全 文 ：黄芩汤及其肠道菌群的代谢产物对 ∆2半乳糖胺
诱导的肝损伤的保护作用的比较研究
左 风 o周钟鸣 o熊玉兰 o王彦礼 o严梅桢 o
宋红月 o吴子伦 o贺 蓉 o回连强 o叶文华
k中国中医研究院 中药研究所 o北京 tsszssl
≈摘要  目的 }对黄芩汤及其经肠道菌群作用后的代谢产物的体内保肝作用进行比较研究 ∀方法 }使用普通
和伪无菌小鼠 o用 ∆2半乳糖胺造成肝脏损伤模型 o分别给予黄芩汤和黄芩汤的代谢产物 o测定给药 v §后血清中丙
氨酸氨基转换酶k„×l和天门冬氨酸氨基转换酶k„≥×l的活性 ∀结果 }普通小鼠口服黄芩汤后 o高 !中剂量组小鼠
血清中 „× 水平明显下降 o与模型组产生显著差异 ~伪无菌小鼠口服黄芩汤代谢产物之后 o高 !中剂量组血清中
„× 水平显著下降 o但黄芩汤 v个剂量组对其无相似的药理作用 ∀结论 }黄芩汤经过肠道菌群作用后的代谢产物
是体内产生保肝降酶作用的物质基础 ∀
≈关键词  黄芩汤 ~肠道菌群 ~代谢产物 ~伪无菌小鼠 ~保肝作用
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvls|2s{wu2sv
黄芩汤为5伤寒论6中的经典方剂 o由黄芩 !芍
药 !甘草 !大枣 w 味中药组成 o现代临床多用于治疗
泄泻 !痢疾 o以及伴有消化道症状的发热 !感冒等 ∀
黄芩汤主要成分为黄芩苷 !芍药苷 !甘草酸 o据国外
文献报道 o这 v 种成分经肠道菌群作用后发生了生
物转化 o代谢产物分别为黄芩素 !芍药苷代谢素和甘
草次酸≈t2v  ∀
在以前的研究中 o我们对黄芩汤水煎剂中多种
成分经人肠道菌群作用以后的代谢产物进行了定性
定量分析≈w ox  ∀黄芩汤中其它成分汉黄芩苷 !千层
纸素 „ 苷 !甘草苷和异甘草苷 o经过人肠道菌群作
用后也发生了相应的转化 o代谢产物分别为汉黄芩
素 !千层纸素 „ !甘草素 !异甘草素 ∀使用普通 !无菌
和悉生小鼠 o对黄芩汤在小鼠肠道内的代谢过程也
进行了研究 o进一步证实了黄芩汤中多种成分的代
谢规律≈y  ∀本文使用普通和伪无菌小鼠 o对黄芩汤
及其经肠道菌群作用后的代谢产物的保肝降酶作用
进行了比较研究 ∀
1 材料和仪器
≈收稿日期  ussu2s|2tu
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kv|zzs|twl
≈通讯作者  周钟鸣 ר¯ }kstslywstwwtt2u|{t ƒ¤¬}kstsl
ywstv||y ∞2°¤¬¯}½«²∏½° ƒ uyv q±¨ ·
1 q1 药品和试剂
青霉素 ∂ 钾片 o华北制药有限股份公司 o批号
ssswu{ ~罗红霉素片 o沈阳埃默药业有限公司 o批号
sssvtt ~头孢氨苄片 o北京生物化学制药厂 o批号
ussstuu|t ~吡哌酸片 o北京市曙光制药厂 o批号
sssxtz ~制霉素片 o广东石歧制药厂 o批号 ||syu{ ~
∆2半乳糖胺 kŠ¤¯‘l o中国人民解放军防化研究所 ~
联苯双酯 o中国医学科学院药物研究所药厂 o批号
{{szst ~„× 和 „≥× 试剂盒 o北京化工厂 ∀
1 q2 仪器
德国 ‹∏°¤¯¼½¨ µusss型半自动生化分析仪等 ∀
1 q3 动物 雄性昆明种小鼠ktw ∗ ty ªl o购于北京
大学医学部实验动物中心 ∀
2 方法≈z 
2 q1 黄芩汤水煎剂及黄芩汤经肠道菌群作用的代
谢产物的制备
黄芩汤水煎剂k‹ ± ×l制备方法见文献≈w  o人
肠道菌群混合液k‹Œ l制备参照文献≈t  o并稍做改
动 }取健康人新鲜粪便 v ªo立即加入 tss °普通厌
氧培养基中 o充分搅拌后用 v层纱布过滤 o将上清液
放入厌氧橱中 vz ε 培养 uw «o在培养好的 ‹Œ 中
加入黄芩汤kwΒt oς/ ςl o继续在厌氧橱中 vz ε 培
养 uw «∀培养结束后 o将混合物离心 o取上清液浓缩
成膏状 o然后用甲醇充分溶解 o离心 v 次 o合并上清
#uw{#
第 u{卷第 |期
ussv年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ |≥ ³¨·¨°¥¨µoussv
液 o再浓缩成膏状 o用蒸馏水稀释至合适体积 o即为
黄芩汤肠道菌群代谢产物的混合物k‹   l ∀
2 q2 ‹°≤ 测定
‹ ± × 和 ‹   中各成分的含量测定参照文献
≈w  o根据测定结果计算 ‹   的给药浓度 o‹ ± × 中
主要成分为黄芩苷 o含量最高 o而在 ‹   中其苷元
黄芩素含量最高 o为了平行比较 ‹ ± × 和 ‹   的药
效学指标 o‹   的浓度以其中黄芩素的含量为依
据 o其摩尔浓度与 ‹ ± × 中黄芩苷的摩尔浓度相当 o
并折合成相当的生药量表示 ∀
2 q3 伪无菌小鼠的制备
普通小鼠联合使用多种抗生素 o青霉素 ∂ 钾片
yzs °ª#®ªp t o头孢氨苄 yzs °ª#®ªp t o罗红霉素 ww
°ª#®ªp t o吡哌酸片 yzs °ª#®ªp t o制霉素片 vvx °ª
#®ªp tk均为人体用药剂量的 us倍l ∀将药片碾碎 o
用生理盐水充分溶解经口灌胃给药 o连续给药 v §o
每天 u 次 ∀分别于停用抗生素后第 t天和第 z天 o
取部分动物的盲肠内容物做细菌培养 o分析肠道内
菌群情况 ∀整个试验过程中 o动物饲养于洁净饲养
柜中 o水 !饲料和垫料均经高压灭菌 ∀
2 q4 动物的处置
给予抗生素 v §后的伪无菌小鼠和普通小鼠分
别分为 |组 }空白组 !模型组 !阳性对照组 !‹ ± × 高 !
中 !低剂量组kus ots ox ª#®ªp tl和 ‹   高 !中 !低
剂量组k浓度参见 u qul ∀ ‹ ± × 和 ‹   给药 x次 o
每天早晚 u次 o第 v天上午给药后 o于下午 x }ss腹
腔注射 Š¤¯‘yss °ª#®ªp t o小鼠禁食不禁水 o第 w
天早 | }ss小鼠眼眶取血 o测定血清中 „× 和 „≥×
水平 ∀每组 u只小鼠解剖 o取肝脏切片做病理检查 ∀
阳性药为联苯双酯 o分别于¬³ Š¤¯‘前 t «和 y «口
服给予 uss °ª#®ªp t ∀其余处置同上 ∀
2 q5 统计学方法
实验数据统计处理方法采用 τ检验 ∀
3 结果
3 q1 普通小鼠给予抗生素 v §后 o小鼠盲肠内容物
的细菌培养分析
停药后的第 t天和第 z天 o小鼠肠道内的菌群
基本被抑制 o细菌培养试验未发现明显的菌落生成 ∀
说明此种方法可以建立伪无菌小鼠 ∀
3 q2 血清中转氨酶的测定
普通小鼠给予 ‹ ± × 高 !中剂量后 o可以显著降
低血清中 „× 的升高 o与模型组存在显著性差异 ∀
‹   各剂量组 o„× 水平与模型组相比没有显著
性差异 ~伪无菌小鼠给予 ‹ ± × 后 ov个剂量组都不
能降低血清中 „× 水平 o而 ‹   高 !中剂量组明
显降低了血清中 „× 水平的升高 ∀结果见表 t ∀
所有的小鼠无论是给予 ‹ ± × 或 ‹   o血清中 „≥×
水平与模型组相比无显著性变化 ∀
表 t 普通小鼠和伪无菌小鼠口服 ‹ ± × 及
‹   后血清中 „× 值( ξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
rª# ®ªp t
„×r˜#p t
普通小鼠 伪无菌小鼠
空白对照组 uy qx ? ts q{ vy qw ? tx qw
模型组 tsu qz ? wv qt t|t qt ? tuz qx
‹ ± × us vx qx ? t{ qwul tuv qt{ ? {t q|
ts xx qs ? v| qttl ttv q| ? w| q|
x zw qu ? v{ q| tw{ qw ? {s qx
‹   us zy qw ? vy qt xw q{ ? tx qtul
ts {{ qu ? uz q| zy qt ? wz q|tl
x zv qz ? vz q| ttt qw ? tsy qu
阳性对照组 s qu wt qz ? t{ qtul {x q{ ? wu q|tl
注 }与模型组比较 tl Π s .sx u) Π s qst
3 q3 病理学检查
给予 ‹ ± × v个剂量组的伪无菌小鼠的肝脏 o组
织病变明显重于 ‹   v个剂量组 o肝细胞水样变
较明显 o间质有炎性细胞浸润 o并有网眼样坏死灶 o
肝细胞损伤程度较重 ∀
以上结果说明 ‹ ± × 对普通小鼠有保肝降酶的
作用 o对伪无菌小鼠则没有作用 ~‹   对伪无菌小
鼠有显著的保肝降酶作用 o可以认为经过肠道菌群
作用后的代谢产物是黄芩汤在体内产生保肝作用的
真正的活性成分 ∀
4 讨论
近年来 o国内外对肠道菌群的研究已经越来越
深入 o许多文献报道了代谢产物和原型化合物之间
的药效学比较 o代谢产物的药理作用远远强于原型
化合物 o说明经肠道菌群作用后的代谢产物是进入
体内 o真正发挥药理作用的活性成分≈{ o|  ∀但是对
复方经肠道菌群代谢作用的研究 o未见到有关报道 ∀
黄芩汤中各成分经肠道菌群作用后的各代谢产物的
标准品数量很少 o不够用于多组动物的药效学比较
试验中 o因此我们用黄芩汤经过肠道菌群体外作用
后的代谢产物的混合物进行药效学比较 ∀
采用 Š¤¯‘造成小鼠的肝损伤模型 o血清中转氨
酶 „× 和 „≥× 都显著升高 o但是经过药物处理后 o
只对 „× 的升高产生降低作用 o对 „≥× 没有明显
#vw{#
第 u{卷第 |期
ussv年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ |≥ ³¨·¨°¥¨µoussv
的作用 ∀另外 o‹   对普通小鼠血清中 „× 有降
低的趋势 o但是没有显著性的改变 o可能因为普通小
鼠对 ‹   的吸收和代谢又发生了作用 ∀有报道认
为黄酮苷元在体内发生开环裂解 o又能转化为其他
化合物 ∀对这方面的结论有待于进一步研究确定 ∀
≈参考文献 
≈t  ‹¤··²µ¬ o≥¤®¤°²·² × o Ž²¥¤¶«¬Žo ·¨¤¯ q  ·¨¤¥²¯¬¶° ²© Š¯ ¼2
¦¼µµ«¬½¬± ¥¼ ‹∏°¤± Œ±·¨¶·¬±¤¯ ƒ¯ ²µ¤q °¯ ¤±· §¨ot|{v ow{ktl }
v{ q
≈u  ‹¤··²µ¬ o≥«∏ ≠  o≥«¬°¬½∏  o ·¨¤¯ q  ·¨¤¥²¯¬¶° ²© °¤¨ ²±¬2
©¯²µ¬± ¤±§ • ¨¯¤·¨§ ≤²°³²∏±§¶ ¥¼ ‹∏°¤± Œ±·¨¶·¬±¤¯ …¤¦·¨µ¬¤q
≤«¨ ° °«¤µ° …∏¯¯ot|{x ovvk|l }v{v{ q
≈v  Ž¬° ⁄ ‹ o¤±ªŒ ≥ o¨¨≥ • o ·¨¤¯ q…¤¦·¨µ¬²¬§¨¶2vz o¤ ‹∏°¤±
Œ¬±·¨¶·¬±¤¯ …¤¦·¨µ¬∏° o °µ²§∏¦¨¶ Α2ª¯∏¦∏µ²±¬§¤¶¨ q …¬²¯ °«¤µ°
…∏¯¯ot||z ousk{l }{vw q
≈w  ∏² ƒ o«²∏  o¬∏  q⁄¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²©tw ≤«¨ °¬¦¤¯ ≤²±2
¶·¬·∏¨ ±·¶ ¬± ·«¨ ×µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨  §¨¬¦¬±¤¯ °µ¨³¤µ¤·¬²±
‹∏¤±ª´¬±2פ±ª ¥¼ ‹¬ª« ° µ¨©²µ°¤±¦¨ ¬´∏¬§ ≤«µ²°¤·²ªµ¤³«¼ q
…¬²¯ °«¤µ° …∏¯¯ousst ouwkyl }y|v q
≈x  ∏² ƒ o«²∏  o ≠¤±   o ·¨¤¯ q  ·¨¤¥²¯¬¶° ²© ≤²±¶·¬·∏¨ ±·¶
¬± ‹∏¤±ª´¬±2פ±ªo ¤ °µ¨¶¦µ¬³·¬²± ¬± ×µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨
 §¨¬¦¬±¨ o¥¼ ‹∏°¤±Œ±·¨¶·¬±¤¯ …¤¦·¨µ¬¤q…¬²¯ °«¤µ° …∏¯¯oussu o
uxkxl }xx{ q
≈y  • ¤±ª  o Ž∏µ²¶¤®¬≠ o ‘¤®¤¼¤°¤ × o ·¨¤¯ q  ¦¨«¤±¬¶° ²© Š¤¶2
·µ²¬±·¨¶·¬±¤¯ „¥¶²µ³·¬²± ²© Š¯ ¼¦¼µµ«¬½¬±¬± • ¤·¶q…¬²¯ °«¤µ° …∏¯¯o
t||w otzktsl }tv|| q
≈z  ∏² ƒ o «²∏   o ≠¤±   o ·¨¤¯ q ׫¨  ·¨¤¥²¯¬¶° ²© ≤²±2
¶·¬·∏¨ ±·¶ ²© ‹∏¤±ª´¬±2פ±ª ⁄¨ ¦²¦·¬²±o ¤ ×µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨
 §¨¬¦¬±¤¯ °µ¨³¤µ¤·¬²±¬± ≤²±√ ±¨·¬²±¤¯ oŠ µ¨°2©µ¨¨¤±§Š±²·²¥¬²·¨
¬¦¨ q „¶¬¤q ⁄µ∏ª ° ·¨¤¥²¯¬¶° ¤±§ °«¤µ°¤¦²®¬±¨ ·¬¦¶ousst ot
kvl }t{t q
≈{  ‘²¶¨  oŒ·²  oŽ¤°¬°∏µ¤Žo ·¨¤¯ q „ ≤²°³¤µ¬¶²± ²©·«¨ „±·¬2
«¨ ³¤·²·²¬¬¦ „¦·¬√¬·¼ ¥¨·º¨¨ ± Š¯ ¼¦¼µµ«¬½¬± ¤±§ Š¯ ¼¦¼µµ«¨·¬±¬¦
„¦¬§q °¯ ¤±· §¨ot||w oyskul }tvy q
≈|  „¥§¤¯2‹¤©¨ ½ „ o  ¶¨«¯«¼  • o‘¤®¤°∏µ¤‘o ·¨¤¯ q°²·¨±·„±·¬2
¦²±√∏¯¶¤±·° ¤¨²±¬° ·¨¤¥²¯¬±2Œ ⁄¨ µ¬√¤·¬√ ¶¨ ’¥·¤¬±¨ §¥¼ Œ±¦∏¥¤·¬²±
²© °¤¨ ²±¬©¯²µ¬± ¤±§ ׫¬²¯ ≤²°³²∏±§¶ º¬·« ¤¦·²¥¤¦¬¯¯∏¶…µ¨√¬¶q
≤«¨ ° °«¤µ° …∏¯¯ ot||{ owyk|l }tw{y q
Α Χοµ παρισον οφ τηε Προτεχτιϖε Αχτιϖιτψ οφ Λιϖερ ΙνϕυρψΙνδυχεδ
βψ ∆2γαλαχτ2οσαµινε Βετωεεν Ηυανγθιν2Τανγ ανδ
Τηειρ Μεταβολιτεσ βψ Ηυµ αν Ιντεστιναλ Αχτερια
 ˜’ ƒ ±¨ªo ‹ ’ ˜ «²±ª2°¬±ªo ≠ „‘  ¬¨2½«¨ ± o ÷Œ’‘Š ≠∏2¯ ¤± o • „‘ ≠¤±2¯¬o
≥’‘Š ‹²±ª2¼∏¨ o • ˜ ¬2¯ ∏± o ‹∞ • ²±ªo ‹ ˜Œ ¬¤±2 ¬´¤±ªo ≠ ∞ • ±¨2«∏¤
kŒ±¶·¬·∏·¨ ²© ≤«¬±¨ ¶¨ ¤·¨µ¬¤¯  §¨¬¦¤o≤«¬±¤ „¦¤§¨ °¼ ²© ×µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨  §¨¬¦¬±¨ o …¨ ¬­¬±ª tsszss o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¦²°³¤µ¨ ·«¨ ³µ²·¨¦·¬√¨ ¤¦·¬√¬·¼ ²© ¬¯√ µ¨¬±­∏µ¼ ¬±§∏¦¨§ ¥¼ ∆2ª¤¯¤¦·²¶¤°¬±¨ k Š¤¯ ‘l ¥¨·º¨¨ ±
‹∏¤±ª´¬±2פ±ª¤±§·«¨¬µ ° ·¨¤¥²¯¬·¨¶¥¼ «∏°¤± ¬±·¨¶·¬±¤¯ ¥¤¦·¨µ¬¤k‹Œ…l q Μετηοδ : × «¨ ¬¯√ µ¨¬±­∏µ¬¨¶¬± ¦²±√ ±¨·¬²±¤¯ ¤±§ ³¶¨∏§²2
ª¨µ°©µ¨¨ °¬¦¨ º µ¨¨ ¬±§∏¦¨§¥¼ Š¤¯‘q„©·¨µ²µ¤¯ ¤§°¬±¬¶·µ¤·¬²± ²© ‹∏¤±ª´¬±2פ±ª¤±§·«¨¬µ° ·¨¤¥²¯¬·¨¶°¬¬·∏µ¨¶¥¼ ‹Œ… o·«¨ ¶¨µ∏°
·µ¤±¶¤°¬±¤¶¨ k„× ¤±§ „≥×l ¤¦·¬√¬·¬¨¶º µ¨¨ §¨·¨¦·¨§q Ρεσυλτ : Œ± ¦²±√ ±¨·¬²±¤¯ °¬¦¨ o ¤¯µª¨ ¤±§ ° §¨¬∏° §²¶¨¶kus ¤±§ts ª#®ªp tl
²© ‹∏¤±ª´¬±2פ±ª §¨¦²¦·¬²± ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ µ¨§∏¦¨§·«¨ ¬±¦µ¨¤¶¨ ²©¶¨µ∏° „× ¤¦·¬√¬·¼ ¤©·¨µt{« Š¤¯‘·µ¨¤·° ±¨·qŒ± ³¶¨∏§²2ª¨µ°©µ¨¨
°¬¦¨ o ° ·¨¤¥²¯¬·¨¶¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ µ¨§∏¦¨§·«¨ „× ¯¨ √¨¯¶q‹²º √¨ µ¨o ‹∏¤±ª´¬±ª2פ±ª§¬§±. ·¤©©¨¦··«¨ „× ¯¨ √¨¯¶¬±·«¬¶®¬±§²© °¬¦¨ q
ײ ¤¯¯²©·«¨ ¤±¬°¤¯¶o „≥× ¯¨ √¨¯¶µ¨ °¤¬±¨ §·«¨ ¶¤°¨¤©·¨µ²µ¤¯ ‹∏¤±ª´¬±2·¤±ª²µ·«¨¬µ° ·¨¤¥²¯¬·¨¶qΧονχλυσιον : × «¨ ° ·¨¤¥²¯¬¶° ¥¼
¬±·¨¶·¬±¤¯ ¥¤¦·¨µ¬¤ ³¯¤¼¶¤µ²¯¨¬± ³«¤µ°¤¦²¯²ª¬¦¤¯ ©¨©¨ ¦·¶²© ¦²±¶·¬·∏¨ ±·¶²© ≤«¬±¨ ¶¨ «¨ µ¥¤¯ ° §¨¬¦¬±¨ q × «¨ ° ·¨¤¥²¯¬·¨¶²©·«¨ ¦²±2
¶·¬·∏¨ ±·¶¥¼¬±·¨¶·¬±¤¯ ¥¤¦·¨µ¬¤ º µ¨¨ ·«¨ µ¨¤¯ ¤¦·¬√¨¦²°³²±¨ ±·¶ιν ϖιϖο .
[ Κεψ ωορδσ] ‹∏¤±ª´¬±2פ±ª~ ° ·¨¤¥²¯¬·¨¶~¬±·¨¶·¬±¤¯ ¥¤¦·¨µ¬¤~³¶¨∏§²2ª¨µ°©µ¨¨ °¬¦¨ ~«¨ ³¤·²³µ²·¨¦·¬²±
≈责任编辑 方文贤 
#ww{#
第 u{卷第 |期
ussv年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ |≥ ³¨·¨°¥¨µoussv