与发展 o
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≈{  ‘¨ º° ¼¨¨ µ⁄ ⁄oƒ µ¨ª∏¶²±2¬¯¯ µ¨≥ o ¬·²¦«²±§µ¬¤q • ¨¯ ¤¨¶¬±ª³²º µ¨
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§∏µ¬±ª¤³²³·²¶¬¶q Χελλ ∆εατη ∆ιφφερ, ussv ots }zs| q
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¶¬¶q Λµ µυνολογψ Τοδαψ, t||z ot{ }ww q
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Ρολε οφ µιτοχηονδρια ιν Τυβειµ οσιδε Ι2 µεδιατεδ ποπτοσισιν ηυµαν
χερϖιχαλ χαρχινοµα ΗεΛα χελλλινε
• „‘Š ƒ¤±ªt o  „ •∏±2§¬u o ≠˜ ¬2­¬¤±u
(t . Σουτη Χηινα Σεα Ινστιτυτε οφ Οχεανολογψ, Χηινεσε Αχαδεµψ οφ Σχιενχεσ , Γυανγζηου xtsvst , Χηινα ;
∆επαρτµεντ οφ Οβστετριχσ ανδ Γψναεχολογψ, Αφφιλιατεδ ηοσπιταλ οφ Γυανγδονγ Μεδιχαλ Χολλεγε , Ζηανϕιανγ xuwsst , Χηινα .
u . Γυανγδονγ Προϖινχιαλ Κεψ Λαβορατορψ οφ Μαρινε Ματερια Μεδιχα , Ζηανϕιανγ Οχεαν Υνιϖερσιτψ, Ζηανϕιανγ xuwsux , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨ ·«¨ µ²¯¨²© °¬·²¦«²±§µ¬¤¬± ׅ≥t2° §¨¬·¨§¤³²³·²¶¬¶²© «∏°¤± ¦¨µ√¬¦¤¯ ¦¤µ¦¬±²°¤ ‹ ¨¤ ¦¨¯¯
¬¯±¨ q Μετηοδ : ¬·²¦«²±§µ¬¤¯ ·µ¤±¶° °¨¥µ¤±¨ ³²·¨±·¬¤k∃Ω°l º¤¶¤¶¶¤¼¨ §¥¼ ©¯²º ¦¼·²° ·¨µ¼q „³²³·²·¬¦¬±§∏¦·¬²± ¥¼ ׅ≥t º¤¶§¨·¨µ°¬±¨ §
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中 国 中 药 杂 志
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≈责任编辑 方文贤 
≈收稿日期  ussx2sv2ux
≈基金项目  河南省杰出人才创新基金项目ksuutsstzssl ~高校
创新人才基金项目kusss2tsl
≈通讯作者  3 李建生 oר¯ }ksvztlyxyzyxy{ o∞2°¤¬¯ }¯­¶{ ƒ vzt q
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大黄素抗大鼠脑缺血损伤及对炎性因子反应的影响
李建生 3 o刘敬霞 o张伟宇 o梁生旺 o王 冬 o方 建
k河南中医学院 老年医学研究所 o河南 郑州 wxsssvl
≈摘要  目的 }评价大黄素抗脑缺血损伤作用 o并从细胞因子水平及表达方面探讨其抑制炎性级联反应机制 ∀
方法 }将大鼠分为假手术组 !模型组 !川芎嗪组 !大黄素组k低 !中 !高剂量l ∀线栓法制备局灶性脑缺血 y «模型 ∀观
察神经症状积分 !脑组织含水量 !梗死面积变化 o放射免疫法测定脑组织 בƒ2ΑoŒ2tΒo׊ƒ2Β水平 o免疫组织化学法
测定 בƒ o∂ ≤„2t表达 o原位杂交法测定 ∂ ≤„2t2°• ‘„表达 ∀结果 }与假手术组比较 o模型组大鼠神经症状积分
和脑含水量及梗死面积增加 o脑组织 בƒ2Α和 Œ2tΒ水平增高 !׊ƒ2Β水平降低 oבƒ 和 ∂ ≤„2t的表达增强k Π
s1stl ~大黄素各组神经症状积分和脑含水量及梗死面积明显降低 o以低剂量组尤为显著 ~大黄素低剂量组和川芎嗪
组 בƒ2Α和 Œ2tΒ水平及 בƒ oŒ≤„2t表达明显降低k Π s1stl o׊ƒ2Β水平增高k Π s1stl o大黄素低剂量组较川芎
嗪组尤为显著 ∀结论 }由多种细胞因子介导的炎性级联反应增强和 ׊ƒ 的保护作用减弱是脑缺血损伤的重要机
制 ∀大黄素抗脑缺血损伤作用机制可能是通过抑制脑组织炎性级联反应和提高脑保护因子如 ׊ƒ水平而实现的 ∀
≈关键词  脑缺血 ~大鼠 ~大黄素 ~炎性级联反应
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxluw2t|v|2sx
大黄及其提取物可减轻大鼠脑缺血再灌注后脑
组织损伤 o对大鼠脑缺血损伤具有保护作用≈t2w  ∀大
黄素可以减轻大鼠脑缺血后脑组织损伤 o其中以高
剂量kt1wsw °ª#®ªpt#§ptl更为显著≈x  ∀本实验在
以往研究的基础上 o进一步研究大黄素对脑缺血损
伤的保护作用 o并从脑组织细胞因子水平及其表达
方面探讨其作用机制 ∀
1 材料与方法
111 材料与试剂 青年 ≥⁄大鼠 ov ∗ w月龄 oys只 o
雌雄各半 o体重kvss ? xsl ªo河南省实验动物中心
提供k编号 ussv„2tvs o合格证号 ssststu号l ∀大
黄素k河南中医学院中药制剂教研室提供l o川芎嗪
注射液k山东潍坊制药有限公司 ~规格 }u °ows °ª~
批号 svsvtwl ∀放免试剂盒白细胞介素 tΒkŒ2tΒl !
肿瘤坏死因子 Αkבƒ2Αl !转化生长因子2Βk׊ƒ2Βl由
解放军总医院科技开发中心放免研究所提供 ~肿瘤
坏死因子kבƒl !血管细胞黏附因子k∂ ≤„2tl免疫
组织化学测试试剂盒 o血管细胞黏附因子 ° • ‘„
k∂ ≤„2t° • ‘„l原位杂交试剂盒由武汉博士德生
物试剂公司提供 ∀
112 模型制备 采用改良的 ²±ª¤法制备局灶性
脑缺血模型k≤„’l≈y  o假手术组不插入栓线 ∀实
验过程中保持大鼠肛温kvz1s ? s1xl ε o保持室温
kuy ? tl ε ∀
113 分组与处理 大鼠按随机数字表法分为假手
术组 !模型组 !川芎嗪组kz1u °ª#®ªpt#§ptl !大黄素
低 !中 !高 v个剂量组kt1wsw ou1{s{ ox1yty °ª#®ªpt#
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第 vs卷第 uw期
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