全 文 ：黄芪 !三七促进骨髓干细胞体外转化并扩增血管内皮
前体细胞k∞°≤l作用的研究
杨博华 3 o朱陵群 o张娟子 o牛福玲 o崔 巍
k北京中医药大学 附属东直门医院 o北京 tsszssl
≈摘要  目的 }探讨黄芪 !三七对骨髓干细胞体外转化并扩增 ∞°≤ 的促进作用及其可能的机制 ∀方法 }常规采
集下肢缺血患者骨髓血 o密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞 o不同条件下贴壁扩增细胞 ∀镜下细胞的形态学观
察 o流式细胞仪检测 ≤⁄nvw细胞的百分比 ∀结果 }细胞呈梭形 o束状排列 o间杂有少量圆形细胞 ∀与对照组相比 o黄芪
中 !低剂量组 o三七中 !高剂量组 ≤⁄nvw细胞的百分比均显著增加 ∀结论 }黄芪 !三七能促进 ∞°≤ 的转化和增殖 ∀
≈关键词  黄芪 ~三七 ~骨髓干细胞 ~≤⁄nvw细胞 ~血管内皮前体细胞
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxluu2tzyt2sv
≈收稿日期  ussx2sx2tx
≈基金项目  国家中医药管理局科研基金资助项目 ksw2
sx°sul
≈通讯作者  3杨博华 oר¯ }kstsl{wstvu|u o∞2°¤¬¯}¼¤±ª¥xt|t ƒ
¶¬±¤1¦²°
自体骨髓干细胞移植治疗肢体缺血性疾病是当
今研究的热点 o但患者往往因为年龄 !糖尿病 !高血
脂等因素 o造成体内骨髓干细胞数量相对减少 !向血
管内皮前体细胞k∞°≤l分化能力差以及机体不能为
移植的细胞提供满意的增殖分化环境等问题 ∀中药
可通过对相关细胞因子的影响 o增加单个核细胞的
数量及其免疫活性 o并通过诱导 …细胞产生抗体发
挥免疫激活作用 o使血管再生细胞因子的数量增
加≈t  o较好的解决这一问题 ∀因此 o作者以中医气血
相关 !益气活血理论为基础 o选用益气活血药物k黄
芪 !三七l o研究其对体外培养的骨髓干细胞向 ∞°≤
分化扩增的促进作用 o为临床自体骨髓干细胞移植
联合中药治疗下肢慢性缺血性疾病提供实验依据 o
并为进一步研究中药现代化及其促进 ∞°≤ 增生的
机制奠定基础 ∀
1 材料
111 药物 黄芪注射液k成都地奥九泓制药厂 o相
当于生药材 u ª#°pt o批号 svswsswl !血塞通粉针剂
k主要成分三七总皂苷 o黑龙江珍宝岛制药有限公
司 o每支 uss °ªo批号 usswsuszl分别稀释成高 !中 !
低剂量 ow ε 冰箱保存 ∀
112 试剂 密度 t1szz的淋巴细胞分离液k中国医
学科学院血液学研究所l o⁄∞ 培养基kŠŒ…≤’ 公
司l o胎牛血清k北京元亨圣马生物技术研究所l o胰
蛋白酶k≥¬ª°¤公司l o≤⁄vw抗体k…⁄公司l
113 仪器 德国 ‹ µ¨¤¨ ∏¶¦¨¯¯ 型二氧化碳培养箱 ~
北京半导体设备仪器厂 ×tvss 型超净工作台 ~
’≠ °˜≥ Œ× p u 型倒置相差显微镜 ~德国
…Œ’ƒ˜Š∞p u{• ≥ 型高速离心机 ~美国 ƒ„≤≥ ≤¤¯¬¥∏µ
流式细胞仪 ∀
114 细胞 东直门医院血管外科自体骨髓干细胞移
植术患者骨髓血 o密度梯度法分离骨髓单个核细胞 ∀
2 方法
211 骨髓单个核细胞的分离 !接种及体外扩增
常规采集骨髓血后 o小心叠加于淋巴细胞分离液上 o
密度梯度法分离单个核细胞 ∀调整细胞浓度 o接种
于培养瓶中 o加入完全培养基 o置培养箱中 o隔日半
量换液 ∀细胞贴壁并达 |s h以上融合后 o以消化液
消化 o完全培养基重悬 o调整细胞浓度 o重新接种于
培养瓶中 ∀传代 t ∗ u次后 o将细胞接种于平皿中 ∀
212 分组 u种药物各分为高 !中 !低 v个剂量组 o
并设立空白对照组k黄芪注射液高 !中 !低剂量浓度
分别为 vy otu ow ª#pt o血塞通粉针剂高 !中 !低剂量
分别为三七总皂苷 uss otss oxs °ª#ptl ∀
213 形态学观察 培养 v周后 o以倒置显微镜观
察细胞形态并拍照 ∀
214 流式细胞仪检 ≤⁄nvw细胞 培养 v周后的细
胞 o胰酶消化后 o离心 ot sss µ#°¬±pt ots °¬± ≅ u次 o
加入 ≤⁄vw抗体 o避光染色 s1x «o流式细胞仪检测 ∀
#tyzt#
第 vs卷第 uu期
ussx年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ uu
‘²√¨ °¥¨µoussx
215 统计学处理 采用 ≥°≥≥ts1s统计软件单因素
方差分析 o所有数据均以 cξ ? σ表示 ∀
3 结果
311 细胞形态学观察 镜下观察 o可见细胞贴壁生
长旺盛 o呈梭形 o形状与内皮细胞相似 o束状排列 o间
杂有少量圆形细胞k图 tl ∀
图 t 骨髓干细胞体外培养形态k ≅ wl
骨髓干细胞体外向内皮前体细胞定向培养过程中细胞形态生长旺
的梭形细胞 o形状与内皮细胞相似 o排列成束状 o其间有部分圆形细胞
312 流式细胞仪检测 ≤⁄nvw细胞 与对照组比 o黄
芪低中剂量组 ≤⁄nvw百分比显著增加k Π  s1sx 及
Π s1st) ,而高剂量组的增加无显著差异 ( Π 
s1sx o表 tl ~三七中高剂量组 ≤⁄nvw百分比显著增加
kΠ s1stl o而低剂量组较对照组偏低但不具统计
学意义k Ё s1sx o表 tl ∀
表 t 黄芪 !三七 ≤⁄nvw细胞百分比
组别 ν 剂量rª#pt 最低值 最高值 cξ ? σ
空白对照组 z sqyx uquy tqvywv ? sqwz{ y
黄芪组 { w tqxx vqvy uqwvz x ? sqx|t |tl
{ tu tqwu yqzw vqwz{ { ? tqyyx sul
{ vy sqwz tq|x tqwxx s ? sqwx| w
三七组 y sqsx sqyu tqvz sq{{s s ? sqvvw w
y sqts tqt| xquz wqsxy v ? tqu{z yul
y squs wq|z |qvu zqsyt z ? tqyww |ul
注 }与对照组相比tl Π s1sx oul Π s1st
4 讨论
本研究从细胞的形态看 o贴壁细胞中绝大多数
为梭形细胞 o形态与内皮细胞相似 o且排列成束状 o
显示这些细胞具有许多内皮细胞的形态和生长特
性 ∀
与对照组相比 o黄芪低中剂量组 ≤⁄nvw百分比显
著增加k Π s1sx及 Π s1 stl o而高剂量组的增加
无显著差异k Ё s1sxl ~三七中高剂量组 ≤⁄nvw百分
比显著增加k Π s1stl o而低剂量组较对照组偏低 o
但不具统计学意义k Ё s1sxl ∀可见 o黄芪中剂量
组 !三七高剂量组促进 ≤⁄nvw细胞增殖的作用最好 o
且整体看来三七组的促进作用更为明显 ∀研究发
现 o功能性的 ∞°≤ 发源于骨髓内的单个核细胞≈u  o
主要集中在 ≤⁄nvw细胞中≈v ow  o因此上面的结果也反
映出黄芪 !三七对 ∞°≤的促进作用 ∀
∞°≤可进一步分化为成熟的血管内皮细胞 o从
而生成大量的新生小血管以建立侧枝循环 ∀本研究
初步证明益气活血药物k黄芪 !三七l能够促进骨髓
单个核细胞向 ∞°≤的转化与增殖 ∀
≈参考文献 
≈t  张 英 o贺新怀 o王盛民 q细胞因子在造血干细胞移植中作用
及中药的调节效应 q陕西中医学院学报 oussv ouyktl }xt q
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§²·«¨ ¬¯¤¯ ¦¨¯¯¶©²µ¤±ª¬²ª¨ ±¨ ¶¬¶q Σχιενχε , t||z ouzx }|yw q
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Εφφεχτσ οφ Αστραγαλυσ µεµβραναχευσ ανδ Παναξ νοτογινσενγ ον τηετρανσφορµατιον
οφ βονε µαρροω στεµ χελλσ ανδ προλιφερατιον οφ ΕΠΧ ιν ϖιτρο
≠„‘Š …²2«∏¤o‹˜ ¬±ª2 ∏´± o‹„‘Š ∏¤±2½¬o‘Œ˜ ƒ∏2¯¬±ªo≤˜Œ • ¬¨
( ∆ονγζηιµεν Ηοσπιταλ, Βειϕινγ Υνιϖερσιτψ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Βειϕινγ tsszss , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨ ·«¨ ©¨©¨¦·¤±§·«¨ ³²¶¶¬¥¯¨ ° ¦¨«¤±¬¶° ∏±§¨µ¯¼¬±ª·«¨ ³µ²°²·¬²±¤¯ ©¨©¨ ¦·²© Αστραγαλυσ µεµ2
βραναχευσ ¤±§ Παναξ νοτογινσενγ ²±·«¨ ·µ¤±¶©²µ°¤·¬²± ²©¥²±¨ ±¤µµ²º ¶·¨° ¦¨¯¯¶¤±§³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ²© ∞°≤ q Μετηοδ : ׫¨ °¤µµ²º ¥¯²²§ º¤¶
¦²¯¯¨ ¦·¨§¬±·«¨ ³¤·¬¨±·¶º¬·«¬¶¦«¨ °¬¤²© ²¯º µ¨¯¬°¥¶¤±§…2‘≤¶º µ¨¨ ¶¨³¤µ¤·¨§¤±§³µ²¯¬©¨µ¤·¨§∏±§¨µ§¬©©¨µ¨±·¦²±§¬·¬²±¶q Α. µορπηολογιχ
²¥¶¨µ√¤·¬²± º¤¶³¨µ©²µ° §¨¤±§·«¨ µ¤·¬²²© ≤⁄nvw ¦¨¯¯¶º¤¶° ¤¨¶∏µ¨§q Ρεσυλτ : ׫¨ ¶«∏·¯¨¶«¤³¨ §¦¨¯¯¶ ¬¯±¨ §∏³¤¶¥∏±¦«¨¶º¬·«¶¨√ µ¨¤¯ µ²∏±§
¦¨¯¯¶¶¦¤·¨µ¨§q׫¨ µ¤·¬²²©≤⁄nvw ¦¨¯¯¶º¤¶¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼¬±¦µ¨¤¶¨§¬±ªµ²∏³¶·µ¨¤·¨§º¬·«° §¨¬∏° k Π s1stl ¤±§ ²¯º µ¨k Π s1sxl §²¶¤ª¨¶²©
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第 vs卷第 uu期
ussx年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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‘²√¨ °¥¨µoussx
Α. µεµβραναχευσ ¤±§ ° §¨¬∏° k Π s1stl ¤±§«¬ª«§²¶¤ª¨¶k Π s1stl ²© Π. νοτογινσενγ µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼ ¤¶¦²°³¤µ¨§ º¬·«¦²±·µ²¯ ªµ²∏³q
Χονχλυσιον : Α. µεµβραναχευσ ¤±§ Π. νοτογινσενγ ¦¤± ³µ²°²·¨·«¨ ·µ¤±¶©²µ°¤·¬²± ¤±§³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ²© ∞°≤ q
[ Κεψ ωορδσ] Αστραγαλυσ µεµβραναχευσ~ Παναξ µοτογινσενγ ~¥²±¨ °¤µµ²º ¶·¨° ¦¨¯¯ ~ ≤⁄nvw ¦¨¯¯ ~ ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ³µ²ª¨ ±¬·²µ¦¨¯¯k∞°≤l
≈责任编辑 方文贤 
≈收稿日期  ussx2st2ts
≈通讯作者  3肖凤英 oר¯ }ksuzlyuuuxy{s o∞2°¤¬¯}¬¬¤²©¨ ±ª¼¬±ª¯«
ƒ ¶¬±¤q¦²° q¦±
马齿苋及其不同部位对高脂血清损伤脂肪
细胞分泌 בƒ2Α及 Œ2y的影响
肖凤英 3 o陆付耳 o徐丽君
k华中科技大学 同济医学院 附属同济医院 o湖北 武汉 wvssvsl
≈摘要  目的 }在体外探讨马齿苋不同部位含药血清对高脂血清损伤脂肪细胞分泌肿瘤坏死因子kבƒ2Αl及
白介素2ykŒ2yl的影响 ∀方法 }建立悬浮脂肪细胞模型 o分为对照组及不同浓度载药血清组 o以 ××比色法测定各
组细胞存活率 o以放射免疫法测定有效浓度组脂肪细胞分泌 בƒ2Α及 Œ2y的浓度变化 ∀结果 }××试验结果表明 o
正常血清组细胞存活率明显高于高脂血清组k Π s1sxl ∀与高脂血清组比 o不同剂量高脂血清加载药血清组中 o载
药血清浓度为 ws h和 us h的组别细胞存活率明显提高k Π s1sxl ∀与正常血清组比 o高脂血清组 בƒ2Α及 Œ2y浓
度明显增高k Π s1stl ∀与高脂血清组比较 o除马齿苋低剂量 us h组 o其余各高脂血清加载药血清组均能明显降低
בƒ2Α浓度k Π s1sx或 Π s1stl ~各剂量高脂血清加载药血清 ws h 浓度组和马齿苋不饱和脂肪酸k ≥l高剂量
us h组均能明显降低 Œ2y浓度k Π s1sx或 Π s1stl ∀结论 }马齿苋及其不同部位载药血清作用于高脂血清损伤
的脂肪细胞 o能显著提高脂肪细胞的存活率 o并能降低脂肪细胞 בƒ2Α及 Œ2y的分泌 o这在一定程度上证实了马齿
苋及其不同部位可以在体外细胞水平上改善脂代谢紊乱 ∀
≈关键词  马齿苋 ~脂肪细胞 ~肿瘤坏死因子kבƒ2Αl ~白介素2ykŒ2yl
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxluu2tzyv2sw
前期工作中 o已对马齿苋及其不同部位对 u型
糖尿病大鼠脂代谢紊乱的影响及其机制作出了初步
探讨≈t  ∀本实验采用血清药理学的方法 o进一步从
细胞水平观察马齿苋及其不同部位含药血清对高脂
血清损伤脂肪细胞分泌 בƒ2Α及 Œ2y的影响 o从而
为多方面阐明该药改善脂代谢紊乱疗效的确切性及
其机制 o开发高活性的降糖调脂及防治相关疾病的
中药单体提供实验依据 ∀
1 材料与方法
111 药物 马齿苋干品购自武汉国药集团 o并由
湖北中医学院鉴定为 Παρτυλαχε ολεραχεα 1 o水煎浓缩
成含生药 u1s °ª#°pt的煎剂 o置 w ε 冰箱保存备
用 ∀马齿苋黄酮k ‹l部位及马齿苋不饱和脂肪酸
k≥l部位由本研究所分离 !纯化 ∀多烯康胶囊k天
津市中央药业有限公司 o每丸 wxs °ªo含 Ξ2v脂肪酸
vtx °ªl o临用前抽取胶囊内药液 o加入三梨醇甲酯 o
在 ys ε 水浴中边搅拌边加入蒸馏水稀释成含 Ξ2v
脂肪酸 tw1|y °ª#°pt !三梨醇甲酯 x h的乳剂 ∀胆
固醇粉k河南省郑州利伟生物有限公司l o临用前加
入食用植物油 o在 ys ε 水浴中搅拌使其溶解为 u1s
ª#°pt的乳剂 ∀
112 主要试剂与仪器 ⁄∞rƒtu培养粉 !胎牛血
清及胰蛋白酶kŠŒ…≤’ 公司l o××k≥ŒŠ„公司l o其
余试剂均为国产分析纯 ∀ בƒ2Α及 Œ2y放射免疫测
定试剂盒k北京生物研究所l ∀ ≤’u细胞培养箱k美
国 ƒ²µ°¤公司l o超净工作台k中国苏州实验设备仪
器厂l o倒置相差显微镜k日本 ’¯ ¼°³∏¶公司l o电热
恒温干燥箱k中国上海l o恒温循环水浴锅k美国
Šµ¤±·公司l o低温离心机k美国 ∞³³¨ ±§²µ©公司l ∀
113 含药血清的制备 取 •¬¶·¤µ大鼠 uss ∗ uxs ª
#vyzt#
第 vs卷第 uu期
ussx年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs oŒ¶¶∏¨ uu
‘²√¨ °¥¨µoussx