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配伍对葛根芩连汤中葛根HPCE指纹图谱的影响



全 文 :配伍对葛根芩连汤中葛根 ‹°≤∞指纹图谱的影响
戴开金 3 o罗奇志 o罗佳波 o马安德
k第一军医大学 o广东 广州 xtsxtxl
葛根芩连汤出自5伤寒论6 o由葛根 !黄芩 !黄连 !甘草组
成 o具有解肌 !清热止痢功效 o用于治疗太阳表邪内陷所致肠
热下痢证 o临床应用广泛 ∀近年研究证明 o葛根芩连汤具有
解热 !抗菌 !抗病毒 !解痉 !抑制胃肠运动 !抗缺氧 !抗心律失
常 !增强机体免疫功能等药理作用 ∀目前对该方的物质基
础 !作用机理及配伍组方研究成为该方研究的重点 ∀笔者研
究了配伍对葛根指纹图谱的影响 ∀
1 仪器与试药
1 q1 仪器
uzs„p ‹× 型高效毛细管电泳仪k„³³¯¬¨§ …¬²¶¼¶·¨°¶公
司 o美国l ~毛细管 }未涂层融硅毛细管 oxs Λ° ≅ yx ¦° o有效
长度 wv ¦° ~‹ • p usss色谱工作站数据处理系统k南京千谱
软件有限公司l ~¬¯¯¬³²µ¨ p ± 纯水器 ∀
1 q2 试药
甲醇k色谱纯l !乙醇 !磷酸氢二钠 !硼砂均为国产分析
纯 ~对照品 }葛根素k中国药品生物制品检定所 o含量测定用 o
批号 zxv2usssszl ~葛根 !黄芩 !黄连 !甘草药材由广东省药材
公司提供 o经本校中药鉴定教研室刘传明讲师鉴定 o分别为
豆科植物野葛 Πυεραρια λοβατα ’«º¬o唇形科植物黄芩干燥根
茎 Σχυτελλαρια βαιχαλενσισ Š¨ ²µª¬o毛茛科植物黄连干燥根茎
Χοπτισ χηινενσισ ƒµ¤±¦«o豆科植物甘草 Γλψχψρρηιζα υραλενσισ ƒ¬¶¦«
干燥根茎k经蜜制l ∀
2 指纹图谱的建立
2 q1 供试样品的制备
按处方配比k葛根 tx ªo黄芩 | ªo黄连 | ªo甘草 y ªl取葛
根芩连汤各味药饮片 o加水 wss °浸泡 tx °¬±o先煎葛根 us
°¬±o余药共煎 vs °¬±o煎 u次 o合并滤液 o定容 t sss °o取 w
°o定量加甲醇 y °o超声 ts °¬±o离心 o定容 ts °o作为供
试样品 ∀各配伍煎液同法制备 ∀
2 q2 电泳条件≈t2y 
电解质溶液由 vs °°²¯#pt磷酸盐 !ws °°²¯#pt硼酸盐
和甲醇组成 ~未涂层融硅毛细管kxs Λ° ≅ yx ¦° o有效长度 wv
¦°l o分离电压 uu ®∂ o进样 t ¶~检测波长 uxw ±° o温度 vs ε ∀
样品依次进样电泳 o全方 !葛根阴性 !葛根药材高效毛细管分
≈收稿日期  ussv2ts2uz
≈基金项目  国家自然科学基金重点资助项目kv||zs{{yl ~广
东省自然科学基金资助项目ksstszsl
≈通讯作者  3戴开金 oר¯ }ksuslytyw{t|y
离图 o见图 t ∀
图 t ‹°≤∞分离图
„ q葛根药材 …q葛根芩连汤 ≤ q缺葛根阴性
2 q3 方法学考察
2 q3 q1 精密度试验 取全方供试品溶液 t份 o连续进样 x
次 o测得主要峰相对迁移时间和单峰面积 o结果表明葛根 tu
个峰k命名为 t ∗ tul迁移时间相对恒定 oy个峰k分别为 w oy o
{ o| ots otul峰面积相对恒定 o• ≥⁄ x h ∀
2 q3 q2 稳定性试验 取全方供试品溶液 t份 o分别在 s ow o
{ otu ouw «进样 o测得主要共有峰迁移时间和峰面积的色谱
峰峰面积 o表明葛根 tu个峰相对迁移时间稳定 oy个峰的峰
面积相对恒定 o• ≥⁄ x h ∀
2 q3 q3 重现性试验 按处方配比取全方药材饮片 x份 o按
2 q1 项下煎煮 o制成供试液 o依次进样电泳 o测得主要峰相对
迁移时间和峰面积 o结果表明葛根 tu个峰相对迁移时间稳
定 oy个峰的峰面积相对恒定 o• ≥⁄ x h ∀
2 q4 指纹图谱技术参数≈z o{  根据 ts批葛根药材供试品溶
液 ‹°≤∞谱给出的相关参数 o比较供试品谱图 o其中葛根 tu
个峰是各批供试品所共有的 o因此确定这 tu个峰为共有指
纹峰 o其中葛根 y个峰峰面积相对恒定 o• ≥⁄ x h o可以定
量 ∀其余各共有峰均按其相对迁移时间定性 ∀
3 配伍对葛根芩连汤中葛根指纹图谱的影响
3 q1 葛根芩连汤配伍组合正交设计 选黄连 !黄芩 !甘草作
为 v个因素 o选用药和不用药为两个水平 o并考虑两两交互
作用的 {kuzl正交表进行分组 o因素 !水平表见表 t ∀
3 q2 各配伍供试样品的制备及测定 取配伍组合药材 o按
#|t{#
第 u|卷第 {期
ussw年 {月
中 国 中 药 杂 志
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表 t 因素水平表
水平 Αk黄芩l Βk黄连l Χk甘草l
t 用药 用药 用药
u 不用药 不用药 不用药
2 q1 项下制备 o按 2 q2 项下电泳条件测定 ∀峰面积测定结果
见表 u ∀结果表明黄连 !黄芩 !甘草及其两两交互作用对葛
根 w oy o{ o| ots otu峰的峰面积没有显著性差异 ∀
3 q3 统计处理 采用 ≥°≥≥ts qs统计分析软件 o方差分析 ∀
表 u {kuzl正交设计及结果
配伍
峰面积
w y { | ts tu
全方 {|x{ x|tt u|xvw ts{||v vxsyw wy{|w
葛芩连 {zzu xzws vsw|u tts|vt vvz|x wyyzx
葛芩甘 {sws xtss uxuxv tswx{w vszux v|zxx
葛芩 {ttv xtvs uyt{x tsxxsx vt{us wtxvs
葛连甘 |uuu xv{| vuzux tuxxsv vwytt v|y|{
葛连 |szt wy|v uz{yu tszzzu vszvu v|ywz
葛甘 {sxs wzys u|{sw tt|sz| vyyuz wt|wv
葛根 |sx{ w{ss u|usu ttvtx| u|tuz v||sv
4 结果分析与讨论
4 q1 样品制备方法的考察 取样品离心后的沉淀物 o用
ts°甲醇超声 vs °¬±o以甲醇为对照 o在 uvs ∗ {ss ±°扫描 o
各波长的紫外吸收均小于 s qsx o因此认为上述处理方法没有
造成成分损失 o方法可行 ∀
4 q2 葛根芩连汤中成分复杂 o含有多种生物碱 !黄酮类 !皂
苷类成分 o单纯用磷酸盐电解质或硼酸盐电解质时分离效果
不太好 o采用磷酸盐 !硼酸盐和甲醇混合电解质之后 o对方中
葛根的组分分离效果较好 o经筛选采用本次实验条件 ∀方法
学考察表明该方法可以用于葛根芩连汤中葛根的指纹图谱
研究 o葛根有 tu个峰可以用相对保留时间定性 oy个峰可以
用峰面积定量 ∀
4 q3 含葛根的配伍煎液中葛根 y个成分峰面积结果经统计
分析kªz峰因与其他峰重叠 o没有统计分析l表明 o黄连 !黄
芩 !甘草及其两两交互作用对其峰面积影响没有显著性差
异 o黄连 !黄芩 !甘草对葛根素kª|l含量没有影响 o这与用高效
液相色谱法≈| 测得的结果相一致 ∀
4 q4 在本实验条件下各配伍组合没有新的峰出现 o即没有
发现新的物质 o葛根中 tu个峰也没有丢失 ∀
4 q5 本法可为葛根芩连方及其他含葛根的方剂物质基础及
配伍规律研究提供分析方法 o亦可为葛根药材及其复方制订
指纹图谱的建立提供参考 ∀
4 q6 研究主要针对配伍因素对方中葛根主要成分的影响 o
对于煎煮时间及制剂成型所采用的方法和手段对化学成分
产生的影响有待进一步的研究 ∀同时由于配伍中产生沉淀 o
因此在提取分离和制剂成型过程中也要加以注意 ∀
≈参考文献 
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≈v  周洪雷 o魏璐雪 o杨东辉 q高效毛细管电泳测定黄连 !肉桂配
伍前后黄连主要生物碱的含量 q中国中药杂志 ot||| ouwkxl }
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≈w  孙立华 o胡永明 o邹德禄 o等 q高效毛细管电泳法测定葛根及
其制剂脑得生片中葛根素的含量 q中国药学杂志 ousss ovx
ktsl }y|w q
≈x  张国华 o王延琮 o张永友 o等 q高效毛细管电泳测定黄连及成药
中小檗碱型生物碱的含量 q色谱 ot||x otvkwl }uwz q
≈y  韩凤梅 o程智勇 o杨 新 o等 q高效毛细管电泳法分离测定黄芩
复方制剂中的黄芩甙 q色谱 ousss ot{kvl }u{s q
≈z  谢培山 q中药制剂色谱指纹图谱 k图象 l鉴别 q中成药 ousss ouu
kyl }v|t q
≈{  国家药品监督管理局 q中药注射剂指纹图谱研究的技术要求
k暂行l qusss q
≈|  戴开金 o罗佳波 o谭晓梅 o等 q葛根芩连汤不同配伍对葛根素
含量的影响 q中草药 oussv ovwkyl }xsy q
≈责任编辑 古云侠 
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第 u|卷第 {期
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中 国 中 药 杂 志
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