全 文 ：葛根总黄酮指纹图谱数据分析方法探讨
郑一敏t ou 3 o胥秀英u o傅善权u
kt q重庆大学 生物力学与组织工程教育部重点实验室 o重庆 wsssww ~
u q重庆市中药研究院 o重庆 wsssyxl
≈收稿日期 ussv2sx2ux
≈基金项目 高等学校重点实验室访问学者基金资助ksutst{l
≈通讯作者 3郑一敏 oר¯ }ksuvlyuwyuts|
中药指纹图谱是指中药所共有的特征性的某类
化学成分的色谱或光谱的特征性图谱 ∀目前 o指纹
图谱的测定多采用高效液相色谱法 o评价指标一般
为各共有色谱峰定量化表征参数 o如保留时间 !峰面
积或峰高值≈t o缺乏各共有色谱峰定性量化的表征
参数 o难以体现指纹图谱整体性≈u ∀本研究以葛根
黄酮中有效成分葛根素为标准参照物 o采用高效液
相色谱法 o通过对 ts批葛根总黄酮进行测定 o选用
各共有峰的保留时间 !峰面积百分数 !峰高百分数 !
光谱相似系数 !v点纯度系数为表征参数 o建立了葛
根总黄酮指纹图谱模式标准 o采用模式识别方
法≈v2x o分别对 v批样品中的共有峰与模式标准中的
共有峰进行了分析 o计算出样品中的共有峰与模式
标准中的共有峰的相似系数 o从而较为直观地判别
待测样品与标准的差异大小 ∀该方法稳定 o可行 o现
报道如下 ∀
1 仪器与试剂
岛津液相色谱仪 k包括 ≤ p y⁄泵 !≥°⁄ p
ts∂°二极管检测器 !≥≤p ts×∂°控制器 !≤×
p ts≥∂°柱温箱 !≤≥≥ p ∂°y qt数据工作站l
葛根素对照品k中国药品生物制品检定所 o批号
szxu2|{syl ~葛根总黄酮由本实验室自制 ~甲醇为分
析纯 ~水为重蒸馏水 ∀
2 方法与结果
2 q1 色谱条件
参考文献≈y 并经过筛选试验 o确定最佳色谱条
件为 }°«¨ ±²°¨ ±¨ ¬∏±¤ ≤t{色谱柱kw qy °° ≅ txs °° o
x Λ°l o流动相甲醇2水kuvΒzzl o柱温 ux ε o检测波
长 uxs ±° o流速 t qs °#°¬±pt o进样量 }供试品与对
照品溶液均为 ts Λ∀
2 q2 供试品溶液的制备
取葛根黄酮提取物 o用 ys h甲醇溶解制成 t qs ª#
pt的溶液 os qwx Λ°膜滤过 o滤液作为供试品溶液 ∀
2 q3 葛根素对照品溶液的制备
取葛根素对照品一定量 o用 ys h甲醇溶液溶解
制成 s qu ª#pt的溶液 os qwx Λ°膜滤过 o滤液作为对
照品溶液 ∀
2 q4 方法学考察与结果
2 q4 q1 专属性试验 取空白溶剂 !葛根素对照品与
葛根黄酮供试品溶液 o分别在上述色谱条件下测定 o
结果样品溶剂不干扰测定 o葛根素对照品色谱峰 !葛
根总黄酮中葛根素对应峰经二极管阵列检测器分
析 o色谱峰纯度达 s q||| yk图 tl ∀
图 t 葛根素对照品与葛根黄酮样品色谱图
t q葛根素 ~ q葛根素对照品 ~
q葛根黄酮样品
2 q4 q2 稳定性试验 取同一供试品溶液 o在上述色
谱条件下 o分别于 s ou ow o{ oty «检测 o以葛根素对应
峰为标准峰 o其主要共有峰的相对保留时间稳定 o经
≤≥≥2∂°y qt软件处理 o各共有峰的相对保留时间
≥⁄t q|| h o峰面积 ≥⁄ u qx| h o峰高百分数 ≥⁄
u q{v h ov点峰纯度 ≥⁄u qtt h o相似性系数 ≥⁄为
u qvt h ∀
2 q4 q3 精密度试验 取同一供试品溶液 o连续进样
x次 o分别经 ≤≥≥2∂°y qt软件处理 o各共有峰的相
对保留时间 ≥⁄ u qvs h o峰面积 ≥⁄ u qzv h o峰高
百分数 ≥⁄u qyz h ov点峰纯度 ≥⁄u q|z h o峰相似
性系数 ≥⁄t q|{ h ∀
sz
第 vs卷第 t期
ussx年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qvs o¶¶∏¨ t
¤±∏¤µ¼oussx
2 q4 q4 重复性试验 取同一批供试品 y份 o分别处
理测定 o各共有峰的相对保留时间 ≥⁄ u q{| h o峰
面积 ≥⁄u q|y h o峰高百分数 ≥⁄u qxv h ov点峰纯
度 ≥⁄u q|t h o峰相似性系数 ≥⁄u qz{ h ∀
2 q5 理论模式标准建立 !样品测定和计算
选择共有色谱峰有 ν 个 o分别为 Ξt , Ξu , Ξv ,
, , Ξν o每个共有色谱峰有 Σ种特征参数 o通过对多
批次样品测定 o计算各特征参数平均值 o建立指纹图
谱模式标准及样品测定参数 ∀
采用广义夹角余弦法≈x o计算样品共有色谱峰
与标准模式中对应的色谱峰 Ξι相似度 ∀
2 q6 葛根总黄酮模式标准的建立
随机抽取 usss ∗ ussu年来制备的 ts批样品 o
按照样品制备方法和测试条件进行测定 o计算其共
有指纹图谱峰的保留时间 !面积百分数 !峰高百分
数 !v点峰纯度与光谱相似系数 o得出葛根总黄酮指
纹图谱的模式标准k表 t l ∀
表 t ts批葛根总黄酮指纹图谱的模式标准
共有
峰号
保留
时间
面积
百分数
峰高
百分数
v点峰
纯度
峰光谱相
似系数tl
t y qwu| u qxuy y qytw s q||| s q||{
u | qtys u qtzx w qsuz s q||| s q||z
v ts q|xs x qvzz | q|y| s q||| s q|{w
w tz qtty t qu|z t qut{ s q|zy s q|z|
x ut q{tv xu qttw xv qytt s q||| t qsss
y uy qs|{ | qtvv | qtsu s q||{ s q|{w
z vs q|{v u qzyx t q{{| s q|z| s q||y
{ vx qz{u uu qs|y tv qsst s q|{u s q||y
| wv q|yx t qtyw s qxy| s q|yu s q|wx
注 }tlt号峰为葛根素对应的峰 o以该峰为标准峰 o计算与其他色
谱峰的光谱相似系数
2 q7 样品测定与相似度
对 ussv年制备的 v批葛根总黄酮进行了测定 ∀
各共有峰与模式标准的相似度 ov批葛根总黄酮中
各共有色谱峰均大于 s q|k表 ul o即各批样品与标准
有较好的相似性 o表明生产工艺稳定 ∀
表 u v批样品的各共有峰与标准模式对应色谱峰的相似度
批号
峰号
t u v w x y z { |
t s q||| { s q||| { s q||| { s q||| | s q||| { s q||| w s q||| { s q||z x s q||| |
u s q|{w t s q||v { s q||x y s q||| t s q||| v s q||| v s q||z w s q||| { s q||| |
v s q||| y s q||| { s q||| | s q||| w s q||| | s q|{| v s q||| u s q||| s s q||{ |
3 讨论
本研究在进行指纹图谱分析时 o除采用了时间 !
峰面积百分数 !峰高百分数等定量表征参数外 o还采
用了峰光谱相似性系数和峰 v点纯度系数 ∀峰光谱
相似性系数是指一色谱图谱中各共有色谱峰峰顶点
的紫外吸收光谱与该色谱图谱中已知的对照品k或
参照物l色谱峰峰顶点紫外吸收光谱的相似程度 o相
似性系数越接近 t o峰紫外光谱特征越相似 o表明系
同类物质的可能性越大 o因此 o该表征参数尤其适合
于中药有效部分总体评价 ~v点峰纯度是指峰开始
点 !峰顶点和峰结束点之间的拟合程度 ov点峰纯度
系数越接近 t o表明该色谱峰含杂质越少 ∀峰光谱相
似性系数和峰 v点峰纯度系数为具有模糊性的定性
量化表征参数 ∀在此基础上 o建立了指纹图谱模式
标准 o采用模式识别方法≈w2y o计算出样品中的共有
峰与模式标准中的共有峰的相似系数 o根据该数值 o
不仅可以从定性和定量角度评价中药指纹图谱 o充
分反映指纹图谱的整体性 o而且还可较为直观地判
别待测样品与模式标准的差异大小 ∀
≈参考文献
≈t 翟为民 o袁永生 o周玉新 q人参 !西洋参及三七参指纹图谱鉴别 q
中国中药杂志 ousst ouykzl }w{t q
≈u 梁逸曾 o谢培山 q指纹图谱的化学模式识别分析 q世界科学技术
#中药现代化 oussu owkxl }wz q
≈v 程翼宇 o陈闽军 o吴永江 q化学指纹图谱的相似性测度及其评价
方法 q化学学报 oussu oyskttl }ustz q
≈w 楼世博 o孙 章 o陈化威 o等 q模糊数学 q北京 }科技出版社 o
t|{x qtsx q
≈x 潘唏陵 o汪 伟 o叶崇义 q模糊聚类分析应用于术类药材分类的
基本模式 q中国药科大学学报 ot||w ouxkyl }vw{ q
≈y 梁光义 o曹佩雪 o徐必学 o等 q°≤ 法测定葛根芩莲汤不同煎液
中葛根素的含量 q华西药学杂志 ousst otykxl }vzt q
≈责任编辑 李 禾
5中国中药杂志6ussx年改为半月刊
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