全 文 ：海洋真菌 Αλτερναλια σπ1发酵液中化学成分的研究
张海龙t o田 黎u o付红伟t o裴月湖t 3 o华会明t
kt1 沈阳药科大学 中药学院 o辽宁 沈阳 ttssty ~u1 国家海洋局 第一海洋研究所 o山东 青岛 uyyssvl
≈摘要 目的 }研究海洋真菌 Αλτερναλια σπ1 菌株发酵液的化学成分 o研究其成分对稻瘟霉的抑制情况 o为从海
洋微生物代谢产物中寻找新型抗真菌活性物质奠定基础 ∀方法 }利用各种色谱技术进行分离 o根据光谱数据鉴定
结构 ∀结果 }从中分离得到 y个成分 o分别鉴定为对苄氧基苯酚k ´l o对羟基苯乙胺k µl ov2羟甲基2{羟基吡咯并
哌嗪 u ox2二酮k ¶l ov2异丁基2y2另丁基2哌嗪2u ox2二酮k ·l oxΑo{Α2表二氧麦角甾2y ouu2二烯2vΒ醇k ∏l ovΒ2羟基2胆
甾2x烯k √ l ∀结论 }其中化合物 ´ oµ o¶ o·对稻瘟霉分生孢子或菌丝体有一定抑制作用 ~化合物 ´ oµ o¶为首次
从本属菌中分离得到 ∀
≈关键词 海洋真菌 ~抗真菌 ~稻瘟霉
≈中图分类号 u{w qt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxlsx2svxt2sv
≈收稿日期 ussv2tu2tx
≈基金项目 国家高技术研究发展计划k{yv项目lkusstyuwsusl
≈通讯作者 3裴月湖 oר¯ }ksuwluv{wvztt2vvu| o∞2°¤¬¯}½««¯¦µ¨¶·
tyv1¦²°
近年来 o国内外对海洋微生物代谢产物的研究
日益增多 o并已从中分离出许多有活性的化合物 o其
中以抗菌和抗肿瘤化合物较多 ∀海洋微生物种类繁
多 !数量巨大 !资源丰富 o目前人类研究海洋微生物
的种类还不及总数的 x h ≈t o海洋微生物代谢产物
结构多样 !功能各异 ∀因此 o对海洋微生物代谢产物
的研究是新药开发的有效途径之一 ∀作者采用稻瘟
霉活性筛选体系≈u 进行菌种筛选 o发现海洋真菌
Αλτερναλια σπ1的发酵液对稻瘟霉分生孢子有很强的
抑制和诱导变形作用 ∀对该菌株发酵液中的代谢产
物进行活性追踪分离 o得到了 y个化合物 ∀
1 仪器和材料
日本 ≠¤±¤¦² ° p ≥v型显微熔点测定仪 o
µ∏®¨µ
p ÷ p vss型核磁共振仪 o⁄÷ p vss质谱仪 oƒ¬±±¬2
ª¤± ≤± ≤2≥ ∀稻瘟霉由日本东京大学分子生物
学研究所提供 oΑλτερναλια σπ1 真菌由青岛附近海洋
海泥中分离得到 o经国家海洋局第一海洋研究所田
黎教授鉴定 ∀
2 发酵液中活性成分的追踪分离
海洋真菌 Αλτερναλια σπ1菌株是由采自青岛附近
海洋海泥中分离得到 o纯化后在蛋白胨培养基上培
养 o大批发酵 Αλτερναλια σπ1 菌株 o过滤得发酵液 ws
o浓缩至 us o测定活性 o发现该发酵液有较好的诱
导稻瘟霉分生孢子变形作用 o最小活性浓度 v1x ≅
tsp x #pt ∀将该发酵液分别用醋酸乙酯和正丁醇
萃取 o回收醋酸乙酯和正丁醇 o将两部分合并得浸膏
z1x ªo最小活性浓度为 t{ °ª#pt ∀经反复硅胶柱
色谱纯化 o以 ≤≤¯ v2≤v 梯度洗脱 o先后得化合
物 ´ ∗ √ o结构见图 t ∀
图 t 化合物 ´ ∗ √的结构
3 结构鉴定
化合物 k ´ l 无色针晶 k甲醇l o°³ tt| ∗
tut ε o ∞2≥和tv ≤2 k⁄∞°×l确定分子组分为
≤tvtusu ot2 kvss ½o≤⁄v≤≤⁄vl ∆}z1{{kt o
¶ol oz1wxku o° o2vχ o 2xχl oz1vzku o° o2uχ o
2yχl oz1vskt o° o2wχl oy1{xku o§oϑ |1s ½o2
v o2xl oy1zxku o§oϑ |1s ½o2u o2yl ∀ tv≤2
kzx1x ½o≤⁄v≤≤⁄vl ∆}txv1tk≤2wl otxu1wk≤2tl o
tv{1|k≤2tχl otu|1uk≤2vχ o≤2xχl otu{1wk≤2wχl otu{1v
k≤2uχ o≤2yχl otty1zk≤2v o≤2xl otty1yk≤2u o≤2yl ∀ ∞2
≥ µ/ ζ usskln ots| o|t o{t oyx oxv ov| ∀根据以上
数据并与文献≈v ow 对照 o鉴定该化合物为对苄氧基
#txv#
第 vs卷第 x期
ussx年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ x
¤µ¦«oussx
苯酚 ∀
化合物k µl 无色针晶k甲醇l o°³ tyw ∗ tyx
ε ot2 kvss ½o≤⁄v⁄l ∆}z1s{ku o§oϑ {1x
½o2uχ o2yχl oy1zxku o§oϑ {1x ½o2vχ o2xχl o
v1s|ku o·oϑ {1t ½o2tl ou1{wku o·oϑ {1t ½o
2ul ∀tv ≤2 kzx1x ½o≤⁄v⁄l ∆}txz1{k≤2wχl o
tvs1{k≤2uχ o≤2yχl otu{1wk≤2tχl otty1{k≤2vχ o≤2xχl o
wu1vk≤2tl ovv1{k≤2ul ∀根据以上数据并参照文献
≈x o鉴定该化合物为对羟基苯乙胺 ∀
化合物k ¶l 白色粉末 o°³uwv ∗ uwx ε o茚三
酮反应阴性 ot2 kvss ½o⁄ul ∆}u1tskt o
§§§oϑt tv1x ½oϑu tu1y ½oϑv w1u ½l ou1vs
kt o§§oϑt tv1x ½oϑu y1v ½l≤u2z ov1wukt o
§§oϑ tv1u ½l ov1{ukt o§§oϑt tv1u ½oϑu w1{
½l≤u2| ov1{ykt o§§oϑt tu1s ½oϑu v1y ½l o
w1svkt o§§oϑt tu1s ½oϑu v1y ½l≤u2 ow1u
kt o§§oϑ v1s ½l ow1wyku o°l2y ¤±§ 2{ ~tv ≤2
kzx1x ½o⁄ul ∆}tzv1ysk≤2xl otyz1vyk≤2ul o
y|1uxk≤2{l oyt1wwk≤u2l ox{1{sk≤2yl ox{1xuk≤2
vl oxx1xwk≤2|l ov{1wwk≤2zl ∀ ∞≥2≥ µ/ ζ ust≈ n
n ∀综合以上信息并参考文献≈y 鉴定该化合物
为 v2羟甲基2{羟基吡咯并哌嗪 u ox2二酮 ∀
化合物k ·l 无色针晶k甲醇l ot2 kvss
½o⁄ul ∆}v1yxkt o·oϑ {1t ½o2vl ov1xxkt o
§oϑ v1| ½o2yl ot1{|kt o° o2zl ot1yuku o° o
2ttl ot1yv kt o° o2tul ∀ tv ≤2 kzx1x ½o
⁄ul ∆}tzy1|k≤2ul otzx1yk≤2xl oyt1uk≤2yl oxx1tk≤2
vl owt1xk≤2ttl ovz1xk≤2zl ouy1tk≤2{l oux1{k≤2tul o
uv1zk≤2tvr≤2twl ouu1y k≤2twr≤2tvl oty1v k≤2tsl o
tu1{k≤2|l ∀从以上数据可鉴定该化合物为 v2异丁
基2y2另丁基哌嗪2u ox2二酮 o与文献≈z 对照一致 ∀
化合物k ∏l 无色针状结晶k醋酸乙酯l o°³
tzx ∗ tzz ε ots h硫酸乙醇溶液显黑绿色 ∀t2
kvss ½o≤⁄≤¯ vl ∆}s1{tkv o§oϑ y1v ½o2uy ²µ
2uzl os1{ukv o¶o2t{l os1{vkv o§oϑ y1v ½o2
uz ²µ2uyl os1|skv o¶o2t|l os1|skv o§oϑ y1|
½o2u{l os1||kv o§oϑ y1y ½o utl ov1|zkt o
° o2vl ox1tzkt o§§oϑ tu1s oz1{ ½o2uvl ox1us
kt o§§oϑ tu1s oz1{ ½o2uul oy1uwkt o§oϑ {1w
½o 2yl oy1xtkt o§oϑ {1w ½o2zl ∀ tv ≤2
kzx1x ½o≤⁄≤¯ vl ∆}tu1|k≤2t{l otz1xk≤2u{l ot{1v
k≤2t|l ot|1{k≤2uy ²µ≤2uzl ot|1|k≤2uz ²µ≤2uyl ous1t
k≤2ttl ous1|k≤2utl ouv1wk≤2txl ou{1yk≤2tyl ovs1v
k≤2ul ovv1tk≤2uxl ovw1{k≤2tl ovy1|k≤2w ²µ≤2tsl o
v|1wk≤2tul ov|1|k≤2usl owu1{k≤2uwl oww1yk≤2tvl o
xt1uk≤2|l oxt1|k≤2twl oxy1vk≤2tzl oyy1wk≤2vl oz|1x
k≤2{l o{u1uk≤2xl otvs1zk≤2zl otvu1wk≤2uvl otvx1u
k≤2yl otvx1xk≤2uul ∀从以上数据可鉴定该化合物
为 x Αo{ Α2表二氧麦角甾2y ouu2二烯2v Β醇 o与文献
≈{ 对照一致 ∀
化合物k √ l 无色针晶k丙酮l ot2 kvss
½o≤⁄≤¯ vl ∆}s1yz ∗ t1sukx≤vl ov1xtkt o° o2
vl ox1vxkt o§oϑ x1w ½o2yl ∀ tv ≤2 kzx1x
½o≤⁄≤¯ vl }∆ vz1vk≤2tl ovt1yk≤2ul ozt1{k≤2vl o
wu1vk≤2wl otws1{k≤2xl otut1zk≤2yl ovt1|k≤2zl ovt1z
k≤2{l oxs1uk≤2|l ovy1xk≤2tsl out1tk≤2ttl ov|1{k≤2
tul owu1vk≤2tvl oxy1{ktwl ouw1vk≤2txl ou{1uk≤2tyl o
xy1tk≤2tzl ott1|k≤2t{l ot|1wk≤2t|l ovy1vk≤2usl o
t{1{k≤2utl ovs1vk≤2uul ouw1vk≤2uvl ov|1{k≤2uwl o
u{1uk≤2uxl out1tk≤2uyl ouv1tk≤2uzl ∀从以上数据
及对照文献≈| 鉴定该化合物为 v Β2羟基 p胆甾 p x
烯 ∀
4 活性测定结果
作者在实验中利用稻瘟霉分生孢子和菌丝体形
态变化 o参考文献≈ts 的活性指标 o对 Αλτερναλια σπ1
菌株发酵液活性部位醋酸乙酯和正丁醇浸膏进行活
性追踪分离 o最终得到 y个化合物 o其抗稻瘟霉活性
测定结果见表 t o其中化合物 ∏ o√没有活性 ∀
表 t 化合物 ´ ∗ ·的抗稻瘟酶活性
≤ ⁄≥ ´ µ ¶ · µ«¬½²¬¬±
÷ p u1xx p p u1sw t1u
n p p t1|y t1ty p s1{
注 } ≤1 最小活性浓度k ≅ tsp x °²¯ #ptl ~÷1 诱导分生孢子变
形 ~n 1 抑制菌丝体生长空白对照为二甲亚砜k⁄≥l ~阳性对照为
根霉素kµ«¬½²¬¬±l
≈致谢 沈阳药科大学分析测试中心沙沂 !李文老师代
测核磁共振图谱 ∀
≈参考文献
≈t 林永成 o周世宁 1 海洋微生物及其代谢产物 1 北京 }化学工业
出版社 oussv1w1
≈u ¬¶¤¼²¶«¬o ¬¦«¬²oפ®¨ ¶«¬≠ o ετ αλ1 ¶¦µ¨ ±¨¬±ª °¨ ·«²§©²µ¤±2
·¬°¬·²·¬¦¤±§¤±·¬©∏±ª¤¯ ¶∏¥¶·¤±¦¨¶∏¶¬±ª¦²±¬§¬¤²© Πψριχυλαρια ορψζαε o
°²§¬©¬¦¤·¬²± ¤±§ ¤³³¯¬¦¤·¬²± ·² ·µ²³¬¦¤¯ °¤µ¬±¨ ©∏±ª¬1 ϑ Αντιβιοτ o
t||y ow|k|l }{zv1
≈v ≥¤§·¨µ ¶¨¨¤µ¦« ¤¥²µ¤·²µ¬¨¶1 ≥¤§·¯¨µ¶·¤±§¤µ§ ¶³¨¦·µ¤1 ≥ }
≥¤§·¯¨µ ¶¨¨¤µ¦«¤¥²µ¤·²µ¬¨¶ot|zy1yxxu1
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第 vs卷第 x期
ussx年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ x
¤µ¦«oussx
≈w ≥¤§·¯¨µ ¶¨¨¤µ¦«¤¥²µ¤·²µ¬¨¶1 ≥¤§·¯¨µ¶·¤±§¤µ§¦¤µ¥²µ2tv ¶³¨¦2
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·µ²³¬¦¤¯ ³¯¤±·¶1 Πηψτοχηεµσιτρψot||x owskwl }ttsx1
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l2utr≤2tv ¦¨¯¯¶1 Νατυραλ Μεδ ot||{ oxukul }
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≈z 黄钟奇 o周世宁 o吴雄宇 o等 1 南海海洋细菌 tts的代谢产物研
究 1 中山大学学报k自然科学版l ot||z ovykyl }tuz1
≈{ ¤µ¬±¤ ⁄o²µ¨±½² o±·²±¬² o ετ αλ1 xΒo{Β2 ³¨¬§¬²¬¼ µ¨ª²¶·¤2y o
uu2§¬¨±¨ 2vΒ2²¯1 Γαζζ Χηιµ Ιταλot||s otuskyl }v|t1
≈| 于德泉 o杨峻山 1 分析化学手册 1 第 z分册 1 北京 }化学工业出
版社 ot||y1{|v1
≈ts 杨 君 1 真菌次级代谢产物中抗稻瘟霉活性物质的研究 }≈学
位论文 1 沈阳 }沈阳药科大学 ot||{1
Στυδιεσ ον χονστιτυεντσφροµ τηεφερµεντατιον οφ Αλτερναλια σπ1
¤¬2¯ ²±ªt o׬u oƒ ²±ªº ¬¨t o°∞ ≠∏¨2«∏t o ∏¬2°¬±ªt
(t1 Σχηοολ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινεσ , Σηενψανγ Πηαρµαχευτιχαλ Υνιϖερσιτψ, Σηενψανγ ttssty , Χηινα ;
u1 Φιρστ Ινστιτυτε οφ Οχεανογραπηψ, Στατε Οχεανιχ Αδµινιστρατιον , Θινγδαο uyyssv , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε :ײ¶·∏§¼·«¨ ° ·¨¤¥²¯¬·¨¶²© °¤µ¬±¨ ©∏±ª∏¶ Αλτερναλια σπ1 Μετηοδ : ≤²°³²∏±§¶º µ¨¨ ¶¨³¤µ¤·¨§¥¼ ¦²¯∏°± ¦«µ²2
°¤·²ªµ¤³«¼ ¤±§·«¨¬µ¶·µ∏¦·∏µ¨¶º µ¨¨ ¨¯∏¦¬§¤·¨§¥¼ ° ¤¨±¶²©¦«¨ °¬¦¤¯ ¤±§¶³¨¦·µ¤¯ ¤±¤¯¼¶¬¶1 Ρεσυλτ : ≥¬¬ ¦²°³²∏±§¶º µ¨¨ ¬¶²¯¤·¨§©µ²° ·«¨
·¨«¼¯ ¤¦¨·¤·¨ ¤±§±2¥∏·¤±²¯ ¬¨·µ¤¦·¶²©·«¨ ©¨µ° ±¨·¤·¬²± ²© °¤µ¬±¨ ©∏±ª∏¶ Αλτερναλιᶳ1 ׫¨¬µ¶·µ∏¦·∏µ¨¶º µ¨¨ ¨¯∏¦¬§¤·¨§¤¶ π2¥¨ ±½¼¯²¬¼2³«¨ ±²¯
k ´l o³2«¼§µ²¬¼ ³«¨ ±¼¯ ·¨«¼¯¤°¬±¨ k µl ov2«¼§µ²¬¼° ·¨«¼¯2{2«¼§µ²¬¼¯2³¼µµ²¯²³¬³¨µ¤½¬±¨ 2u ox2§¬²±¨ k ¶l ov2¬¶²¥∏·¼¯2y2¶¨¦¥∏·¼¯2³¬³¨µ¤½¬±¨ 2u o
x2§¬²±¨ k ·l oxΑo{Α2 ³¨¬§¬²¬¼2 µ¨ª²¶·¤2y ouu2§¬¨±¨ 2vΒ2²¯ k ∏l ovΒ2«¼§µ²¬¬¼2¦«²¯ ¶¨·¤2x2 ±¨¨ k √ l1 Χονχλυσιον : ≤²°³²∏±§¶ ´ o µ o ¶ o
· «¤√¨·«¨ ¤¦·¬√¬·¼ ²©¬±§∏¦¬±ª °²µ³«²¯²ª¬¦¤¯ §¨©²µ°¤·¬²± ²© °¼¦¨ ¬¯¤ª¨µ°¬±¤·¨§©µ²° ¦²±¬§¬¤²© Πψριχυλαρια ορψζαε1 ≤²°³²∏±§¶ ´ o µ o ¶
º µ¨¨ ¬¶²¯¤·¨§©µ²°·«¨ ª¨ ±∏¶ Αλτερναλια©²µ·«¨ ©¬µ¶··¬° 1¨
[ Κεψ ωορδσ] °¤µ¬±¨ ©∏±ª∏¶~¤±·¬©∏±ª¬~ Πψριχυλαρια ορψζαε
≈责任编辑 李 禾
竹叶兰菲类化学成分研究
刘美凤t o丁 怡t 3 o张东明u
kt1 清华大学 生物科学与技术系 药物药理研究室 o北京 tsss{w ~
u1 中国医学科学院 中国协和医科大学 药物研究所 o北京 tsssxsl
≈摘要 目的 }分离鉴定竹叶兰干燥根茎中的化学成分 ∀方法 }乙醇提取 o硅胶 !≥ ³¨«¤§¨¬2us及 ⁄≥柱色谱
分离 o采用 ∂ o 和 ≥等方法确定化合物的结构 ∀结果 }分得 x个化合物 o分别为 z2羟基2u ow2二甲氧基2| ots2二
氢菲 kz2«¼§µ²¬¼2u ow2§¬° ·¨«²¬¼2| ots2§¬«¼§µ²³«¨ ±¤±·«µ¨±¨ ´ l o w oz2二羟基2u2甲氧基2| ots2二氢菲 kw oz2§¬«¼§µ²¬¼2u2
° ·¨«²¬¼2| ots2§¬«¼§µ²³«¨ ±¤±·«µ¨±¨ µl ou oz2二羟基2w2甲氧基2| ots2二氢菲ku oz2§¬«¼§µ²¬¼2w2° ·¨«²¬¼2| ots2§¬«¼§µ²³«¨ ±¤±2
·«µ¨±¨ ¶l oz2羟基2u2甲氧基2菲2t ow2二酮kz2«¼§µ²¬¼2u2° ·¨«²¬¼2³«¨ ±¤±·«µ¨±¨ 2t ow2§¬²±¨ ·l o和 z2羟基2u2甲氧基2| ots2二
氢菲2t ow二酮kz2«¼§µ²¬¼2u2° ·¨«²¬¼2| ots2§¬«¼§µ²³«¨ ±¤±·«µ¨±¨ 2t ow2§¬²±¨ ∏l ∀结论 }x个菲类化合物均为首次从竹叶兰
中分离得到 ∀
≈关键词 竹叶兰 ~菲 ~化学成分
≈中图分类号 u{w qt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxlsx2svxv2sw
≈收稿日期 ussw2su2tx
≈通讯作者 3丁怡 oר¯ }kstslyuz|wz|z oƒ¤¬}kstslyuzzvyvs o∞2
°¤¬¯}¼¬§¬±ª·¶¬±ª«∏¤1 §¨∏1¦±
竹叶兰 Αρυνδινα γραµινιφολιαk⁄1⁄²±l²¦«µ1 为
兰科 µ¦«¬§¤¦¨¤¨ 竹叶兰属 Αρυνδινα植物 o别名长杆
兰 o草姜 o山荸荠 o竹兰 o禾叶竹叶兰 o文哈海k傣名l o
为云南西双版纳地区傣族人民常用的植物药 o资源
#vxv#
第 vs卷第 x期
ussx年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ x
¤µ¦«oussx