全 文 ：doi:10．3969 / j．issn．1000-484X．2016．10．013
异土木香内酯通过介导 ＲOS产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌 Hela
细胞凋亡①
于秀艳 李 铤 吴雪峰 刘晓峰 (吉林省肿瘤医院，长春 130012)
中图分类号 Ｒ737. 33 文献标志码 A 文章编号 1000-484X(2016)10-1467-06
①本论文受吉林省卫生计生委课题(20142021)资助。
作者简介:于秀艳(1968年－)，女，硕士，主任技师，主要从事肿瘤免
疫学研究，E-mail:yuxiuyan1968@ sohu．com。
通讯作者及指导教师:刘晓峰(1972 年－)，女，博士，副主任医师，主
要从事肿瘤免疫学研究，E-mail:liuyang7406@
sohu．com。
［摘 要］ 目的:探讨异土木香内酯通过介导 ＲOS产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌 Hela细胞凋亡机制。方法:不同终
浓度异土木香内酯体外诱导 Hela细胞 24 h及加入抑制剂 NAC作为实验组，以正常细胞作为对照组，MTT测定细胞活性;Ho-
echst 33258染色观察 Hela细胞凋亡细胞核变化;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期和 ＲOS产生变化和 MMP 水平;Western blot
方法测定细胞色素 C蛋白、Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:异土木香内酯以浓度依
赖性抑制 Hela细胞生长;20 μmol /L和 40 μmol /L终浓度异土木香内酯处理 Hela细胞 24 h后，细胞核出现典型的核固缩及核
碎裂凋亡形态，细胞凋亡率增加，可抑制细胞生长于 S期，细胞内均可诱导 ＲOS的产生。ＲOS抑制剂 NAC可以明显阻断异土
木香内酯对 Hela细胞生长的抑制作用，降低细胞凋亡率;20 μmol /L 和 40 μmol /L 终浓度异土木香内酯处理 Hela 细胞 24 h
后，Bax蛋白表达水平明显增加而 Bcl-2蛋白表达水平明显降低，同时 Caspase-3蛋白也被活化，出现 cleaved Caspase 蛋白，线
粒体内细胞色素 C蛋白释放增加。结论:异土木香内酯在体外可通过介导 ＲOS产生及线粒体损伤来抑制人宫颈癌 Hela细胞
生长且诱导其凋亡，且伴随 Bax蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调及 Caspase-3活化相关变化。
［关键词］ 异土木香内酯;ＲOS;线粒体损伤;Hela细胞
Isoalantolactone induces apoptosis in human cervical cancer Hela cells through
ＲOS generation and Mitochondrial dysfunction
YU Xiu-Yan，LI Ting，WU Xue-Feng，LIU Xiao-Feng. Cancer Hospital of Jilin Province，Changchun 130012，China
［Abstract］ Objective:To investigate the induction of apoptosis by isoalantolactone in human cervical cancer Hela cells is medi-
ated through ＲOS generation and Mitochondrial dysfunction.Methods:Cells were treated with isoalantolactone in a dose-dependent
manner in the presence or absence of NAC for 24 h as the experimental group，and the normal cells were used as control group. Cell via-
bilities were determined by the MTT assay;the nuclear morphology of Hela cells were observed under fluorescence microscope using the
Hoechst 33258 staining;apoptosiscell cycle and reactive oxygen species(ＲOS)and mitochondrial membrane potential(MMP)were
measured by flow cytometry;the protein expression levels of cytochrome C，Bcl-2，Bax and Caspase-3 were detected by Western
blot. Ｒesults:In the present study，we found that isoalantolactone inhibits growth in a dose-dependent manner in Hela cells. Further
studies revealed that Hela cells were treated with 20 and 40 μmol /L isoalantolactone for 24 h，after which we could observe the fragmen-
ted nuclei and the increased apoptosis rate. And we also found that isoalantolactone arrested the cell cycle at S phase and increased gen-
eration of reactive oxygen species and dissipation of mitochondrial membrane potential (ΔΨm)in Hela cells. While pretreatment with
NAC obviously blocked the apoptotic and inhibition effect of isoalantolactone indicating that induction of apoptosis is ＲOS-dependent，
Western blot study showed that isoalantolactone increased the expression of Bax and cleaved Caspase-3 and decreased the expression of
Bcl-2 with concomitant release of cytochrome C from mitochondria into cytosol. Conclusion:Isoalantolactone could inhibit the prolifera-
tion and induce the apoptosis of human cervical cancer Hela cells in vitro through mediating ＲOS generation and Mitochondrial dysfunc-
tion，the mechanism of which is also accompanied by up-regulation of Bax expression，down-regulation of Bcl-2 expression，activation of
Caspase-3 and release of cytochrome C.
［Key words］ Isoalantolactone;ＲOS;Mitochondrial dysfunction;Hela cells
宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，严重威胁着
女性的健康及生活质量，其在我国乃至全球恶性肿
瘤发病率屈居第二，全球每年死于宫颈癌的女性高
达 25万之多，死亡率排第四位［1］。其高发病率和死
·7641·于秀艳等 异土木香内酯通过介导 ＲOS产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌 Hela细胞凋亡 第 10期
亡率与女性对宫颈癌的认知水平和预防息息相
关［2］。而随着越来越多中草药植物的发现及其天
然提取物药理作用的研究，特别是在抗肿瘤方
面［3，4］，天然提取物的研发已经备受关注。
异土木香内酯(Isoalantolactone)是从系菊科旋
覆花属植物土木香(Inula helenium L)中分离出来的
倍半萜内酯类化合物，具有抗炎、抗菌、抗肿瘤、驱
虫、降血糖和镇痛等多种活性［5］。国内学者发现，
无论是异土木香内酯自身［6，7］还是其修饰后的产
物［8］，都可以抑制肿瘤细胞增殖，具有一定的抗肿
瘤活性。我们也报道过其抗肿瘤活性［9］。国内
外［6，10］有研究发现异土木香内酯可以显著抑制体外
Hela细胞增殖，并推测 11，13-去氢内酯基团与其抗
肿瘤活性有关系，而异土木香内酯诱导 Hela 细胞凋
亡细胞内 ＲOS 变化和线粒体损伤机制未见报道。
本研究旨在探讨异土木香内酯诱导 Hela 细胞凋亡
细胞内 ＲOS变化和线粒体损伤机制，以期为临床应
用提供理论研究基础。
1 材料与方法
1. 1 主要试剂 ＲPMI1640 细胞培养液购自美国
HyClone 公司;胎牛血清和胰蛋白酶购自美国 Gibco
公司;异土木香内酯(色谱纯度＞99%)购自上海同田
生物技术有限公司;MTT、DMSO 购于北京鼎国生物
技术有限公司;Hoechst 33258 染料、Annexin V-FITC
细胞凋亡检测试剂盒、细胞周期与细胞凋亡检测试剂
盒、活性氧检测试剂盒、兔抗 cytochrome C 多克隆抗
体、兔抗 Bax多克隆抗体、兔抗 Bcl-2多克隆抗体和兔
抗多克隆 Caspase-3均购自上海碧云天生物技术研究
所;罗丹明 123 荧光染料购于 Sigma 公司;鼠抗 β-
actin单克隆抗体购自 Santa Cruz公司;羊抗鼠 IgG、羊
抗兔 IgG美国 Proteintech公司;其他仪器及化学分析
纯由吉林大学第二医院中心实验室提供。
1. 2 方法
1. 2. 1 Hela细胞培养及活性测定 Hela 细胞由吉
林大学第二医院中心实验室保存，用 ＲPMI1640 细
胞培养基培养，加入双抗 100 U /ml 青霉素和 100
μg /ml链霉素，1 g /L 葡萄糖和 L-谷氨酸，10% 的胎
牛血清，细胞培养于 37℃、5% CO2 细胞孵箱中。每
3～4 d胰蛋白酶消化传代 1 次，按 1 ∶6比例传代。
根据 1983年Mosmann［11］报道的MTT法检测细
胞活性。取对数生长期的 Hela细胞，胰酶消化后制
成单细胞悬液，按每孔 1×104 个细胞数接种于 6 孔
板，第二天加入不同终浓度的异土木香内酯，培养箱
中孵育 24 h 后，MTT 粉末溶解于 DMEM 细胞培养
基中，滴加入培养有细胞的 96 孔板中(终质量浓度
为 0. 5 mg /ml)，37℃孵育 1 h，弃掉细胞培养液，加
入 200 μl DMSO 溶解细胞中还原的甲臜蓝颗粒，酶
标仪(Thermo scientific)测定波长为 570 nm 处的吸
光度值，参考波长为 690 nm，计算细胞活性。IC50
数值使用软件 GraphPad Prism 5测定。
1. 2. 2 Hoechst 33258核染实验 取对数生长期的
Hela细胞，胰酶消化后制成单细胞悬液，按每孔 1×
104 个细胞数接种于 6 孔板，第二天加入不同终浓
度的异土木香内酯，培养箱中孵育 24 h后，用 4%多
聚甲醛室温固定 30 min，PBS 洗涤后加入终浓度为
50 μg /ml 的 Hoechst 33258 37℃避光孵育 20 min，
PBS洗涤后用荧光显微镜(Olympus 1×71)观察。
1. 2. 3 细胞凋亡率测定 取对数期生长的 Hela 细
胞，胰酶消化后制成单细胞悬液，按每孔 2×105 个细
胞数接种于 6孔板，第二天加入不同终浓度的异土
木香内酯和终浓度为 3 mmol /L 抑制剂 NAC，培养
箱中孵育 24 h后，收集细胞，PBS洗涤 2～3次，最后
使用含有 5 μl Annexin V 的 PBS 200 μl 重悬细胞，
室温避光孵育 10 min 后，离心，弃上清，加入190 μl
Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞，加入 10 μl碘
化丙啶染色液，轻轻混匀，冰浴避光放置，随即进行
流式细胞仪检测(Beckman Coulter，Epics XL)。
1. 2. 4 细胞凋亡周期的测定 取对数生长期的
Hela细胞，胰酶消化后制成单细胞悬液，按每孔 2×
105 个细胞数接种于 6 孔板，第二天加入不同终浓
度的异土木香内酯，培养箱中孵育 24 h 后，收集细
胞，PBS洗涤。用 70%乙醇 4 ℃过夜固定。第二天
PBS洗涤 2遍，加入含有 50 μg /ml PI 和 100 μg /ml
ＲNase A的染色液 200 μl，室温孵育 30 min，流式细
胞仪测定(Beckman Coulter，Epics XL)。
1. 2. 5 活性氧(Ｒeactive oxygen species，ＲOS)测定
取对数生长期的 Hela细胞，胰酶消化后制成单细
胞悬液，按每孔 2×105 个细胞数接种于 6孔板，第二
天加入不同终浓度的异土木香内酯和终浓度为 3
mmol /L抑制剂 NAC，培养箱中孵育 24 h后，收集细
胞后悬浮于稀释好的终浓度为 10 μmo /L 的 DCFH-
DA染液中，37 ℃细胞培养箱内孵育 20 min。每隔
3～5 min 颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。
PBS洗涤、离心细胞 3次，以充分去除未进入细胞内
的 DCFH-DA，流式细胞仪测定(Beckman Coulter，
Epics XL)。
1. 2. 6 线粒体膜电位(Mitochondrial membrane po-
tential，MMP)测定 取对数生长期的 Hela 细胞，胰
酶消化后制成单细胞悬液，按每孔 2×105 个细胞数
·8641· 中国免疫学杂志 2016年第 32卷
接种于 6孔板，第 2 天加入不同终浓度的异土木香
内酯和终浓度为 3 mmol /L 抑制剂 NAC，培养箱中
孵育 24 h后，收集细胞后加入 10 μg罗丹明 123，避
光孵育 30 min后 PBS洗涤、重悬后上机测定(Beck-
man Coulter，Epics XL)。
1. 2. 7 凋亡相关蛋白测定
1. 2. 7. 1 蛋白样本制备 测定取对数生长期的
Hela细胞，胰酶消化后制成单细胞悬液，按每孔 2×
105 个细胞数接种于 6 孔板，第二天加入不同终浓
度的异土木香内酯，培养箱中孵育 24 h 后，收集细
胞。应用蛋白裂解液(30 mmol /L Tris-HCl，pH7. 4，
25℃，2 mmol /L EDTA，0. 5 mmol /L EGTA，1 mmol /L
DTT，50 mg /ml 亮肽素，50 mg /ml 胃蛋白酶抑制剂
A，0. 1 mmol /L 苯甲基磺酰氟(PMSF)和 50 mg /ml
抑肽酶)裂解细胞，同时超声粉碎 3～4 次，每次 3～4
s，形成细胞裂解液。用 BCA 方法定量计算蛋白质
含量。将裂解后的细胞加入样本缓冲液(62. 5
mmol /L Tris-HCl，pH7. 4，4% SDS，10%丙三醇，10%
β-巯基乙醇，0. 002%溴酚蓝)，沸水中煮 6 min，－20
℃保存。
1. 2. 7. 2 SDS-PAGE 电泳和 Western blot 实验 按
不同蛋白分子量配胶，每孔加入 50 μg 的蛋白进行
电泳后转移到硝酸纤维素膜(NC 膜)上，5%脱脂奶
粉 4 ℃过夜封闭;第二天 TBST洗膜 3次，5 min /次，
抗体稀释液稀释一抗 Bcl-2(1 ∶ 1 000)、Bax (1 ∶
300)、Caspase-3(1 ∶1 000)、β-Actin(1 ∶5 000)，室温
摇床孵育 3 h;TBST 洗膜 3 次，5 min /次;加入辣根
过氧化物酶(HＲP)标记的二抗(1 ∶5 000)，室温摇
床孵育 1. 5 h;TBST洗膜 3 次，5 min /次。进入暗室
操作，甩干 NC膜上的液体，加入 ECL化学发光底物
反应 5 min，压片后胶片经过显影液，双蒸水，定影液
洗片曝光。
1. 3 统计学方法 应用 SPSS16. 0 软件对各实验的
结果数据进行分析，计量资料以 x±s表示，两组间数
据用 t 检验，多组间数据用单因素方差分析。P ＜
0. 05为差异有统计学意义。
2 结果
2. 1 MTT实验及 Hoechst 33258核染 异土木香内
酯对 Hela的细胞毒性采用 MTT 方法测定。不同浓
度的异土木香内酯处理 Hela 细胞 24 h 后，以浓度
依赖的方式使细胞活性降低，80 μmol /L 的土木香
内酯可使 Hela细胞活性抑制率高达 80%以上，IC50
抑制率浓度值为 40. 36 μmol /L(图 1);而加入 3
mmol /L 抑制剂 NAC 可以显著提高细胞活性。
20 μmol /L和 40 μmol /L的土木香内酯诱导 Hela 细
胞后，荧光显微镜可以观察到 Hela 细胞核出现典型
的核固缩及细胞凋亡核碎裂形态(图 2 箭头所示)。
以上说明异土木香内酯诱导 Hela 细胞凋亡与 ＲOS
的产生相关。
2. 2 异土木香内酯可诱导 Hela 细胞凋亡且抑制细
胞生长于 S期 细胞凋亡和周期是反映细胞抑制生
长的两个主要条件。数据表明，用 20 μmol /L 和 40
μmol /L终浓度异土木香内酯处理 Hela 细胞 24 h
后，与对照组(2. 31±0. 56)(图 3A1)相比，细胞凋亡
率明显增加，分别为 19. 56±3. 41(图 3A2)、48. 72±
4. 25(图 3A3)，P＜0. 05，可诱导 Hela 细胞凋亡，抑
制 Hela细胞生长;而加入抑制剂 NAC 预处理后，再
0加入异土木香内酯，可以有效地抑制 Hela 细胞凋
亡(4. 35±1. 24)。数据也表明，异土木香内酯以浓
度依赖抑制 Hela 细胞生长于 S 期。20 μmol /L 和
40 μmol /L终浓度异土木香内酯处理 Hela细胞 24 h
图 1 MTT 方法测定不同浓度异土木香内酯对 Hela 细胞
活性的影响
Fig．1 MTT assay were used to test effect of different con-
centrations of isoalantolactone (IALT) on Hela
cell viability
Note:Compared with control group，* . P＜0. 05，＊＊. P＜0. 01.
图 2 荧光显微镜和 Hoechst 33258 染色观察异土木香内
酯对 Hela细胞诱导凋亡的细胞核变化
Fig． 2 Fluorescence microscope and Hoechst 33258
staining were used to observe nuclear morpho-
logical changes of apoptosis induced by isoalan-
tolactone in Hela cells
Note:A. Control;B. 20 μmol /L;C. 40 μmol /L. Scale bar = 20 μmol /L.
·9641·于秀艳等 异土木香内酯通过介导 ＲOS产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌 Hela细胞凋亡 第 10期
图 3 流式细胞仪测定异土木香内酯诱导 Hela 细胞的凋
亡率
Fig． 3 Flow cytometry analysis of apoptosis induced by
isoalantolactone(IALT)in Hela cells
Note:A1. Control;A2. 20 μmol /L;A3. 40 μmol /L;A4. 40 μmol /L
isoalantolactone+ 3 mmol /L NAC;B. Data are showed with x ± s
(n= 3). Compared with control group，* . P＜0. 05.
图 4 流式细胞仪测定异土木香内酯诱导 Hela细胞凋亡各
周期分布
Fig．4 Flow cytometry analysis of cell cycle phase distribu-
tion induced by isoalantolactone (IALT ) in
Hela cells
Note:A. Control;B. 20 μmol /L;C. 40 μmol /L;D. Data are showed with
x±s(n= 3). Compared with control group，* . P＜0. 05.
后，S 期细胞数(P ＜ 0. 05)从 18. 43 ± 1. 34 增加到
28. 89±1. 73 和 41. 53±1. 78;而相应的 G0 /G1 期细
胞数(P＞0. 05)从 58. 18±3. 63 变化到 58. 33±1. 72
和 59. 36±0. 97，G2 /M期细胞数(P＜0. 05)从 23. 5±
1. 71递减到 15. 16±0. 78 和 5. 16±0. 63(图 4)。可
以看出异土木香内酯可诱导 Hela 细胞凋亡依赖于
ＲOS的产生。
2. 3 异土木香内酯可使 Hela 细胞内 ＲOS 生成增
加 Hela细胞内 ＲOS 水平通过 DCFH-DA 染料来
测定。数据表明(图 5)，20 μmol /L 和 40 μmol /L
终浓度异土木香内酯处理 Hela 细胞 24 h 后，Hela
细胞内 ＲOS 水平与对照组相比有不同程度的增
加，从 2. 02± 0. 47 分别增加到 20. 63 ± 3. 45 和
25. 14±4. 70，P＜0. 05;而加入抑制剂 NAC 预处理
后，再加入异土木香内酯可以明显减少 ＲOS 的
产生。
2. 4 异土木香内酯可使 Hela 细胞内 MMP 水平
降低 为了测定异土木香内酯对线粒体细胞膜的损
图 5 流式细胞仪测定异土木香内酯诱导 Hela 细胞内
ＲOS的生成
Fig．5 Flow cytometry analysis of ＲOS generation induced
by isoalantolactone(IALT)in Hela cells
Note:A1. Control;A2. 20 μmol /L;A3. 40 μmol /L;A4. 40 μmol /L
isoalantolactone+ 3 mmol /L NAC;B. Data are showed with x± s
(n= 3). Compared with control group，* . P＜0. 05.
图 6 流式细胞仪测定异土木香内酯诱导 Hela细胞 MMP
水平变化
Fig．6 Flow cytometry analysis of changes of mitochond-
rial membrane potential induced by
isoalantolactone(IALT)in Hela cells
Note:A1. Control;A2. 20 μmol /L;A3. 40 μmol /L;A4. 40 μmol /L
isoalantolactone+ 3 mmol /L NAC;B. Data are showed with x± s
(n= 3). Compared with control group，* . P＜0. 05.
伤，我们使用罗丹明 123荧光染色检测MMP 水平变
化。数据表明(图 6)，20 μmol /L和 40 μmol /L终浓
度异土木香内酯处理 Hela 细胞 24 h 后，Hela 细胞
MMP 水平与对照组相比有不同程度的降低，从
(93. 14± 0. 57)%分别降低到(80. 17 ± 3. 69)%和
(67. 32±4. 41)%，P＜0. 05;而加入抑制剂 NAC 预处
理后，再加入异土木香内酯可以明显提升 MMP
水平。
2. 5 异土木香内酯诱导 Hela细胞凋亡对相关蛋白
的影响 为了进一步测定异土木香内酯对 Hela 细
胞凋亡的影响，我们从蛋白水平测定凋亡相关蛋白
Bax、Bcl-2 和 Caspase-3 的变化。如图 6A 所示，20
μmol /L和 40 μmol /L 终浓度异土木香内酯处理
Hela细胞 24 h 后，Bax 蛋白表达水平明显增加而
Bcl-2蛋白表达水平明显降低，同时 Caspase-3 蛋白
也被活化，细胞色素 C释放增加(P＜0. 05)。
·0741· 中国免疫学杂志 2016年第 32卷
图 7 免疫印迹实验测定异土木香内酯诱导 Hela细胞凋亡
的蛋白表达
Fig．7 Protein expressions of apoptosis induced by isoalan-
tolactone(IALT) in Hela cells were detected by
Western blot
Note:A. The protein expressions of Bcl-2，Bax，Caspase-3，Cytochrome
C and β-actin;B. Data are showed with x± s(n = 3)． Compared
with control group，* . P＜0. 05.
3 讨论
宫颈癌作为全球排名第二位的女性恶性肿
瘤［12］，其主要的致病因素是高危 HPV 持续感染导
致的上皮内瘤样病变［13］。研究宫颈癌分子靶点的
治疗药物仍然是当前一大热点，而天然提取物用于
抗肿瘤治疗的研究也越来越广泛［14］。近年来发现
的许多天然药物单体化合物如土木香内酯和表没食
子儿茶素没食子酸酯等都具有良好的抗肿瘤活
性［15，16］。异土木香内酯是从系菊科旋覆花属植物
土木香中分离出来的倍半萜内酯类化合物单体，也
具有良好的抗肿瘤活性［17］，在此，我们主要研究其
诱导 Hela细胞凋亡的初步机制。凋亡一直是肿瘤
治疗研究的热点话题［14］。从我们的实验可知，异土
木香内酯抑制 Hela细胞增殖呈明显的浓度依赖性。
Hoechst 33258 核染后，在荧光显微镜下观察到明显
的细胞核固缩及核碎裂形态。流式细胞仪检测同样
显示，异土木香内酯浓度增加，Hela 细胞凋亡率也
增加，也具有浓度依赖性;通过测定细胞周期发现，
异土木香内酯可以抑制 Hela 细胞生长于细胞周期
S 期，说明异土木香内酯是通过抑制 Hela 细胞内
DNA合成而阻滞细胞生长;且异土木香内酯诱导的
Hela细胞凋亡伴随着 ＲOS 产生。ＲOS 过多可产生
氧化应激，可使线粒体膜脂质过氧化、膜蛋白氧化和
DNA损伤，对线粒体膜产生损害，导致线粒体通透
性增加，从而使线粒体内细胞色素 C 释放增加，最
终导致细胞死亡［15］。我们也发现异土木香内酯可
以使 Hela细胞线粒体膜电位水平降低，同时也检测
到大量细胞色素 C 从线粒体内释放到细胞质中。
Caspase-3作为 Caspase 家族成员在凋亡中的关键
酶，异土木香内酯诱导的 Hela 细胞凋亡也被激活，
出现 cleaved Caspase蛋白。ＲOS作为第二信使进入
线粒体，可以激活线粒体内级联反应中蛋白 Bcl-2
家族［17］。Bcl-2家族包括抗凋亡蛋白如 Bcl-2 和促
凋亡蛋白如 Bax等蛋白，在线粒体外膜稳定性和凋
亡调节中发挥重要作用，当 Bcl-2 /Bax 蛋白比例失
调后，可导致细胞凋亡［18］。本研究也发现，异土木
香内酯诱导 Hela 细胞凋亡后，Bcl-2 蛋白表达明显
下降，而 Bax蛋白表达明显升高。
综上所述，ＲOS 的产生、细胞膜电位的改变和
细胞色素 C 的释放是线粒体损伤凋亡的特征性改
变，由此可见异土木香内酯是通过介导 ＲOS 产生和
线粒体损伤来诱导 Hela细胞凋亡的，同时伴随着上
调 Bax 蛋白表达而下调 Bcl-2 蛋白表达，激活
Caspase-3蛋白酶。异土木香内酯对其他肿瘤的作
用及更多机制和体内药理作用有待进一步研究，有
望开发成为以线粒体凋亡途径为靶点的新型抗肿
瘤药。
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·1741·于秀艳等 异土木香内酯通过介导 ＲOS产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌 Hela细胞凋亡 第 10期
MMP /TIMPs，上皮细胞向间质转化(EMT)也是肺纤
维化的显著特征;在 EMT 过程中，细胞失去胞间接
合蛋白 E-cadherin并表达 α-SMA和 vimentin等间质
标志。本实验中肺组织纤维化相关因子 TGF-β1 、
MMP9和 TIMP1 的 mＲNA 水平表达量在进行 CLP
处理第 5天时升高较为显著，到第 10天时有所下降
但仍高于 sham 组，而给予 HSM 治疗后均有相应改
善。免疫组化结果也表明 α-SMA和 fibronectin在进
行 CLP 处理第 5 天时升高较为显著，到第 10 天时
有所下降但仍高于 sham 组，给予 HSM 提取物治疗
后小鼠肺部 α-SMA 和 fibronectin 表达均下降，说明
冬虫夏草菌丝体具有抗肺纤维化的功能。
本研究结果证实冬虫夏草菌丝体具有抑制炎症
及平衡免疫缓解肺纤维化的功能，且这种作用可能
是通过抑制炎性因子及 Treg 细胞功能达到的;对此
进行进一步研究将有利于阐明其抗纤维化的作用机
制，为寻找抗肺纤维化药物提供新视角。
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［收稿 2016-03-02 修回 2016-04-25］
(编辑 张晓舟)
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［收稿 2016-05-29］
(编辑 张晓舟)
·6741· 中国免疫学杂志 2016年第 32卷