全 文 :铁皮石斛降血糖作用及其机制的研究
吴昊姝t 3 o徐建华t o陈立钻u o孙继军u
kt q浙江大学 药学院 药理与毒理研究室 o浙江 杭州 vtssvt ~
u q浙江天皇药业有限公司 o浙江 杭州 vtsstul
≈摘要 目的 }研究铁皮石斛的降血糖作用及其机制 ∀方法 }采用正常小鼠 o肾上腺素性高血糖小鼠 o链脲佐
菌素性糖尿病k≥×2⁄l大鼠 o用放射免疫分析和免疫组化 °2≥°染色等方法进行研究 ∀结果 }铁皮石斛对正常
小鼠血糖及血清胰岛素水平无明显影响 o但可使 ≥×2⁄ 大鼠的血糖值降低 !血清胰岛素水平升高 !胰高血糖素水
平降低 ∀免疫组化染色显示 o给药大鼠胰岛 Β细胞数量增多 oΑ细胞数量减少 ∀它还可使肾上腺素性高血糖小鼠血
糖降低 !肝糖原含量增高 ∀结论 }铁皮石斛对肾上腺素性高血糖小鼠及 ≥×2⁄ 大鼠有明显的降血糖作用 ∀其降血
糖的胰内机制是促进胰岛 Β细胞分泌胰岛素 o抑制胰岛 Α细胞分泌胰高血糖素 o胰外机制可能是抑制肝糖原分解和
促进肝糖原合成 ∀
≈关键词 铁皮石斛 ~链脲佐菌素 ~血糖 ~胰岛素 ~胰高血糖素
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswlsu2stys2sx
糖尿病是一种胰岛素分泌绝对或相对不足引起
的代谢性疾病 o中医将它归入消渴证的范畴 ∀
据5中药志6记载 o石斛有/养阴益胃 o生津止渴0
的功效 o在治疗糖尿病的中药方剂中也有的采用石
斛≈t ou o但未见对石斛单味中药降血糖的研究报道 ∀
对铁皮石斛的养阴生津作用 o作者已作报道≈v ∀本
文研究铁皮石斛的降血糖作用 o并探讨其降血糖作
用的机制 o为铁皮石斛及其制剂用于治疗糖尿病提
供药理学依据 ∀
1 材料
1 q1 药物及试剂 铁皮石斛浸膏 o每克含生药 t q{
ª∀由浙江省天台县中药药物研究所提供 ∀临用时
用蒸馏水稀释成所需浓度 o给药剂量均折合生药 ª#
®ªpt表示 ∀链脲佐菌素k≥×l o批号 {|sysw o为美国
≥¬ª°¤公司产品 ∀盐酸肾上腺素注射液 o批号
|{ttuz o为武汉制药厂产品 ∀葡萄糖测定试剂盒由
卫生部上海生物制品研究所供应 ∀胰岛素及胰高血
糖素放射免疫测定试剂盒 o均为中国原子能科学研
究院产品 ∀豚鼠抗猪胰岛素抗血清 o批号 swx≤ o为
丹麦 ⁄¤®²公司产品 o工作浓度 tΒxss ∀小鼠抗人胰
高血糖素抗血清工作液 o批号 2uyxw o美国 ≥¬ª°¤公
≈收稿日期 ussu2ts2tt
≈通讯作者 3 吴昊姝 oר¯ }ksxztl {zutzusy oƒ¤¬}ksxztl
{zutzusy ∞2°¤¬¯}«¤²¶«∏pº∏ ¼¤«²²q¦²° q¦±
司产品 ∀辣根过氧化酶标记葡萄球菌 蛋白k≥ °2
≥°l o批号
ts{s o武汉博士德公司产品 o工作浓度
tΒxss ∀
1 q2 动物 小鼠 oα ⎯ 各半 o体重 t{ ∗ uw ª~≥⁄
大鼠 o⎯ o体重 t{s ∗ uws ª∀均由浙江大学医学院实
验动物中心提供 ∀
2 方法与结果
2 q1 铁皮石斛对正常小鼠血糖 !血清胰岛素的影响
取小鼠 vs 只 o随机均分为 v 组 o分别给生理盐水
us °#®ªpt和铁皮石斛 s qux os qx ª#®ªpt o¬ª∀每天给
药 t次 o连续 v §o于末次给药后 u «断头取血 o用葡
萄糖氧化酶法测血糖值 o用放射免疫法测定胰岛素 ∀
结果表明 o铁皮石斛 s qux os qx ª#®ªpt o¬ª后血糖和胰
岛素水平变化不明显k表 tl ∀
表 t 铁皮石斛对正常小鼠血糖及血清胰岛素的影响
k ξ ? σ, ν tsl
药物
剂量
rª#®ªpt#§pt
血糖值
r°°²¯#pt
血清胰岛素
rtsvΛ#pt
生理盐水 us x qu ? t qs uw qu ? x qu
铁皮石斛 s qux w q| ? s q|tl uw qx ? x qstl
s qx x qs ? s qztl uv qs ? x qttl
注 }与生理盐水对照组比 tl Π s qsx
2 q2 铁皮石斛对肾上腺素性高血糖小鼠血糖及肝
糖原含量的影响 小鼠 ws只 o随机均分为 w组 ou个
给药组分别给铁皮石斛各 s qx ot qs ª#®ªpt o¬ªo正常
对照组和肾上腺素对照组给生理盐水 us °#®ªpt o
#syt#
第 u|卷第 u期
ussw年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ u
ƒ ¥¨µ∏¤µ¼oussw
¬ªo每天 t次 o连续 v §∀于末次给药后 zs °¬±o两个
给药组和肾上腺素对照组均以肾上腺素 s qu °ª#
®ªpt o¶¦oxs °¬±后断头取血测血糖 o并迅速剖取肝
脏 o用碘试剂法测定肝糖原含量 ∀
小鼠¶¦肾上腺素后血糖值明显升高 o肝糖原含
量明显降低k均为 Π s qsstl ∀铁皮石斛 s qx ot qs ª#
®ªpt可使肾上腺素性高血糖小鼠的血糖值明显降低
kΠ s qsstl ot qs ª#®ªpt组肝糖原含量比肾上腺素
对照组明显增加k Π s qst o表 ul ∀
表 u 铁皮石斛对肾上腺素性高血糖小鼠血糖及
肝糖原含量的影响k ξ ? σ, ν tsl
组别
剂量
rª#®ªpt#§pt
血糖值
r°°²¯#pt
肝糖原含量
r°ª#ªpt
正常对照 w q| ? s qyul | qt ? t qvul
肾上腺素对照 tu qv ? u qw t q{ ? t qt
铁皮石斛 s qx z qt ? t qsul u qz ? t q{
t qs y qz ? s q|ul w qv ? t q{tl
注 }与肾上腺素对照组比 tl Π s .st , u) Π s qsst
2 q3 铁皮石斛对 ≥×2⁄ 模型≈w 大鼠血糖 !血清胰
岛素及胰高血糖素的影响 大鼠禁食 ty «o称重 o¬³
≥× zs °ª#®ªpt ozu «后剪尾取血 o取血前禁食 ty «o
用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖值 o取血糖值大于
ty °°²¯ #pt的大鼠供试验用 ∀将糖尿病大鼠随机
均分为 v组 o每组 y只 ∀u组分别给铁皮石斛 s qtux o
s qx ª#®ªpt o¬ª~t组为模型对照组 o另设正常对照组 o
均给以等容量生理盐水 ∀各组分别于给药后 u «剪
尾取血 o分离血清 o测血糖 !胰岛素及胰高血糖素 ∀
结果表明 o铁皮石斛 s qtux os qux ª#®ªpt o¬ªo均对 ≥×
诱发的糖尿病大鼠有明显降血糖作用k Π s qsstl ~
铁皮石斛 s qux ª#®ªpt ¬ª可使糖尿病大鼠胰岛素水
平明显升高k Π s qsxl o表明铁皮石斛能促进糖尿病
大鼠胰岛 Β细胞分泌胰岛素 ∀铁皮石斛 s qtux os qux
ª#®ªpt o¬ª可使糖尿病大鼠胰高血糖素水平明显降
低k Π s .sx与 Π s qstl o表明铁皮石斛能抑制胰
岛 Α细胞分泌胰高血糖素k表 vl ∀
表 v 铁皮石斛对 ≥×2⁄ 大鼠血糖 !
血清胰岛素及胰高血糖素的影响k ξ ? σ, ν yl
组别
剂量
rª#®ªpt
血糖值
r°°²¯#pt
血清胰岛素
r ≅ tsvΛ#pt
胰高血糖素
r ≅ tsv³ª#pt
正常对照 x q{ ? s quvl uw qw ? y qxvl |t ? tvvl
≥×对照 t| qz ? t qz tw qs ? u q| tws ? us
铁皮石斛 s qtux y q| ? s qyvl tz qy ? v qy tsu ? uutl
s qux x qy ? s qvvl us qy ? x qttl |{ ? t|ul
注 }与 ≥×对照组比 tl Π s .sx , u) Π s .st , v) Π s qsst
2 q4 铁皮石斛对 ≥×2⁄ 大鼠血糖及胰岛 ΑoΒ细胞
形态学的影响
2 q4 q1 预防用药对 ≥×2⁄ 大鼠血糖及胰岛 ΑoΒ细
胞形态学的影响 大鼠 tu只 o随机均分为 u组 o分
别给铁皮石斛 s qux ª#®ªpt和生理盐水 ts °#®ªpt o
¬ªo每天u次 o连续z§o于第x天上午给药后t«¬³
≥× tss °ª#®ªpt o给 ≥× v §后尾尖取血测空腹血
糖值 ∀从每组各取大鼠 u只 o颈椎脱位法处死 o迅速
剖取胰腺尾部 o用 w h多聚甲醛液固定 o石蜡包埋 o
切片 o进行胰岛素及胰高血糖素的免疫组织化学
°2≥°法染色≈x o以正常大鼠胰腺作为阳性对照 o
以 ×µ¬¶2≤¯ 缓冲液代替第一抗体作为阴性对照 o光
镜下观察胰岛 ΑoΒ细胞形态 ∀结果表明 o大鼠¬³≥×
tss °ª#®ªpt v §后 o生理盐水对照组大鼠血糖值为
kuv q{ ? u qul °°²¯ #pt ~铁皮石斛预防组血糖值为
ktw q| ? z qxl °°²¯#pt o与生理盐水对照组比较有
显著性差异k Π s qsxl ∀
胰岛素免疫组织化学染色后 o表达胰岛素的免
疫反应阳性产物为棕黄色颗粒 o存在于免疫反应阳
性 Β细胞胞质内 ∀正常大鼠胰岛表达胰岛素的免疫
反应阳性 Β细胞位于胰岛中央大部 o阳性反应较强
k图 tl ∀省去第一抗体抗胰岛素血清的阴性对照切
片染色结果为阴性 o说明该染色为特异性 ∀模型对
照组在给 ≥×后 v §o以及继续饲养 t ou ow周时大鼠
胰岛细胞完全呈阴性反应或仅有少数呈弱阳性k图
ul ∀铁皮石斛预防组大鼠 u只 o血糖值分别为 { q| o
x qu °°²¯#pt o胰腺免疫组化染色阳性 Β细胞数量比
模型对照组为多 o阳性反应比模型对照组为强 o比正
常对照组为弱k图 vl ∀
图 t 胰岛素免疫组 图 u 胰岛素免疫组
化染色正常组 ≅ wss 化染色模型组 ≅ wss
胰高血糖素免疫组织化学染色显示 o正常胰岛
表达胰高血糖素的免疫反应阳性 Α细胞位于胰岛周
#tyt#
第 u|卷第 u期
ussw年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ u
ƒ ¥¨µ∏¤µ¼oussw
边部 o多数呈单层排列 o棕黄色阳性产物位于胞质
内 o染色较浅k图 xl ∀省去第一抗体抗胰高血糖素
血清的阴性对照染色结果均为阴性 o说明该染色为
特异性 ∀模型对照组在各个时间阳性 Α细胞染色较
深 o且数量较多 o有的 Α细胞由胰岛边缘部向中央部
增生 o呈宽带状分布k图 yl ∀铁皮石斛预防组大鼠 u
只表达胰高血糖素的 Α细胞数量较模型对照组减
少 o呈小灶状分布于胰岛周边 o阳性反应较模型对照
组为弱k图 zl ∀
图 v 胰岛素免疫组化染色 图 w 胰岛素免疫组化染色
铁皮石斛预防组 ≅ wss 铁皮石斛治疗组 ≅ uss
图 x 胰高血糖素免疫组化 图 y 胰高血糖免疫组化
染色正常组 ≅ wss 染色模型组 ≅ wss
图 z 胰高血糖素免疫组化 图 { 胰高血糖素免疫组化
染色铁皮预防组 ≅ wss 染色铁皮治疗组 ≅ wss
2 q4 q2 治疗用药对 ≥×2⁄ 大鼠血糖及胰岛 ΑoΒ细
胞形态学的影响 大鼠 uw只 o随机均分为 v组 ∀t
组为正常对照组 o另 u组¬³≥× tss °ª#®ªpt ov §后
造成糖尿病大鼠模型 ∀治疗组以铁皮石斛 s qux ª#
®ªpt o¬ªo正常对照组和模型对照组以生理盐水 ts
°#®ªpt o¬ªo每天 u次 o连续给药 w周 ∀于给药 t ou o
w周时 o分别于次晨给药前取血测空腹血糖值 o并分
次每组取 u只大鼠处死 o迅速剖取胰尾固定 o同上法
制作组织切片进行免疫组织化学染色 ∀
结果糖尿病模型对照组大鼠于 t ou ow周时血糖
值分别较正常对照组显著升高k Π s qsstl ∀治疗组
大鼠于 u周和 w周时 o血糖值分别较相应的模型对
照组大鼠血糖值为低 o其中治疗 u周时血糖值与模
型对照组比较有显著性差异k Π s qsxl ow周时血糖
值更低 o因动物数少而未作统计学处理k表 wl ∀
表 w 铁皮石斛 s qux ª#®ªp t¬ª
每日 u次治疗用药对 ≥×2⁄ 大鼠血糖的影响k ξ ? σ)
组别
血糖值r°°²¯#pt
t周 u周 w周
正常对照 x qv ? s q{ulk{l y qw ? s qxulkyl x qx ? s qzulkwl
≥×对照 ut qt ? v qsk{l u{ qz ? u qxkyl u{ q{ ? u qxkvl
铁皮石斛 ut qs ? t q|k{l ut qv ? x qxtlkyl ty qy ? { q|kvl
注 }≠括号内为动物数 ~ 与 ≥×对照组比 tl Π s .sx , u) Π
s qsst
免疫组化染色结果显示 o铁皮石斛治疗 t周时 o
表达胰岛素的 Β细胞比模型对照组略为增多 o但数
量仍较少 o阳性反应较弱 ~阳性 Α细胞数量较模型对
照组减少 o阳性反应比模型对照组减弱 ∀u周及 w周
时 o与模型对照组比较 Β细胞数量增多 o阳性反应增
强 o但仍较正常对照组为弱k图 wl ~Α细胞阳性反应
较模型对照组减弱 o已较接近正常对照组k图 {l ∀
3 讨论
3 q1 本研究结果表明 o铁皮石斛能明显降低 ≥×2
⁄ 大鼠的血糖值 o它能促进胰岛 Β细胞分泌胰岛
素 o提高血清胰岛素水平 o并能抑制胰岛 Α细胞分泌
胰高血糖素 o使血清胰高血糖素水平降低 ∀这说明
该药可通过调节胰岛 ΑoΒ细胞分泌的激素水平来发
挥降血糖作用 o具有胰内降血糖作用机制 ∀铁皮石
斛与口服降血糖药磺酰脲类不同 o它对小鼠正常血
糖无降低作用 o也不提高正常小鼠的血清胰岛素水
平 ∀
3 q2 本研究免疫组化染色结果显示 o≥×2⁄ 大鼠
胰岛 Β细胞基本上不表达胰岛素 o提示 ¬³tss °ª#
®ªpt ≥×对大鼠胰岛 Β细胞具有严重的损伤作用 o
#uyt#
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ u
ƒ ¥¨µ∏¤µ¼oussw
使胰岛素的合成和分泌减少 o导致血中胰岛素水平
明显降低 o血糖值持续升高 o至给 ≥×后 w周仍维持
高血糖状态 ∀同时还观察到胰岛 Α细胞呈现明显的
增生现象 o使血中胰高血糖素水平明显升高 o此与文
献≈x 报道相符 ∀用铁皮石斛给大鼠预防和治疗用
药 o预防组和治疗组表达胰岛素呈阳性的胰岛 Β细
胞数量增多 o阳性反应较模型对照组为强 o而表达胰
高血糖素呈阳性的 Α细胞则数量减少 o阳性反应比
模型对照组明显减弱 ∀以上结果说明该药对 ≥×诱
发大鼠糖尿病具有一定的预防和治疗效果 o提示对
≥×引起的 Β细胞的损伤具有修复作用 ∀由于大鼠
不同时间作组织形态学观察的动物数较少 o所得结
果仅是初步的 o有待进一步研究 ∀
3 q3 铁皮石斛还可增加肾上腺素性高血糖小鼠的
肝糖原含量 o降低肾上腺素性高血糖小鼠的血糖值 o
可能该药具有抑制肾上腺素引起的肝糖原分解和促
进肝糖原合成的作用 o从而可减少血糖的来源 o增加
血糖的去路 o降低小鼠的血糖值 o故铁皮石斛也具有
胰外的降血糖作用机制 ∀关于铁皮石斛对糖代谢的
影响 o作者已作研究表明该药不具有促进葡萄糖氧
化的作用 ∀
3 q4 本研究采用高血糖小鼠和糖尿病大鼠模型 o从
血糖值 !血清胰岛素和胰高血糖素水平 o结合胰岛 Β
细胞和 Α细胞的形态学变化等方面肯定了铁皮石斛
具有明显降血糖作用 o初步探讨了该药作用的胰内
和胰外机制 o此为铁皮石斛用于治疗糖尿病提供了
药理学依据 ∀已作毒性试验表明该药毒性很低 o故
具有开发降血糖新药的前景 ∀
≈参考文献
≈t 赵冠英 o张 京 q保元降糖冲剂治疗糖尿病 vx例临床观察 q中
医杂志 ot||v ok|l }xws q
≈u 朱建华 q朱良春老中医治疗消渴病的经验 q江苏中医 ot||u o
kzl }t q
≈v 徐建华 o陈立钻 o李 莉 q铁皮石斛与西洋参的养阴生津作用
研究 q中草药 ot||x ouykul }z| q
≈w 于德民 o吴 锐 o尹 潍 o等 q实验性链脲佐菌素糖尿病动物模
型的研究 q中国糖尿病杂志 ot||x ovkul }tsx q
≈x 张 能 o张 徽 o张志勇 o等 q链佐菌素糖尿病大鼠胰岛损伤及
牛磺酸对损伤保护的病理形态免疫组化研究 q重庆医科大学
学报 ot||z ouukvl }usv q
Στυδιεσ ον αντι2ηψπεργλψχεµιχ εφφεχτ
ανδ ιτσ µεχηανισµ οφ ∆ενδροβιυµ χανδιδυµ
• ¤²2¶«∏t o ÷ ¬¤±2«∏¤t o≤∞¬2½∏¤±u o≥¬2∏±u
kt . ∆επαρτµεντ οφ Πηαρµαχολογψ ανδ Τοξιχολογψ, Χολλαγε οφ Πηαρµαχευτιχαλ Σχιενχεσ , Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtssvt , Χηινα ;
u . Ζηεϕιανγ ΤιανΗυανγ Πηαρµαχευτιχαλ ΧΟ . ΛΤ∆ . Ηανγζηου vtsstu , Χηιναl
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼·«¨ ¤±·¬2«¼³¨µª¯¼¦¨ °¬¦ ©¨©¨¦·¤±§¬·¶° ¦¨«¤±¬¶° ²© ∆ενδροβιυµ χανδιδυµ k⁄≤l q Μετηοδ : ²µ°¤¯
°¬¦¨ o¤§µ¨±¤¯¬±¨ 2¬±§∏¦¨§«¼³¨µª¯¼¦¨ °¬¦°¬¦¨ o¶·µ¨³·²½²·²¦¬±2¬±§∏¦¨§§¬¤¥¨·¬¦k≥×2⁄l µ¤·¶º µ¨¨ ∏¶¨§q׫¨ ° ¦¨«¤±¬¶°¶²©·«¨ ¤±·¬2«¼³¨µ2
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·¬²±¶¬± ≥×2⁄ µ¤·¶q׫¨ µ¨¶∏¯·¶²©¬°°∏±²«¬¶·²¦«¨ °¬¦¤¯ ¶·¤¬± §¨ °²±¶·µ¤·¨§·«¤··«¨ ±∏°¥¨µ²©¬¶¯ ·¨Β¦¨¯¯¶º¤¶¬±¦µ¨¤¶¨§¤±§·«¤·²©¬¶¯ ·¨Α
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µ¤·¶q·¶° ¦¨«¤±¬¶°¶¤µ¨ ¶·¬°∏¯¤·¬±ª·«¨ ¶¨¦µ¨·¬²± ²©¬±¶∏¯¬±©µ²° Β ¦¨¯¯¶¤±§¬±«¬¥¬·¬±ª·«¨ ¶¨¦µ¨·¬²± ²©ª¯∏¦¤ª²±¶©µ²° Α¦¨¯¯¶o¤±§¬·¦¤± ³µ²¥2
¤¥¯¼ §¨¦µ¨¤¶¨ ·«¨ §¨¦²°³²¶¬·¬²± ²© ¬¯√ µ¨ª¯∏¦²ª¨ ± ¤±§¬±¦µ¨¤¶¨ ·«¨ ¶¼±·«¨¶¬¶²© ¬¯√ µ¨ª¯∏¦²ª¨ ±q
[ Κεψ ωορδσ] ∆ενδροβιυµ χανδιδυµ ~¶·µ¨³·²½²·²¦¬±~¥¯²²§¶∏ª¤µ~¬±¶∏¯¬±~ª¯∏¦¤ª²±
≈责任编辑 方文贤
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第 u|卷第 u期
ussw年 u月
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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