全 文 ：冬凌草甲素通过激活 ＥＲＫ途径诱导 Ｕ９３７细胞凋亡
刘艳秋１，２，游 松２，田代真一３，小野寺敏３，池岛乔１
（１沈阳药科大学 中日医药研究所，辽宁 沈阳 １１００１６；２沈阳药科大学 天然产物生物技术实验室，
辽宁 沈阳 １１００１６；３昭和药科大学 病态科学教研室，日本 东京 １９４８５４３）
［摘要］ 目的：研究冬凌草甲素诱导人组织淋巴瘤 Ｕ９３７细胞凋亡的机制及 ＥＲＫ激酶在凋亡过程中的作用。
方法：噻唑蓝（ＭＴＴ）法，Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色法，ＤＮＡ凝胶电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测法。结果：冬凌草甲素对 Ｕ９３７细胞
生长抑制作用呈时间剂量依赖性。２７μｍｏｌ·Ｌ
－１冬凌草甲素作用细胞１２ｈ后，Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色细胞，出现明显凋
亡小体，并诱导ＥＲＫ发生磷酸化。ＥＲＫ磷酸化抑制剂 ＰＤ９８０５９阻断了冬凌草甲素诱导的细胞生长抑制及 ＤＮＡ片
段化。细胞内抑制凋亡蛋白ＢｃｌＸＬ表达量时间依赖性减少，促凋亡蛋白 Ｂａｘ表达量增加，而 ＥＲＫ抑制剂可逆转这
种作用。结论：冬凌草甲素（２７μｍｏｌ·Ｌ
－１）诱导 Ｕ９３７细胞凋亡，这种作用是通过活化 ＥＲＫ激酶，改变其下游 Ｂａｘ／
ＢｃｌＸＬ的表达比率，从而促进Ｕ９３７细胞发生凋亡。
［关键词］ 冬凌草甲素；Ｕ９３７细胞；凋亡；ＥＲＫ激酶
［中图分类号］Ｒ２８５５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００５）２３１８５６０４
［收稿日期］ ２００５０３２５
［通讯作者］ 池岛乔，Ｔｅｌ：（０２４）２３８４４４６３，Ｅｍａｉｌ：ｉｋｅｊｉｍａｔ＠
ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ
冬凌草甲素（ｏｒｉｄｏｎｉｎ）是植物冬凌草 Ｒａｂｄｏｓｉａ
ｒｕｂｅｓｃｅｎｓＨｅｍｓｌ中的四环二萜类化合物。药理学研
究表明，冬凌草甲素有较强的抗肿瘤、抗菌、清除活
性氧自由基和抗突变的作用［１３］。作者应用 ＭＴＴ
法、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色法、琼脂糖电泳、蛋白质
电泳观察冬凌草甲素体外诱导 Ｕ９３７细胞凋亡的机
制，并探讨细胞外信号调节激酶ＥＲＫ的调控作用。
１ 材料与方法
１１ 药物与试剂 冬凌草甲素由中国科学院昆明
植物研究所提供；甲基噻唑蓝 ＭＴＴ（Ａｍｒｅｓｃｏ），
Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８，ＲＮａｓｅＡ，ＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫ（Ｓｉｇｍａ）。Ｂａｘ
和ＥＲＫ多克隆兔抗体、磷酸化ＥＲＫ（ｐｈｏｓｐｈｏＥＲＫ）和
ＢｃｌＸＬ单克隆鼠抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗
兔二抗及羊抗鼠二抗均购于 ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
公司。
１２ 细胞培养 Ｕ９３７细胞株购于美国 Ａｍｅｒｉｃａｎ
ＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ１５９３２，ＵＳＡ），
接种于含５％的胎牛血清，２％的谷氨酰胺，２ｍｍｏｌ·
Ｌ－１Ｈｅｐｅｓ的 ＲＰＭＩ１６４０培养液中，在饱和湿度、温
度为３７℃，ＣＯ２为５％的培养箱中培养。
１３ ＭＴＴ法检测细胞生长抑制 １×１０５·ｍＬ－１
Ｕ９３７细胞接种于９６孔培养板，每孔１００μＬ培养１２
ｈ，分别加入不同浓度的冬凌草甲素及 ＥＲＫ抑制剂
培养６，１２，２４ｈ，每孔加入１５μＬ（５ｇ·Ｌ
－１）ＭＴＴ，继续
培养４ｈ后，弃上清，每孔加入１５０μＬ二甲基亚砜溶
解，酶标仪４９２ｎｍ检测吸光度值（Ａ）。细胞生长抑
制率：抑制率（％）＝［Ａ４９２（阴性对照）－Ａ４９２（冬凌草
甲素）］／Ａ４９２（阴性对照）×１００％。
１４ 细胞形态学变化观察 每孔１×１０５个细胞接
种于６孔板中，１２ｈ后加入浓度为２７μｍｏｌ·Ｌ
－１冬凌
草甲素分别于１２ｈ用光学显微镜观察。
Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色：将细胞接种于培养板中，用
ＰＢＳ洗１次，以１ｍＬ３７％多聚甲醛重悬细胞，固定
３０ｍｉｎ。弃上清，以 ＰＢＳ洗 １次，加入 Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８
（１ｍｍｏｌ·Ｌ－１）使其终浓度为１６７μｍｏｌ·Ｌ
－１，３７℃与
Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８共孵育１０ｍｉｎ，荧光显微镜下观察。
１５ 细胞ＤＮＡ提取及电泳观察［４］ 收集１×１０６以
上细胞，２５００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，以ＰＢＳ洗２次，用
细胞裂解液（１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＴｒｉｓＨＣｌｐＨ７４，１０ｍｍｏｌ·
Ｌ－１ＥＤＴＡｐＨ８０，０５％ＴｒｉｔｏｎＸ１００）４℃ 裂解３０
ｍｉｎ，１６０００ｒ·ｍｉｎ－１离心２０ｍｉｎ，收集上清。加入４０
ｎｇ·Ｌ－１ＲＮａｓｅ，３７℃温育１ｈ，再加入４０ｎｇ·Ｌ－１ｐｒｏ
ｔｅｉｎａｓｅＫ，３７℃温育 ２ｈ，加入０５ｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＣｌ和
５０％异丙醇，－２０℃冷浴过夜。１６０００ｒ·ｍｉｎ－１离心
２０ｍｉｎ，收集沉淀，以 ＴｒｉｓＥＤＴＡ缓冲液（ｐＨ７５）溶
解。提出的ＤＮＡ用２％琼脂糖凝胶在１００Ｖ下电泳
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第３０卷第２３期
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１ｈ，以 ０５ｍｇ·Ｌ－１溴化乙锭染色 １５ｍｉｎ，以蒸馏水
洗３０ｍｉｎ，紫外投射仪下观察。
１６ Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹法 参考文献方法处理细
胞［５］，提取细胞总蛋白，经 ＢｉｏＲａｄ法定量蛋白，取
４０μｇ总蛋白上样，经十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺
凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）后，转移到醋酸纤维素膜上，
５％脱脂奶粉室温封闭 ３～４ｈ，与抗 Ｂａｘ，ＥＲＫ，
ｐｈｏｓｐｈｏＥＲＫ，ＢｃｌＸＬ的抗体 ４℃孵育过夜，辣根过
氧化物酶标记的二抗室温下孵育２ｈ，充分洗膜后显
色。
２ 结果
２１ 冬凌草甲素抑制Ｕ９３７细胞生长的时间与剂量
依赖性 冬凌草甲素 （２７～１３５μｍｏｌ·Ｌ
－１）作用于
Ｕ９３７细胞不同时间后，对 Ｕ９３７细胞的细胞毒作用
呈明显的时间和剂量依赖性（表１）。
表１ 冬凌草甲素对Ｕ９３７细胞生长抑制作用的剂量
与时间依赖性 （珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
剂量
／μｍｏｌ·Ｌ
－１
细胞死亡率／％
０ｈ ６ｈ １２ｈ ２４ｈ
０ ０．４５±１．４３ ０．３６±１．２７ ０．１３±４．３８ １３．８６±７．７２
２．７ ０．１６±２．７２ １．４０±１．３５ １．７４±２．０４ ３１．９７±７．２４
１３．５ １．４６±５．０４ ６．２１±２．０５ １９．９４±３．３２ ３１．９７±３．２４
２７ ５．１５±２．１０ ２２．６４±５．３４ ４３．９７±６．６０ ５５．５２±５．１７
５４ ３．５４±１．９８ ２８．８６±６．４４ ９５．３１±１．１８ ９３．１１±０．４４
１３５ １．４１±５．５２ ３３．２６±６．４２ ９６．２８±１．１８ ９７．７０±０．４４
２２ 冬凌草甲素诱导细胞凋亡的形态学变化 ２７
μｍｏｌ·Ｌ
－１冬凌草甲素作用 Ｕ９３７细胞 １２ｈ后观察，
可见细胞在形态上的变化。与对照组细胞相比（图
１Ａ），经处理的细胞体积变小，细胞皱缩，有的核周
边形成小芽，形成凋亡小体（见图１Ｂ箭头所示）。细
胞经Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色后，观察核形态变化。未处
理的细胞核染色均匀（图１Ｃ），冬凌草甲素处理１２ｈ
后，细胞核染色致密，形成凋亡小体（见图 １Ｄ箭头
所示）。
２３ ＥＲＫ激酶对冬凌草甲素诱导的 Ｕ９３７细胞凋
亡的调控 因 ＥＲＫ激酶在不同的细胞及刺激物的
情况下，发挥促进细胞凋亡或保护细胞的双向作
用［６，７］。２７μｍｏｌ·Ｌ
－１冬凌草甲素作用不同时间后，
上调了磷酸化 ＥＲＫ的表达，但对 ＥＲＫ总蛋白表达
水平没有影响（图 ２）。应用 ＥＲＫ磷酸化抑制剂
ＰＤ９８０５９逆转了冬凌草甲素对 Ｕ９３７细胞生长抑制
作用（表２）及凋亡特征的 ＤＮＡ片段化（图３）。此结
果说明ＥＲＫ激酶在冬凌草甲素处理 Ｕ９３７细胞过程
中起到促进凋亡的作用。
图１ 凌草甲素诱导Ｕ９３７细胞凋亡的形态学变化
Ａ对照；Ｂ冬凌草甲素（２７μｍｏｌ·Ｌ
－１）作用１２ｈ；
Ｃ对照 （Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色细胞核）；Ｄ冬凌草甲素
（２７μｍｏｌ·Ｌ
－１）作用１２ｈ（Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色细胞核）
表２ ＥＲＫ抑制剂 ＰＤ９８０５９阻断了冬凌草甲素诱导的Ｕ９３７细胞生长抑制（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
组别
不同剂量ＰＤ９８０５９细胞死亡率／％
０μｍｏｌ·Ｌ
－１ ５μｍｏｌ·Ｌ
－１ １０μｍｏｌ·Ｌ
－１ ２５μｍｏｌ·Ｌ
－１
空白对照组 １．５０±０．０４ ０．８１±０．１６ ３．８８±０．２４ ６．２２±０．５２
冬凌草甲素 ５０．６７±０．４０ ４６．２４±１．６５ ３４．８４±２．４１１） ２９．５９±５．１７１）
注：与冬凌草甲素单独处理组比较１）Ｐ＜０．０５
图２ 冬凌草甲素诱导ＥＲＫ磷酸化
２４ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测 Ｂａｘ和 ＢｃｌＸＬ蛋白的表达
及ＥＲＫ激酶对其影响 ２７μｍｏｌ·Ｌ
－１冬凌草甲素作
用不同时间后，ＢｃｌＸＬ表达下降，而 Ｂａｘ表达增加
（图４Ａ），然而ＥＲＫ磷酸化抑制剂ＰＤ９８０５９逆转了这
种效果（图４Ｂ），说明ＥＲＫ激酶存在于 Ｂａｘ和 ＢｃｌＸＬ
上游，通过调控Ｂａｘ／ＢｃｌＸＬ的表达比率，从而促进冬
凌草甲素诱导的Ｕ９３７细胞凋亡。
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图３ ＥＲＫ抑制剂 ＰＤ９８０５９对冬凌草甲素
诱导的ＤＮＡ片段化的影响
Ｍ标示物（２００～２０００ｂｐ）；ａ～ｃ冬凌草甲素
处理０，６，１２ｈ；ｄＰＤ９８０５９作用１ｈ后，
加入冬凌草甲素处理１２ｈ
图４ ＰＤ９８０５９对ＢｃｌＸＬａｎｄＢａｘ蛋白表达的影响
Ａ冬凌草甲素处理０，３，６，１２，２４ｈ；
ＢＰＤ９８０５９作用１ｈ后，加入冬凌草甲素处理１２ｈ
３ 讨论
作者已经报道冬凌草甲素在 ４１２μｍｏｌ·Ｌ
－１以
上的剂量下可诱导人宫颈癌 ＨｅＬａ细胞和小鼠纤维
瘤 Ｌ９２９细胞发生凋亡［８，９］，在本研究中进一步发
现，冬凌草甲素在２７μｍｏｌ·Ｌ
－１剂量下即可诱导人组
织淋巴瘤Ｕ９３７细胞凋亡，说明冬凌草甲素对 Ｕ９３７
细胞有更高的敏感性，为进一步研究冬凌草甲素的
抗癌作用提供实验依据。
据文献报道 ＭＡＰＫ家族成员 ＥＲＫ既参与细胞
凋亡也参与调控细胞存活［６，７］。考察 ＥＲＫ的活化
对冬凌草甲素诱导的Ｕ９３７细胞凋亡的影响，结果发
现ＥＲＫ激酶的抑制减少了 Ｕ９３７的凋亡，说明 ＥＲＫ
激酶在冬凌草甲素诱导的 Ｕ９３７细胞凋亡过程中起
到促进作用。
Ｂｃｌ２家族调节线粒体途径诱导的凋亡，主要包
括Ｂｃｌ２，Ｂａｘ，ＢｃｌＸＬ等。Ｂａｘ促进细胞凋亡，而 Ｂｃｌ２
和ＢｃｌＸＬ抑制凋亡［１０］。Ｂａｘ和 ＢｃｌＸＬ可形成二聚体
调节细胞的死亡和存活。Ｂａｘ／ＢｃｌＸＬ的比率增加可
导致细胞凋亡。Ｕ９３７细胞经冬凌草甲素处理后，
Ｂａｘ蛋白表达增加，ＢｃｌＸＬ表达减少，从而诱导细胞
凋亡。有文献报道 ＥＲＫ激酶调节线粒体途径引起
的凋亡［１１］。本实验表明，ＥＲＫ抑制剂逆转了冬凌草
甲素引起的 Ｂａｘ蛋白水平的上调和 ＢｃｌＸＬ的下调，
说明ＥＲＫ作用于 Ｂａｘ和 ＢｃｌＸＬ的上游，它的活化增
加Ｂａｘ／ＢｃｌＸＬ的比率，从而促进了冬凌草甲素诱导
的Ｕ９３７细胞凋亡。
综上所述，冬凌草甲素可通过激活 ＥＲＫ途径，
从而增加 Ｂａｘ／ＢｃｌＸＬ的表达比率诱导 Ｕ９３７细胞凋
亡。
［参考文献］
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［９］ ＺｈａｎｇＣＬ，ＷｕＬＪ，ＴａｓｈｉｒｏＳ，ｅｔａｌ．Ｏｒｉｄｏｎｉｎｉｎｄｕｃｅｓａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎ
ｈｕｍａｎｃｅｒｖｉｃａｌｃａｒｃｉｎｏｍａＨｅＬａｃｅｌｓｔｈｒｏｕｇｈｃａｓｐａｓｅ３／ＩＣＡＤｐａｔｈ
ｗａｙａｆｔｅｒａｌｔｅｒｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢｃｌ２／Ｂａｘ．ＡｃｔａＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａ
Ｓｉｎｉｃ，２００４，２５（５），６９１．
［１０］ ＥｒｈａｒｄｔＰ，ＣｏｏｐｏｅｒＧＭ．ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＣＰＰ３２ａｐｏｐｔｏｔｉｃｐｒｏｔｅａｓｅ
ｂｙｄｉｓｔｉｎｃｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｗｉｔｈｄｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｏＢｃｌｘＬ．
ＪＢｏｉｌＣｈｅｍ，１９９６，２７１（３０）：１７６０１．
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中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３０，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００５
［１１］ ＣｈｏｉＢＫ，ＣｈｏｉＣＨ，ＯｈＨＬ，ｅｔａｌ．ＲｏｌｅｏｆＥＲＫａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｎｃｉｓ
ｐｌａｔｉｎｉｎｄｕｃｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎＡ１７２ｈｕｍａｎｇｌｉｏｍａｃｅｌｓ．Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉ
ｃｏｌｏｇｙ，２００４，２５（６）：９１５．
ＯｒｉｄｏｎｉｎｉｎｄｕｃｅｄＵ９３７ｃｅｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｔｈｒｏｕｇｈＥＲＫｐａｔｈｗａｙ
ＬＩＵＹａｎｑｉｕ１，２，ＹＯＵＳｏｎｇ２，ＴＡＳＨＩＲＯＳｈｉｎｉｃｈｉ３，ＯＮＯＤＥＲＡＳａｔｏｓｈｉ３，ＩＫＥＪＩＭＡＴａｋａｓｈｉ１
（１．ＣｈｉｎａＪａｐａｎＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｅｄｉｃａｌａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｈｅｎｙａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００１６，Ｃｈｉｎａ；２．ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
ＳｈｅｎｙａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００１６，Ｃｈｉｎａ；
３．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌａｎｄＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｈｏｗａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｍａｃｈｉｄａ，Ｔｏｋｙｏ１９４８５４３，Ｊａｐａｎ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｏｒｉｄｏｎｉｎｉｎｄｕｃｅｄＵ９３７ｃｅｌａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ａｎｄｔｏｅｘａｍｉｎｅｔｈｅｒｏｌｅｏｆＥＲＫＭＡＰＫ．
Ｍｅｔｈｏｄ：ＭＴＴ，Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８ｓｔａｉｎｉｎｇ，ＤＮＡａｇａｒｏｓｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓｗｅｒｅｕｓｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｏｒｉｄｏｎｉｎｉｎｈｉｂｉｔｅｄ
Ｕ９３７ｃｅｌｇｒｏｗｔｈｉｎａｔｉｍｅａｎｄｄｏｓｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ．ＡｐｏｐｔｏｔｉｃｂｏｄｉｅｓｗｅｒｅｆｏｕｎｄｗｉｔｈＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８ｓｔａｉｎｉｎｇａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈ２７μｍｏｌ
·Ｌ－１ｏｒｉｄｏｎｉｎ．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ，ＥＲＫｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ．ＥＲＫｉｎｈｉｂｉｔｏｒＰＤ９８０５９ｐａｒｔｉａｌｙｂｌｏｃｋｅｄｔｈｅｇｒｏｗｔｈｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔａｓ
ｗｅｌａｓＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎｔｉａｐｏｐｔｏｔｉｃｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｐｒｏｔｅｉｎＢｃｌＸＬｄｅｃｒｅａｓｅｄｔｉｍｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ，ａｎｄｔｈａｔｏｆｐｒｏａｐｏｐｔｏｔｉｃ
ｐｒｏｔｅｉｎＢａｘｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ＰＤ９８０５９ｒｅｖｅｒｓｅｄｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆｏｒｉｄｏｎｉｎｏｎＢｃｌＸＬａｎｄＢａｘ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＯｒｉｄｏｎｉｎｉｎｄｕｃｅｓＵ９３７ｃｅｌａｐｏｐ
ｔｏｓｉｓｔｈｒｏｕｇｈａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＥＲＫａｎｄａｌｔｅｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒａｔｉｏｏｆＢａｘ／ＢｃｌＸＬ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｏｒｉｄｏｎｉｎ；Ｕ９３７ｃｅｌｓ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ＥＲＫ
［责任编辑 方文贤］
［收稿日期］ ２００５０８０８
［通讯作者］ 赵润英，Ｔｅｌ：（０２４）６２２１５６８７，Ｆａｘ：（０２４）６２２１５８０９，
Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｏｒｕｎｙｉｎｇ＠ｓｏｈｕｃｏｍ
银杏叶提取物对大鼠急性肾缺血再灌注损伤
保护作用的实验研究
赵润英１，李艳华１，高 文２，王玉霞２
（１沈阳医学院 药理教研室，辽宁 沈阳 １１００３４；
２沈阳勃润生物技术有限公司，辽宁 沈阳 １１００２５）
［摘要］ 目的：研究银杏叶提取物对大鼠急性肾缺血再灌注损伤的保护作用。方法：肾缺血４５ｍｉｎ再灌注４ｈ
建立大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型，用银杏叶提取物预处理，测定肾皮质丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、
Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋ＡＴＰ酶的活性，血浆肌酐和尿素氮的水平，并观察肾脏病理学改变。结果：缺血再灌注损伤
后，肾皮质ＭＤＡ含量升高，ＳＯＤ，Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋ＡＴＰ酶的活性下降；血浆 ＢＵＮ和 Ｃｒ水平升高；肾组织出现
明显的病理改变。银杏叶提取物预处理能降低肾皮质丙二醛含量；提高超氧化物歧化酶、Ｎａ＋Ｋ＋ＡＴＰ酶和 Ｃａ２＋
ＡＴＰ酶的活性；降低血浆肌酐和尿素氮水平；肾组织病理改变明显减轻。结论：银杏叶提取物对大鼠急性肾缺血再
灌注损伤具有保护作用。
［关键词］ 银杏叶提取物；大鼠；肾脏；缺血再灌注
［中图分类号］Ｒ２８５５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００５）２３１８５９０４
在肾移植、肾脏手术、体外震波碎石、失血或休
克后微循环再通等过程中极易发生肾缺血再灌注
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第３０卷第２３期
２００５年１２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３０，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００５