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Protective effects of Huanglian Jiedu decoction on vascular endothelial function in type 2 diabetic rats

黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠血管内皮功能的影响



全 文 :黄连解毒汤对 u型糖尿病大鼠血管内皮功能的影响
肖雁凌 o陆付耳 3 o徐丽君 o冷三华 o王开富
kt1 华中科技大学 同济医学院 附属同济医院 o湖北 武汉 wvssvs ~
u1 华中科技大学 同济医学院 中西医结合研究所 o湖北 武汉 wvssvsl
≈摘要  目的 }通过观察黄连解毒汤对 u型糖尿病大鼠血管内皮功能的影响 o探讨黄连解毒汤对 u型糖尿病血
管并发症的防治意义及其机制 ∀方法 }采用小剂量链脲佐菌尾静脉注射加高糖高热量饲料喂养的方法建立 u型糖
尿病大鼠模型 o将模型动物随机分为模型组 !黄连解毒汤组 !阿司匹林组 o另设正常对照组 ∀药物干预治疗 |周后 o
各组动物进行口服糖耐量实验k’Š××l ~ts周后 o观察各组动物体重变化并检测各组空腹血糖kƒ…Šl !总胆固醇
k×≤l !甘油三酯k׊l !高密度脂蛋白2胆固醇k‹⁄2≤l !空腹血清胰岛素kƒŒ‘≥l值及血清一氧化氮k‘’l !血浆内皮素
k∞×l !血管紧张素 µk„±ªµl o√²± • ¬¯¯ ¥¨µ¤±§因子k√ • ƒl的表达水平 ∀结果 }黄连解毒汤组 ’Š×× 较模型组改善 o体
重 o×≤ o׊ o∞×值均低于模型组k Π s1sxl o ‹⁄2≤ 和 ‘’值高于模型组k Π s1sxl ~ƒ…Š oƒŒ‘≥ o„±ªµ o√• ƒ值均显著
低于模型组k Π s1stl ∀与阿司匹林组相比 o黄连解毒汤组 ƒ…Š值显著降低k Π s1sxl o׊ o‹⁄2≤ o‘’ o„±ªµ o√ • ƒ
的改善情况优于阿司匹林组 o但无显著性差异k Ё s1sxl ∀结论 }黄连解毒汤对 u型糖尿病早期出现的血管内皮损
伤有良好的保护作用 o机制与其降糖 !降脂 !抗炎 !改善胰岛素抵抗及内皮依赖性的舒张血管等作用有关 ∀
≈关键词  黄连解毒汤 ~u型糖尿病 ~血管内皮
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussxluu2tzyz2sw
≈收稿日期  ussw2tt2ts
≈基金项目  国家自然科学基金资助课题kvsvzt{tyl
≈通讯作者  3 陆付耳 oר¯ }ksuzl{vyyuxzz o∞2°¤¬¯}©¨ ∏¯ƒ ·­«q·­2
°∏q¨§∏q¦±
内皮功能紊乱在 u型糖尿病早期就发生 o它既
是糖尿病血管并发症发生的前兆 o也是其产生的主
要病理变化≈t  ∀近年研究表明 o高糖 !高脂 !高胰岛
素环境及氧化应激会导致血管内皮受损 o血液中的
一系列生物分子和细胞因子调控失衡从而产生各种
血管并发症 ∀有临床和实验研究表明 o黄连解毒汤
对 u型糖尿病有确切的降低血糖 !血脂和改善胰岛
素抵抗作用 o有研究也曾证实其中的主要有效成分
盐酸小檗碱有抗过氧化≈u 及内皮依赖性舒张血管≈v 
等作用 o可见 o黄连解毒汤在治疗 u型糖尿病方面有
良好的应用前景 ∀本实验采用注射小剂量链脲佐菌
加高糖 !高脂饮食诱导 u型糖尿病大鼠模型 o应用放
射免疫分析及免疫浊度等方法测量大鼠血液中各种
内皮相关因子的表达水平 o以观察黄连解毒汤对 u
型糖尿病大鼠血管内皮功能的影响 o进一步探讨黄
连解毒汤治疗 u型糖尿病的药理机制 ∀
1 材料
111 动物 选用健康清洁级雄性 •¬¶·¤µ大鼠 o体
重 t{s ∗ uus ªo由华中科技大学同济医学院动物学
部提供k许可证编号 }׍„2ussv2uwzl ∀
112 药物 黄连解毒汤由黄连 !黄芩 !黄柏 !栀子
按 vΒuΒuΒv比例组成 ∀其药材均购于武汉同济医院
药剂科 o按文献≈w 方法煎煮取汁 o浓缩成清膏kt ª
清膏相当于 t1x ª黄连解毒汤生药l ∀取清膏送武
汉药品检验所以薄层扫描方法测得其所含盐酸小檗
碱为 t{ °ª#ªpt ~黄连解毒清膏临用前以含 s1x h羧
甲基纤维素的 °…≥溶液k³‹ z1wl配成含盐酸小檗碱
vz1w ª#pt的混悬液 ~肠溶阿司匹林片为石家庄神
威药业公司生产k批号 usswsus|l o配制成含阿司匹
林 uw ª#pt混悬液 ∀
113 试剂及仪器 检测 ×≤ o׊ o‹⁄2≤ 及 ƒ…Š试
剂盒均为温州东瓯生物工程有限公司产品 ∀ƒŒ‘≥ o
∞× o„±ªµ放免试剂盒为北京北方生物研究所产品 ∀
√• ƒ检测试剂盒为上海太阳生物技术公司产品 ∀
‘’检测试剂盒为南京建成生物有限公司产品 ∀链
脲佐菌素为 ≥¬ª°¤公司产品 ∀检测仪器为 Šƒ p
⁄{ss型半自动化生化分析仪 ∀
2 方法
211 动物分组及处理 除作口服葡萄糖耐量试验
k’Š××l及处死前 tu «须禁食外 o大鼠自由进食 !饮
#zyzt#
第 vs卷第 uu期
ussx年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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‘²√¨ °¥¨µoussx
水 ∀随机取 ws只大鼠按 vs °ª#®ªpt体重剂量尾静
脉注射链脲佐菌素后 o用普通饲料喂养 u周 o高糖 !
高脂饲料喂养 t周 o然后作 ’Š××试验 o筛选糖耐量
异常者共 vt只随机分组 }黄连解毒汤组 |只 o按 s1x
°#tss ªpt体重≈x 剂量给大鼠灌服上述黄连解毒清
膏混悬液 o每日 | }vs ∗ ts }vs灌胃 t次k以下各组灌
胃药液容积及灌胃时间与此同l ~阿司匹林组 tt只 o
灌上述阿司匹林混悬液 ~模型组 tt只 o灌含 s1x h羧
甲基纤维素的 °…≥溶液 ∀以上 v组在治疗期间喂高
脂 !高糖饮食k蔗糖Β猪油Β奶粉Β鸡蛋Β普通饲料 €
vsΒusΒwΒuΒyvl ∀阿司匹林组剂量根据文献≈y  o每
日灌阿司匹林 tus °ª#®ªpt ~黄连解毒汤组用药剂量
是根据临床成人用药剂量 k盐酸小檗碱 t1{ ª#
§ptl≈x 和转换系数计算而来≈z  o灌胃药液所含盐酸
小檗碱量为 t{z °ª#®ªpt o即相当于 ts1w ª#®ªpt的
黄连解毒汤生药清膏 ∀另 |只大鼠不作任何处理 o
以普通饲料喂养 o作为正常对照组 ∀
212 ’Š××实验 大鼠模型筛选及治疗 |周后均行
’Š××实验 ∀动物禁食 tu «后 o以 ux h葡萄糖水按
u1x ª#®ªpt剂量灌胃 ∀分别于灌胃前及灌胃后 vs o
ys otus °¬±剪尾取血 o采用葡萄糖氧化酶法 o用强生
公司血糖仪及试纸测定血糖k…Šl ∀
213 指标检测 大鼠治疗 ts周后 o用 wx °ª#®ªpt
戊巴比妥钠腹腔注射麻醉 o腹主动脉取血并处死动
物 ∀每只大鼠约可以取血 { ∗ ts °用于检测不同
指标 ∀处理方法如下 }v °全血 vs °¬±内分离血
清 o分装入 ∞³³¨ ±§²µ©管 op us ε 冻存 o用于检测葡萄
糖 !血脂 !胰岛素及 ‘’ ~u °全血注入含 ts h ∞⁄ׄ
二钠 vs ˏ和抑肽酶 us ˏ的离心管中 o混匀 ow ε o
v sss µ#°¬±pt o离心 ts °¬±o分离血浆 o密封 p us ε
冻存 o用于检测 ∞× ~u °全血注入含 vss °°²¯#pt
∞⁄ׄ us ˏovus °°²¯ #pt二巯基丙醇 ts ˏovws
°°²¯#pt{2羟基喹啉硫酸盐 us ˏ的离心管中 o上
下颠倒混匀 o冰水浴 t ∗ u «后取出 ow ε ou xss µ#
°¬±pt o离心 z °¬±o分离血浆 o密封 p us ε 冻存 o用于
检测 „±ªµ ~剩余全血用 ts| °°²¯ #pt枸橼酸钠抗
凝分离血浆 o用于检测 √• ƒ ∀ƒŒ‘≥ o∞×及 „±ªµ均由
同济医院核医学科采用放免法检测 ~×≤ o׊采用酶
学方法检测 o‹⁄2≤ 采用镁r钨酸沉淀法检测 o血清
‘’含量测定采用硝酸还原酶法 o血浆 √• ƒ 含量测
定采用免疫浊度法 ∀
214 统计学方法 实验数据用 cξ ? σ表示 o采用
≥°≥≥ tt1x软件处理 o用 ’±¨ 2 • ¤¼ „‘’∂ „ k单因素方
差分析l方法 o方差齐性用 ƒ¬¶«¨µ≥⁄检验 o方差不
齐用 פ°«¤±¨ . ¶×u检验 ∀
3 结果
311 黄连解毒汤对大鼠体重及基础生化指标影响
31111 药物干预前后各组体重比较k见表 tl 治疗
前各组体重无明显差异k Ё s1sxl ∀黄连解毒汤组
和阿司匹林组大鼠经药物干预 ts周后精神状态良
好 o神态安详 o较温顺 o毛发较润泽 ∀模型组大鼠精
神萎靡 !易惊易怒 !毛发稀落欠光泽 o与其他 v组相
比 o体重增加明显k Π s1sxl o糖尿病症状也较重 ∀
表 t 各组大鼠治疗前后体重比较kcξ ? σl
组别
剂量
rª#®ªpt
ν 体重rª治疗前 治疗后
正常组 p | vux qy ? { qxz wvv qw ? tt qsvul
模型组 p tt vwx qs ? tu q|t w|x qx ? tv q{wvl
黄连解毒汤组 ts1w | vwz q{ ? ts q{x wvx qv ? ty qvwul
阿司匹林组 s1tu tt vu{ qy ? tu qyx wxu qs ? tz q{zul
注 }与模型组相比tl Π  s qsx oul Π  s qst ~与正常组相比
vl Π s qsx owl Π s qstk表 u ∗ w同l
31112 药物干预 |周后各组大鼠 ’Š×× 结果k见表
ul 黄连解毒汤组灌胃前ks °¬±l及餐后 vs oys otus
°¬±各时点血糖值均低于模型组 k Π s1sxl o阿司
匹林组灌胃前ks °¬±l及餐后 vs oys otus °¬±各时点
血糖值均显著低于模型组 o具有显著性意义k Π 
s1stl ou组在餐后 vs °¬±和 ys °¬±两时点血糖值均
高于正常组k Π s1sxl ∀
31113 药物干预 ts周后各组血糖 !血脂及血清胰
岛素水平比较k见表 vl 黄连解毒汤组和阿司匹林
组 ƒ…Š和 ƒŒ‘≥均比模型组显著降低k Π s1stl o黄
连解毒汤组 ƒ…Š与正常组无差异k Ё s1sxl o阿司
匹林组 ƒ…Š 比黄连解毒汤组和正常组高 k Π 
s1sxl ~模型组 ׊ o×≤ oƒŒ‘≥值比正常组显著性增高
kΠ  s1stl o‹⁄2≤ 值比正常组显著降低 k Π 
s1stl o黄连解毒汤组 ׊ o×≤ 值比模型组低k Π 
s1sxl o‹⁄2≤值比模型组高k Π s1sxl o阿司匹林组
×≤值比模型组低k Π s1sxl o׊ o‹⁄2≤ 值均与模
型组无明显差异k Ё s1sxl ∀
312 黄连解毒汤对大鼠血管内皮细胞功能相关指
标的影响
31211 药物干预 ts周后各组血清 ‘’ !血浆 ∞× 水
平比较k见表 wl 黄连解毒汤组血清 ‘’ 值高于模
型组k Π s1sxl o与正常组无差异k Ё s1sxl ~阿司
#{yzt#
第 vs卷第 uu期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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‘²√¨ °¥¨µoussx
表 u 各组大鼠药物干预 |周后 ’Š××结果比较kcξ ? σl
组别
剂量
rª#®ªpt
ν …Šr°°²¯#
pt
s °¬± vs °¬± ys °¬± tus °¬±
正常组 p | w qss ? s qu{ul x q{t ? s qtwul y q{u ? s qusul x qvs ? s qvvul
模型组 p tt x qut ? s quswl { qxv ? s qwvwl ts qv{ ? s qwxwl y qy| ? s qutwl
黄连解毒汤组 ts1w | w qsw ? s qtzul z qv{ ? s qw|t ovl { qyv ? s q{tt ovl x q|{ ? s qt{tl
阿司匹林组 s1tu tt w quy ? s quzul z qxy ? s qvuu ovl { qwy ? s qwzu ovl x qz| ? s qt|ul
表 v 各组大鼠治疗 ts周后血糖 !血脂及血清胰岛素水平比较kcξ ? σl
组别 剂量rª#®ªpt ν ƒ…Šr°°²¯#pt ׊r°°²¯#pt ×≤r°°²¯#pt ‹⁄2≤r°°²¯#pt ƒŒ‘≥r°˜#pt
正常组 p | v q|| ? s qwuu oxl t qsz ? s qtyul t qt| ? s quwul t quz ? s qtwul uw qxy ? v quvul
模型组 p tt { qxs ? s qytwl u qs{ ? s qu|wl t q|t ? s quswl s q{t ? s qs{wl vx qzz ? x qyzwl
黄连解毒汤组 ts1w { v q|w ? s qxwu oxl t qu| ? s qu|tl t qvy ? s qtutl t qt{ ? s qtstl ut qu{ ? t qzyul
阿司匹林组 s1tu ts x qzt ? s qwvu ovl t qyy ? s quv t qv{ ? s qtvtl s q|x ? s qtv tz q{z ? u qvtul
注 }≠与阿司匹林组相比xl Π s1sx ~黄连解毒组 !阿司匹林组各损坏 t例血样标本
匹林组血清 ‘’值与模型组和正常组相比均无差异
kЁ s1sxl ~模型组血清 ‘’ 值低于正常组k Π 
s1sxl ∀黄连解毒汤组血浆 ∞× 值低于模型组( Π
s1sxl o阿司匹林组血浆 ∞×值显著低于模型组k Π
s1stl ou组均与正常组无差异k Ё s1sxl ~模型组血
浆 ∞×值高于正常组k Π s1sxl ∀
31212 药物干预 ts周后大鼠血浆中 „±ªµ和 √• ƒ
水平比较k见表 wl 黄连解毒汤组血浆 „±ªµ和
√• ƒ水平均比模型组显著降低k Π s1stl o阿司匹
林组血浆 „±ªµ和 √• ƒ 水平较模型组降低k Π 
s1sxl ou组均与正常组无差异k Ё s1sxl ~模型组较
正常组血浆 „±ª µ和 √• ƒ 水平显著降低 k Π 
s1stl ∀
4 讨论
表 w 各组大鼠治疗 ts周后 ‘’ o∞× o„±ªµ o√ • ƒ表达水平比较kcξ ? σl
组别 剂量rª#®ªpt ν ‘’rΛ°²¯#pt ∞×r±ª#pt „±ªµr±ª#pt √ • ƒr h
正常组 p | uy qyv ? u q{utl yz qww ? z qxttl t{y qvu ? tu q|yul wx qsv ? v q{vul
模型组 p tt ty qvs ? u qt|vl ttu qxv ? | qutvl vvu qx{ ? vz qxuwl yv quz ? u qzywl
黄连解毒汤组 ts1w { ux q|{ ? v qvytl yx qws ? z q{ttl usz qtt ? ux qzsul v| qv{ ? w qszul
阿司匹林组 s1tu ts ut q|y ? v qux yu qut ? { qv|ul uwy q|| ? ux qxxtl ww qzs ? w qutul
糖尿病血管并发症的发病机制有很多 o其中血
管内皮损伤是其主要机制之一 ∀血管内皮可以分泌
一系列生物活性物质以维持机体内环境的稳定 o同
时这些物质的协调平衡也对血管内皮细胞正常功能
的维持起着重要作用 ∀而 u型糖尿病中各种代谢紊
乱恰恰打破了这种平衡而造成了内皮的损伤 ∀本实
验结果从多方面证实了黄连解毒汤对 u型糖尿病大
鼠血管内皮有很好的保护作用 ∀
411 黄连解毒汤有很好的降糖 !调脂 !降低血清胰
岛素的作用
高血糖 o高血脂 o高胰岛素血症均会使氧化应激
增加 o氧自由基产生增多 o造成血管内皮细胞损
伤≈{  ∀因此 o要想维持 u型糖尿病患者血管内皮的
正常功能 o同时改善患者的糖 !脂 !胰岛素代谢是十
分重要的 ∀本实验结果表明 o黄连解毒汤干预糖尿
病大鼠 |周后已显示出显著的降糖作用 o其降糖效
果与阿司匹林相当 o调脂效果较阿司匹林为佳 ∀说
明黄连解毒汤有很好的降低空腹和餐后血糖 !调节
血脂和降低血清胰岛素的作用 ∀可见 o黄连解毒汤
在致内皮细胞损伤的始动环节上进行了有效的遏
制 ∀
412 黄连解毒汤对一些影响血管内皮功能的活性
物质有良好的调控作用
当血管内皮细胞受损时 o内皮细胞中的 √• ƒ释
放入血 o促进血小板黏附并聚集于受损的血管内皮
细胞下 o启动血栓形成的第一步 ∀因而血浆中的
√• ƒ升高被认为是血管内皮细胞损伤的标志 o可较
准确反映体内血管内皮细胞损伤程度≈|  ∀ ‘’和 ∞×
是一对主要由内皮细胞合成分泌的重要物质 ∀ ∞×
的主要作用是收缩血管 o而 ‘’ 的主要作用是舒张
血管 ∀血液中 ‘’ 和 ∞× 水平也可以作为血管内皮
细胞损伤的标志物 ∀本实验中 o模型组的这 v种标
志物的水平均异常 o说明糖尿病时血管内皮细胞有
损伤 ∀黄连解毒汤组的这 v种血管内皮损伤标志物
的水平和正常组无差异 o表明黄连解毒汤有很好的
保护血管内皮细胞的作用 ∀
#|yzt#
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糖尿病时 o血浆 „±ªµ水平会增高 o造成血管内
皮细胞损伤 o血管结构重塑 o血管性炎症等≈ts  ∀本
实验结果显示 o黄连解毒汤能很好的调控血浆中
„±ªµ的水平 o避免了由于血浆 „±ªµ水平增高造成
的血管内皮损伤 ∀
以上研究表明 o黄连解毒汤对 u型糖尿病早期
出现的血管内皮损伤有良好的保护作用 ∀其药理机
制包括改善 u型糖尿病的糖 !脂 !胰岛素代谢 ~刺激
血管内皮细胞产生 ‘’ 并减少 ∞× 的产生使血管舒
张 ~通过降低血浆中 „±ªµ水平调控血管内皮细胞
功能 ∀黄连解毒汤对血浆 √• ƒ 水平也有很好的调
控作用 o提示抗血栓形成可能也是其防治糖尿病血
管并发症的机制之一 o有待进一步深入研究 ∀
≈参考文献 
≈t  Ž¬±ª Š o≥«¬¥¤× o ’¯¬√¨ µo ετ αλq ≤¨¯ ∏¯¯¤µ¤±§ °²¯ ¦¨∏¯¤µ¤¥±²µ2
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÷Œ„’ ≠¤±2¯¬±ªo˜ ƒ∏2 µ¨o ÷˜ ¬2­∏±o∞‘Š ≥¤±2«∏¤o • „‘Š Ž¤¬2©∏
(Ινστιτυτε οφ Ιντεγρατιϖε Τραδιτιοναλ & Ωεστερν Μεδιχινε , Τονγϕι Ηοσπιταλ, Τονγϕι Μεδιχαλ
Χολλεγε , Ηυαζηονγ Υνιϖερσιτψ οφ Σχιενχε & Τεχηνολογψ, Ωυηαν wvssvs , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¬±√¨ ¶·¬ª¤·¨·«¨ ©¨©¨¦·¶²© ‹∏¤±ª¯¬¤±¬¨§∏k‹⁄l §¨¦²¦·¬²± ²± √¤¶¦∏¯¤µ ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ©∏±¦·¬²±¬±·¼³¨ u §¬¤¥¨·¬¦
µ¤·¶¤±§ ¬¨³¯²µ¨ ·«¨ ³µ²³«¼¯¤¦·¬¦¤±§·«¨µ¤³¨∏·¬¦¶¬ª±¬©¬¦¤±¦¨ ¤±§³«¤µ°¤¦²¯²ª¬¦¤¯ ° ¦¨«¤±¬¶° ²© ‹⁄ §¨¦²¦·¬²±¬±·¼³¨ u §¬¤¥¨·¬¦¤±ª¬²³¤·«¬¦
¦²°³¯¬¦¤·¬²±q Μετηοδ : ׫¨ °∏µ¬±¨ ·¼³¨ u §¬¤¥¨·¨¶°²§¨ ¶¯º µ¨¨ ¬±§∏¦¨§¥¼·«¨ ¬±·µ¤√¨ ±²∏¶¬±­¨¦·¬²±²©¤¶°¤¯¯§²¶¨ ²©¶·µ¨³·²½²·²¦¬± ³¯∏¶«¬ª«©¤·
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° ±¨·o·«¨ ¦«¤±ª¨¶²© °∏µ¬±¨ ¥²§¼ º ¬¨ª«·¶¤±§¯¨ √¨ ¶¯²©©¤¶·¬±ª¥¯²²§ª¯∏¦²¶¨ kƒ…Šl o¶¨µ∏°·²·¤¯ ¦«²¯ ¶¨·¨µ²¯ k×≤l o·µ¬ª¯¼¦¨µ¬§¨¶k׊l o«¬ª«
§¨±¶¬·¼ ¬¯³²³µ²·¨¬±2¦«²¯ ¶¨·¨µ²¯k‹⁄2≤l o©¤¶·¬±ª¶¨µ∏°¬±¶∏¯¬± kƒŒ‘≥l o¶¨µ∏° ±¬·µ¬¦²¬¬§¨ o³¯¤¶°¤ ±¨§²·«¨ ¬¯±o¤±ª¬²·¨±¶¬± µ¤±§√²± • ¬¯¯ ¥¨µ¤±§
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第 vs卷第 uu期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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