全 文 ：ｈａｄｓｍａｌｕｌｃｅｒａｔｉｏｎａｎｄｓｅｖｅｒｅｅｒｏｓｉｏｎａｎｄｅｄｅｍａ．ＴｈｅｓｃｏｒｅｏｆｇｌｏｓｓｃｈａｎｇｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｏｗｅｒｉｎＭｕｓｃｏｖｉｔｅｇｒｏｕｐｓｔｈａｎｔｈａｔｉｎｎｏｒｍａｌ
ｓａｌｉｎｅｇｒｏｕｐ（Ｐ＜００１）．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｎｅｃｒｏｓｉｓａｎｄｅｘｆｏｌｉａｔｉｏｎｏｆｍｕｃｏｓａ，ｍｕｌｔｉｐｌｅｃｙｓｔｉｃｄｉｌａｔｉｏｎｏｆｍｕｃｏｓａｇｌａｎｄ，ａｎｄｌａｒｇｅｎｕｍｂｅｒｏｆ
ｎｅｒｕｔｒｏｐｈｉｌｓａｎｄｖｅｓｓｅｌｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｉｎｕｌｃｅｒａｔｉｖｅｃｏｌｉｔｉｓ．ＴｈｅｕｌｃｅｒａｔｉｏｎｄｉｓａｐｐｅａｒｅｄａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎａｔｅｎｕａｔｅｄｉｎＭｕｓｃｏｖｉｔｅｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅｒｅ
ｗｅｒｅｅｒｏｓｉｏｎｉｎｍｕｃｏｓａａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｅｌｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇｉｎｔｏｓｕｂｍｕｃｏｓａｉｎＳＡＳＰｇｒｏｕｐ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｓａｌｉｎｅｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ
ｓｃａｌｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎＭｕｓｃｏｖｉｔｅａｎｄＳＡＳＰｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＜００５）．ＴｈｅＭＰＯａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｃｒｅａｓｅｄｉｎｃｏｌｉｔｉｓｔｉｓｓｕｅｃｏｍ
ｐａｒｅｄｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０００１）．ＡｆｔｅｒａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｎｇｗｉｔｈＭｕｓｃｏｖｉｔｅｏｒＳＡＳＰ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＭＰＯｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜００１）．
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｍｕｓｃｏｖｉｔｅｈａｓｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｍｕｃｏｓａｌｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｂｙａｔｅｎｕａｔｉｎｇｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｏｆｃｏｌｏｎｉｃｍｕｃｏｓａａｎｄｄｅｃｒｅａｓｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ
ＭＰＯ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｍｕｓｃｏｖｉｔｅ；ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅｃｏｌｉｔｉｓ；ｍｕｃｏｓａｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ
［责任编辑 方文贤］
［收稿日期］ ２００５０６２８
［基金项目］ 山东省自然基金资助项目（Ｙ２００２Ｃ３７）
［通讯作者］ 李贵海，Ｔｅｌ：（０５３１）８２９４９８４８，Ｆａｘ：（０５３１）
８２９６８４７３，Ｅｍａｉｌ：９９５８００ｇｈｌｉ＠１６３ｃｏｍ
中药生物碱逆转小鼠 Ｓ１８０肉瘤细胞获得性多药
耐药相关生物因子的过度表达
李贵海１，潘成业２，孙付军１，尹格平３，王学荣１
（１山东省中医药研究院，山东 济南 ２５００１４；
２山东烟台市毓璜顶医院，山东 烟台 ２５６００１；
３济南军区总医院，山东 济南 ２５００３１）
［摘要］ 目的：探讨中药生物碱口服给药逆转化疗诱导的肿瘤细胞 ＭＤＲ的分子生物学基础，以指导临床应用
中药逆转肿瘤多药耐药，提高化疗疗效。方法：给予亚于治疗剂量的联合化疗诱导腹水型 Ｓ１８０小鼠，苦参碱、粉防
己碱、氧化苦参碱和盐酸小檗碱４周，流式细胞仪免疫荧光检测Ｓ１８０肿瘤细胞Ｐ１７０，ＬＲＰ，ＴＯＰＯＩ，Ｆａｓ和细胞凋亡率。
结果：苦参碱、粉防己碱明显降低化疗诱导后耐药细胞 Ｐ１７０，ＬＲＰ的表达率和 ＴＯＰＯＩ活性，增加凋亡基因 Ｆａｓ表达
率，促进耐药肿瘤细胞的凋亡；盐酸小檗碱明显降低化疗诱导后耐药细胞 ＬＲＰ，ＴＯＰＯＩ的表达率；氧化苦参碱明显
降低化疗诱导后耐药细胞ＬＲＰ的表达率。结论：苦参碱、粉防己碱可通过对 ＭＤＲ相关生物活性物质的调节，干预
化疗诱发的ＭＤＲ的产生，并且其作用程度与生物碱的结构相关。
［关键词］ 生物碱；获得性多药耐药；小鼠；Ｐ１７０；ＬＲＰ；ＴＯＰＯＩ；Ｆａｓ
［中图分类号］Ｒ２８５５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００５）２３１８４４０５
生物碱是一类有广泛生物效应的中药成分，近
年来体外实验显示粉防己碱（汉防己甲素）对人白血
病耐药株Ｋ５６２细胞多药耐药相关蛋白表达有一定
的逆转或抑制作用。但体外细胞培养难以客观反应
临床化疗诱导的获得性多药耐药（ＭＤＲ）的状况，故
模拟临床常用联合化疗 ＰＦＣ方案诱导小鼠 Ｓ１８０肉
瘤细胞 ＭＤＲ相关因子过度表达，观察了苦参碱、粉
防己碱、氧化苦参碱和盐酸小檗碱对小鼠 Ｓ１８０肉瘤
细胞ＭＤＲ相关生物因子表达或活性的影响，以探讨
上述４种中药生物碱干预化疗所致 ＭＤＲ的作用和
作用机制，为临床应用中药预防肿瘤化疗抗性的产
生提供依据。
１ 材料
１１ 药品 ９８％的粉防己碱、苦参碱、氧化苦参碱
均由西安山川生物制品有限公司提供；盐酸小檗碱
由四川什邡鸿运生物制品有限公司提供；注射用顺
铂：山东齐鲁制药厂产品，批号０１１１１６１１；环磷酰胺：
上海华联制药有限公司产品，批号０３０７０３；５氟尿嘧
啶（５ＦＵ）：天津金耀氨基酸有限公司产品，批号
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第３０卷第２３期
２００５年１２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３０，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００５
Ｈ１２０２０９５９。
１２ 动物 昆明种小鼠，由山东大学实验动物中心
提供，合格证号：鲁动质字 ２００２１００２３；小鼠 Ｓ１８０腹
水型瘤种鼠，由山东医学科学院药物研究所药理室
提供。
１３ 试剂 碘化嘧啶 ＰＩ，Ｃ２７Ｈ３４Ｎ４Ｉ２，编号 ２５５３５
１６４，美国 Ｓｉｇａｒｍ公司产品，批号 ２４７０８１０；ＭＤＲ表
达产物 Ｐ１７０（Ｐ糖蛋白，Ｐｇｐ），ＤＮＡ拓扑异构酶 Ｉ
（ＤＮＡ，ＴｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅＩ，ＴＯＰＯＩ），相关蛋白肺耐药蛋
白（ＬＲＰ），细胞凋亡因子（Ｆａｓ），异硫氢酸荧光素
（ＦＩＴＣ）标记的单克隆抗体 ＩｇＧ１及免疫阴性对照品
ＩｇＧ１ＦＩＴＣ均为美国 ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ公司产品，由北京岳
泰生物公司提供。
１４ 仪器 ＦＡＣＳｃａｎ型流式细胞仪：美国 ＢＤ公司
产品；梅特勒 ＧＢ－３０３电子天平：美国梅特勒公司
产品。
２ 方法
２１ 小鼠分组及给药 １８～２２ｇ昆明种小鼠，雌雄
各半，随机分为６组，每组１４只，无菌抽出３只 Ｓ１８０
小鼠腹水，由无菌 ＮＳ稀释至含瘤细胞 １×１０６·
ｍＬ－１，摇匀，每只小鼠无菌腹腔接种０２ｍＬ，接种２４
ｈ后（除正常对照组外），均开始给予顺铂 ３ｍｇ·
ｋｇ－１，ｉｐ，每周１次；环磷酰胺和５ＦＵ各 ３ｍｇ·ｋｇ－１，
ｉｇ，每天１次。接种第１５天，存活的小鼠无菌抽出腹
水，一对一传代，传代２４ｈ后，再给予上述化疗药物
诱导１５ｄ［１］。无菌抽出诱导后小鼠腹水，无菌ＮＳ稀
释至含瘤细胞１×１０６·ｍＬ－１，摇匀，每只小鼠无菌腹
腔接种０２ｍＬ，接种２４ｈ后，分组，模型组和正常对
照小鼠Ｓ１８０组，给予水 ０２ｍＬ·１０ｇ－１，ｉｇ，苦参碱、
粉防己碱、氧化苦参碱和盐酸小檗碱组均给予 １００
ｍｇ·ｋｇ－１（０５％的溶液，其中粉防己碱为混悬液）０２
ｍＬ·１０ｇ－１，ｉｇ，共给药 ４周，停药 ２４ｈ后，无菌抽出
各小鼠腹水２ｍＬ，入肝素抗凝试管中，１５００ｒ·ｍｉｎ－１
离心５ｍｉｎ，去除上清液，由ｐＨ７４ＰＢＳ液漂洗，离心
洗脱３次，以７０％乙醇固定，４℃保存，待测。
２２ 细胞凋亡测定 ７０％乙醇固定的小鼠 Ｓ１８０细
胞，ＰＩ染色前，由ＰＢＳ液稀释后再离心洗脱１次，并
调至含肿瘤细胞１×１０６·ｍＬ－１，摇匀，取细胞混悬液
５００μＬ，加入１０μｇ·ｍＬ
－１的 ＰＩ工作液５００μＬ，３７℃
避光反应３０ｍｉｎ后，由ＦＡＣＳｃａｎ流式细胞仪，以标准
荧光微球调整仪器的变异系数并稳定在 ２％以内，
每标本１万个细胞，荧光强度以对数放大，光散射，
测试完后在 Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ６５０计算机上用 ＭｏｄｉＦｉｔ软件
（ＢＤ公司提供）分析数据，分别得出凋亡细胞百分率
（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）。
２３ Ｐ１７０，ＬＲＰ，ＴＯＰＯＩ，Ｆａｓ表达的检测 取 ７０％
乙醇固定的小鼠 Ｓ１８０细胞，由 ｐＨ７４ＰＢＳ液稀释
后，１５００ｒ·ｍｉｎ－１离心５ｍｉｎ，再次洗脱１次，并调整
细胞浓度为 １×１０６·ｍＬ－１，摇匀，取细胞悬液 ５００
μＬ，加入各自相对应的异硫氢酸荧光素标记的鼠抗
人的单克隆抗体 ＩｇＧ１工作液 ２０μＬ，另各取 １支阴
性对照抗 ＩｇＧ１ＦＩＴＣ，３７℃避光反应３０ｍｉｎ后，由流
式细胞仪荧光检测。仪器的检测变异系数＜２％，测
定１万个细胞的上述５种相关生物分子的表达，激
发光波长均为４８８ｎｍ。
３ 结果
３１ 对化疗诱导的获得型多药耐药 ＭＤＲ小鼠腹水
型 Ｓ１８０肉瘤细胞 ｍｄｒ１表达产物 Ｐ１７０（Ｐ糖蛋白、Ｐ
ｇｐ）的影响 在给予化疗药物诱导的同时给予上述
４种中药生物碱，连续４周，测得各组小鼠Ｓ１８０腹水
细胞Ｐ１７０，表达率如表１。
结果提示：经模拟临床化疗诱导４周后，腹水型
小鼠Ｓ１８０细胞其Ｐ１７０表达明显增加，与正常 Ｓ１８０细
胞组比较，有显著性差异；苦参碱、粉防己碱显著抑
制化疗诱导后的Ｓ１８０细胞 Ｐ１７０的表达，说明这 ２种
生物碱可以明显降低肿瘤 ＭＤＲ细胞膜糖黏蛋白
Ｐ１７０的表达，减少 Ｐ１７０对药物的外排，增加细胞内药
物浓度，从而干预肿瘤细胞获得性多药耐药的发生，
盐酸小檗碱和氧化苦参碱作用与模型组比较作用较
弱。
表１ 生物碱对化疗诱导的多药耐药小鼠Ｓ１８０细胞膜糖
黏蛋白Ｐ１７０过度表达的逆转作用（珋ｘ±ｓ）
组别 ｎ 表达率 抑瘤率／％
正常Ｓ１８０细胞组 １１ ３．６１±１．７５３） －
化疗诱导４周组 ９ ２４．０１±７．４８ －
对照组 １１ ２８．１２±９．７９ －
苦参碱组 １０ ６．１６±３．６７３） ７８．０９
粉防己碱组 １０ ７．３５±３．６５３） ７３．８６
小檗碱组 １０ １５．５６±６．４５１） ４４．６７
氧化苦参碱 １０ １６．６４±９．７２１） ４０．８３
注：与诱导后传代对照组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１，３）Ｐ＜０００１
（表２～５同）
３２ 对化疗诱导的 ＭＤＲ模型小鼠腹水型 Ｓ１８０肉
瘤细胞ＬＲＰ表达的影响 ７０％乙醇固定后的各组
小鼠Ｓ１８０细胞，由免疫荧光单抗体 ＩｇＧ１结合后，由
流式细胞仪检测其荧光强度，统计小鼠耐药 Ｓ１８０肿
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Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００５
瘤细胞肺耐药ＬＲＰ，表达率如表２。
表２ 生物碱对小鼠耐药Ｓ１８０细胞ＬＲＰ表达的影响（珋ｘ±ｓ）
组 别 ｎ ＬＲＰ表达率 抑制率／％
正常Ｓ１８０细胞 １１ ４．９９±１．７５３） －
化疗诱导４周组 ９ ７０．２１±２１．７５ －
对照组 １１ ６７．６５±２５．４２ －
苦参碱组 １０ １０．６７±６．２８２） ８４．０９
粉防己碱组 １０ ８．９３±６．２８３） ８６．８０
小檗碱组 １０ ２９．３６±１０．２７１） ５６．６０
氧化苦参碱 １０ ２１．３８±１５．１４１） ６８．４０
结果提示：经模拟临床化疗诱导后，小鼠 Ｓ１８０
细胞耐药相关蛋白ＬＲＰ表达明显增加，与正常 Ｓ１８０
对照组比较有显著性差异；而中药生物碱能有效的
降低化疗诱导小鼠Ｓ１８０细胞ＬＲＰ的表达率，其作用
为粉防己碱＞苦参碱＞盐酸小檗碱＞氧化苦参碱。
说明上述 ４种中药生物碱可通过抑制肺耐药蛋白
ＬＲＰ表达，减少化疗药物的核质转运，从而增加药
物的细胞内浓度，干预肿瘤ＭＤＲ的产生。
３３ 对化疗诱导的 ＭＤＲ模型小鼠腹水型 Ｓ１８０肉
瘤细胞ＴＯＰＯＩ活性的影响 ７０％乙醇固定的 Ｓ１８０
细胞，由ｐＨ７４ＰＢＳ液洗脱后配成细胞悬液，经荧光
单克隆抗性结合后，由 ４８８ｎｍ激发，测定细胞内荧
光强度，检测各组细胞ＴＯＰＯＩ活性，如表３。
表３ 生物碱对小鼠Ｓ１８０耐药细胞ＴＯＰＯＩ
活性的影响（珋ｘ±ｓ）
组别 ｎ ＴＯＰＯＩ表达率 抑制率／％
正 常Ｓ１８０细胞组 １１ ５．４６±１．９５３） －
化疗诱导四周组 ９ ２２．５７±１２．３８ －
对照组 １１ ２４．４５±１４．３５ －
苦参碱组 １０ ８．５８±４．１０２） ６４．９１
粉防己碱组 １０ １０．２１±４．３９２） ５８．２４
小檗碱组 １０ １９．９５±７．５３ １８．４０
氧化苦参碱 １０ １９．６５±１０．４３ １９．６３
结果提示：给予模拟临床化疗诱导后，小鼠
Ｓ１８０细胞 ＴＯＰＯＩ活性明显增强，与正常组比较有
明显差异；而苦参碱、粉防己碱和盐酸小檗碱明显抑
制化疗诱导后 Ｓ１８０细胞的 ＴＯＰＯＩ活性，氧化苦参
碱则不明显，说明抑制 ＴＯＰＯＩ活性，是上述中药生
物碱干预肿瘤细胞ＭＤＲ形成的途径之一。
３４ 对化疗诱导的 ＭＤＲ模型小鼠腹水型 Ｓ１８０肉
瘤细胞凋亡率的影响 取 ７０％乙醇固定的各组
Ｓ１８０细胞，由ｐＨ７４ＰＢＳ液洗脱后，调整细胞密度至
１×１０６·ｍＬ－１后，取细胞悬液ＰＩ染色，３７℃避光反应
３０ｍｉｎ后，由流式细胞仪荧光检测，激发光为 ４８８
ｎｍ，测得各组小鼠Ｓ１８０细胞凋亡率，如表４。
表４ 生物碱对化疗诱导的小鼠Ｓ１８０多药耐药
细胞凋亡的影响（珋ｘ±ｓ）
组 别 ｎ 凋亡率 促进率／％
正常Ｓ１８０细胞组 １１ ２．０７±１．１３２） －
化疗诱导四周组 ９ ２．５７±１．６３ －
对照组 １１ ３．１０±１．８７
苦参碱组 １０ １５．６４±７．３７３） ３０１．０３
粉防己碱组 １０ １４．２３±６．３２３） ２６４．８７
小檗碱组 １０ ４．２６±２．０５ ９．２３
氧化苦参碱 １０ ４．３９±２．４８ １２．５６
结果提示：化疗诱导后的模型组细胞凋亡率与
正常Ｓ１８０细胞组比较没有明显的统计学差异；苦参
碱、粉防己碱均明显增加化疗诱导而致的小鼠 Ｓ１８０
细胞的凋亡，盐酸小檗碱和氧化苦参碱作用不明显。
说明 ＭＤＲ的产生，对细胞凋亡没有明显的影响；而
苦参碱和粉防己碱干预化疗诱导的 ＭＤＲ与其促进
耐药细胞凋亡有关，增加耐药肿瘤细胞凋亡可能是
其干预肿瘤ＭＤＲ的重要机制之一。
３５ 对化疗诱导的 ＭＤＲ模型小鼠腹水型 Ｓ１８０肉
瘤细胞凋亡因子 Ｆａｓ（ＣＤ９５）表达的影响 取经
ｐＨ７４ＰＢＳ液再次洗脱的７０％乙醇固定的小鼠 Ｓ１８０
细胞，由 ＰＢＳ液调整细胞密度为 １×１０６·ｍＬ－１，由
Ｆａｓ荧光单克隆抗体 ＩｇＧ１结合 ２０ｍｉｎ，流式细胞仪
荧光检测，激发波长４８８ｎｍ，结果如表５。
表５ 生物碱对化疗诱导的小鼠Ｓ１８０多药耐药细胞凋亡促进因子表达的影响（珋ｘ±ｓ）
组 别 ｎ
Ｆａｓ Ｔｒａｉｌ
表达率 促进率／％ 表达率 促进率／％
正常Ｓ１８０细胞组 １１ ７．２１±３．８８ － － －
化疗诱导四周组 ９ １０．３１±６．５３ － ６．４７±３．５３ －
对照组 １１ １０．３６±５．５７ － ５．５７±３．５７ －
苦参碱组 １０ ５２．３６±２０．７２） ４０５．４１ ２４．５６±１０．７２） ３４０．９３
粉防己碱组 １０ １２．５１±５．５６ ２０．７５ １９．５１±７．５０２） ２５０．２７
小檗碱组 １０ １１．６８±３．７８ １０．１２ ８．１８±３．７６ ４６．８６
氧化苦参碱 １０ １１．３７±５．４３ ９．７０ ６．４９±２．４３ １６．５２
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Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００５
结果提示：化疗诱导后小鼠 Ｓ１８０细胞 Ｆａｓ表达
率与正常对照组比较无显著性差异；苦参碱、粉防己
碱对化疗诱导的多药耐药小鼠 Ｓ１８０细胞 Ｆａｓ表达
率有明显的增加作用。说明中药生物碱增加耐药
Ｓ１８０细胞凋亡，与其增加凋亡基因Ｆａｓ（ＣＤ９５）表达相
关。
４ 讨论
肿瘤细胞的多药耐药（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）
是指肿瘤细胞组织对多种化学结构完全不同、作用
机制各异的抗肿瘤药物，具有交叉耐受的性质，被确
认为是肿瘤化疗失败的主要原因［２，３］。人类基因组
中存在 ２个 ＭＤＲ基因，即 ｍｄｒ１和 ｍｄｒ２基因，研究
表明只有ｍｄｒ１基因的表达水平与人体肿瘤细胞耐
药有关［１］。ＭＤＲ的发生，主要以肿瘤细胞多药耐药
ｍｄｒ１基因表达的膜糖黏蛋白 Ｐ１７０过度表达、肺耐药
蛋白 ＬＲＰ水平升高、肿瘤细胞 ＤＮＡ拓扑异构酶
ＴＯＰＯＩ等相关酶活性增加和肿瘤细胞凋亡下降为
表现。
耐药ｍｄｒ１基因引起细胞膜糖黏蛋白 Ｐ１７０的过
度表达，可加速化疗药物经跨膜转运排出细胞从而
阻止药物进入细胞核，使化疗药物不能发挥细胞毒
性作用，产生 Ｐ１７０介导的 ＭＤＲ（经典多药耐药
性）［４，５］，ＬＲＰ是１９９３年发现的１种新的 ＭＤＲ因子，
其通过降低药物的核质分布比率、并经囊泡转运和
泡吐机制将胞质中药物排出细胞，以降低药物的有
效浓度，这一发现提示 ＬＲＰ引起 ＭＤＲ的机制可能
与核质转运有关［６，７］；ＴＯＰＯ是催化 ＤＮＡ拓扑结构
改变的酶系，在ＤＮＡ的合成、转录、核分裂过程中及
染色体分离中起重要作用，是晚期、Ｇ２和 Ｍ期敏感
而又特异的指标，ＴＯＰＯＩ活性增强，可增强 ＤＮＡ修
复能力，降低化疗药物的细胞毒性，阻止化疗药物作
用于肿瘤细胞，而产生耐药性（非典型多药耐药）［８］。
细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）又称程序性细胞死亡（ｐｒｏ
ｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｄｅａｔｈ，ＰＣＤ），是机体为维护内环境的稳
定，通过基因调控而使细胞自动消亡的过程，细胞凋
亡信号传导途径的研究，近年来引人注目的是能诱
导死亡信号的细胞膜受体分子 Ｆａｓ蛋白及其配体分
子ＦａｓＬ与参与其信号途径调控的许多细胞内外因
子共同组成的Ｆａｓ系统。Ｆａｓ表达于多种肿瘤细胞，
在不同组织类型肿瘤细胞中的表达具有明显的异质
性［９］。
中药生物碱是一类具有广泛生物效应的中药成
分，文献报道粉防己碱对人白血病耐药Ｋ５６２细胞株
的体外耐药性有逆转作用［１０，１１］，为了进一步观察中
药生物碱对ＭＤＲ的作用及作用机制，作者应用临床
肿瘤化疗常用诱导ＰＦＣ方案，诱导小鼠Ｓ１８０细胞表
达产生耐药性，建立小鼠 ＭＤＲ模型［１］，可见到多药
耐药基因ｍｄｒ１表达产物 Ｐ１７０，耐药相关蛋白—肺耐
药蛋白ＬＲＰ及ＴＯＰＯＩ表达率明显升高，这一体内模
型与临床患者肿瘤多药耐药的产生有相似性和可比
性，较体外细胞培养和裸鼠模型更客观地反应了临
床化疗多药耐药产生的病理生理过程。
通过实验观察不同中药生物碱体内给药对肿瘤
细胞的产生与耐药相关生物活性物质的表达的影
响，结果可知苦参碱、粉防己碱口服给药可以明显降
低模拟临床化疗所诱导的小鼠 Ｓ１８０细胞耐药基因
ｍｄｒ１的表达产物Ｐ１７０、肺耐药蛋白ＬＲＰ的表达，抑制
细胞拓扑异构酶 Ｉ（ＴＯＰＯＩ）的活性；提高细胞凋亡
因子Ｆａｓ的表达率，促进 ＭＤＲ肿瘤细胞的凋亡；并
且通过降低细胞黏附因子 ＣＤ５４的表达率，抑制肿瘤
细胞的转移。盐酸小檗碱、氧化苦参碱降低肺耐药
蛋白ＬＲＰ的表达，通过囊泡转运和泡吐机制作用于
ＭＤＲ细胞，干预肿瘤细胞 ＭＤＲ的产生。上述实验
观察通过细胞膜、细胞核、细胞因子和耐药基因等不
同层次和水平解释了４种中药生物碱干预 ＭＤＲ的
机制。同时可见生物碱结构不同，其作用程度不同，
进一步探讨结构与生物碱干预肿瘤多药耐药作用的
相关性，对于应用中药临床防止和降低化疗多药耐
药的发生、提高临床化疗疗效具有重要指导意义。
［参考文献］
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ＭＤＲ表达鼠模型的建立．上海免疫学杂志，２００１，５（２１）：２８２．
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ｒｅｌａｘｅｄｐｒｏｔｅｉｎＬＲＰｉｓｔｈｅｈｕｍａｎｍａｊｏｒｖａｕｌｔｐｒｏｔｅｉｎＮａｔＭｅｄ，
１９９５，１：５７８．
［７］ ＨｅｄｉｅｙＤＵ，ＸｉｅＳＸ，ＭｉｎｄｅｎＭＤ，ｅｔａｌ．ＡＮｏｖｅｌｅｎｅｒｇｙｄｅｐｅｎ
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·７４８１·
第３０卷第２３期
２００５年１２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３０，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００５
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Ｔｈｅｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｉｎｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｂｔａｉｎｅｄｍｕｌｔｉｄｒｕｇ
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ｏｆＹａｎｔａｉ，Ｙａｎｔａｉ２５６００１，Ｃｈｉｎａ；３ＪｉｎａｎＭｉｌｉｔａｒｙＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｊｉｎａｎ２５００３１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｂａｓｅｏｆｔｈｅｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｉｎｃｏｒｅｌａｔｅｄｂｉｏｔｉｃａｃｔｉｖｅｍａｔｅｒｏｂｔａｉｎｅｄｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｕｃｅｄ
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［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ａｌｋａｌｏｉｄ；ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ；ｍｏｕｓｅ；Ｐ１７０；ＬＲＰ；ＴＯＰＯＩ；Ｆａｓ ［责任编辑 方文贤］
［收稿日期］ ２００５０５２８
［基金项目］ 河北省科学技术委员会基金项目（０５２７６１０１Ｄ８９）
［通讯作者］ 王文智，Ｔｅｌ：（０３１１）８６２６５０５３，Ｅｍａｉｌ：ｚｙｘｂ４０７＠１２６ｃｏｍ
骨复活汤对激素性股骨头坏死细胞凋亡的影响
田伟明１，王文智２，王鑫国２，徐国华１
（１河北医科大学 中医院，河北 石家庄 ０５００１１；
２河北医科大学 中医学院，河北 石家庄 ０５００９１）
［摘要］ 目的：观察激素性股骨头缺血性坏死（ＳＡＮＦＨ）骨标本及骨复活汤对 ＳＡＮＦＨ细胞凋亡的影响。方法：
采用臀部注射醋酸氢化泼尼松建立兔股骨头骨坏死模型，６周处死取材，采用 ＴＵＮＥＬ标记法，研究细胞凋亡情况。
结果：激素性骨坏死标本上，存在大量凋亡的骨细胞及成骨细胞，模型组与对照组、骨复活汤组及仙灵骨葆组家兔
股骨头骨细胞凋亡指数比较均有显著性差异（Ｐ＜００５）。结论：家兔早期 ＳＡＮＦＨ病程中，骨坏死是通过激素诱导
骨细胞及成骨细胞的凋亡和坏死共同作用的结果，骨复活汤在改善家兔 ＳＡＮＦＨ的骨细胞、成骨细胞凋亡及坏死方
面有一定作用。
［关键词］ 骨复活汤；激素性股骨头缺血性坏死；兔；细胞凋亡；原位末端标记检测法
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第３０卷第２３期
２００５年１２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
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Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００５